全 文 ：© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
　核 农 学 报　2010, 24 (1) : 0025～0030
Journal of N uclear Agricu ltura l Sciences
文章编号 : 100028551 (2010) 0120025206
辐照花粉辅助授粉对百合远缘杂交结实的
影响及杂种早期分子鉴定
贾月慧 1, 2 　张克中 2 　李文学 1 　张福锁 1
(1. 中国农业大学 ,北京　100193; 2. 北京农学院 , 北京　102206)
摘　要 :研究了辐照花粉辅助授粉对百合‘pollyanna’(♀) ×毛百合杂交结实的影响。结果表明 :采用普
通柱头授粉能获得许多膨大果实和饱满种子 ,表明该组合为亲合性组合。用经 1000和 2500Gy的
60 Coγ射线辐照的母本花粉进行辅助授粉明显提高了果实中饱满种子的结籽率 ,表明 2种剂量的辐照
花粉辅助授粉均能有效克服该组合的杂交障碍。结籽数的提高能获得更多的后代 ,增加了从 F1 代中选
育新优单株的几率。随机选取辐照花粉辅助授粉获得的杂交子代 15株 ,采用 ISSR技术对其组培苗进
行亲子鉴定 , 6条 ISSR随机引物在 15个子代中共扩增出 372个条带 ,其中具有父本特征带 114条 ,具有
母本特征带 67条 ,具有双亲共有带 65条。 ISSR鉴定结果证实了杂种的真实性。
关键词 :百合‘pollyanna’; 远缘杂交 ; 辐照花粉辅助授粉 ; ISSR2PCR; 杂种鉴定
EFFECTS O F IRRAD IATED POLL EN ASS IST ING POLL INAT IO N
TECHN IQUE O N SEEDSET O F L ILY’S D ISTANT CRO SS
AND EARLY MOLECULAR ID ENTIF ICAT IO N O F THE HY BRID S
J IA Yue2hui1, 2 　ZHANG Ke2zhong2 　L IW en2xue1 　ZHANG Fu2suo1
(1. China A gricu ltural U niversity, B eijing, 100193; 2. B eijing Agricu ltura l College, B eijing　102206)
Abstract: The effects of the irradiated pollen assisting pollination technique on seedset of the lily‘pollyanna’(♀) ×
L ilium dauricum were investigated. A number of fruits and p lump seeds were p roduced by using the normal stigma
pollination , which indicated that the crosswas a compatible cross. The app lication of 1000 and 2500Gy irradiated pollen
assisting pollination increased the seedset obviously, which showed that this method could overcome the cross barriers
effectively. More seedsets means that more excellent individuals m ight be selected from F1 hybrids. 15 random F1
individuals were selected for parentage identification by ISSR2PCR technique. Total 372 bands were generated from 6
p rimers’ISSR2PCR amp lification, in which 114 bands were the male parent characteristic bands, 67 were the female
parent characteristic bands, 65 were the parents common bands, and ISSR analysis showed that they were really
hybrids.
Key words:L ily‘pollyanna’; distant cross; irradiated pollen assisting pollination; ISSR2PCR; parentage identification
收稿日期 : 2009204208　接受日期 : 2009204217
基金项目 :北京市科技新星项目 (2003B013) ,北京市教委科技创新平台 ( PXM200920142072078529)
作者简介 :贾月慧 (19702) ,女 ,河北藁城人 ,博士 ,主要从事植物营养与育种研究。E2mail: yhjzxd@126. com
通讯作者 :李文学 (19732) ,男 ,河南人 ,副教授 ,主要从事分子生物学研究。　　亚洲百合‘pollyanna’为一种商业切花品种 ,花朵鲜黄色 ,斑点少 ,对切花生产过程中的环境条件要求不严。但其缺点明显 ,如种球对百合鳞茎腐烂病 [一种 由镰刀菌 ( Fusarium oxysporum )引起的病害 ]的抵抗能力弱 ,冷藏种球常因感染镰刀菌而腐烂 ;生长周期较长 ,在 16℃～17℃的日平均温度下 ,从种植到开花约
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核　农　学　报 24卷
需 105d。毛百合 (L ilium dauricum )为原产我国东北的
一种野生百合 ,花桔红色 ,斑点多 ,早花 (从种到开花
仅需 40 ～ 45d ) , 对百合鳞茎腐烂病抗性强 [ 1 ]。
‘pollyanna’×毛百合杂交有望培育出改变花色、斑点
增加、生长期变短、对鳞茎腐烂病抗性增强的百合新品
种。该杂交组合为栽培品种与野生百合之间远缘杂
交 ,温度处理 [ 2 ]、激素处理 [ 3 ]、切割花柱授粉 [ 4 ]、辐射
花粉辅助授粉 [ 5 ]、离体胚抢救 [ 6 ]、离体子房切片 - 胚
珠培养 [ 7 ]等技术常用于克服百合杂交障碍。辐照花
粉辅助授粉是克服百合受精前障碍的重要方法之一 ,
但存在着少数未被杀死的母本花粉萌发伸长、提供精
子并进而发生自交的可能性 ,杂交果实里可能混有自
交种子。采用分子标记技术对这些杂交子代进行早期
鉴定 ,能剔除由自交形成的假杂种。据报道 ,形态学标
记 [ 8 ]、细胞学标记 [ 8, 9 ]、蛋白质标记 [ 8 ]、RAPD 分子标
记 [ 10 ]等遗传标记曾用于百合杂种的早期鉴定。 ISSR
技术具有 RAPD简便及易操作性的优点 ;同时 ,其引物
较 RAPD引物长 ,因而扩增图谱的稳定性比 RAPD更
佳 [ 11 ]。本试验采用不同剂量 60 Co γ射线辐照百合
‘pollyanna’花粉 ,然后将辐照花粉以“先锋花粉 ”和
“蒙导花粉”的形式辅助授粉 ,用于克服该组合杂交障
碍 ;随机选出 F1 代的 15粒种子 ,离体成苗并扩繁形成
株系后 ,取其叶子提取 DNA ,采用 ISSR技术进行杂种
真实性鉴定。对辐照花粉辅助授粉获得的百合杂交后
代进行杂种真实性的早期鉴定 ,可加速百合杂交育种
的选育进程。
1　材料与方法
111　材料
以百 合‘pollyanna ’为 母 本 , 毛 百 合 ( L ilium
dauricum )为父本 ,种植在北京农学院园林系实验基地
温室内 ,于 2007年 12月开花期间进行花粉辐照处理
及杂交工作。
112　方法
11211　辐射花粉辅助授粉 　当母本‘pollyanna’花蕾
完全显色但花苞未打开时 (大约开花前 1～2d) ,剥开
花蕾 ,取出花药 ,于室内阴凉干燥处使花药自然开裂。
收集花粉 ,混匀 ,用硫酸纸包好 ,于当天送至北京辐照
中心钴源室进行辐照。参考前人相关研究报道 [ 12 ]和
本组过去试验的结果 [ 13, 14 ] ,设计了 1000和 2500Gy 2
种辐照剂量 ,剂量率为 100Gy/m in。完成辐照后 ,装进
加有无水氯化钙的干燥瓶中 ,储藏于 4℃冰箱备用。
当母本‘pollyanna’花蕾完全显色但花苞未打开
时 ,剥开花蕾去雄。去雄后套袋 ,挂吊签 ;蒙导花粉辅
助授粉方法 :当母本‘pollyanna’柱头上出现分泌物时 ,
将经辐照处理的母本‘pollyanna’花粉与未辐射的父本
(毛百合 )花粉等量混合均匀 ,然后授予母本柱头上 ;
先锋花粉辅助授粉方法 :当母本‘pollyanna’柱头上出
现分泌物时 ,先用辐照过的母本花粉进行自花授粉。
24h后 ,再授以父本 (毛百合 )花粉。
本试验设置了 8种授粉方法 (表 1) ,其中以柱头
直接授粉作为对照。每种授粉方式授粉 16～30朵 ,授
粉 75～80d后摘取杂交果实 ,统计每个果实中的饱满
种子数 ,并对各处理的统计结果进行方差分析。
11212　杂交种子离体成苗 　杂交获得的饱满种子经
表面消毒后 , 接 种 到 MS + BA 011mg/L + NAA
0101mg/L + 30g /L蔗糖培养基中离体萌发。形成的小
苗在 MS + BA 1mg/L +NAA 015mg/L + 30g/L蔗糖培
养基上扩繁 2～3代形成株系。
表 1　8种不同的授粉方式
Table 1　The p resentation of 8 different pollination methods
授粉方法代码
code of pollination methods
方法描述
descrip tion of method
S( F) 用未经辐照处理的母本花粉进行自花授粉　self2pollination with untreated female pollen
S(1000Gy) 用经 1000Gy辐照的母本花粉进行自花授粉　self2pollination with 1000Gy irradiated female pollen
S(2500Gy) 用经 2500Gy辐照的母本花粉进行自花授粉　self2pollination with 2500Gy irradiated female pollen
C (M) CK 用父本花粉直接授粉于母本柱头上　male pollen was directly app lied onto the male stigma
C (1000Gy +M) 经 1000Gy辐照的母本花粉与未辐射的父本花粉等量混合均匀后授粉
pollination with the m ixed pollen of half irradiated female pollen at 1000Gy and a half male pollen
C (2500Gy +M) 经 2000Gy辐照的母本花粉与未辐射的父本花粉等量混合均匀后授粉
pollination with the m ixed pollen of half irradiated female pollen at 2500Gy and a half male pollen
C (1000Gy/M /24 h) 先用 1000Gy辐照母本花粉授粉 , 24h后再用未辐射的父本花粉授粉
pollination with 1000Gy irradiated female pollen at first, and with male pollen 24h later
C (2500Gy/M /24h) 先用 2500Gy辐照母本花粉授粉 , 24h后再用未辐射的父本花粉授粉
pollination with 2500Gy irradiated female pollen at first, and with male pollen 24h later
　　注 : S为自交 ; C为杂交 ; F为母本 ;M为父本。下表同。
Note: S means selfing; C means cross; F means female parent; M means male parent; the same as following table1
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　1期 辐照花粉辅助授粉对百合远缘杂交结实的影响及杂种早期分子鉴定
113　杂种后代的 ISSR早期鉴定
11311　DNA 的提取 　采用 CTAB 法进行提取 : 取
013g百合组培苗新鲜嫩叶液氮研磨至粉末 ;将叶片粉
末转移到 115m l离心管中 ,加入预热的 CTAB , 60℃水
浴保温 30m in,其间轻轻倒转离心管数次 ;加入等体积
的 C I(氯仿 ∶异戊醇体积比为 24∶1) ,轻轻颠倒混匀数
次 , 10000 r/m in 离心 8m in; 加入 RNase 酶至终浓度
10μg/L , 37℃保温 1h;用 C I再抽提 1次 , 10000 r/m in
离心 8m in,取上相转入新的离心管中 ;加入 2倍体积
的无水乙醇 ,混匀 ,置于 - 20℃冰箱 30m in,可观察到
白色絮状沉淀 ; 12000 r/m离心 10m in,用 70%乙醇冲
洗沉淀 2次 ,再用无水乙醇冲洗 1遍。风干沉淀 ,溶于
适量 TE (200μl)中。
11312　 ISSR反应体系及 PCR扩增程序建立 　根据多
次试验 ,以下列 ISSR反应体系为最佳 : 10μl反应体系
中 , 1 ×PCR buffer,模板浓度 25ng,MgCl2 浓度 3mmol/
L, dNTP浓度 200μmol/L ,引物浓度 012μmol/ l, 015U TaqDNA酶 ,最后加重蒸水补足。经过多次试验 ,以下列 ISSR的 PCR扩增程序为最佳 : 94℃下 4m in预变性 ; 94℃变性 1m in, 53℃复性3m in, 72℃延伸 2m in, 30个循环 ; 72℃延伸 5m in; 4℃保温。PCR仪器 : Perkin Elmer 9600。2　结果与分析211　辐照花粉辅助授粉对于克服‘pollyanna’×毛百合杂交障碍的影响授粉 75～80d后摘取果实进行结果数和种子数统计 ,结果见表 2。由表 2可以看出 :母本‘pollyanna’自交亲合结果率达 8113% ,平均每个果能结 7815粒饱满种子。母本‘pollyanna’用 1000或 2500Gy剂量辐照的花粉自交 ,没有获得膨大果实和种子。表明 2种剂量的辐照均使‘pollyanna’的花粉丧失供精能力。
表 2　不同授粉方法对百合‘pollyanna’×毛百合杂交结果及形成种子的影响
Table 2　The Effects of different pollination methods on fruitset and seedset of‘pollyanna’×L1dauricum
处理方法
treatment
授粉花朵数
number of
pollinated flower
结果数
number of
fruit2set 结果率fruit2setrate ( % ) 饱满种子数number ofp lump seeds 平均饱满种子数average numberof p lump
seed /p lant
平均种子数
average number
of seeds/p lant
饱满种子率
rate of p lump
seeds( % )
S( F) 16 13 8113 1020 7815 - -
S( F 1000Gy) 18 0 0 0 0 - -
S( F 2500Gy) 18 0 0 0 0 - -
C (M直 ) CK 30 19 6313 994 5213c 23918 2118
C ( F 1000Gy +M) 20 15 7510 1299 8616a 22615 3812
C ( F 2500Gy +M) 20 14 7010 963 6818b 21510 3210
C ( F 1000Gy/M /24h) 21 14 6617 1140 8114a 20913 3819
C ( F 2500Gy/M /24h) 19 14 7317 1015 7215b 21817 3312
　　注 :数字后相同字母者表示在 0105水平上差异不显著 (仅对杂交果实中的饱满种子数进行差异显著性比较 ) ;平均种子数指该处理杂交果实中
的‘饱满种子数 +空瘪种子数’的平均值。
Note: the same letter behind data shows no significant difference at 0105 level ( only analyzing the data of p lump seeds in cross fruits among different
treatments) 1‘Average number of seeds’means the average value of“p lump seed number + shriveled seed number ”.
　　杂交组合‘pollyanna’×毛百合 ,各处理均获得果
实及种子。但是 ,仔细观察果实中的种子情况 ,少部分
为饱满种子 ,大部分为空瘪种子。普通柱头授粉 (CK)
的结果率为 6313% ,饱满种子数为 5213粒 /果 ,表明
该组合为亲合性组合 ; 但是其饱满种子率仅为
2118% ,即只有 2118%的种子可能成苗获得后代。表
明该组合仍存在一定的杂交障碍 ,许多父本花粉并未
克服其在母本柱头和花柱中遭遇到的不亲合障碍 ,并
未进入胚珠受精形成有胚种子。蒙导花粉及先锋花粉
辅助授粉技术均能显著提高单颗果实中饱满种子的数
量。1000和 2500Gy蒙导花粉辅助授粉结出的饱满种
子数分别为 8616和 6818粒 /果 ,其饱满种子率分别为
3812%和 3210% ,均显著高于对照。1000和 2500Gy
先锋花粉辅助授粉结出的饱满种子数分别 8114和
7215粒 /果 ,饱满种子率分别为 3819%和 3312% ,也
显著高于对照。饱满种子数的增加 ,预示着将来 F1 代
群体成苗数量增加 ,从杂交后代中选育出新优单株的
几率增大。
212　杂种后代的 ISSR早期鉴定结果
从北京鼎国生物技术公司合成了 40条 ISSR引
物 ,从中筛选出扩增多态性较好、重复性好的引物 6
个 ,从母本‘pollyanna’、父本毛百合以及利用辐照花粉
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核　农　学　报 24卷
辅助授粉杂交获得的 F1 群体中随机选出了 15个单株
(通过组织培养形成株系 )进行 ISSR2PCR扩增 ,结果
如表 3 (图 1)所示。由表 3可见 , F1 - 1共扩增出 25
条带 ,其中具有的父本特征带 10条 ,具有母本特征带
7条 ,具有双亲共有带条数 4条 ; F1 - 2共扩增出 22条
带 ,其中具有的父本特征带 7条 ,具有母本特征带 5
条 ,具有双亲共有带条数 4条 ; ⋯⋯; F1 - 15共扩增出
22条带 ,其中具有的父本特征带 7条 ,具有母本特征
带 3条 ,具有双亲共有带条数 4条。图 1和图 2分别
为引物 P16和引物 P36的 ISSR2PCR扩增谱图。
表 3　杂交 F1 代扩增条带数及来源
Table 3　Amounts of bands of F1 and their origin via ISSR2PCR
引物编号
p rimer code
P16 P17 P20 P35 P36 P37 合计
序列 5’23’
sequence 5’23’ (CT) 7 TGT (CT) 8 G (CT) 8 RG (CA) 7 GTT (CA) 7AGT (AG) 7 TC total
条带特征
character of band
(♂, ♀, ♀ + ♂) (♂, ♀, ♀ + ♂) (♂, ♀, ♀ + ♂) (♂, ♀, ♀ + ♂) (♂, ♀, ♀ + ♂) (♂, ♀, ♀ + ♂) (♂, ♀, ♀ + ♂)
F1 - 1 3 (1, 2, 0) 6 (2, 0, 2) 5 (3, 1, 0) 3 (1, 2, 0) 4 (2, 1, 1) 4 (1, 1, 1) 25 (10, 7, 4)
F1 - 2 2 (1, 1, 0) 2 (1, 0, 1) 4 (2, 0, 0) 4 (1, 2, 0) 5 (1, 1, 2) 5 (1, 1, 1) 22 (7, 5, 4)
F1 - 3 5 (2, 1, 0) 6 (2, 0, 2) 4 (2, 1, 0) 3 (1, 2, 0) 4 (0, 1, 2) 4 (2, 1, 1) 26 (9, 6, 5)
F1 - 4 5 (2, 1, 0) 8 (2, 0, 2) 4 (2, 0, 0) 6 (1, 2, 0) 3 (0, 0, 2) 5 (2, 1, 1) 31 (9, 4, 5)
F1 - 5 4 (2, 1, 0) 5 (2, 0, 1) 4 (1, 1, 0) 7 (1, 1, 0) 3 (1, 0, 2) 6 (3, 1, 1) 29 (10, 4, 4)
F1 - 6 2 (1, 1, 0) 6 (2, 0, 2) 3 (2, 0, 0) 3 (1, 1, 0) 3 (1, 0, 2) 2 (1, 0, 1) 19 (8, 2, 5)
F1 - 7 4 (2, 2, 0) 7 (2, 0, 1) 2 (1, 0, 0) 3 (1, 2, 0) 5 (1, 1, 2) 5 (2, 1, 1) 26 (9, 6, 4)
F1 - 8 5 (1, 1, 0) 3 (2, 0, 1) 2 (1, 0, 0) 2 (1, 0, 0) 3 (0, 0, 2) 4 (1, 1, 1) 19 (6, 1, 4)
F1 - 9 4 (1, 1, 0) 5 (2, 0, 1) 3 (0, 0, 0) 3 (1, 2, 0) 5 (1, 1, 2) 6 (2, 1, 1) 26 (7, 5, 4)
F1 - 10 4 (1, 1, 0) 4 (2, 0, 1) 3 (0, 1, 0) 4 (1, 2, 0) 5 (0, 1, 2) 5 (2, 0, 1) 25 (6, 5, 4)
F1 - 11 4 (1, 1, 0) 5 (2, 0, 2) 2 (0, 1, 0) 4 (1, 2, 0) 3 (0, 0, 2) 7 (2, 1, 1) 25 (6, 5, 5)
F1 - 12 2 (1, 1, 0) 7 (2, 0, 1) 3 (1, 0, 0) 3 (1, 1, 0) 6 (1, 1, 2) 6 (2, 1, 1) 27 (8, 4, 4)
F1 - 13 4 (1, 1, 0) 5 (1, 0, 2) 3 (0, 0, 0) 3 (1, 2, 0) 5 (0, 2, 2) 5 (2, 1, 1) 25 (5, 6, 5)
F1 - 14 2 (1, 1, 0) 5 (2, 0, 1) 3 (1, 0, 0) 5 (1, 2, 0) 6 (0, 1, 2) 4 (2, 0, 1) 25 (7, 4, 4)
F1 - 15 4 (2, 1, 0) 4 (2, 0, 1) 4 (0, 0, 0) 3 (1, 2, 0) 3 (1, 0, 2) 4 (1, 0, 1) 22 (7, 3, 4)
合计 total - - - - - - 372 (114, 67, 65)
　　注 : ♂表示子代具有父本的特征条带数 , ♀表示子代具有母本的特征条带数 , ♀ + ♂表示子代具有父母本共有条带数。
Note: ♂ means the number of male characteristic bands, ♀ means the number of female characteristic bands, ♀ + ♂means the number of parent’s
common bands.
图 1　引物 P16的 ISSR2PCR扩增图谱
Fig. 1　The map of ISSR2PCR amp lification via p rimer P16
M: marker; A:母本 pollyanna; B:父本毛百合 ; 1～15:选取的 15个 F1 子代。下图同
M, A and B stand for the marker, the maternal parent and paternal parent respectively;
1～15: the 15 possible hybrid individuals respectively1 The same as the following figure.
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　1期 辐照花粉辅助授粉对百合远缘杂交结实的影响及杂种早期分子鉴定
图 2　引物 P36的 ISSR - PCR扩增图谱
Fig. 2　The map of ISSR2PCR amp lification via p rimer P36
　　15个子代共扩增出 372条带 ,其中具有父本特征
带 114条 ,具有母本特征带 67条 ,具有双亲共有带条
数 65条。
表 3表明 : 15个子代 ,均既有母本的特征带 ,又有
父本的特征带 ,只是每个子代的父本特征带有多有少。
一般来说 ,因为 ISSR是显性分子标记 ,只要具有父本
的特征带 ,即表明该子代是真杂种后代。可见上述 15
个子代均为父、母本的杂交后代。
3　结论与讨论
本研究结果表明 :在亚洲百合‘pollyanna’与毛百
合杂交育种过程中 ,采用普通柱头授粉能获得一些膨
大果实和饱满种子 ,表明该组合为亲合性组合。经
1000和 2500Gy 60 Coγ射线辐照的母本花粉用于辅助
授粉 ,能促进形成更多的饱满种子。饱满种子数的显
著增加 ,预示着将来 F1 代群体成苗数量的显著增加 ,
这将提高从杂交后代中选育出新优单株的几率。
虽然‘pollyanna’与毛百合杂交亲合 ,但毕竟是百
合栽培品种与野生种之间的远缘杂交 ,仍然会存在一
定的不亲合性障碍。采用普通柱头直接授粉 ,仅获得
2118%的饱满种子 ,而其余 7912%为空瘪种子。空瘪
种子的形成有 2种原因 :其一是部分父本花粉管并未
克服其在母本雌蕊中遭遇到的不亲合障碍 ,无法进入
胚珠 ,胚珠因未受精而形成空瘪种子 ;其二是虽然发生
受精作用 ,但是远缘杂交导致的遗传物质不平衡致使
胚胎早期夭亡 ,从而使胚珠发育成空瘪种子。辐照花
粉的蒙导和先锋作用 ,会消耗掉一定量的拒绝蛋
白 [ 15 ] ,促进父本花粉在异种柱头上的萌发和伸长 ,促
使父本花粉管顺利进入子房和胚珠中 ,发生双受精作
用 ,导致饱满种子数量的增加。在使用辐照处理母本
　　　　　　
花粉时 ,辐照剂量的选择较为重要 ,既要保证 DNA失
活 ,又要保证对识别蛋白不产生较大的破坏。根据前
人研究 [ 12 ]和本课题组的前期工作 [ 13～14 ]表明 , 1000与
2500Gy是合适的剂量 ,本次试验中 1000、2500Gy也证
明了这一点。
百合为多胚珠植物 ,由于受精作用的刺激 ,即使某
些未受精的胚珠也有可能自行膨大 ,最后通过孤雌生
殖成苗。另外 ,辐照花粉辅助授粉存在着少数未被杀
死的母本花粉萌发与母本卵细胞受精从而发生自交的
可能性 ,杂交果实里可能出现自交种子。因此 ,无论是
播种成苗还是试管内离体成苗 ,子代中都存在着非真
实杂交种的可能性。从获得种子到生长为开花植株 ,
百合杂交育种大约需要 215～3年时间 ,这期间需要花
费较大的精力进行管理。为此 ,有必要前期进行杂种
真实性的鉴定。本研究中 ISSR 标记的结果表明 :
ISSR标记是百合杂种早期鉴定的有效方法 ,本试验随
机选取的 15株杂种后代经 ISSR标记证明都是真实
的。各子代一般既有母本的特征带 ,又有父本的特征
带 ,因为 ISSR是显性分子标记 ,只要具有父本的特征
带 ,即确定该子代是真杂种后代。杂交子代的扩增条
带中除了具有与亲本相同的条带以外 ,还出现了亲本
没有的扩增条带。据前人研究报道 ,它们可能来源于
不同长度的等位核苷酸序列之间形成的异源双链
体 [ 16 ]。在扩增谱带中 ,也出现双亲有而杂交后代没有
的条带 ,可能是配子形成过程中染色体的交换及 DNA
分子碱基修饰引起的突变等原因所造成的位点丢
失 [ 17 ]。有人认为这些例外情况发生是由于竞争性抑
制作用 ,杂合双链 DNA可能表现对某些引物结合的空
间干扰或竞争作用 ,使得杂种本应显现的条带受到了
完全的或部分的抑制 ,或者使杂种出现双亲都不具有
的扩增带 [ 18 ]。
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Journal of N uclear A gricu ltura l Sciences
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(责任编辑 　王媛媛 )
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