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紫斑蝴蝶草的组织培养和快速繁殖



全 文 :植物生理学通讯 第 45卷 第 3期,2009年 3月 273
紫斑蝴蝶草的组织培养和快速繁殖
陈刚 *, 王瑛华, 陈雄伟
肇庆学院生命科学学院, 广东肇庆 526061
Tissue Culture and Rapid Propagation of Torenia fordii Hook. f.
CHEN Gang*, WANG Ying-Hua, CHEN Xiong-Wei
Faculty of Life Sciences, Zhaoqing College, Zhaoqing, Guangdong 526061, China
收稿 2008-12-17 修定 2009-01-15
资助 肇庆市科技项目(2008N001)和肇庆学院自然科学研究项
目( 0 7 3 1 )。
* E-mail: chengang@zqu.edu.cn; Tel: 0758-2752258
1 植物名称 紫斑蝴蝶草(Torenia fordii Hook. f.)。
2 材料类别 种子萌发形成的叶片。
3 培养条件 不定芽诱导培养基: (1) MS+CPPU (氯
吡苯脲, forchlorfenuron) 0.01 mg·L-1 (单位下同);
(2) MS+CPPU 0.05; (3) MS+CPPU 0.10; (4)
MS+TDZ (噻苯隆, thidiazuron) 0.01; (5) MS+TDZ
0.05; (6) MS+TDZ 0.10。生根培养基: (7) MS; (8)
1/2MS; (9) 1/3MS; (10) 1/4MS。上述培养基均加
入 3.0%蔗糖和 0.7%琼脂, pH 5.8~6.2。培养温度
为(24±2) ℃, 光照时间为16 h·d-1, 光照强度为30~40
µmol·m-2·s-1。
4 生长与分化情况
4.1 无菌材料的获得 将紫斑蝴蝶草即将成熟的蒴
果先用自来水冲洗0.5~1 h, 在超净工作台中用70%
酒精消毒 30 s, 再用 0.1%升汞溶液(每升加 2~3滴
吐温 -80)处理 10 min, 无菌水冲洗 5~6 遍。随即
将处理好的蒴果撕开, 种子平铺在MS培养基上, 待
其长出3~4对叶片后, 将全展叶切成0.7 cm×0.7 cm
的小块, 接种于不定芽诱导培养基(1)~(6)中。
4.2 不定芽分化及增殖 外植体在不定芽诱导培养
基(1)~(6)上培养 10 d, 均出现绿色的芽点, 14 d后
可观察到部分芽点开始分化为幼芽, 21 d即形成丛
生不定芽(图 1)。其中培养基(1)中的外植体分化
率为 15%, 不定芽较少, 每个外植体可产生 3~5个
丛生芽, 形成的丛生芽平均高度1.26 cm, 部分外植
体有黄化现象; 培养基(2)中的外植体分化率为80%,
形成的丛生芽健壮, 每个外植体可产生10~30个丛
生芽, 丛生芽平均高度 1.22 cm, 50%外植体有褐
化现象; 培养基(3)中的外植体分化率为 100%, 芽
点密集, 高度在 0.2~0.5 cm之间, 80%外植体有褐
化现象。培养基(4)中的外植体分化率为 53%, 形
成的丛生芽密集, 每个外植体可产生10~20个丛生
芽, 丛生芽平均高度 0.83 cm; 培养基(5)中的外植
体分化率为 84%, 形成的丛生芽健壮, 每个外植体
可产生 20~50个丛生芽, 丛生芽平均高度 1.49 cm;
培养基(6)中的外植体分化率为60%, 形成的丛生芽
密集, 纤细, 每个外植体可产生30~80个丛生芽, 丛
生芽平均高度 1.48 cm。外植体在培养基(1)~(6)
中培养 30 d, 不定芽高度均可超过 2 cm。对比
TDZ与CPPU实验结果可知, 添加生长物质TDZ诱
导不定芽的效果明显优于 CPPU。统计结果表明,
培养基(5)的诱导效果最佳。
4.3 生根培养 丛生芽长成较健壮的小植株后, 切取
高 2 cm左右的单芽, 转入生根培养基(7)~(10)上培
养, 6 d后即可观察到根的形成。第 21天时, 培养
基(7)~(10)上小植株生根率均超过 95% (图 2)。但
在培养基(7)上的小植株形成的根粗短, 根长范围在
0.2~1.1 cm, 根的个数多集中于 3~8条; 培养基(8)
上的小植株形成的根最多, 根长在 0.65~2.15 cm之
间, 根的个数多集中于 8~12条; 培养基(9)上的小
图 1 紫斑蝴蝶草的分化芽
植物组织培养简报 Brief Communications of Plant Tissue Culture
植物生理学通讯 第 45卷 第 3期,2009年 3月274
植株形成的根较细, 根长在 0.5~1.5 cm之间, 根的
个数多集中于 3~6条; 培养基(10)上的小植株形成
的根细短, 根长在 0.4~1.25 cm之间, 根的个数多
集中于 4~10条。
4.4 试管苗的移栽 打开装有再生苗的培养瓶盖, 室
温条件下放置 2~3 d, 小心取出, 去除根上的培养
基, 移入沙土和蛭石(3:1)的混合基质中, 保证湿度,
控制温度和光照, 其成活率在 90%以上, 3个月后
即可开花(图 3)。
5 意义与进展 紫斑蝴蝶草又名紫斑翼萼, 为玄参
科蝴蝶草属[也有称蓝猪耳属(侯宽昭1958)]一年生
直立草本植物, 分布于广东、江西、湖南、福建
等省(中国科学院中国植物志编辑委员会 1979)。
全草用于治疗疮毒(谢宗万和余友芩 1996)。紫斑
蝴蝶草盛花期为夏秋季节, 花冠黄色或白色, 花萼
筒状, 先端四裂片, 两侧裂片先端蓝色, 中裂片先端
橙黄色(中国科学院华南植物研究所 2000)。自然
图 2 紫斑蝴蝶草的生根 图 3 紫斑蝴蝶草的开花
繁殖为种子繁殖, 但速度慢、增殖率低, 野生资源
逐年减少。本文建立的离体培养再生体系稳定性
好, 繁殖周期短, 对紫斑蝴蝶草资源的保存、品质
改良以及生产中的快繁可能有一定的参考意义。
同属的单色蝴蝶草(陈刚等 2007)和蓝猪耳(佟晓南
等 2002)的组织培养和快速繁殖已有报道, 但紫斑
蝴蝶草的组织培养和快速繁殖的报道尚未见。
参考文献
陈刚, 陈雄伟, 王瑛华(2007). 单色蝴蝶草的组织培养和快速繁
殖. 植物生理学通讯, 43 (3): 499
侯宽昭(1958). 中国种子植物科属辞典. 北京: 科学出版社, 439
佟晓南, 韩玉珍, 徐夙侠(2002). 蓝猪耳的组织培养和植株再生.
植物生理学通讯, 38 (3): 255
谢宗万, 余友芩(1996). 全国中草药名鉴(上册). 北京: 人民卫生
出版社, 872
中国科学院华南植物研究所(2000). 广东植物志(第四卷). 广州:
广东科技出版社, 375~377
中国科学院中国植物志编辑委员会(1979). 中国植物志(第六十七
卷第二分册). 北京: 科学出版社, 152~164