全 文 ：植物生理学通讯 第46卷 第12期, 2010年12月 1269
收稿 2010-10-20 修定 2010-11-02
资助 国家林业局 “948” 重大项目(2006-4-C08)和国家科技支
撑计划课题(2006BAD01A18)。
* 通讯作者(E-mail: zqx@bjfu.edu.cn; Tel: 010-62338005)。
肿节石斛的无菌播种和快速繁殖
霍丽丽 1, 潘会堂 1,2, 张启翔 1,2,*
1北京林业大学园林学院, 北京100083; 2国家花卉工程技术研究中心, 北京100083
Asepsis Sowing and Rapid Propagation of Dendrobium pendulum Roxb.
HUO Li-Li1, PAN Hui-Tang1,2, ZHANG Qi-Xiang1,2,*
1College of Landscape Architecture, Beijing Forestry University, Beijing 100083, China; 2National Engineering Research Center for
Floriculture, Beijing 100083, China
1 植物名称 肿节石斛(Dendrobium pendulum
Roxb.)。
2 材料类别 成熟种子。
3 培养条件 以 N6 和 MS 为基本培养基。种子萌
发培养基: (1) N6; (2) MS; (3) 1/2MS; (4) VW (Vacin-
Went培养基); (5) MS+椰乳 100 mg·L-1 (单位下
同)。增殖与分化成苗培养基: (6) MS+6-BA 0.2+
NAA 0.2。生根壮苗培养基: (7) MS+NAA 0.5; (8)
MS+土豆泥100。上述培养基均附加30 g·L-1蔗糖
和6 g·L-1琼脂, pH 5.5~5.8。培养温度为(24±2) ℃;
光照强度20~40 mmol·m-2·s-1, 光照时间12 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 材料的无菌处理 取肿节石斛植株自交授粉后
的成熟果荚, 用肥皂水擦洗蒴果表面后用自来水冲
洗30 min, 在超净工作台上, 用无菌蒸馏水冲洗3
次, 75%酒精表面灭菌30 s, 无菌蒸馏水冲洗3次
后, 再于5% NaClO溶液中浸5~15 min, 最后用无
菌蒸馏水冲洗 5 遍。
4.2 种子萌发 用消毒滤纸吸干水分, 切开蒴果, 将
种子分散于琼脂水溶液中(琼脂含量2 g·L-1), 用移
液枪吸取种子接种于萌发培养基(1)~(5)上。培养
基(1)上的种子萌发率最高, 达到90%以上; 其次是
培养基(5), 萌发率85%; 在培养基(2)和(3)上的萌发
率相差不大, 为80%左右; 在培养基(4)上的种子萌
发率最低, 仅有 50%。在正常光照条件下的种子
萌发率和经暗培养1周后再转入光照培养条件的种
子萌发率无明显区别, 活性炭的添加与否对种子萌
发也无明显影响, 而添加椰乳则显著提高种子萌发
率和原球茎长势, 椰乳对种胚的萌发有促进作用。
N6培养基是本实验所试5种培养基中最适种子萌
发培养基。在体视显微镜下观察发现, 接种的种
子1周后种胚膨大突破种皮, 2周后种胚呈现绿色
原球茎状, 3周后少量原球茎顶端长出叶原基, 可
进行增殖培养, 4周后80%原球茎顶端长出叶原基
(图 1)。
图1 肿节石斛种胚发育过程
A: 蒴果果荚剖开; B: 成熟种子; C: 种胚发育2周; D: 种胚发
育4 周。
4.3 原球茎增殖与分化 将上一阶段获得的原球茎
接种于液体培养基(3)中振荡培养, 2周后形成大量
黄绿色粒状原球茎, 原球茎随着培养时间的延长逐
渐变绿, 且大小一致。将原球茎接种于培养基(6)
植物生理学通讯 第46卷 第12期, 2010年12月1270
中, 增殖率达4~7倍。将增殖后的原球茎直接转入
培养基(2)中, 1周后原球茎迅速萌发成芽, 在芽的
基部有新芽产生, 部分芽又能分化出原球茎, 长出
新芽, 4周后新芽长出2~3片叶子, 此时约有30%
原球茎长出嫩根, 可转入生根壮苗培养基中。
4.4 壮苗及生根培养 将分化后高约1 cm的肿节石
斛苗转至培养基(7)中, 1~2周后苗基部长出新根, 每
株生根4~5条, 4周后根长为1~2 cm, 此时转入添
加有土豆泥的培养基(8)中, 植株生长速度加快, 植
株粗壮, 叶片厚实, 根系发达(图2)。
图2 肿节石斛生根壮苗
4.5 炼苗移栽 将培养瓶敞开瓶盖, 炼苗1~2周后,
取出小苗, 洗去根部残留的培养基, 用经过1 000
倍多菌灵溶液浸泡处理12 h的水苔包裹小苗基部
移入穴盘中, 注意保持温度, 做部分遮荫处理并喷
雾保湿, 30 d后成活率达90%以上(图3、4), 之后
可正常的水肥管理。
5 意义与进展 肿节石斛为兰科石斛属植物, 属于
附生兰, 主要分布于中国云南南部海拔1 000~1 600 m
的疏林中树干上, 在印度、缅甸、越南、老挝和
图3 肿节石斛移栽幼苗
图4 移栽1个月后的肿节石斛幼苗
泰国也有分布。肿节石斛茎节明显肿大, 花大, 唇
盘有一大黄色斑块, 花色艳丽, 具有较高的观赏价
值, 同时肿节石斛也是春石斛杂交育种的常用原生
种。肿节石斛种子小、无胚乳, 自然条件下萌发
率极低, 人工栽培中虽然可用常规扦插或分株繁殖,
但繁殖率较低。采用无菌非共生萌发技术实现试
管苗大量繁殖, 不仅能够满足市场需求, 而且可以
实现石斛属野生资源的保护和利用。肿节石斛的
无菌播种和快速繁殖尚未见报道。