全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员圆袁圆远渊员冤院园园苑猿 耀 园园苑怨允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员员鄄园员鄄圆缘摇 接受日期院圆园员员鄄园圆鄄圆源
基金项目院国家野愿远猿冶项目渊圆园园苑粤粤园圆员猿园缘冤袁国家自然科学基金重点资助项目渊猿园愿猿园园园远冤袁重大新药创制科技重大专项渊圆园园怨在载允园怨园园员鄄园猿源冤袁
转基因生物新品种培育重大专项项目渊圆园园怨在载园愿园园怨鄄园苑缘月冤袁 农业部行业专项渊圆园园愿园猿园猿源冤
作者简介院王摇 媛 渊员怨愿远鄄冤袁女袁浙江温州人袁硕士研究生袁研究方向为 阅晕粤损伤修复遥 栽藻造院园缘苑员鄄愿远怨苑员圆缘员曰耘鄄皂葬蚤造院泽澡皂蚤造赠赃憎葬灶早赠怎葬灶岳 员远猿郾 糟燥皂
通讯作者院华跃进渊员怨缘怨鄄冤袁男袁浙江东阳人袁博士袁博士生导师袁研究方向为 阅晕粤 损伤修复与分子调控遥 栽藻造院园缘苑员鄄愿远怨苑员苑园猿曰耘鄄皂葬蚤造院赠躁澡怎葬岳 扎躁怎援
藻凿怎援 糟灶
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员圆冤园员鄄园园苑猿鄄园苑
耐辐射球菌中 责则蚤粤类似基因突变对阅晕粤修复和 阅晕粤转化的影响
王摇 媛摇 华跃进
渊浙江大学原子核农业科学研究所 辕农业部核农学重点开放实验室袁浙江 杭州摇 猿员园园圆怨冤
摘摇 要院阅晕粤损伤很易阻断复制叉的前进遥 损伤 阅晕粤的修复以及接下来停止复制叉的重启动过程对细
胞生存极为重要遥 依赖于 孕则蚤粤的复制重启动机制是细菌复制重启动的主要途径遥 为了解 责则蚤粤 类似基
因 阅则圆远园远 在耐辐射球菌中的作用袁并检测 阅则圆远园远 在 阅晕粤 修复中的作用袁本研究用卡那霉素抗性基因
代替 阅则圆远园远 阅读框袁构建了 阅则圆远园远 缺失突变株袁并对突变株进行 哉灾 和丝裂霉素处理袁测定了 阅则圆远园远
突变株的转化效率遥 阅则圆远园远 的突变导致菌体生长缓慢袁细胞生存率急剧下降遥 意外的是袁耐辐射球菌
的 阅晕粤修复能力没有削弱遥 但突变株的转化效率大大削弱遥 这说明在耐辐射球菌中 责则蚤粤 类似基因
阅则圆远园远对停止复制叉的重启动过程并不是必需的曰耐辐射球菌不依赖于原点的复制重启动过程可能与
其他细菌不同遥
关键词院责则蚤粤曰 耐辐射球菌曰 阅晕粤修复曰 阅晕粤转化效率
耘云云耘悦栽 韵云 责则蚤粤 造蚤噪藻 郧耘晕耘 酝哉栽粤栽陨韵晕 韵晕 阅晕粤 砸耘孕粤陨砸 粤晕阅
阅晕粤 栽砸粤晕杂云韵砸酝粤栽陨韵晕 韵云 阅藻蚤灶燥糟燥糟糟怎泽 则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽
宰粤晕郧 再怎葬灶摇 匀哉粤 再怎藻鄄躁蚤灶
渊运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 枣燥则 晕怎糟造藻葬则鄄粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽 燥枣 悦澡蚤灶藻泽藻 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻 葬灶凿 在澡藻躁蚤葬灶早 孕则燥增蚤灶糟藻 辕
陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 晕怎糟造藻葬则鄄粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 在澡藻躁蚤葬灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 在澡藻躁蚤葬灶早袁匀葬灶早扎澡燥怎 猿员园园圆怨冤
粤遭泽贼则葬糟贼院砸藻责造蚤糟葬贼蚤燥灶 枣燥则噪 责则燥早则藻泽泽蚤燥灶 糟葬灶 遭藻 遭造燥糟噪藻凿 藻葬泽蚤造赠 遭赠 阅晕粤 凿葬皂葬早藻援 阅葬皂葬早藻凿 阅晕粤 则藻责葬蚤则 葬灶凿 贼澡藻 泽怎遭泽藻择怎藻灶贼
则藻泽贼葬则贼 燥枣 贼澡藻 泽贼葬造造藻凿 燥则 糟燥造造葬责泽藻凿 则藻责造蚤糟葬贼蚤燥灶 枣燥则噪泽 葬则藻 糟则蚤贼蚤糟葬造 枣燥则 糟藻造造 泽怎则增蚤增葬造援 栽澡藻 孕则蚤粤鄄凿藻责藻灶凿藻灶贼 责葬贼澡憎葬赠 蚤泽 贼澡藻 皂葬躁燥则
则藻责造蚤糟葬贼蚤燥灶 则藻泽贼葬则贼 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂 蚤灶 遭葬糟贼藻则蚤葬援 栽燥 怎灶凿藻则泽贼葬灶凿 贼澡藻 则燥造藻泽 燥枣 葬 责则蚤粤鄄造蚤噪藻 早藻灶藻 渊 阅则圆远园远 冤 蚤灶 阅藻蚤灶燥糟燥糟糟怎泽
则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽 葬灶凿 阅晕粤 则藻责葬蚤则袁葬 阅则圆远园远 灶怎造造 皂怎贼葬灶贼 憎葬泽 糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿 遭赠 则藻责造葬糟蚤灶早 阅则圆远园远 燥责藻灶 则藻葬凿蚤灶早 枣则葬皂藻 憎蚤贼澡 葬
噪葬灶葬皂赠糟蚤灶鄄则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 早藻灶藻 葬灶凿 贼则藻葬贼藻凿 贼澡藻 阅则圆远园远 皂怎贼葬灶贼 憎蚤贼澡 哉灾 葬灶凿 皂蚤贼燥皂赠糟蚤灶 悦 渊 酝酝悦冤袁 葬灶凿 贼澡藻 阅晕粤
贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠 燥枣 贼澡藻 阅则圆远园远 皂怎贼葬灶贼 憎葬泽 葬造泽燥 贼藻泽贼藻凿援 杂怎糟糟藻泽泽蚤增藻造赠袁 贼澡藻 阅则圆远园远 皂怎贼葬灶贼 泽澡燥憎藻凿 葬 凿藻造葬赠藻凿
早则燥憎贼澡 葬灶凿 葬 凿则葬皂葬贼蚤糟 凿藻糟则藻葬泽藻 燥枣 糟藻造造 增蚤葬遭蚤造蚤贼赠援 哉灶藻曾责藻糟贼藻凿造赠袁 贼澡藻 阅晕粤 则藻责葬蚤则 糟葬责葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 阅援 则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽 憎葬泽 灶燥贼
蚤皂责葬蚤则藻凿 遭赠 贼澡藻 蚤灶葬糟贼蚤增葬贼蚤燥灶 燥枣 阅则圆远园远郾 匀燥憎藻增藻则袁 贼澡藻 阅晕粤 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠 憎葬泽 造葬则早藻造赠 糟燥皂责则燥皂蚤泽藻凿 蚤灶 贼澡藻
皂怎贼葬灶贼援 栽澡藻泽藻 则藻泽怎造贼泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 贼澡葬贼 贼澡藻 责则蚤粤鄄造蚤噪藻 早藻灶藻 渊阅则圆远园远冤 蚤泽 凿蚤泽责藻灶泽葬遭造藻 枣燥则 泽贼葬造造藻凿 阅晕粤 则藻责造蚤糟葬贼蚤燥灶 枣燥则噪泽 则藻泽贼葬则贼 蚤灶
阅援 则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽 葬灶凿 燥则蚤早蚤灶鄄蚤灶凿藻责藻灶凿藻灶贼 则藻责造蚤糟葬贼蚤燥灶 则藻泽贼葬则贼 蚤灶 阅援 则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽 皂葬赠 遭藻 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 枣则燥皂 燥贼澡藻则 遭葬糟贼藻则蚤葬援
运藻赠 憎燥则凿泽院责则蚤粤曰 阅藻蚤灶燥糟燥糟糟怎泽 则葬凿蚤燥凿怎葬灶泽曰 阅晕粤 则藻责葬蚤则曰 阅晕粤 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠
猿苑
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
摇 摇 在细菌中袁环状染色体渊大小为几个 酝遭冤是从单
个复制起点 燥则蚤悦 进行双向复制遥 各种内在或外在事
件会引起 阅晕粤 损伤袁这些损伤会阻断复制叉的移
动咱员袁圆暂 遥 为了确保对基因组完整和准确的复制袁细胞
必需修复这些损伤并重启动 阅晕粤复制咱圆暂 遥
复制重启动对 阅晕粤 损伤后的染色体复制和细胞
存活很重要遥 在大肠杆菌中袁有一系列蛋白渊如 孕则蚤粤尧
孕则蚤月尧孕则蚤悦尧阅灶葬月尧阅灶葬悦和 阅灶葬栽 冤参与了复制叉重启动
的过程袁孕则蚤粤蛋白能够识别并结合 阅鄄蕴燥燥责或复制叉结
构咱猿 耀 缘暂 遥 一个包含 孕则蚤月尧孕则蚤悦 和 阅灶葬栽 的复合体装配
引起 孕则蚤粤 的结合袁接着解旋酶装载者 阅灶葬悦装载 阅灶葬月
解旋酶蛋白遥 这个解旋酶 原 引发酶复合体引发了
阅晕粤聚合酶 陨陨陨 全酶的结合袁从而形成了一个功能性
复制体咱圆袁 远袁 苑暂 遥 孕则蚤粤 在这个过程中起了关键作用遥
责则蚤粤突变株显示了生存率降低袁对 哉灾 敏感袁产生大量
的双链断裂袁同时会降低同源重组的能力咱愿 耀 员园暂 遥
耐辐射球菌对电离辐射尧哉灾 照射尧长时期干燥以
及许多其他的 阅晕粤 损伤剂的致命效果有着超强的抗
性咱员员袁 员圆暂 袁引起了广泛的关注咱员猿 耀 员缘暂 袁目前对耐辐射球菌
的修复机制有了较多的认识袁而该细菌中的复制叉重
启动仍是个谜遥 尽管耐辐射球菌有 员 个 孕则蚤粤 同源物袁
但是这种超级细菌中并不存在 孕则蚤月尧 孕则蚤悦尧阅灶葬栽 和
阅灶葬悦咱员远暂 遥 这意味着耐辐射球菌中参与复制重启动的
蛋白和途径可能与其他细菌不同遥
为了揭示 孕则蚤粤在耐辐射球菌中的功能袁本研究构
建了 责则蚤粤 同源物 阅则圆远园远 的突变株袁并检测了 阅则圆远园远
在 阅晕粤修复和 阅晕粤转化过程中的功能遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 菌株及生长条件
耐辐射球菌 砸员渊阅藻蚤灶燥糟燥糟糟怎泽 则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽 砸员 粤栽悦悦
员猿怨猿怨冤菌株为本实验室继代保存遥 耐辐射球菌在
栽郧再渊 园郾 缘豫 蛋白胨袁 园郾 员豫 葡萄糖袁 园郾 猿豫 酵母提取
物冤液体培养基或 栽郧再固体培养基渊栽郧再 液体培养基
中添加 员郾 缘豫 琼脂冤于 猿园益 培养遥 如无其他说明袁抗
生素按以下标准添加院圆园滋早 辕 皂造 卡那霉素袁猿滋早 辕 皂造 氯
霉素袁缘园滋早 辕 皂造 利福平遥
员郾 圆摇 构建 阅则圆远园远 缺失突变株
耐辐射球菌中 阅则圆远园远 基因突变采用删除取代
法咱员苑暂 遥 用引物对从 砸员 基因组中扩增出 阅则圆远园远 上游
区域和下游区域的 阅晕粤片段渊引物 孕员 尧 孕圆 用来扩增
上游 阅晕粤袁 孕猿 尧孕源 用来扩增下游 阅晕粤曰本文所用引物
见表 员冤袁得到的片段分别用限制性内切酶 月葬皂 匀陨 和
匀蚤灶凿 陨陨陨 酶切遥 同时袁大肠杆菌 原耐辐射球菌穿梭质
粒 责砸粤阅运用 月葬皂 匀陨 和 匀蚤灶凿 陨陨陨 酶切袁得到带有耐辐
射球菌 郧则燥耘蕴 启动子的卡那霉素抗性基因遥 将这 猿 个
阅晕粤 片段用 栽源 阅晕粤 连接酶连接遥 连接产物再用引物孕员 和 孕源 进行 孕悦砸 扩增袁经电泳纯化袁得到 猿 段连接
孕悦砸产物袁将 猿 段连接产物转入耐辐射球菌遥 在含有
圆园滋早 辕 皂造 卡那霉素的 栽郧再 平板上筛选突变株遥 突变
株先用引物 孕员 和 孕源 进行 孕悦砸 验证袁之后再由引物
孕缘 和 孕远 进行 孕悦砸 验证渊 孕缘 尧 孕远 位于 阅则圆远园远 的密
码子域冤遥 将得到的突变株命名为 酝圆远园远遥
员郾 猿摇 补偿株的构建
用引物 圆远园远鄄云 和 圆远园远鄄砸 从野生株 砸员 中扩增得
到了完整的耐辐射球菌 阅则圆远园远 编码序列遥 得到的片
段用限制性内切酶 晕凿藻 陨 和 月葬皂 匀陨 酶切袁与同样用
晕凿藻 陨 和 月葬皂 匀陨 双酶切线性化的大肠杆菌 原耐辐射
球菌穿梭质粒 责砸粤阅运 质粒相连接遥 因此在得到的菌
株中 阅则圆远园远 的表达水平受 郧则燥耘蕴 启动子的调控遥 将
得到的质粒转入含 圆园滋早 辕 皂造 卡那霉素和 猿滋早 辕 皂造 氯霉
素的 栽郧再平板上筛选得到补偿株遥 将得到的补偿株
命名为 酝圆远园远鄄悦遥
员郾 源摇 生存率测定
耐辐 射 球 菌 的 生 存 率 用 月葬糟蕴蚤早澡贼 月葬糟贼藻则蚤葬造
灾蚤葬遭蚤造蚤贼赠 试剂盒渊陨灶增蚤贼则燥早藻灶袁 悦葬则造泽遭葬凿袁 哉杂粤冤测定遥 细
菌细胞培养至对数生长中期袁取 员皂造 菌液用 园郾 愿缘豫
晕葬悦造 洗 圆 次后悬浮于 园郾 缘皂造 园郾 愿缘豫 晕葬悦造 中遥 按产品
说明将细菌悬浮液染色袁取 缘滋造 染色的菌液涂于载玻
片上袁于 蕴藻蚤糟葬 阅酝 源园园园月 憎蚤凿藻鄄枣蚤藻造凿 荧光发射显微镜
渊蕴藻蚤糟葬 酝蚤糟则燥泽赠泽贼藻皂泽袁 宰藻贼扎造葬则袁 郧藻则皂葬灶赠冤下观察遥
员郾 缘摇 生长速率测定
生长速率的测定方法按以前描述的操作咱员苑暂 遥 挑
取野生株 砸员袁突变株 酝圆远园远 和补偿株 酝圆远园远鄄悦 的单
菌落过夜培养后袁各取 缘园园滋造转接到 缘园皂造不添加抗生
素的 栽郧再液体培养基中袁于摇床上 猿园益培养遥 细菌的
生长用分光光度计渊耘责责藻灶凿燥则枣袁 郧藻则皂葬灶赠冤检测遥
员郾 远摇 阅晕粤损伤敏感性测定
试验用细菌于添加合适抗生素的 栽郧再 液体培养
基中培养至对数生长中期渊韵阅远园园 越 园郾 源 耀 园郾 远冤遥 哉灾敏
感性测定中袁将菌液用磷酸缓冲液稀释到合适浓度
渊员园源尧员园缘尧员园远 冤后涂布于 栽郧再 平板上遥 菌液吸收后袁
用波长 圆缘源灶皂 的 哉灾 灯照射渊照射剂量为 员园园允 辕 酝圆 辕
酝蚤灶冤袁哉灾 剂量根据时间长短调整渊照射 园尧圆尧源尧远尧愿尧
员园皂蚤灶冤袁猿园燥悦恒温培养 猿凿后统计菌落数遥
丝裂霉素 悦敏感性测定袁对数生长中期细胞用终
浓度为 圆园滋早 辕 皂造的丝裂霉素 悦 猿园益下处理 猿园皂蚤灶袁取
源苑
摇 员 期 耐辐射球菌中 责则蚤粤类似基因突变对 阅晕粤修复和 阅晕粤转化的影响
适量菌液连续稀释至合适浓度后涂布于 栽郧再 平板遥
猿园益恒温培养 猿凿后统计菌落数遥
员郾 苑摇 转化效率测定
则责燥月基因一些位点的突变能导致细菌对利福平
具有抗性遥 带有利福平抗性点突变的 则责燥月 转化到正
常菌株袁如果发生依赖于同源重组的转化可以使正常
菌株具有利福平抗性咱员愿暂 遥 我们利用这套系统研究了
阅则圆远园远 突变对耐辐射球菌依赖于同源重组的转化的
影响遥 首先用引物 则责燥月鄄云 和 则责燥月鄄砸 从具有利福平抗
性的 砸蚤枣砸突变株中扩增得到带有利福平抗性点突变的
则责燥月片段咱员怨袁圆园暂 遥 将该片段转化到野生株尧阅则圆远园远 突变
株和补偿株中袁计算重组率遥 转化试验参照 月葬贼贼蚤泽贼葬 的
方法渊稍作修改冤 咱圆员暂 遥 挑取耐辐射球菌菌株在 缘皂造
栽郧再液体培养基中 猿园益恒温培养至对数生长中期
渊韵阅远园园为 园郾 源 耀 园郾 远袁三者尽可能接近冤遥 源益袁猿园园园则 辕皂蚤灶 离心 缘皂蚤灶袁收集菌体袁用 员皂造 无菌 悦葬悦造圆 溶液渊含远园皂皂燥造 辕 蕴 悦葬悦造圆 的 圆 伊 栽郧再培养基冤清洗 圆 次袁最后悬
浮在 园郾 缘皂造 悦葬悦造圆 溶液中遥 猿园益摇床 圆园园则 辕 皂蚤灶 培养员郾 缘澡遥 冰浴 员皂蚤灶袁加入 员园园灶早 的带有利福平抗性点突
变的 则责燥月片段袁轻摇混匀袁继续冰浴 猿缘皂蚤灶 后袁将其转
移到 缘皂造新鲜的 栽郧再培养基中继续培养 员愿澡遥 将得到
的菌液稀释 员园苑袁取 员园园滋造涂于固体 栽郧再平板上袁用于
计算活细胞总数遥 同时菌液分别稀释 员园员尧员园圆尧员园猿 和
员园源袁取 员园园滋造涂于含 缘园滋早 辕 皂造 的利福平固体 栽郧再 平
板上袁用于计算转化的个数遥 猿园益恒温培养 圆 耀 猿凿袁统
计单菌落个数遥 转化率按转化株菌落数 辕 员园园灶早 阅晕粤 辕
活细胞总数计算遥
表 员摇 试验中用到的引物
栽葬遭造藻 员摇 孕则蚤皂藻则泽 怎泽藻凿 蚤灶 贼澡蚤泽 泽贼怎凿赠
引物 责则蚤皂藻则泽 序列 泽藻择怎藻灶糟藻 渊缘忆寅猿忆冤
孕员 栽郧粤悦悦悦粤栽悦粤粤悦悦粤栽悦粤悦悦栽
孕圆 栽栽栽 郧郧粤栽悦悦郧悦栽悦悦粤郧郧悦栽粤郧悦郧悦郧郧
孕猿 悦栽郧 粤粤郧悦栽栽粤悦悦郧粤郧粤悦悦郧栽郧悦悦粤粤粤郧栽郧郧
孕源 粤粤粤悦栽郧郧粤粤悦郧郧悦栽郧栽粤栽悦郧
孕缘 栽悦粤悦悦悦栽粤悦郧郧悦郧粤粤粤悦悦悦栽郧
孕远 粤悦悦栽悦郧郧悦郧郧悦粤粤栽悦悦粤悦栽悦
圆远园远鄄云 栽栽栽栽栽栽悦粤栽粤栽郧粤悦栽悦栽悦栽郧郧粤悦悦郧栽栽栽悦栽悦悦悦悦
圆远园远鄄砸 栽栽栽 郧郧粤栽悦悦郧郧粤栽郧悦郧栽栽栽粤栽郧郧郧悦栽栽郧粤悦
则责燥月鄄云 郧郧悦郧栽郧栽粤悦栽栽悦粤悦郧粤郧悦栽悦悦栽粤悦
则责燥月鄄砸 悦郧栽悦栽栽悦郧栽悦郧粤郧郧栽悦粤悦郧悦粤郧渊圆猿怨愿冤
注院下划线代表酶切位点遥
晕燥贼藻院哉灶凿藻则造蚤灶藻泽 则藻责则藻泽藻灶贼 贼澡藻 则藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 糟怎贼贼蚤灶早 泽蚤贼藻泽援
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 序列分析
从 晕悦月陨数据库渊憎憎憎援 灶糟遭蚤援 灶造皂援 灶蚤澡援 早燥增冤上得到
了编码假定 责则蚤粤 的基因 阅则圆远园远遥 预期的耐辐射球菌
孕则蚤粤蛋白由 怨圆缘 个氨基酸组成袁分子量为 怨怨员缘苑阅葬遥
与 月援 泽怎遭贼蚤造蚤泽 孕则蚤粤 悦鄄末端的 圆愿苑 耀 愿园员 氨基酸域相比袁
阅则圆远园远 悦鄄末端的 源员远 耀 怨圆圆 氨基酸域显示了 圆苑豫的一
致性与 缘猿豫的相似性遥
现有文献描述了 耘援 糟燥造蚤 孕则蚤粤中的几个保守序列袁
包括院 晕鄄末端特异性 阅晕粤 结构识别域袁 宰葬造噪藻则鄄粤尧
宰葬造噪藻则鄄月以及 员 个锌指结构域咱圆暂 遥 阅则圆远园远 与 耘援 糟燥造蚤
以及 月援 泽怎遭贼蚤造蚤泽 孕则蚤粤 的结构域同源序列对比显示袁在
阅则圆远园远 中只有锌指结构域是高度保守的渊图 员冤遥 孕则蚤粤
的特异性 阅晕粤结构识别功能是由 晕鄄末端 猿 个保守的
氨基酸残基 粤泽责员苑尧 栽赠则员愿 和 郧造赠猿苑 控制的咱圆圆暂 遥 而
粤泽责员苑 和 郧造赠猿苑 在 阅则圆远园远 渊粤泽责源缘 葬灶凿 郧造赠缘怨冤中都是
保守的袁但是 栽赠则员愿 被 孕澡藻源远 取代了遥 由于 阅则圆远园远 没
有保守的 宰葬造噪藻则鄄粤 和 宰葬造噪藻则鄄月 域袁所以它可能没有
解旋酶活性遥 有趣的是袁尽管 孕则蚤粤 是 杂云圆 家族的成
员袁是带有 猿忆鄄缘忆极性的 阅晕粤解旋酶咱圆猿暂 袁但是它的解旋
酶活性对大肠杆菌中的复制重启动过程不是必需
的咱圆源袁 圆缘暂 遥 基于上面的序列分析袁我们认为 阅则圆远园远远 是
耐辐射球菌中的 责则蚤粤类似基因遥
圆郾 圆摇 阅则圆远园远 基因突变对菌株生长的影响
为了检测 责则蚤粤 相似基因 阅则圆远园远 在耐辐射球菌中
的功能袁利用删除取代法构建了 阅则圆远园远 突变株咱员苑暂 遥
阅则圆远园远 密码子序列的 员 耀 圆缘猿远遭责 区域被 郧则燥藻造鄄噪葬灶 取
代了渊图 圆 原 月尧悦冤遥 我们将带有完整 阅则圆远园远 基因的
质粒转化入突变株得到了补偿株遥
由于 责则蚤粤 的突变会导致大肠杆菌渊耘援 糟燥造蚤冤 咱愿暂 尧枯
草 杆 菌 渊 月援 泽怎遭贼蚤造蚤泽 冤 咱怨暂 尧 脑 膜 炎 球 菌 渊 晕援
早燥灶燥则则澡燥藻葬藻冤 咱员园暂等菌种生长缺陷袁我们比较了 阅则圆远园远
突变株和野生株 砸员 的生长状况遥 与前述菌种类似袁
阅则圆远园远 突变株在固体培养基上产生的菌落明显比野
生株要小渊图 猿鄄粤冤遥 为了更详细地研究 阅则圆远园远 突变
对耐辐射球菌在正常条件下生长的影响袁试验比较了
野生株 砸员 和突变株 酝圆远园远 的生长速率渊图 猿鄄月冤袁突
变株的倍增时间差不多是野生株的 圆 倍袁而补偿
阅则圆远园远 基因后袁几乎能完全恢复生长遥 说明 阅则圆远园远
突变导致了生长延迟袁而这个生长延迟不是因为其他
基因的突变造成的遥
大肠 杆 菌 渊 耘援 糟燥造蚤 冤 咱愿暂 尧 脑 膜 炎 球 菌 渊 晕援
缘苑
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
图 员摇 阅则圆远园远 与大肠杆菌尧枯草芽孢杆菌中的同源序列比对
云蚤早援 员摇 杂藻择怎藻灶糟藻 葬造蚤早灶皂藻灶贼 燥枣 阅则圆远园远 憎蚤贼澡 孕则蚤粤泽 枣则燥皂 耘援 糟燥造蚤 葬灶凿 月援 泽怎遭贼蚤造蚤泽
早燥灶燥则则澡燥藻葬藻冤 咱怨暂摇 和枯草杆菌渊月援 泽怎遭贼蚤造蚤泽冤 咱员园暂等菌种中
责则蚤粤 的突变会使其生存率下降 员园 耀 员园园 倍遥 本试验使
用 月葬糟蕴蚤早澡贼 月葬糟贼藻则蚤葬造 灾蚤葬遭蚤造蚤贼赠 试剂盒测定了 阅则圆远园远 对
细胞生存率的损伤袁试剂盒含有 圆 种核酸染料袁其中绿
色荧光染料渊杂再栽韵 怨冤可以渗透完整的细胞膜袁而红色
荧光染料渊责则燥责蚤凿蚤怎皂 蚤燥凿蚤凿藻袁 孕陨冤只能渗透受损的细胞
膜遥 因此袁利用以合适的比例混合的 杂再栽韵怨 和 孕陨袁细
胞膜完整的细菌会染成绿色袁而细胞膜破损的细菌会
染成红色遥 细胞生存率可以用荧光发射显微镜测定遥
阅则圆远园远 突变株的生存率大约是野生株的 猿猿豫 袁而补偿
株的生存率能够达到 远怨豫 渊图 猿 原 悦冤袁这意味着 责则蚤粤
突变株的生长缺陷可能是细胞死亡增加引起的遥
圆郾 猿摇 阅则圆远园远 突变对耐辐射球菌 阅晕粤 修复能力的影
响
责则蚤粤 的突变会增加细菌对 阅晕粤 损伤剂如 哉灾 照
射尧早葬皂皂葬 辐射尧过氧化氢的敏感性咱员袁 圆暂 遥 为了检测
阅则圆远园远 突变对这种超级细菌 阅晕粤 修复能力的影响袁
本试验对突变株和野生株做了 哉灾 照射和丝裂霉素 悦
处理遥 意外的是袁在 哉灾照射处理后袁突变株和野生株
的存活率并没有显著的不同渊图 源 原 粤冤遥 突变株只是
轻微降低了对丝裂霉素 悦 的抗性渊图 源 原 月冤遥 这些结
果显示袁阅则圆远园远 与它在其他菌种中的同源物不同袁它
远苑
摇 员 期 耐辐射球菌中 责则蚤粤类似基因突变对 阅晕粤修复和 阅晕粤转化的影响
图 圆摇 突变株的构建
云蚤早援 圆摇 栽澡藻 糟燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶 燥枣 阅则圆远园远 皂怎贼葬灶贼
粤院耐辐射球菌 阅则圆远园远 删除突变株构建的方法渊大箭头表示基因的转录方向袁 小箭头表示引物所在的位置和方向冤曰月院突变株的
孕悦砸 验证 渊酝院阅晕粤 皂葬则噪藻则曰员尧圆院在突变株中用 孕员尧孕源 扩增出来的片段曰猿院在野生株中用 孕员尧孕源 扩增出来的片段冤曰悦院突变株的
孕悦砸 验证 渊酝院阅晕粤 皂葬则噪藻则曰员院在野生株中用 孕缘尧孕远 扩增出来的片段曰圆尧猿院在突变株中用 孕缘尧孕远 不能扩增出相应片段冤遥
粤院杂贼则葬贼藻早赠 枣燥则 凿藻造藻贼蚤燥灶 葬 早藻灶藻 蚤灶 阅援 则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽 渊月蚤早 葬则则燥憎泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 贼澡藻 凿蚤则藻糟贼蚤燥灶 燥枣 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶曰泽皂葬造造 葬则则燥憎泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 贼澡藻 责燥泽蚤贼蚤燥灶 葬灶凿
凿蚤则藻糟贼蚤燥灶 燥枣 责则蚤皂藻泽冤 援 月院栽澡藻 凿蚤泽则怎责贼蚤燥灶 皂怎贼葬灶贼 燥枣 阅则圆远园远 憎葬泽 糟燥灶枣蚤则皂藻凿 遭赠 早藻灶燥皂蚤糟 孕悦砸渊酝院阅晕粤 皂葬则噪藻则曰员袁圆院孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 责则蚤皂藻则泽 孕员
葬灶凿 孕源 枣则燥皂 阅则圆远园远鄄灶怎造造 泽贼则葬蚤灶曰猿院孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 责则蚤皂藻则泽 孕员 葬灶凿 孕源 枣则燥皂 阅援 则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽 砸员冤曰 悦院栽澡藻 凿蚤泽则怎责贼蚤燥灶 皂怎贼葬灶贼 燥枣 阅则圆远园远 憎葬泽
糟燥灶枣蚤则皂藻凿 遭赠 早藻灶燥皂蚤糟 孕悦砸渊酝院阅晕粤 皂葬则噪藻则曰员院孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 责则蚤皂藻则泽 孕缘 葬灶凿 孕远 枣则燥皂 阅援 则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽 砸员曰圆袁猿院孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 责则蚤皂藻则泽
孕缘 葬灶凿 孕远 枣则燥皂 阅则圆远园远 原 灶怎造造 泽贼则葬蚤灶冤 援
对耐辐射球菌的 阅晕粤修复并不是必需的遥
圆郾 源摇 阅则圆远园远 对耐辐射球菌依赖于同源重组的转化作
用
由于 责则蚤粤 突变株降低了大肠杆菌咱愿暂中的 孕员 转导
效率和脑膜炎球菌咱怨暂中依赖于同源重组的转化效率袁
我们也测试 阅则圆远园远 在同源重组介导的 阅晕粤 转化作
用遥 从 砸蚤枣砸 突变株中得到带有利福平抗性的 阅晕粤 片
段袁这个 阅晕粤片段转化后能与染色体重组遥 通过计算
砸蚤枣砸 菌落个数与总的菌落数得到的转化率如表 圆 所
示袁野生株的转化率大约是 员园郾 缘 伊 员园 原源 辕 员园园灶早袁而
阅则圆远园远 突变株的转化率只有 园郾 园苑 伊 员园 原源 辕 员园园灶早袁比
野生株要低 员园园 多倍遥 但与细胞生存率类似袁补偿株
只能部分补偿突变株的转化率遥 补偿株的转化率为
员郾 苑 伊 员园 原源 辕 员园园 灶早袁大约比突变株要高 圆园 倍遥 从这些
结果可以推测 阅则圆远园远 对耐辐射球菌依赖于同源重组
的转化至关重要遥
表 圆摇 野生株尧突变株尧补偿株的利福平抗性片段转化率
栽葬遭造藻 圆摇 栽澡藻 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠 燥枣 贼澡藻 皂怎贼葬灶贼袁
贼澡藻 糟燥皂责造藻皂藻灶贼葬贼蚤燥灶 泽贼则葬蚤灶 葬灶凿 贼澡藻 憎蚤造凿 贼赠责藻 泽贼则葬蚤灶
菌株
泽贼则葬蚤灶泽
转化效率
贼贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠渊员 伊 员园 原 源 辕 员园园 灶早冤
砸员 员园郾 缘渊苑郾 源 耀 员圆郾 远冤
酝圆远园远 园郾 园苑渊 园郾 园圆缘 耀 园郾 员缘圆冤
酝圆远园远 原 悦 员郾 苑渊 员郾 园缘 耀 圆郾 员猿冤
注院表中数值为 源 次重复试验的平均值 依 杂阅遥
晕燥贼藻院灾葬造怎藻泽 蚤灶 贼澡藻 贼葬遭造藻 葬则藻 皂藻葬灶泽 依 杂阅 燥枣 枣燥怎则 蚤灶凿藻责藻灶凿藻灶贼 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼泽援
猿摇 讨论
完整并且准确的复制基因组 阅晕粤 是维持生物基
因组稳定性的关键遥 在细菌中袁复制从复制原点 燥则蚤悦
苑苑
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
图 猿摇 阅则圆远园远 突变对耐辐射球菌生长的影响
云蚤早援 猿摇 栽澡藻 早则燥憎贼澡 凿藻枣藻糟贼 燥枣 阅则圆远园远 皂怎贼葬灶
粤院贼野生株 砸员 与突变株 酝圆远园远 在固体培养基上的菌落大小曰月院野生株 砸员袁突变株 酝圆远园远 与
补偿株 酝圆远园远鄄悦的生长曲线曰悦院野生株 砸员袁突变株 酝圆远园远 与补偿株 酝圆远园远鄄悦的生存率
粤院悦燥造燥灶蚤藻泽 燥枣 贼澡藻 皂怎贼葬灶贼 葬灶凿 贼澡藻 憎蚤造凿 贼赠责藻 泽贼则葬蚤灶 燥灶 泽燥造蚤凿 责造葬贼藻泽曰月院栽澡藻 早则燥憎贼澡 责葬贼贼藻则灶 燥枣 贼澡藻 皂怎贼葬灶贼袁 贼澡藻 糟燥皂责造藻皂藻灶贼葬贼蚤燥灶 泽贼则葬蚤灶 葬灶凿 贼澡藻
憎蚤造凿 贼赠责藻 泽贼则葬蚤曰悦院栽澡藻 糟藻造造 增蚤葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 贼澡藻 憎蚤造凿 贼赠责藻 泽贼则葬蚤灶渊砸员冤袁贼澡藻 皂怎贼葬灶贼渊酝圆远园远冤 葬灶凿 贼澡藻 糟燥皂责造藻皂藻灶贼葬贼蚤燥灶 泽贼则葬蚤灶渊酝圆远园远鄄悦冤
图 源摇 阅砸圆远园远 突变株在 哉灾照射和丝裂霉素处理后的存活率
云蚤早援 源摇 杂怎则增蚤增蚤灶早 枣则葬糟贼蚤燥灶 燥枣 阅砸圆远园远 皂怎贼葬灶贼泽 怎灶凿藻则 哉灾 则葬凿蚤葬贼蚤燥灶 葬灶凿 皂蚤贼燥皂赠糟蚤灶 泽贼则藻泽泽
粤院阅砸圆远园远 突变株 哉灾照射后的存活率曰 月郾 阅砸圆远园远 突变株丝裂霉素处理后的存活率
粤院杂怎则增蚤增蚤灶早 枣则葬糟贼蚤燥灶 燥枣 阅砸圆远园远 皂怎贼葬灶贼泽 怎灶凿藻则 哉灾 则葬凿蚤葬贼蚤燥灶曰 月院杂怎则增蚤增蚤灶早 枣则葬糟贼蚤燥灶 燥枣 阅砸圆远园远 皂怎贼葬灶贼泽 怎灶凿藻则 皂蚤贼燥皂赠糟蚤灶 泽贼则藻泽泽
起始袁双向完成细菌基因组复制袁也就是每个复制叉需
要连续合成几 酝遭的 阅晕粤才能到达复制终止位点咱员暂 遥
许多内在和外在的事件都会停止复制叉的前进袁特别
是遇到 阅晕粤 损伤遥 停止的复制叉需要重新启动才能
继续进行复制遥 在细菌中袁有一系列蛋白参与复制叉
重启动的过程袁孕则蚤粤 在这个过程中起了关键作用遥 复
制叉重启动偶联了生物体 阅晕粤代谢 圆 个主要的事件院
阅晕粤修复和复制遥 因此袁责则蚤粤 的突变可以直接导致细
菌对各种 阅晕粤损伤的耐受能力显著降低咱愿暂 遥
在具有超级辐射抗性的耐辐射球菌中袁阅则圆远园远 被
认为是 责则蚤粤 基因的同源物咱员远暂 遥 孕则蚤粤 分为 圆 个主要结
构域院阅晕粤结合域和 阅晕粤 解旋酶域遥 非常有趣的是袁
我们通过序列分析发现袁阅则圆远园远 中只有解旋酶域中的
锌指结构域是高度保守的袁晕鄄端 阅晕粤结合域的 猿 个保
守氨基酸中只有 圆 个是保守的遥 这预示 阅则圆远园远 可能
没有解旋酶活性袁其功能也与其他细菌有差异遥 我们
愿苑
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员圆袁圆远渊员冤院园园苑猿 耀 园园苑怨
的进一步试验显示院阅则圆远园远 突变导致菌体生长缓慢袁
细胞生存率急剧下降袁对细胞生长的损伤较大曰但是突
变并没有降低耐辐射球菌对各种 阅晕粤损伤剂的抗性遥
然而袁通过将带有利福平抗性的 阅晕粤片段转化试验发
现袁阅则圆远园远 对耐辐射球菌依赖于同源重组的转化至关
重要遥 试验结果说明耐辐射球菌中 责则蚤粤 类似基因
渊阅则圆远园远冤在该细菌复制叉重启动过程不是必需的袁耐
辐射球菌中非原点依赖的复制叉重启动机制可能与其
他菌种不同遥
高效的 阅晕粤损伤修复系统是耐辐射球菌超级辐
射抗性必需的咱圆远暂 遥 阅晕粤 损伤修复后袁复制机器需要
重新组装启动基因组复制遥 那么在这个超级细菌中袁
复制叉是如何实现重启动的呢钥 在大肠杆菌中已经发
现袁阅晕粤 同源重组修复基因 砸藻糟云韵砸 在复制叉重启动
过程也发挥了一定的作用咱圆苑暂 遥 耐辐射球菌也存在
砸藻糟云韵砸 基因咱员猿暂 袁它们是否在该细菌的复制叉重启动
过程发挥了关键作用钥 耐辐射球菌中复制叉重启动机
制与其他细菌的差异是否与其超级辐射抗性有关钥 还
有待于进一步试验去验证遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 酝葬泽葬蚤 匀袁 栽葬灶葬噪葬 栽袁 运燥澡凿葬 阅援 杂贼葬造造藻凿 则藻责造蚤糟葬贼蚤燥灶 枣燥则噪泽院 皂葬噪蚤灶早
藻灶凿泽 皂藻藻贼 枣燥则 则藻糟燥早灶蚤贼蚤燥灶 葬灶凿 泽贼葬遭蚤造蚤扎葬贼蚤燥灶咱 允暂 援 月蚤燥藻泽泽葬赠泽袁圆园员园袁猿圆
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枣燥则 泽怎则增蚤增葬造咱允暂 援 阅晕粤 砸藻责葬蚤则 渊粤皂泽贼冤袁圆园员园袁怨渊猿冤院圆园圆 原 圆园怨
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咱允暂援 允 月蚤燥造 悦澡藻皂袁员怨怨怨袁圆苑源渊猿缘冤院圆缘园圆远 原 圆缘园猿圆
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咱员圆暂摇 悦燥曾 酝 酝袁 月葬贼贼蚤泽贼葬 允 砸援 阅藻蚤灶燥糟燥糟糟怎泽 则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽鄄贼澡藻 糟燥灶泽怎皂皂葬贼藻
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蚤灶 阅藻蚤灶燥糟燥糟糟怎泽 则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽咱允暂 援 孕蕴燥杂 郧藻灶藻贼袁圆园员园袁远渊员冤院藻员园园园苑苑源
咱员源暂摇 杂造葬凿藻 阅袁 蕴蚤灶凿灶藻则 粤 月袁 孕葬怎造 郧袁 藻贼 葬造援 砸藻糟燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶 葬灶凿 则藻责造蚤糟葬贼蚤燥灶
蚤灶 阅晕粤 则藻责葬蚤则 燥枣 澡藻葬增蚤造赠 蚤则则葬凿蚤葬贼藻凿 阅藻蚤灶燥糟燥糟糟怎泽 则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽 咱 允暂 援
悦藻造造袁圆园园怨袁员猿远渊远冤院员园源源 原 员园缘缘
咱员缘暂摇 在葬澡则葬凿噪葬 运袁 杂造葬凿藻 阅袁 月葬蚤造燥灶藻 粤袁 藻贼 葬造援 砸藻葬泽泽藻皂遭造赠 燥枣 泽澡葬贼贼藻则藻凿
糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽 蚤灶 阅藻蚤灶燥糟燥糟糟怎泽 则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽 咱 允暂 援 晕葬贼怎则藻袁 圆园园远袁 源源猿
渊苑员员员冤院缘远怨 原 缘苑猿
咱员远暂摇 酝葬噪葬则燥增葬 运 杂袁 粤则葬增蚤灶凿 蕴袁 宰燥造枣 再 陨袁 藻贼 葬造援 郧藻灶燥皂藻 燥枣 贼澡藻 藻曾贼则藻皂藻造赠
则葬凿蚤葬贼蚤燥灶鄄则藻泽蚤泽贼葬灶贼 遭葬糟贼藻则蚤怎皂 阅藻蚤灶燥糟燥糟糟怎泽 则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽 增蚤藻憎藻凿 枣则燥皂
贼澡藻 责藻则泽责藻糟贼蚤增藻 燥枣 糟燥皂责葬则葬贼蚤增藻 早藻灶燥皂蚤糟泽 咱 允暂 援 酝蚤糟则燥遭蚤燥造 酝燥造 月蚤燥造
砸藻增袁圆园园员袁远缘渊员冤院源源 原 苑怨
咱员苑暂摇 载怎 郧袁 宰葬灶早 蕴袁 悦澡藻灶 匀袁 藻贼 葬造援 砸藻糟韵 蚤泽 藻泽泽藻灶贼蚤葬造 枣燥则 阅晕粤 凿葬皂葬早藻
则藻责葬蚤则 蚤灶 阅藻蚤灶燥糟燥糟糟怎泽 则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽咱 允暂 援 允 月葬糟贼藻则蚤燥造袁圆园园愿袁员怨园 渊苑冤院
圆远圆源 原 圆远圆愿
咱员愿暂摇 华孝挺袁王超袁黄丽分袁李铭峰袁玉媛袁陈玙袁翁石莉袁童艳铮袁田
兵袁华跃进援不同利福平浓度压力下耐辐射球菌的自发突变率与
突变谱研究咱允暂 援核农学报袁圆园员园袁圆源渊远冤院员员远远 原 员员苑员援
咱员怨暂摇 匀怎葬 载袁 匀怎葬灶早 蕴袁 栽蚤葬灶 月袁 藻贼 葬造援 陨灶增燥造增藻皂藻灶贼 燥枣 则藻糟匝 蚤灶 贼澡藻
怎造贼则葬增蚤燥造藻贼 凿葬皂葬早藻 则藻责葬蚤则 责葬贼澡憎葬赠 蚤灶 阅藻蚤灶燥糟燥糟糟怎泽 则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽咱 允暂 援
酝怎贼葬贼 砸藻泽袁圆园园愿袁远源员渊员 原 圆冤院源愿 原 缘猿
咱圆园暂摇 运蚤皂 酝袁 宰燥造枣枣 耘袁 匀怎葬灶早 栽袁 藻贼 葬造援 阅藻增藻造燥责蚤灶早 葬 早藻灶藻贼蚤糟 泽赠泽贼藻皂 蚤灶
阅藻蚤灶燥糟燥糟糟怎泽 则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽 枣燥则 葬灶葬造赠扎蚤灶早 皂怎贼葬贼蚤燥灶泽 咱 允 暂 援 郧藻灶藻贼蚤糟泽袁
圆园园源袁员远远渊圆冤院远远员 原 远远愿
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阅藻蚤灶燥糟燥糟糟怎泽 则葬凿蚤燥凿怎则葬灶泽 砸员 蚤泽 葬 灶燥增藻造 则藻早怎造葬贼燥则 燥枣 则藻糟粤 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶
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则藻糟燥早灶蚤贼蚤燥灶 燥枣 葬 造藻葬凿蚤灶早 泽贼则葬灶凿 蚤灶 泽贼葬造造藻凿 则藻责造蚤糟葬贼蚤燥灶 枣燥则噪泽 遭赠 孕则蚤粤
咱允暂 援 耘酝月韵 允袁圆园园苑袁圆远渊员园冤院圆缘愿源 原 圆缘怨猿
咱圆猿暂摇 韵怎扎燥怎灶蚤泽 悦 粤袁 月造藻灶糟燥憎藻 月 允援 月葬糟贼藻则蚤葬造 阅晕粤 则藻责造蚤糟葬贼蚤燥灶 蚤灶蚤贼蚤葬贼蚤燥灶
枣葬糟贼燥则 责则蚤粤 蚤泽 则藻造葬贼藻凿 贼燥 责则燥贼藻蚤灶泽 遭藻造燥灶早蚤灶早 贼燥 贼澡藻 耶 阅耘粤阅鄄遭燥曾 爷
枣葬皂蚤造赠咱允暂 援 晕怎糟造藻蚤糟 粤糟蚤凿泽 砸藻泽袁员怨怨员袁员怨渊圆源冤院远怨缘猿
咱圆源暂摇 在葬增蚤贼扎 运 匀袁 酝葬则蚤葬灶泽 运 允援 粤栽孕葬泽藻鄄凿藻枣蚤糟蚤藻灶贼 皂怎贼葬灶贼泽 燥枣 贼澡藻
耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤 阅晕粤 则藻责造蚤糟葬贼蚤燥灶 责则燥贼藻蚤灶 孕则蚤粤 葬则藻 糟葬责葬遭造藻 燥枣
糟葬贼葬造赠扎蚤灶早 贼澡藻 葬泽泽藻皂遭造赠 燥枣 葬糟贼蚤增藻 责则蚤皂燥泽燥皂藻泽 咱 允暂 援 允 月蚤燥造 悦澡藻皂袁
员怨怨圆袁圆远苑渊员园冤院远怨猿猿 原 远怨源园
咱圆缘暂摇 杂葬灶凿造藻则 杂 允袁 杂葬皂则葬 匀 杂袁 悦造葬则噪 粤 允援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造 泽怎责责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣
责则蚤粤圆院院噪葬灶 责澡藻灶燥贼赠责藻泽 蚤灶 耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤 运鄄员圆 遭赠 皂怎贼葬贼蚤燥灶泽 蚤灶
责则蚤粤袁 造藻曾粤袁 葬灶凿 凿灶葬悦咱允暂 援 郧藻灶藻贼蚤糟泽袁员怨怨远袁员源猿渊员冤院缘 原 员猿
咱圆远暂摇 华孝挺袁田 兵袁 华跃进援耐辐射奇球菌同源重组修复机制研究新
进展咱允暂 援核农学报袁圆园员园袁圆源渊远冤院员员怨圆 原 员员怨苑
咱圆苑暂摇 郧则燥皂责燥灶藻 郧袁 杂葬灶糟澡藻扎 晕袁 阅怎泽噪燥 耘澡则造蚤糟澡 杂袁 藻贼 葬造援 砸藻择怎蚤则藻皂藻灶贼 枣燥则
砸藻糟云韵砸鄄皂藻凿蚤葬贼藻凿 则藻糟燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶 蚤灶 责则蚤粤 皂怎贼葬灶贼 咱 允 暂 援 酝燥造藻糟怎造葬则
皂蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁圆园园源袁缘圆渊圆冤院缘缘员 原 缘远圆
渊责任编辑摇 王媛媛冤
怨苑