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飘香藤离体培养中茎尖枯死现象的控制



全 文 :植物生理学通讯 第 45卷 第 10期,2009年 10月 1043
收稿 2009-07-17 修定  2009-08-19
资助 广州市科技攻关重大项目(2 00 4Z1-E00 41 )。
* 通讯作者(E-mail: wu_kunlin@163.com)。
飘香藤离体培养中茎尖枯死现象的控制
梁乃斌 1, 吴坤林 2,*, 方中明 2,3, 廖文君 1
1华南农业大学生命科学学院, 广州 510642; 2中国科学院华南植物园, 广州 510650; 3中国科学院研究生院, 北京 100049
茎尖枯死或枝叶枯萎是由植物生理调节混乱
而引起的一种普遍现象。茎尖枯死现象的出现, 可
能是钙元素的缺乏引起的, 硼的缺乏也会引起这一
现象。因此怎样防止这一现象的发生, 是组织培养
中十分关注的问题。本文以飘香藤(Mandevilla
sanderi Hemsl.)离体培养的不定芽为材料, 对茎尖
枯死的控制和对优质芽的保护进行了研究。
试验材料为在增殖培养基 TB1 (MS+0.10 mg.
L-1 IBA)上诱导培养的飘香藤不定芽。实验有: (1)
TB1增殖培养基中添加不同浓度的氯化钙(0~960.0
mg.L-1), 诱导出的新芽接种于其上。(2) TB1增殖
培养基中添加入不同浓度的 IBA (0~8.00 mg.L-1),
诱导出的新芽接种于其上。(3)每隔 2个星期, 向培
养新芽的广口瓶中加入5 mL无植物生长调节剂的
MS液体培养基, 2 d后去掉加入的液体。(4)培养基
表面覆盖一层经过高压灭菌后的羊毛脂降低培养基
表面的蒸发量, 从而降低广口瓶的湿度。每隔 2个
星期, 打开广口瓶的盖子 10 s, 以增加其通风量。
(5)少量棉花堵住橡皮塞的 4 mm直径圆孔, 以增加
广口瓶与周围空气的交换。
5种处理的增殖培养基皆为TB2 (MS+0.05 mg.
L-1 6-BA)。所有试验中所用的培养容器均为 100
mL的广口玻璃瓶, 每瓶分装 20 mL培养基, 每处
理接种 30瓶, 每瓶接种 4个不定芽, 培养温度为
(25±1) ℃, 光照时间 16 h.d-1 , 光照强度为 30~40
µmol.m-2.s-1。所有培养基的 pH均为 5.8。培养 8
周后测定所有长度大于 3 mm的芽长, 并记录芽的
个数和茎尖枯死的芽个数。计算茎尖枯死率并对
每个平行实验结果进行分析。计算芽的平均数、
芽的平均长度、茎尖枯死的平均值。其中, 茎尖
枯死率 =(茎尖枯死芽数 /总芽数)×100%。得到如
下结果。
(1)不同浓度钙离子下的茎尖枯死率均明显地
降低, 钙离子浓度为 480.0 mg.L-1的茎尖枯死率最
低(仅为 11%) (表 1)。但顶芽伸长受到的影响不明
显。据此认为, 茎尖枯死的出现, 与钙的缺乏可能
表 1 不同浓度钙对茎尖枯死的影响
钙浓度 /mg·L-1 出芽数 茎尖枯死芽数 茎尖枯死率 /%
0 11.20±0.37a 4.08±0.33de 36±0.03cd
2.4 10.98±0.57a 3.78±0.75de 34±0.06bcd
4.8 10.76±0.56ab 3.74±0.33de 35±0.04cd
9.6 10.73±0.38ab 3.07±0.41bcde 28±0.03bc
12 .0 9.78±0.37abc 2.85±0.56bcd 29±0.05bc
24 .0 9.94±0.29abc 3.25±0.54cde 33±0.06bcd
48 .0 9.04±0.33c 3.04±0.21bcde 34±0.02bcd
96 .0 9.90±0.44abc 4.43±0.30e 45±0.03d
120.0* 9.36±0.60bc 3.24±0.20cde 35±0.04cd
240.0 9.34±0.49bc 1.92±0.52abc 21±0.06ab
480.0** 9.31±0.49bc 1.01±0.41a 11±0.04a
960.0 8.81±0.51c 1.84±0.30ab 21±0.03ab
不同字母表示在 P≤ 0.05水平上差异显著。*MS培养基中钙
浓度, **茎尖枯死的最佳控制数。表 2 和表 3 同此。
有关。
(2)低浓度 IBA (0~0.08 mg·L-1)下的茎尖枯死
率明显降低(表 2)。飘香藤的出芽数随着 IBA浓度
的降低而下降, 0.02 mg·L-1 IBA最有效。
表 2 不同浓度 IBA对茎尖枯死的影响
IBA浓度 /mg·L-1 出芽数 茎尖枯死芽数 茎尖枯死率 /%
0 11.20±0.37a 3.78±0.22ab 34±0.01ab
0.02* 11.20±0.58a 3.08±0.45a 28±0.04a
0.04 11.20±0.58a 3.41±0.36ab 30±0.03a
0.08 11.40±0.40a 3.64±0.30ab 32±0.02a
0.10 10.60±0.40a 4.55±0.18bcd 43±0.02cd
0.20 11.00±0.32a 3.71±0.36ab 34±0.03ab
0.40 10.20±0.37a 4.09±0.55abc 40±0.05bc
0.80 11.40±0.51a 5.54±0.32d 49±0.01d
1.00 11.00±0.71a 5.05±0.44cd 46±0.01cd
2.00 11.20±0.58a 5.20±0.33cd 46±0.01cd
4.00 11.40±0.60a 5.15±0.37cd 45±0.01cd
8.00 11.00±0.63a 5.53±0.37d 50±0.01d
·小经验·
植物生理学通讯 第 45卷 第 10期,2009年 10月1044
表 3 不同湿度和通风量对茎尖枯死的影响
处理 出芽数 茎尖枯死芽数 茎尖枯死率 /%
空白对照 * 9.34±0.49a 3.65±0.12a 39±0.02a
添加液体培养基 9.36±0.60a 3.24±0.20a 35±0.04a
添加羊毛脂 9.34±0.49a 3.61±0.13a 39±0.01a
增加棉花 9.36±0.60a 3.24±0.20a 35±0.04a
(3)液体培养基有利于芽的伸长, 但茎尖枯死率
不降低, 而且对芽的增殖也无促进作用(表 3)。同
样地, 广口培养瓶通风量增加的茎尖枯死率也未受
到明显的影响(表 3)。
参考文献
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dependent process. Plant Physio1, 77: 544~551