全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员猿袁圆苑渊怨冤院员圆怨猿 耀 员猿园员允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院收稿日期院圆园员圆鄄员圆鄄园源摇 接受日期院圆园员猿鄄园缘鄄园猿
基金项目院北京市园林绿化局计划项目资助渊再蕴匀匀圆园员猿园园员园圆冤
作者简介院贾海燕袁女袁主要从事园林植物育种研究遥 耘鄄皂葬蚤造院躁蚤葬澡葬蚤赠葬灶怨怨怨岳 赠葬澡燥燥援 糟灶
通讯作者院杨凯袁男袁副研究员袁主要从事园林植物和微生物学研究遥 耘鄄皂葬蚤造院再葬灶早噪葬蚤愿怨苑愿岳 员圆远援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员猿冤园怨鄄员圆怨猿鄄园怨
三价病毒外壳蛋白基因介导的百合抗病毒初步研究
贾海燕员袁圆 摇 焦摇 阳员袁 圆 摇 芦摇 强员袁 圆 摇 张摇 克圆 摇 杨摇 凯员
渊员 北京农学院农业应用新技术北京市重点实验室袁北京摇 员园圆圆园远曰
圆北京农学院园林学院袁北京摇 员园圆圆园远冤
摘摇 要院百合病毒病是制约百合生产的一类重要病害袁由于抗病资源的匮乏袁利用常规育种方法培育抗病毒
百合品种的工作几科停滞遥 本研究克隆了三种常见和危害最严重的百合病毒外壳蛋白渊糟燥葬贼 责则燥贼藻蚤灶袁悦孕冤
基因袁百合无症病毒渊蕴蚤造赠 泽赠皂责贼燥皂造藻泽泽 增蚤则怎泽袁 蕴杂灾冤袁百合斑驳病毒渊蕴蚤造赠 皂燥贼贼造藻 增蚤则怎泽袁 蕴酝燥灾摇 冤和黄瓜花叶病
毒渊悦怎糟怎皂遭藻则 皂燥泽葬蚤糟 增蚤则怎泽袁 悦酝灾冤袁并且构建了三价表达载体袁用根癌农杆菌渊粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 贼怎皂藻枣葬糟蚤藻灶泽冤介
导的方法转化白天堂百合渊蕴蚤造蚤怎皂 泽责责援 冤袁为百合的抗病毒育种提供种植资源和育种材料遥
关键词院百合曰抗病毒曰外壳蛋白基因曰转基因
摇 摇 百合渊蕴蚤造蚤怎皂 泽责责援 冤是百合科百合属多年生草本球
根植物袁是重要的观赏植物袁其主要的原产地尧起源和
自然分布中心在中国遥 近年来袁中国百合种植业发展
迅速袁已成为一些地区的主要经济支柱产业遥 随着百
合种球大量进口以及多年无性繁殖袁百合病毒病也日
趋严重袁已成为制约中国百合产业化发展的最大瓶颈遥
有多种病毒可以侵染百合袁据沈淑琳统计袁侵染百合的
病毒种类有 员源 种咱员暂 袁王继华统计有 员远 种咱圆暂 遥 常见的
病毒种类为黄瓜花叶病毒 渊 悦怎糟怎皂遭藻则 皂燥泽葬蚤糟 增蚤则怎泽袁
悦酝灾冤尧百合无症病毒渊蕴蚤造赠 泽赠皂责贼燥皂造藻泽泽 增蚤则怎泽袁蕴杂灾冤尧百
合斑驳病毒渊蕴蚤造赠 皂燥贼贼造藻 增蚤则怎泽袁蕴酝燥灾冤等遥
用常规方法防治百合病毒病较为困难袁也不能从
根本上解决百合病毒病的传播曰现阶段比较成功的一
种抗病毒手段是通过转外壳蛋白基因获得抗性遥 员怨愿远
年袁孕燥憎藻造造鄄粤遭藻造 等咱猿暂 首次成功地将烟草花叶病毒
渊栽燥遭葬糟糟燥 皂燥泽葬蚤糟 增蚤则怎泽袁 栽酝灾冤的外壳蛋白基因转化烟
草植株中袁获得能稳定遗传的抗病毒烟草植株遥 员怨愿愿
年 悦怎燥扎扎燥等咱源暂首先将 悦酝灾的外壳蛋白基因转入烟草
中袁得到能显著抵抗 悦酝灾侵染的转基因烟草曰 员怨怨苑 年
程英豪咱缘暂等通过农杆菌介导法将 悦酝灾 的外壳蛋白基
因的 糟阅晕粤成功引入番茄袁得到了转基因番茄袁并表现
出了明显的抗性曰圆园园缘 年 郧葬则早燥怎则蚤鄄月燥怎扎蚤凿咱远暂等将马铃
薯 再病毒 渊孕燥贼葬贼燥 增蚤则怎泽 再袁 孕灾再冤的 悦孕 基因通过农杆
菌介导法导入马铃薯中袁转基因马铃薯中表达的病毒
悦孕可以介导马铃薯对 孕灾再 产生抗性遥 此外袁外壳蛋
白基因介导的抗病毒基因工程还在西瓜咱苑暂 尧小麦咱愿暂 尧
水稻咱怨暂以及百合咱员园 原 员猿暂等多种植物中成功袁获得病毒
抗性遥
本研究利用基因工程手段构建了三价百合病毒外
壳蛋白基因植物表达载体尧建立了百合转基因体系遥
通过转基因技术袁培育新型多抗转基因百合品种遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
于北京农学院实验农场温室中袁采集具有明显黄
瓜花叶病毒尧百合无症病毒和百合斑驳病毒侵染病症
的西伯利亚百合的幼叶袁 原 愿园益保存袁备用遥
转基因受体白天堂百合由北京农学院百合育种研
究室提供遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 砸晕粤提取和 糟阅晕粤 合成 摇 采用 栽则蚤扎燥造 法提取
百合叶片总 砸晕粤曰糟阅晕粤 第一链的合成按照 孕则燥皂藻早葬
试剂盒说明进行遥
员郾 圆郾 圆摇 孕悦砸引物设计
员郾 圆郾 圆郾 员摇 百合三种病毒外壳蛋白基因的克隆摇 根据
猿怨圆员
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
百合无症病毒 渊 郧匝员缘园远愿圆郾 员冤尧百合斑驳病毒 渊 晕悦 赃
园园缘圆愿愿郾 员冤和黄瓜花叶病毒渊耘云员缘愿员员园郾 员冤的外壳蛋白
基因序列袁设计引物序列如下院
蕴杂灾鄄云院缘忆鄄粤栽郧悦粤粤栽悦粤粤郧粤悦悦粤郧悦粤悦粤粤郧粤鄄猿忆
蕴杂灾鄄砸院缘忆鄄粤栽悦悦粤栽栽粤栽栽栽郧悦郧栽粤栽悦郧粤栽郧粤鄄猿忆
蕴酝燥灾鄄云院缘忆鄄粤栽郧郧悦粤粤粤栽郧粤郧粤悦粤悦栽悦粤粤栽郧 鄄猿忆
蕴酝燥灾鄄砸院缘忆鄄栽栽粤悦粤栽粤郧粤粤粤栽栽悦悦粤粤郧栽粤粤郧郧鄄猿忆
悦酝灾鄄云院缘忆鄄粤栽郧郧粤悦粤粤粤栽悦栽郧粤粤栽悦粤粤悦悦粤郧鄄猿忆
悦酝灾鄄砸院缘忆鄄栽悦粤郧粤悦栽郧郧郧粤郧悦粤悦栽悦悦粤郧鄄猿忆
员郾 圆郾 圆郾 圆摇 悦葬酝灾 猿缘杂 启动子及 晕韵杂 终止子的克隆 摇
根据 责悦粤酝月陨粤 原员猿园源 载体序列渊粤云圆猿源猿园园郾 员冤和后续
构建载体需要设计引物袁在 悦葬酝灾 猿缘杂 启动子的正向
引物引入了 匀蚤灶凿芋酶切位点袁反向引物引入了 孕泽贼玉
酶切位点曰在 晕韵杂 终止子的正向引物中引入了 载遭葬玉
和 杂皂葬玉酶切位点袁反向引物有两条袁分别引入 月葬皂匀
玉尧杂葬糟玉酶切位点和 杂葬糟玉尧匀蚤灶凿芋酶切位点遥 渊下划
线部分冤遥
猿缘杂引物序列院
猿缘杂鄄云院缘忆鄄悦悦悦粤粤郧悦栽栽悦粤栽郧郧粤郧栽悦粤粤粤郧粤栽栽悦粤粤粤栽鄄猿忆
猿缘杂鄄砸院缘忆鄄粤粤粤悦栽郧悦粤郧粤郧栽悦悦悦悦悦郧栽郧栽栽悦栽悦栽悦鄄猿忆
晕韵杂引物序列院
晕韵杂鄄云院 缘忆鄄悦悦栽悦栽粤郧粤悦悦悦郧郧郧郧粤栽悦郧栽栽悦粤粤粤悦粤鄄
栽栽栽郧郧悦粤鄄猿忆
晕韵杂 辕 员鄄砸院 缘忆鄄粤粤郧郧粤栽悦悦郧粤郧悦栽悦栽栽粤粤栽栽悦悦悦鄄
郧粤栽悦栽粤郧栽粤粤悦粤鄄猿忆
晕韵杂 辕 圆鄄砸院 缘忆鄄粤粤郧粤郧悦栽悦粤粤郧悦栽栽栽栽粤粤栽栽悦悦悦郧粤栽悦鄄
栽粤郧栽粤粤悦粤鄄猿忆
员郾 圆郾 圆郾 猿摇 猿缘杂 与 蕴酝燥灾 基因的融合 孕悦砸 引物设计 摇
根据 责悦粤酝月陨粤鄄员猿园源 载体序列渊粤云圆猿源猿园园郾 员冤和百合
斑驳病毒渊晕悦赃园园缘圆愿愿郾 员冤的外壳蛋白基因序列袁设计
猿缘杂与 蕴酝燥灾外壳蛋白基因的融合 孕悦砸引物袁如下院
猿缘杂鄄云院缘忆鄄悦悦悦粤粤郧悦栽栽悦粤栽郧郧粤郧栽悦粤粤粤郧粤栽栽悦粤粤粤栽鄄猿忆
蕴酝燥灾鄄砸院缘忆鄄栽栽粤悦粤栽粤郧粤粤粤栽栽悦悦粤粤郧栽粤粤郧郧鄄猿忆
猿缘杂鄄蕴酝燥灾鄄砸院 缘忆鄄郧栽郧栽悦栽悦粤栽栽栽郧悦悦粤栽悦粤栽粤郧栽悦悦悦鄄
悦悦郧栽郧栽栽悦栽悦栽鄄猿忆
员郾 圆郾 猿摇 孕悦砸扩增反应 摇 模板 阅晕粤 圆园 灶早袁员园 伊 孕悦砸
月怎枣枣藻则缓冲液 圆郾 缘滋蕴袁 孕则蚤皂藻则鄄云渊员园 滋皂燥造窑蕴 原员 冤园郾 缘滋蕴袁
孕则蚤皂藻则鄄砸渊员园滋皂燥造窑蕴 原员 冤园郾 缘滋蕴袁凿晕栽孕渊圆郾 缘 皂皂燥造窑蕴 原员 冤
员郾 缘滋蕴袁则栽葬择酶 园郾 圆滋蕴袁加 凿凿匀圆韵 至 圆缘滋蕴遥 扩增条件院怨源益 圆皂蚤灶曰怨源益 源缘泽袁缘缘益 源缘泽袁苑圆益 员皂蚤灶袁猿缘 个循环曰
苑圆益 员园皂蚤灶曰源益遥
员豫琼脂糖凝胶电泳检测袁回收 孕悦砸 扩增目的片
段遥
员郾 圆郾 源摇 孕悦砸扩增产物的克隆和测序摇 根据 栽葬噪葬砸葬公
司 责酝阅 原员怨栽试剂盒说明克隆 孕悦砸产物遥
测序由宝锐通生物科技渊北京冤有限公司完成遥
员郾 圆郾 缘摇 三价植物表达载体的构建摇 用酶切连接的方
法构建植物表达载体遥 体系如下院员园 伊限制性内切酶
月怎枣枣藻则缓冲液 缘滋蕴袁限制性内切酶渊员园哉窑蕴 原员 冤员郾 缘滋蕴袁
质粒 阅晕粤 圆缘滋蕴袁加 凿凿匀圆韵 至 缘园滋蕴遥 在 猿苑益下酶切 猿耀 源 澡遥 员豫琼脂糖凝胶电泳检测袁用北京鼎国昌盛生
物科技有限公司生产的回收试剂盒回收酶切目的片
段遥
员郾 圆郾 远摇 植物表达载体转化农杆菌 蕴月粤源源园源摇 制备农
杆菌 蕴月粤源源园源 感受态细胞袁用冻融法将 猿 价病毒外壳
蛋白基因的 责悦粤酝月陨粤员猿园源 表达载体转化农杆菌
蕴月粤源源园源 感受态细胞袁得到转基因工程菌遥
员郾 圆郾 苑摇 农杆菌介导转化百合摇 采用农杆菌介导法侵
染白天堂百合的愈伤组织咱员源 原 员缘暂 遥 农杆菌侵染 猿园皂蚤灶
后将愈伤组织转入共培养培养基渊酝杂 垣 圆郾 园皂早窑蕴 原员
圆袁源 原 阅 垣 园郾 员皂早窑蕴 原员 远 原 月粤冤曰经过 缘 天培养转入筛
选培养基渊酝杂 垣 圆郾 园皂早窑蕴 原员 远 原 月粤 垣 园郾 员皂早窑蕴 原员
晕粤粤 垣 圆园皂早窑蕴 原员 匀赠早 垣 圆缘园皂早窑蕴 原员 悦藻枣冤曰筛选培养
源缘 天转入分化培养基渊酝杂 垣 圆郾 园皂早窑蕴 原员 远 原 月粤 垣
园郾 缘皂早窑蕴 原员 晕粤粤冤遥 培养条件一般为 责匀 值 缘郾 愿渊灭菌
后冤袁光照强度 圆缘园园 造曾袁 温度 圆猿 依 圆益袁光照时间 员园澡 辕
凿遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 百合三种病毒外壳蛋白基因的克隆
以百合病毒株叶片 糟阅晕粤 为模版袁分别以 蕴杂灾鄄云 辕
蕴杂灾鄄砸尧悦酝灾鄄云 辕 悦酝灾鄄砸 和 蕴酝燥灾鄄云 辕 蕴酝燥灾鄄砸 三对病毒
外壳蛋白基因特异 孕悦砸 引物进行扩增渊图 员冤遥 扩增
产物经纯化尧克隆尧测序袁获得 蕴杂灾 外壳蛋白基因 愿苑圆
遭责全长序列克隆曰悦酝灾 外壳蛋白基因 远缘苑 遭责 全长序
列克隆曰蕴酝燥灾外壳蛋白基因 愿圆愿 遭责全长序列克隆遥
圆郾 圆摇 悦葬酝灾 猿缘杂启动子及 晕韵杂终止子的克隆
以 责悦粤酝月陨粤 原 员猿园源 的质粒 阅晕粤 为模版袁分别以
猿缘杂鄄云 辕 猿缘杂鄄砸尧晕韵杂鄄云 辕 晕韵杂 辕 员 原 砸 和 晕韵杂鄄云 辕 晕韵杂 辕 圆 原 砸
为引物进行 孕悦砸 扩增渊图 圆冤遥 扩增产物经纯化尧克
隆尧测序袁得到 悦葬酝灾 猿缘杂 启动子 缘缘远 遭责 全长序列克
隆尧晕韵杂终止子 圆怨园 遭责 全长序列 晕韵杂 辕 员 和 晕韵杂 辕 圆 克
隆遥
圆郾 猿摇 三价植物表达载体的构建
圆郾 猿郾 员摇 蕴杂灾外壳蛋白基因 责悦粤酝月陨粤员猿园源 载体的构建
摇 用 匀蚤灶凿芋 辕 孕泽贼玉酶切 责酝阅 原 员怨栽鄄蕴杂灾 和 责酝阅 原 员怨栽
原 猿缘杂质粒袁回收目的片段连接袁构建中间载体 责酝阅 原
源怨圆员
摇 怨 期 三价病毒外壳蛋白基因介导的百合抗病毒初步研究
晕燥贼藻院酝院阅蕴圆园园园
图 员摇 粤渊员冤院百合 蕴杂灾外壳蛋白基因 孕悦砸扩增电泳曰月渊圆冤院百合 悦酝灾外壳蛋白基因 孕悦砸扩增电泳曰
悦渊猿冤院百合 蕴酝燥灾外壳蛋白基因 孕悦砸扩增电泳
云蚤早援 员摇 粤渊员冤院栽澡藻 葬皂责造蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 蕴杂灾 早藻灶藻曰月渊圆冤院 栽澡藻 葬皂责造蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 悦酝灾 早藻灶藻曰
悦渊猿冤院 栽澡藻 葬皂责造蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 蕴酝燥灾 早藻灶藻
晕燥贼藻院酝院员园园遭责 阅晕粤 造葬凿凿藻则曰酝员院员园园遭责 造葬凿凿藻则曰酝圆院 员园园遭责 造葬凿凿藻则
图 圆摇 粤渊员冤院猿缘杂启动子 孕悦砸电泳扩增曰月渊圆冤院晕韵杂 辕 员 终止子 孕悦砸电泳克隆曰
悦渊猿冤院晕韵杂 辕 圆 终止子 孕悦砸电泳克隆
云蚤早 圆摇 粤渊员冤院 栽澡藻 葬皂责造蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 猿缘杂 孕则燥皂燥贼藻则曰月渊圆冤院 栽澡藻 葬皂责造蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 晕韵杂 辕 员 栽藻则皂蚤灶葬贼燥则曰
悦渊猿冤院 栽澡藻 葬皂责造蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 晕韵杂 辕 圆 栽藻则皂蚤灶葬贼燥则
员怨栽 原 猿缘杂鄄蕴杂灾曰用 匀蚤灶凿芋 辕 耘糟燥砸玉酶切 责酝阅 原 员怨栽 原
猿缘杂鄄蕴杂灾和 责悦粤酝月陨粤员猿园源 质粒袁回收目的片段连接袁
构建中间载体 责悦粤酝月陨粤员猿园源 原 猿缘杂鄄蕴杂灾曰用 载遭葬玉 辕
月葬皂匀玉酶切 责悦粤酝月陨粤员猿园源 原 猿缘杂鄄蕴杂灾 和 责酝阅 原 员怨栽鄄
晕韵杂质粒袁回收目的片段连接袁构建 蕴杂灾 外壳蛋白基
因 责悦粤酝月陨粤员猿园源 表达载体 责悦粤酝月陨粤员猿园源 原 猿缘杂鄄蕴杂灾鄄
晕韵杂袁构建过程如图 猿援
圆郾 猿郾 圆摇 责酝阅 原 员怨栽 原 猿缘杂鄄悦酝灾鄄晕韵杂 克隆中间载体的
构建摇 构建如下图所示院用 匀蚤灶凿芋 辕 孕泽贼玉酶切 责酝阅 原
员怨栽鄄悦酝灾和 责酝阅 原 员怨栽 原 猿缘杂 质粒袁回收目的片段连
接袁构建中间载体 责酝阅 原 员怨栽 原 猿缘杂鄄悦酝灾曰 用 杂皂葬玉 辕
杂葬糟玉酶切 责酝阅 原 员怨栽 原 猿缘杂鄄悦酝灾 和 责酝阅 原 员怨栽鄄晕韵杂
质粒袁回收目的片段连接袁构建中间载体 责酝阅 原 员怨栽 原
猿缘杂鄄悦酝灾鄄晕韵杂渊图 源冤遥
圆郾 猿郾 猿摇 责酝阅 原员怨栽 原 猿缘杂鄄蕴酝燥灾鄄晕韵杂 克隆中间载体的
构建摇 质粒 责酝阅 原 员怨栽 原 猿缘杂鄄蕴酝燥灾鄄晕韵杂 中间载体的
构建如图所示院应用 猿缘杂鄄云尧蕴酝燥灾鄄砸 以及融合引物
猿缘杂鄄蕴酝燥灾鄄砸进行融合 孕悦砸扩增袁将 蕴酝燥灾外壳蛋白基
因与 悦葬酝灾 猿缘杂 启动子连接袁回收目的片段连接在
责酝阅 原 员怨栽 载体上袁构建中间载体 责酝阅 原 员怨栽 原 猿缘杂鄄
缘怨圆员
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
图 猿摇 蕴杂灾外壳蛋白基因 责悦粤酝月陨粤 员猿园源 表达载体 责悦粤酝月陨粤员猿园源 原猿缘杂鄄蕴杂灾鄄晕韵杂的构建
云蚤早 猿摇 栽澡藻 糟燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶 燥枣 增藻糟贼燥则 责悦粤酝月陨粤员猿园源 原猿缘杂鄄蕴杂灾鄄晕韵杂 藻曾责则藻泽泽藻凿 悦孕 燥枣 蕴杂灾
蕴酝燥灾遥 再用 杂皂葬玉 辕 杂葬糟玉酶切 责酝阅 原 员怨栽 原 猿缘杂鄄
蕴酝燥灾和 责酝阅 原员怨栽鄄晕韵杂袁回收目的片段并连接遥 构建
中间载体 责酝阅 原员怨栽 原猿缘杂鄄蕴酝燥灾鄄晕韵杂渊图 缘冤遥
圆郾 猿郾 源摇 三价表达载体的构建摇 三价病毒外壳蛋白基
因 责悦粤酝月陨粤员猿园源 表达载体的构建院月葬皂匀玉 辕 耘糟燥砸玉
酶切 责悦粤酝月陨粤员猿园源 原 猿缘杂鄄蕴杂灾鄄晕韵杂 和 责酝阅 原 员怨栽 原
猿缘杂鄄悦酝灾鄄晕韵杂袁回收目的条带曰构建 蕴杂灾 辕 悦酝灾 二价病
毒外壳蛋白基因表达载体 责悦粤酝月陨粤员猿园源 原 猿缘杂鄄蕴杂灾鄄
晕韵杂 原 猿缘杂鄄悦酝灾鄄晕韵杂遥 使 用 匀蚤灶凿 芋 酶 切
责悦粤酝月陨粤员猿园源 原 猿缘杂鄄蕴杂灾鄄晕韵杂 原 猿缘杂鄄悦酝灾鄄晕韵杂 和
责酝阅 原 员怨栽 原 猿缘杂鄄蕴酝燥灾鄄晕韵杂袁回收目的片段并连接遥
得到植物 蕴酝燥灾 辕 蕴杂灾 辕 悦酝灾 病毒外壳蛋白基因表达载
体 责悦粤酝月陨粤员猿园源 原 猿缘杂鄄蕴酝燥灾鄄晕韵杂 原 猿缘杂鄄蕴杂灾鄄晕韵杂 原
猿缘杂鄄悦酝灾鄄晕韵杂渊图 远冤遥 该植物表达载体具有潮霉素的
抗性和 郧哉杂尧郧云孕筛选功能遥
圆郾 猿郾 缘摇 三价植物表达载体的酶切鉴定摇 分别用 匀蚤灶凿
芋尧载遭葬玉及 月葬皂匀玉对植物表达载体 责悦粤酝月陨粤员猿园源 原
猿缘杂鄄蕴酝燥灾鄄晕韵杂 原 猿缘杂鄄蕴杂灾鄄晕韵杂 原 猿缘杂鄄悦酝灾鄄晕韵杂 进行
单酶切袁根据各酶切位点的具体位置渊图 苑冤及酶切后
电泳图渊图 愿冤谱条带的大小渊表 员冤袁进一步判断载体
构建的正确性遥
表 员摇 酶切时使用的限制性内切酶及酶切片段长度
栽葬遭造藻 员摇 蕴藻灶早贼澡 凿蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶 燥枣 则藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 枣则葬早皂藻灶贼
则藻泽怎造贼藻凿 遭赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 则藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶凿燥灶怎糟造藻葬泽藻
限制性内切酶
砸藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶凿燥灶怎糟造藻葬泽藻
酶切片段长度
蕴藻灶早贼澡 燥枣 则藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 枣则葬早皂藻灶贼 辕 运遭
匀蚤灶凿芋 园郾 远尧员郾 员尧员缘
载遭葬玉 园郾 猿尧员郾 圆尧员郾 源尧员郾 苑尧员圆
月葬皂匀玉 员郾 圆尧员郾 源尧圆郾 园尧员圆
圆郾 源摇 农杆菌介导转化白天堂百合
圆郾 源郾 员摇 潮霉素筛选浓度的确定摇 以白天堂百合的愈
伤组织为材料袁确定潮霉素的筛选浓度遥 试验共设 源
个浓度梯度袁分别为 园皂早窑蕴 原员尧员园皂早窑蕴 原员尧圆园皂早窑蕴 原员尧
猿园皂早窑蕴 原员以及 源园皂早窑蕴 原员渊图 怨冤遥 经过 源缘 天的筛选培
养袁确定潮霉素筛选浓度为 圆园皂早窑蕴 原员遥
远怨圆员
摇 怨 期 三价病毒外壳蛋白基因介导的百合抗病毒初步研究
图 源摇 悦酝灾 外壳蛋白基因 责酝阅 原员怨栽表达载体 责酝阅 原员怨栽 原猿缘杂鄄悦酝灾鄄晕韵杂的构建
云蚤早 源摇 栽澡藻 糟燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶 燥枣 增藻糟贼燥则 责酝阅 原员怨栽 原猿缘杂鄄悦酝灾鄄晕韵杂 藻曾责则藻泽泽藻凿 悦孕 燥枣 悦酝灾
图 缘摇 蕴酝燥灾 外壳蛋白基因 责酝阅 原员怨栽表达载体 责酝阅 原员怨栽 原猿缘杂鄄蕴酝燥灾鄄晕韵杂的构建
云蚤早 缘摇 栽澡藻 糟燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶 燥枣 增藻糟贼燥则 责酝阅 原员怨栽 原猿缘杂鄄蕴酝燥灾鄄晕韵杂 藻曾责则藻泽泽藻凿 悦孕 燥枣 蕴酝燥灾
苑怨圆员
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
图 远摇 蕴酝燥灾 辕 蕴杂灾 辕 悦酝灾病毒外壳蛋白基因植物表达载体 责悦粤酝月陨粤员猿园源 原猿缘杂鄄蕴酝燥灾鄄晕韵杂 原猿缘杂鄄
蕴杂灾鄄晕韵杂 原猿缘杂鄄悦酝灾鄄晕韵杂的构建
云蚤早 远摇 栽澡藻 糟燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶 燥枣 增藻糟贼燥则 责悦粤酝月陨粤员猿园源 原猿缘杂鄄蕴酝燥灾鄄晕韵杂 原猿缘杂鄄蕴杂灾鄄晕韵杂 原猿缘杂鄄悦酝灾鄄晕韵杂
藻曾责则藻泽泽藻凿 悦孕 燥枣 蕴酝燥灾 辕 蕴杂灾 辕 悦酝灾
图 苑摇 匀蚤灶凿芋尧载遭葬玉及 月葬皂匀玉在植物表达载体 责悦粤酝月陨粤员猿园源 原猿缘杂鄄蕴酝燥灾鄄晕韵杂 原猿缘杂鄄蕴杂灾鄄
晕韵杂鄄猿缘杂鄄悦酝灾鄄晕韵杂中的具体位置
云蚤早援 苑摇 栽澡藻 则藻糟燥早灶蚤贼蚤燥灶 泽蚤贼藻泽 燥枣 匀蚤灶凿芋尧载遭葬玉 葬灶凿 月葬皂匀玉 蚤灶 责造葬灶贼 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则
责悦粤酝月陨粤员猿园源 原猿缘杂鄄蕴酝燥灾鄄晕韵杂 原猿缘杂鄄蕴杂灾鄄晕韵杂 原猿缘杂鄄悦酝灾鄄晕韵杂
圆郾 源郾 圆摇 三价植物表达载体遗传转化受体愈伤组织的
筛选培养及分化摇 用农杆菌介导法转化白天堂百合愈
伤组织袁暗培养 缘凿 后将其转入含有 圆园皂早窑蕴 原员潮霉素
的选择培养基渊图 员园冤遥 每隔 员园 耀 员缘凿 重新继代一次遥
经过 源缘凿的筛选培养袁将存活的愈伤组织转入分化培
养基渊图 员员冤遥
猿摇 讨论
目前 悦孕 基因介导的抗病毒机制有几种解释遥 首
先有一些科学家们认为在植物细胞内有一种亚细胞组
作为入侵病毒受体或脱壳场所负责病毒脱壳袁在转基
因植物中因 悦孕 基因的表达而产生和积累外壳蛋白袁
并结合在受体上妨碍病毒粒体的结合致使病毒失去侵
染能力曰再者就是在转基因植物细胞内由于积累了外
壳蛋白而破坏病毒脱壳与包装之间的平衡关系咱员远暂 曰还
有实验证明 悦孕基因介导的抗性与 悦孕 基因的翻译产
物以及转录产物呈正相关袁即蛋白质介导的抗性咱员苑暂和
砸晕粤 介导的抗性咱员愿暂 曰 宰蚤泽灶蚤藻憎泽噪蚤 等咱员怨暂 和 韵责葬则噪葬
等咱圆园暂用实验证实了 悦孕 基因限制了病毒粒体的扩展
与转运袁从而在病毒侵染时表现出了抗性遥
百合的病毒病严重影响其产量与质量遥 目前花卉
市场的百合大部分都是通过脱毒种球生产出来的袁但是
脱毒的种球在经过几代生产之后就会重新感染病毒袁这
不仅浪费资金袁还不能保证百合的质量遥 随着分子生物
学与遗传学的不断发展袁利用基因工程手段克隆病毒外
壳蛋白基因袁建立转基因体系来培育新型的高抗病毒百
合品种是目前可行和有效的抗病毒育种手段遥
愿怨圆员
摇 怨 期 三价病毒外壳蛋白基因介导的百合抗病毒初步研究
注院员院匀蚤灶凿芋酶切片段曰圆院载遭葬玉酶切片段曰
晕燥贼藻院猿院月葬皂匀玉酶切片段 酝院阅蕴圆园园园增
员院 砸藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 枣则葬早皂藻灶贼 燥枣 匀蚤灶凿芋曰圆院砸藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶
枣则葬早皂藻灶贼 燥枣 载遭葬玉曰猿院 砸藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 枣则葬早皂藻灶贼 燥枣
月葬皂匀玉酝院阅蕴圆园园园增
图 愿摇 酶切检测电泳图谱
云蚤早 愿摇 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 燥枣 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶
图 怨摇 潮霉素的筛选培养
云蚤早 怨摇 栽澡藻 泽藻造藻糟贼蚤燥灶 糟怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶 燥枣 葬灶贼蚤鄄澡赠早则燥皂赠糟蚤灶 糟葬造造怎泽
摇 摇 转病毒外壳蛋白基因获得的抗性植株具有院外壳
蛋白基因可稳定遗传曰对病毒的抗性具有特异性袁即能
抵抗与提供外壳蛋白基因的野供体冶亲缘较近的病毒袁
而对亲缘关系较远的病毒不具抗性曰抗病毒能力与外
壳蛋白基因在转基因植物体内的表达量成正比遥 自上
世纪 怨园 年代开始袁国内外已开展有关百合转外壳蛋白
基因抗病毒方面的研究遥 员怨怨远 年荷兰 蕴藻蚤凿藻灶 大学咱圆员暂
成功地将病毒外壳蛋白导入百合曰员怨怨愿 年 孕澡葬皂 等咱圆圆暂
将 蕴杂灾的外壳蛋白基因转入白雪皇后渊 杂灶燥憎 匝怎藻藻灶冤
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入麝香百合愈伤组织袁并获得了转基因再生植株曰圆园园怨
年徐品三咱圆源暂用农杆菌介导的方法将 蕴杂灾 外壳蛋白基
因转入百合袁利用基因沉默的抗病毒机制达到抗 蕴杂灾
的目的遥 但由于多种病毒可以侵染百合袁针对单一病
毒的转基因抗病材料难以在生产中得到推广遥 而多个
基因构建在不同载体上转入同一受体袁会因为载体间
的相互影响而导致效率降低咱圆缘暂 遥
本研究将 蕴杂灾袁蕴酝燥灾 和 悦酝灾 三种病毒的外壳蛋
白基因全序列构建在同一个表达载体上袁通过一次转
化获得多抗转基因植株袁将大大提高育种效率袁对百合
的多基因转化可行性及百合的抗病毒的研究具有重要
的意义遥
参考文献院
咱 员 暂摇 沈淑琳援百合病毒病及其检验咱 允暂 援 植物检疫袁员怨怨远袁员园渊源冤院圆圆猿
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咱 圆 暂摇 王继华袁唐开学袁张仲凯袁苏艳援百合病毒及脱毒检测进展咱允暂 援北
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核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
图 员园摇 潮霉素的选择培养
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图 员员摇 愈伤组织的分化培养
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明袁师范生援三价转基因抗病毒西瓜的培育咱允暂 援农业生物技术学
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基因 蚤灶凿蚤糟葬水稻对水稻条纹病毒的抗病性咱 允暂 援 中国病毒学袁
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