作 者 ：刘缙1,*, 王亚红1, 滕红梅1, 王玉国2,*
期 刊 ：植物生理学报 2016年 52卷 7期 页码：1081-1088
关键词：小麦；转录因子；克隆；原核表达；凝胶阻滞；
摘 要 ：为进一步了解小麦Dof (DNA binding with one figner)转录因子在小麦种子发育过程中的作用和功能, 本文利用RTPCR技术, 克隆到一个小麦PBF蛋白的等位基因cDNA序列(GenBank登录号为KX058135), 命名为TaPBFB。该序列包含完整的开放阅读框(ORF) 987 bp, 编码了328个氨基酸的蛋白质, 理论等电点8.75, 理论分子量为33.9 kDa, 这与原核表达后SDS-PAGE和Werstern blot检测结果一致。蛋白质序列分析表明, 该基因编码的氨基酸序列与粗山羊草(Aegilops tauschii, AHZ44510) AtaPBF蛋白相似性最高为92%, 而与已知的‘中国春’小麦(Triticum aestivum, AGR34055) WPBF蛋白相比同源性为91.5%。保守结构域分析表明, 该蛋白中具有典型的Dof结构域, 以及NLS核定位信号, 推测该蛋白定位于细胞核并具有调控储藏蛋白基因表达的功能。凝胶阻滞实验结果也表明, 融合蛋白能与小麦低分子量麦谷蛋白GluD-LMWGS基因上游的顺式元件Prolamin box (PB)特异结合, 证明TaPBFB具有DNA结合活性。这为深入研究多个等位基因的小麦PBF转录因子如何共同调控储藏蛋白的表达机制提供研究材料, 为进一步在转录调控水平实现农作物的遗传改良奠定基础。