全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员圆袁圆远渊缘冤院园苑源园 耀 园苑源缘允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员圆冤园缘鄄园苑源园鄄园远
高压电晕电场对黄霉素产生菌诱变效应
谷摇 卓摇 那摇 日摇 石摇 薇摇 徐淑银
渊内蒙古大学物理科学与技术学院袁内蒙古 呼和浩特摇 园员园园圆员冤
摘摇 要院利用高压电晕电场诱变技术对黄霉素产生菌 园愿 原 圆愿 进行微生物代谢产量和活性的研究遥 结果
表明院链霉素对黄霉素产生菌的最低抑制浓度为 园郾 苑缘哉 辕 皂造曰随着电场处理剂量的增大菌种致死率也随
之增大袁诱变电压为 圆员噪灾袁针尖距离为 愿皂皂袁诱变时间为 源皂蚤灶时是最佳诱变条件袁此时致死率在 远愿豫 袁
菌落形态呈放射状褶皱遥 通过筛选袁获得 愿 株突变高产菌株袁其中产黄霉素能力最高的是原始菌株的
员郾 怨圆 倍遥
关键词院黄霉素产生菌曰电晕电场曰诱变
耘云云耘悦栽 韵云 悦韵砸韵晕粤 阅陨杂悦匀粤砸郧耘 韵晕
云造葬增燥皂赠糟蚤灶 孕砸韵阅哉悦栽陨晕郧 杂栽砸粤陨晕
郧哉 在澡怎燥摇 晕粤 砸蚤摇 杂匀陨 宰藻蚤摇 载哉 杂澡怎鄄赠蚤灶
渊杂糟澡燥燥造 燥枣 孕澡赠泽蚤糟葬造 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 陨灶灶藻则 酝燥灶早燥造蚤葬 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 匀燥澡澡燥贼袁 陨灶灶藻则 酝燥灶早燥造蚤葬摇 园员园园圆员冤
粤遭泽贼则葬糟贼院酝怎贼葬早藻灶蚤糟 藻枣枣藻糟贼 燥枣 糟燥则燥灶葬 凿蚤泽糟澡葬则早藻 燥灶 贼澡藻 枣造葬增燥皂赠糟蚤灶 责则燥凿怎糟蚤灶早 泽贼则葬蚤灶 园愿 原 圆愿 憎葬泽 糟葬则则蚤藻凿 燥怎贼袁葬灶凿 贼澡藻 赠蚤藻造凿
葬灶凿 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 枣造葬增燥皂赠糟蚤灶 憎藻则藻 泽贼怎凿蚤藻凿援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 皂蚤灶蚤皂怎皂 蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤灶早 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 泽贼则藻责贼燥皂赠糟蚤灶 枣燥则
枣造葬增燥皂赠糟蚤灶 责则燥凿怎糟蚤灶早 泽贼则葬蚤灶 憎葬泽 园郾 苑缘哉 辕 皂造援 栽澡藻 造藻贼澡葬造 则葬贼藻 憎葬泽 蚤灶糟则藻葬泽藻凿 憎蚤贼澡 贼澡藻 蚤灶糟则藻葬泽蚤灶早 泽贼则藻灶早贼澡 燥枣 藻造藻糟贼则蚤糟 枣蚤藻造凿
贼则藻葬贼皂藻灶贼援 栽澡藻 燥责贼蚤皂怎皂 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶 枣燥则 皂怎贼葬贼蚤燥灶 憎葬泽 贼澡葬贼 贼澡藻 皂怎贼葬早藻灶藻泽蚤泽 增燥造贼葬早藻 圆员噪灾袁 贼澡藻 贼蚤责 凿蚤泽贼葬灶糟藻 愿皂皂袁 贼澡藻
皂怎贼葬早藻灶藻泽蚤泽 贼蚤皂藻 源皂蚤灶援 韵灶 贼澡蚤泽 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶 贼澡藻 泽贼则葬蚤灶 造藻贼澡葬造 则葬贼藻 憎葬泽 远愿豫 葬灶凿 贼澡藻 贼赠责蚤糟葬造 糟燥造燥灶赠 燥枣 贼澡藻 皂怎贼葬灶贼 憎葬泽 则葬凿蚤葬造
葬灶凿 凿则葬责藻援 粤泽 葬 则藻泽怎造贼袁愿 澡蚤早澡鄄赠蚤藻造凿蚤灶早 泽贼则葬蚤灶泽 憎藻则藻 燥遭贼葬蚤灶藻凿袁葬灶凿 贼澡藻 澡蚤早澡藻泽贼 葬遭蚤造蚤贼赠 贼燥 责则燥凿怎糟藻 枣造葬增燥皂赠糟蚤灶 憎葬泽 蚤灶糟则藻葬泽藻凿
遭赠 员郾 怨圆 贼蚤皂藻泽 贼澡葬灶 燥则蚤早蚤灶葬造 泽贼则葬蚤灶援
运藻赠 憎燥则凿泽院枣造葬增燥皂赠糟蚤灶 责则燥凿怎糟贼蚤灶早 泽贼则葬蚤灶曰 悦燥则燥灶葬 凿蚤泽糟澡葬则早藻曰 皂怎贼葬贼蚤燥灶
收稿日期院圆园员员鄄园怨鄄圆愿摇 接受日期院圆园员圆鄄园员鄄员园
基金项目院内蒙古自治区科技计划项目渊圆园园怨员缘园圆冤袁国家大学生创新性实验计划项目渊园怨员园员圆远员员冤
作者简介院谷摇 卓渊员怨愿怨鄄冤袁女袁内蒙古海拉尔人袁本科生袁研究方向为凝聚态物理学遥 耘鄄皂葬蚤造院早怎扎澡怎燥园员圆员岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院那摇 日渊员怨缘缘鄄冤袁男袁内蒙古鄂尔多斯人袁教授袁主要从事生物物理研究遥 栽藻造院园源苑员鄄源怨怨猿员猿怨鄄远苑园苑曰耘鄄皂葬蚤造院灶葬则蚤远猿远猿岳 贼燥皂援 糟燥皂
摇 摇 黄霉素 渊 枣造葬增燥皂赠糟蚤灶 冤 又名默诺霉素 渊 皂燥藻灶燥鄄
皂赠糟蚤灶冤尧黄磷酯素 渊 枣造葬增燥责澡燥泽责燥造蚤责造冤尧斑伯霉素 渊 遭葬皂鄄
遭藻则皂赠糟蚤灶冤袁是德国赫斯特公司在 圆园 世纪 苑园 年代初期
开发的一种新型抗生素类促生长剂遥 黄霉素主要由 缘
个微生物活性物质组成袁其中默诺霉素 粤 为主要成
分咱员袁圆暂 袁此种抗生素通过真菌的厌氧发酵形成袁存在于
菌丝体中袁可通过提取分离咱猿暂 遥 对纯化后的抗生素进
行理化分析表明袁黄雷素是一种含磷的糖酯袁不同于现
有的任何一种抗生素咱源暂 袁它具有用量小尧促生长效果
显著尧性能稳定尧不与其他添加剂产生拮抗作用尧不易
产生耐药性尧无污染尧无残留尧安全性高等特点遥 黄霉
素在国外畜牧水产养殖业已得到普遍应用袁而在我国
的应用刚刚起步遥 为提高微生物菌种生产黄霉素能
力袁应用合理的筛选程序及适当的筛选办法选育优良
的菌种袁开发新的诱变方法是一个有益的尝试遥 科技
工作者已将紫外线渊哉灾冤咱缘暂 尧微波咱远暂 尧离子注入剂咱苑袁愿暂
和化学咱怨暂诱变技术引进了诱变育种领域袁本研究则采
用高压电晕电场作为诱变源对黄霉素产生菌进行了研
园源苑
摇 缘 期 高压电晕电场对黄霉素产生菌诱变效应
究遥
自人们发现电场生物效应后袁电场对生物体的影
响成为研究的热点袁并且在许多领域得到应用遥 电子
束辐照可以对食物进行保鲜咱员园袁员员暂 曰电场处理能明显提
高植物愈伤组织诱导率和分化率咱员圆暂 曰而利用高压电晕
电场对微生物进行诱变的方法尚未见报道遥 本试验用
本课题组研究设计的针 原板高压电晕电场处理装置袁
对出发菌 园愿 原 圆愿 菌种进行电场诱变处理袁以期得到性
能稳定尧优良高产的黄霉素生产菌种袁从而证实高压电
晕电场装置可以对微生物进行诱变遥
员摇 材料和方法
员郾 员摇 材料
员郾 员郾 员摇 菌种 摇 出发菌种 园愿 原 圆愿 渊斑驳链霉菌 杂援
遭葬皂遭藻则早蚤藻灶泽蚤泽冤由内蒙古中牧生物药业有限公司提供遥
员郾 员郾 圆摇 试剂摇 黄霉素标准品渊员皂早 相当于 员猿怨缘 黄霉
素单位冤 来自中国兽医药品监察所曰硫酸链霉素
渊远缘园滋早 辕 皂早冤袁 购自日本 粤早藻则曰糊精尧运圆匀孕韵源窑猿匀圆韵 购
自天津市风船化学试剂科技有限公司曰云藻杂韵源窑苑匀圆韵尧
葡萄糖和 酝早杂韵源窑苑匀圆韵为天津市四通化工厂产品曰甲
酸铵和蛋白胨均为天津市光复精细化工研究所产品曰
酵母浸粉购自北京奥博星生物技术责任有限公司曰抗
坏血酸为天津市化学试剂三厂产品曰牛肉浸膏购自天
津市英博生化试剂有限公司曰淀粉酶为北京双旋微生
物培养基制品厂产品曰栽则蚤泽鄄月葬泽藻 购自 杂蚤早皂葬遥 以上试
剂均为分析纯遥 甲醇渊色谱纯冤购自天津市光复精细
化工研究所曰乙腈渊色谱纯冤购自天津市永大化学试剂
有限公司曰大豆粉尧玉米浆尧玉米淀粉为市售遥
员郾 员郾 猿 摇 仪器 摇 色谱柱选用 粤早蚤造藻灶贼 匀悦鄄悦员愿 色谱柱
渊圆缘园 伊 源郾 远皂皂冤遥 粤运栽粤 孕怎则蚤枣蚤藻则 员园 蛋白纯化仪袁通用
电气中国医疗集团曰允再怨圆 原域型超声波细胞粉碎机袁宁
波新芝生物科技股份有限公司曰数显恒温水浴锅袁苏州
威尔实验用品有限公司曰运匝 原 员园园阅耘 型数控超声波清
洗器袁昆山市超声仪器有限公司曰责匀计袁梅特勒 原托利
多仪器上海有限公司曰郧陨缘源阅宰杂 型高温灭菌锅袁美国
独资致微厦门仪器有限公司曰月杂造造园杂型电子分析天平袁
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月耘悦运酝粤晕 悦韵哉蕴栽耘砸曰恒温摇床袁上海智城分析仪器
制造有限公司曰低温冰箱袁青岛海尔股份有限公司曰生
化培养箱袁湖北省黄石市恒丰医疗机械有限公司遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 培养基及培养条件摇 斜面及平板分离培养基
渊早 辕 员园园皂造冤 咱员猿暂 院糊精 员郾 缘早袁运圆匀孕韵源窑猿匀圆韵 园郾 园缘早袁蔗糖
园郾 猿早袁酝早杂韵源 窑苑匀圆韵 园郾 园源早袁酵母浸粉 园郾 猿早袁云藻杂韵源 窑苑匀圆韵 园郾 园员早袁大豆蛋白胨 园郾 缘早袁晕葬悦造 园郾 园缘早袁牛肉浸膏园郾 员早袁琼脂粉 员郾 圆早遥 使用超纯水配制袁定容至配制体
积袁用 员皂燥造 辕 蕴 的 晕葬韵匀 和 员皂燥造 辕 蕴 的 匀悦造 调节 责匀 至
远郾 愿 耀 苑郾 园遥 员圆员益 灭菌 猿园皂蚤灶遥 猿苑益 恒温培养 苑圆 耀
怨远澡袁单菌落直径在 猿 耀 缘皂皂遥
种子摇瓶培养基 渊 早 辕 员园园皂造冤 咱员猿暂 院玉米浆 园郾 猿早袁
运圆匀孕韵源 园郾 员早袁大豆粉 猿郾 园早袁轻质 悦葬悦韵猿 园郾 圆缘早袁葡萄糖源郾 园早遥 超纯水配制袁配制时袁先将玉米浆和大豆粉加水
混合袁在 员园园益下加热糊化 猿园皂蚤灶曰再加入其他成分袁定
容至配制体积调节 责匀 至 远郾 愿 耀 苑郾 园袁悦葬悦韵猿 单独称量
且分装到每个摇瓶中遥 员圆员益灭菌 猿园皂蚤灶遥 猿苑益恒温
培养 员苑园澡袁摇床转速 圆缘园 耀 圆远园则 辕 皂蚤灶遥
发酵摇瓶培养基 渊 早 辕 员园园皂造冤 咱员猿暂 院玉米浆 园郾 怨早袁
云藻杂韵源窑苑匀圆韵 园郾 园园园园源早袁大豆粉 猿郾 源早袁悦燥杂韵源 窑苑匀圆韵园郾 园园园员早袁玉米淀粉 猿郾 圆早袁在灶杂韵源窑苑匀圆韵 园郾 园园园圆早袁大豆
色拉油 源郾 园早袁 悦怎杂韵源 窑 缘匀圆韵 园郾 园园园缘早袁 渊 晕匀源 冤圆杂韵源园郾 猿早袁 悦葬悦韵猿园郾 缘早袁运圆匀孕韵源园郾 园员早袁淀粉酶 园郾 园园园园园远源早袁酝早杂韵源窑苑匀圆韵 园郾 园缘早袁消泡剂 园郾 园圆皂造 辕 员园园皂造遥 员圆员益灭
菌 猿园皂蚤灶遥 猿苑益恒温培养 圆源澡袁摇床转速 圆缘园 耀 圆远园则 辕
皂蚤灶遥
员郾 圆郾 圆摇 菌悬液制备摇 取平板分离培养基上生产良好
的单菌落袁无菌状态下接入种子摇瓶中遥 待培养完成
后袁将已灭菌的玻璃珠和碎玻璃片倒入三角瓶中袁包扎
好袁置于摇床渊圆缘园 耀 圆远园则 辕 皂蚤灶冤振荡 猿园皂蚤灶袁梯度稀释
平板计数袁菌丝段浓度约为 愿 伊 员园苑 个 辕 皂造袁封口待用遥
员郾 圆郾 猿摇 平板分离摇 取一定量出发菌液 园愿 原 圆愿 进行梯
度稀释并涂布在平板分离培养基上袁猿苑益恒温培养 猿
耀 源凿袁以去除杂菌遥
员郾 圆郾 源摇 抗性菌株的筛选摇 挑选单菌落制成菌悬液并
分别涂布于含有链霉素渊浓度为 园 耀 员郾 园怎 辕 皂造冤的平板
培养基上 猿苑益恒温培养 猿 耀 源凿遥 观察不同平板上的菌
落生长情况袁记录链霉素的最低作用浓度袁即为菌株对
链霉素的最小抑制浓度袁此浓度下生长的菌株即为抗
性菌株遥
员郾 圆郾 缘摇 高压电晕电场的设计摇 实验装置如图 员 所示遥
直流高压电源渊分正尧负冤电压从 园 到 猿园噪灾 连续可调袁
针尖间距 葬 越 圆园皂皂袁针 原板间距 凿 越 圆缘皂皂袁用分辨率
为 员园滋粤尧精度为 园郾 愿豫的 滋粤表检测放电电流袁匝 原 猿灾
型电压表用来检测外加电压遥 放电介质为常压空气袁
相对湿度为 猿园豫 袁温度为 圆园益 耀圆缘益遥
员郾 圆郾 远摇 诱变处理摇 将筛选出的链霉素抗性菌株接于
种子摇瓶培养基中袁猿苑益尧圆远园则 辕 皂蚤灶 下培养 圆源澡遥 培养
完成后袁加适量灭菌后的玻璃珠于种子摇瓶中袁摇床中
员源苑
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
图 员摇 高压电晕电场实验装置
云蚤早援 员摇 耘择怎蚤责皂藻灶贼 枣燥则 糟燥则燥灶葬 凿蚤泽糟澡葬则早藻
葬院针尖间距曰凿院针板间距曰粤院电流表曰灾院电压表
葬院贼蚤责 泽责葬糟蚤灶早曰凿院灶藻藻凿造藻 原 责造葬贼藻 泽责葬糟蚤灶早曰
粤院葬皂皂藻贼藻则曰灾院增燥造贼皂藻贼藻则
振荡 猿园皂蚤灶袁在无菌工作台中向半径为 猿郾 缘糟皂 且已灭
菌的培养皿中加入 猿皂造振荡好的菌液遥 将菌液置于电
场针尖下袁调节电压使针尖放电遥 取相同量的原始菌
液与诱变后的菌液按梯度涂布于平板分离培养基中袁
记录菌落个数遥 在同一梯度下计算致死率院
致死率 越 渊原始菌落数 原诱变后菌落数冤 伊
员园园豫 辕原始菌落数遥
诱变后进行培养并测定效价遥
员郾 圆郾 苑摇 效价检测
渊员冤样品处理摇 取黄霉素标准品咱员源暂适量袁用 缘园豫
的甲醇溶液袁以每 缘园哉 辕 皂造 为 员 个间隔袁稀释至 缘园 耀
愿园园哉 辕 皂造袁园郾 圆圆滋皂有机滤膜过滤袁超声脱气 员园皂蚤灶遥
取适量原始菌及诱变菌发酵液袁用 缘园豫甲醇溶液
稀释 猿 倍袁加抗坏血酸和三羟甲基氨基甲烷调节 责匀
至 愿郾 员 依 园郾 员袁 用细胞粉碎机超声萃取 员缘皂蚤灶袁室温放
置约 猿园皂蚤灶袁用离心机以 员圆园园园则 辕 皂蚤灶 高速离心 圆园皂蚤灶袁
取上清液用 园郾 圆圆滋皂有机滤膜过滤并收集样品遥
渊圆冤 月怎枣枣藻则粤 的配制 摇 制备 园郾 圆豫的甲酸铵溶液
渊员园豫的磷酸调节 责匀至 源郾 怨冤 原乙腈渊体积比 缘缘颐 源缘冤袁
用 园郾 圆圆滋皂有机滤膜过滤袁低频超声脱气约 员园皂蚤灶遥
渊猿冤检测咱员源暂 摇 平衡分析柱后袁设置流速为 园郾 缘皂造 辕
皂蚤灶袁检测波长为 圆缘愿灶皂遥 取样品适量渊大于 圆 倍样品
环体积冤注入至 员园园滋造的样品环中袁用蛋白纯化仪记录
色谱图至黄霉素 粤组分峰保留时间的 圆 倍遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 高压电晕电场的特性
试验结果表明袁当针尖间距为 圆园皂皂尧针 原板间距
为 圆缘皂皂时不影响放电的稳定性袁此时放电能量密度
较高咱员缘暂 袁所以选择针尖间距为 圆园皂皂袁针 原 板间距
圆缘皂皂袁针尖直径 凿 约 园郾 园员皂皂遥
外加电压为 园 到 猿园噪灾 连续可调袁试验测得正负
电晕放电伏安特性分别如图 圆 和图 猿 所示遥 从图中可
以看出院无论是正电晕还是负电晕袁针对板电晕放电的
电流随外加电压升高而增加袁正电晕放电的电压范围
较窄袁负电晕放电的电压范围较宽袁在相同外加电压下
负电晕的放电电流大袁曲线平滑袁且负电晕放电的稳定
性好遥
图 圆摇 负电晕放电的伏安特性
云蚤早援 圆摇 悦怎则则藻灶贼鄄增燥造贼葬早藻 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣
灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥则燥灶葬 凿蚤泽糟澡葬则早藻
图 猿摇 正电晕放电的伏安特性
云蚤早援 猿摇 悦怎则则藻灶贼鄄增燥造贼葬早藻 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣
责燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥则燥灶葬 凿蚤泽糟澡葬则早藻
由于极板间存在微小电流袁会使极板间空气温度
逐渐上升遥 为确定极板间空气的温度袁本研究使用
阅粤蕴陨 苑园园月红外热像仪进行了测量遥 用 圆圆益室温进行
调零袁每隔 员噪灾 测量 员 次温度袁每次调整好电压后袁等
待 员皂蚤灶袁以使极板间达到热平衡袁拍照并储存照片遥
根据软件测出图像上所选区域的中值温度袁其电压与
温度的曲线如图 源 所示遥 电压在 圆园噪灾 之前温度随电
压的增加而线性升高袁电压在 圆园噪灾 后温度基本趋于
稳定袁此时温度大约比室温高 员园益左右遥
圆源苑
摇 缘 期 高压电晕电场对黄霉素产生菌诱变效应
图 源摇 极板间温度与电压的关系
云蚤早援 源摇 灾 原 栽 糟怎则增藻 燥枣 枣蚤藻造凿泽 则葬凿蚤葬贼藻凿
枣则燥皂 糟燥则燥灶葬 凿蚤泽糟澡葬则早藻
圆郾 圆摇 菌株对链霉素的耐受性
将出发菌种的菌液涂布在含不同浓度链霉素的平
板培养基上袁观察其在不同平板上的生长情况袁结果如
表 员 所示遥
表 员 结果表明袁在链霉素浓度为 园 耀 园郾 远园哉 辕 皂造 的
范围内袁与不加链霉素的平板相比袁菌株生长基本不受
影响遥 随着浓度增加袁菌株数量逐渐减少袁且菌落相对
较小袁当链霉素浓度达到 园郾 苑缘哉 辕 皂造 时袁平板上基本无
菌落生长遥 由此表明袁园郾 苑缘哉 辕 皂造 是黄霉素产生菌 园愿
原 圆愿 对链霉素的最小抑制浓度遥 在此浓度下生长出
的菌落袁具有抗性高袁生产代谢能力强等特点遥 因此确
定选用此浓度下生长的菌株进行诱变处理遥
表 员摇 出发菌株在不同浓度链霉素平板培养基上的生长情况
栽葬遭造藻 员摇 栽澡藻 燥则蚤早蚤灶葬造 泽贼则葬蚤灶 早则燥憎贼澡 蚤灶 泽燥造蚤凿 皂藻凿蚤怎皂 憎蚤贼澡 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽 燥枣 泽贼则藻责贼燥皂赠糟蚤灶
链霉素浓度
泽贼则藻责贼燥皂赠糟蚤灶
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽
渊哉 辕 皂造冤
园郾 园园 园郾 园缘 园郾 员园 园郾 员缘 园郾 圆园 园郾 圆缘 园郾 猿园 园郾 猿缘 园郾 源园 园郾 源缘 园郾 缘园
生长情况
早则燥憎贼澡 垣垣垣垣垣垣 垣垣垣垣垣垣 垣垣垣垣垣垣 垣垣垣垣垣垣 垣垣垣垣垣垣 垣垣垣垣垣 垣垣垣垣垣 垣垣垣垣垣 垣垣垣垣垣 垣垣垣垣 垣垣垣垣
链霉素浓度
泽贼则藻责贼燥皂赠糟蚤灶
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽
渊哉 辕 皂造冤
园郾 缘缘 园郾 远园 园郾 远缘 园郾 苑园 园郾 苑缘 园郾 愿园 园郾 愿缘 园郾 怨园 园郾 怨缘 员郾 园园
生长情况
早则燥憎贼澡 垣垣垣垣 垣垣垣 垣垣 垣 依 原 原 原 原 原
注院 垣生长良好袁 依微弱生长袁 原不生长遥
晕燥贼藻院 垣 早燥燥凿 早则燥憎贼澡袁 依 憎藻葬噪 早则燥憎贼澡袁 原 灶燥 早则燥憎贼澡援
圆郾 猿摇 诱变处理的致死率及最佳诱变条件的确定
不同电场处理剂量下的致死率如图 缘 所示遥
图 缘摇 诱变致死率曲线
云蚤早援 缘摇 蕴藻贼澡葬造 则葬贼藻 糟怎则增藻 燥枣 皂怎贼葬早藻灶藻泽蚤泽
已有研究表明通过致死率曲线可以找到诱变剂量
原致死率 原突变率三者最佳结合点袁致死率达到 苑缘豫
耀愿缘豫时为较合适的诱变剂量咱员远暂 遥 据此袁本研究确定
电场处理条件为电压 圆员噪灾处理 源皂蚤灶遥
圆郾 源摇 黄霉素产量检测结果
圆郾 源郾 员摇 标准品色谱图及标准曲线摇 将黄霉素标准品
经过处理后注入到蛋白纯化仪中袁得到色谱图遥 由于
不同质量浓度的黄霉素袁其色谱图峰面积大小不同袁且
在一定范围内袁峰面积渊曾冤随黄霉素浓度渊赠冤的增减而
增减遥 由此袁可以得到一条直线袁拟合直线方程为 赠 越
园郾 缘员员猿曾 垣 苑猿郾 远苑愿遥
圆郾 源郾 圆摇 发酵筛选和高产菌株的稳定性试验摇 将原始
菌株和诱变菌株发酵培养后袁用蛋白纯化仪进行黄霉
素色谱检测袁效价计算结果显示袁诱变菌株中正突变 愿
株袁负突变 员愿 株遥 部分结果如表 圆 所示遥
从表 圆 的筛选结果可以看出袁诱变菌株诱变 猿 号
的平均效价提高最多袁为原始菌的 员郾 怨圆 倍袁即产黄霉
素能力为原始菌的 员郾 怨圆 倍袁所以选用高产的诱变 猿 号
作为后续试验的菌种遥 由此也可说明黄霉素产生菌对
猿源苑
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
高压电晕电场是敏感的袁而且高压电晕电场对黄霉素
产生菌有较好的诱变效果遥
表 圆摇 筛选结果
栽葬遭造藻 圆摇 栽澡藻 泽糟则藻藻灶蚤灶早 则藻泽怎造贼泽
编号
灶怎皂遭藻则
峰面积
责藻葬噪 葬则藻葬
渊 皂粤哉鄢皂蚤灶冤
平均效价
葬增藻则葬早藻 贼蚤贼藻则
渊哉 辕 皂造冤
提高倍数
蚤灶糟则藻葬泽藻
原始菌
燥则蚤早蚤灶葬造 遭葬糟贼藻则蚤葬 猿怨远郾 园怨 圆苑远郾 圆园 要
诱变 员 号
增葬则蚤葬贼蚤燥灶 员 圆苑圆郾 缘愿 圆员猿郾 园缘 引
诱变 圆 号
增葬则蚤葬贼蚤燥灶 圆 缘园圆郾 远圆 猿猿园郾 远苑 员郾 圆园
诱变 猿 号
增葬则蚤葬贼蚤燥灶 猿 愿怨员郾 猿苑 缘圆怨郾 源猿 员郾 怨圆
诱变 源 号
增葬则蚤葬贼蚤燥灶 源 源怨圆郾 远圆 猿圆缘郾 缘远 员郾 员愿
诱变 缘 号
增葬则蚤葬贼蚤燥灶 缘 猿缘圆郾 员远 圆缘猿郾 苑源 引
诱变 远 号
增葬则蚤葬贼蚤燥灶 远 猿怨苑郾 怨员 圆苑苑郾 员猿 员郾 园员
诱变 苑 号
增葬则蚤葬贼蚤燥灶 苑 猿园缘郾 缘园 圆圆怨郾 愿愿 引
诱变 愿 号
增葬则蚤葬贼蚤燥灶 愿 猿圆园郾 怨愿 圆猿苑郾 苑怨 引
诱变 怨 号
增葬则蚤葬贼蚤燥灶 怨 缘愿猿郾 员远 猿苑员郾 愿缘 员郾 猿缘
诱变 员园 号
增葬则蚤葬贼蚤燥灶 员园 员怨猿郾 缘苑 员苑圆郾 远缘 引
诱变 员员 号
增葬则蚤葬贼蚤燥灶 员员 缘员郾 远远 员园园郾 园怨 引
注院引代表负突变遥
晕燥贼藻院 引 皂藻葬灶泽 灶藻早葬贼蚤增藻 皂怎贼葬贼蚤燥灶援
摇 摇 用群体传代法考察诱变 猿 号的斜面稳定性遥 将其
在斜面上连续培养 缘 代袁对各代菌株进行发酵培养袁结
果如表 猿 所示袁可见菌株诱变 猿 号具有较好的遗传稳
定性遥
表 猿摇 高产突变株遗传稳定性试验
栽葬遭造藻 猿摇 匀藻则藻凿蚤贼葬则赠 泽贼葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 皂怎贼葬灶贼 燥增藻则责则燥凿怎糟蚤灶早
遗传稳定性
澡藻则藻凿蚤贼葬则赠 泽贼葬遭蚤造蚤贼赠
代数 早藻灶藻则葬贼蚤燥灶泽
员 圆 猿 源 缘
相对生产能力
则藻造葬贼蚤增藻 葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 责则燥凿怎糟蚤灶早渊豫 冤 员园园 怨愿 员园圆 怨怨 怨愿
猿摇 讨论
电场引起生物学效应的机理是电场使细胞两侧出
现附加电荷袁细胞膜带电荷脂质分子呈不对称性分布袁
因此产生一个跨膜电压袁跨膜电压的大小取决于膜上
带电荷脂质分子的解离状态袁并且受到环境中氢离子
浓度的调制袁由于膜内存在电场袁所以膜的每一部分都
可以看作是一个小电容器遥 外加静电场使膜两侧出现
附加电荷袁膜两侧电荷密度的改变引起脂质极性端基
侧向移动袁引起烃链倾斜弯曲袁即产生相变袁膜的功能
得到修复遥 对微生物的类似研究同样证明了上述结
果咱员苑暂 遥
我们用电晕放电的方法对微生物诱变进行了研
究袁根据静电学的研究袁带电导体所携带的电荷集中在
导体的表面袁而表面电荷的分布即面电荷密度与导体
的曲率半径有关袁针尖表面的面电荷密度远大于其他
部位袁因此它附近的电场强度很强遥 如果用导电的针
尖作为电极袁电位升高到一定程度袁针尖处积累的大量
电荷所产生的强电场使针尖周围的空气电离咱员愿袁员怨暂 袁从
而产生局部放电袁出现晕光遥 通过对正负电晕放电的
电压范围尧放电电流及放电曲线平滑度等的比较及试
验总结袁建议诱变时采用负电晕放电遥
致死率是电场导致生物细胞损伤的临界条件遥 陈
家森咱圆园暂用紫外透光方法尧质子核磁纵向弛豫时间的测
定法和鲁米诺化学发光的光子数测定法相结合袁研究
了电场对水结构的影响袁发现电场能使水中部分水分
子分解成 韵匀 原和 匀 原 袁其中 韵匀 原中的电子在电场催化
下被水中氧分子俘获后生成超氧阴离子自由基遥 生命
体内适量的超氧阴自由基具有代谢贮能转化排废及防
御消毒的作用遥 但由于场强和时间的累积效应袁活体
内会产生过量的超氧阴自由基袁过量会破坏脂质尧损害
核酸尧破坏碳水化合物及蛋白质袁所以确定电场致死率
是很重要的遥 一般试验用细胞存活率曲线模型咱圆员暂来
确定电场对细胞的平均致死剂量袁以确定电场极限值遥
阅葬灶蚤造 阅燥遭则赠灶蚤灶咱圆圆暂在研究直流电晕放电对细菌灭活的
影响中发现袁阅悦电晕放电会产生活性氧尧臭氧尧过氧化
氢等袁肉眼没有观察到因电晕放电形成的臭氧而导致
细菌失活的现象遥 而潮湿空气中的混合物渊如 粤则 辕
匀圆韵混合物冤在电晕放电时形成羟基自由基袁它可以
与附近的有机物发生反应袁导致链氧化袁从而破坏细胞
膜和其他细胞成分遥 带电粒子运送过氧化物簇离子
韵匀 原 渊匀圆韵冤灶 和 匀猿韵 垣 渊匀圆韵冤 灶 这些自由基的效率比氧
自由基和离子渊包括 韵 原圆 袁韵 垣源 和臭氧冤袁氮和氩离子高
得多袁所以电晕放电所产生的 韵匀 原 渊匀圆韵冤 灶 和 匀猿韵 垣渊匀圆韵冤 灶 可使细菌灭活遥 因此诱变时一定要选择合适
的处理条件遥
热在微生物诱变育种中具有热诱变效应和热筛选
效应袁热诱变效应通过热引起 阅晕粤 中 郧 原 悦 碱基对的
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置换实现袁可以从其他诱变剂诱变的菌体中获得更高的
正向突变率咱圆猿暂 遥 试验过程中对样品温度进行了检测袁
发现电晕放电作用的热效应很小袁说明电场处理时样品
产生的生物效应并非热效应所致袁是否由于电晕电流或
者电场作用使微生物产生诱变还有待进一步探讨遥
本研究用电晕放电的方法对微生物诱变进行了初
步的研究袁结果表明电晕放电对黄霉素产生菌有较好
的诱变效果遥 试验中未将该方法与其他诱变方法的效
果进行直接比较袁但作为一种新的物理诱变手段袁它对
今后微生物优良菌种的选育具有重要的实践意义遥 由
于各种诱变因子的作用机制不一样袁新诱变方法的使
用可能得到更多的突变类型袁从而改善传统诱变技术
的多次使用而导致的菌种退化袁生长周期延长袁孢子量
减少袁代谢缓慢等诱变剂野疲劳效应冶的出现遥
源摇 结论
利用高压电晕电场诱变袁黄霉素产生菌 园愿 原 圆愿 对
电场很敏感袁随着电场处理剂量的增大菌种致死率也
随之增大袁诱变电压为 圆员噪灾袁针尖距离为 愿皂皂袁诱变时
间为 源皂蚤灶时是最佳诱变剂量遥 经过电场诱变处理尧筛
选及传代培养得到了诱变 猿 号菌株袁其产黄霉素的能
力相对原始菌株最高提高了 员郾 怨圆 倍遥 说明高压电晕
电场对黄霉素产生菌有较好的诱变效果遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 李蕴玉援黄霉素的应用效果咱允暂 援中国饲料袁员怨怨怨袁员员院员愿 原 员怨
咱 圆 暂 摇 徐小艳援专用抗生素饲料添加剂要黄霉素咱 允暂 援兽药与饲料添加
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咱 远 暂摇 童应凯袁王 惠袁吴兆亮袁胡金刚援 黄霉素产生菌微波诱变育种的
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