全 文 ：植物生理学通讯 第 45卷 第 1期，2009年 1月 5 1
西藏虎头兰的组织培养与快速繁殖
王莲辉, 姜运力, 余金勇, 罗在柒, 陈景艳 *
贵州省林业科学研究院生物技术中心, 贵阳 550005
Tissue Culture and Rapid Propagation of Cymbidium tracyanum L. Castler.
WANG Lian-Hui , JIANG Yun-Li, YU Jin-Yong, LUO Zai-Qi, CHEN Jing-Yan*
Center of Biological Technology, Guizhou Academy of Forestry, Guiyang 550005, China
收稿 2008-11-03 修定 2008-12-03
资助 贵州省科技厅农业、社会发展科技攻关项目(黔科合
NY 字[2006]3062 号)。
* 通讯作者(E-mail: gzwanglianhui@163.com; Tel: 0851-
3 9 2 1 0 3 8 )。
1 植物名称 西藏虎头兰(Cymbidium tracyanum L.
Castler.)。
2 材料类别 种子。
3 培养条件 西藏虎头兰种子萌发培养基: (1) 1/2MS;
(2) MS; (3) 1/2MS+100 mL·L-1洋芋; (4) MS+100
mL·L-1洋芋; (5) 1/2MS+100mL·L-1椰乳; (6) MS+100
mL·L-1椰乳。原球茎继代增殖培养基: (7) MS+
NAA 0.1 mg·L-1 (单位下同)+100 mL·L-1洋芋; (8)
MS+NAA 0.5+100 mL·L-1洋芋; (9) MS+6-BA 0.5+
NAA 0.2+100 mL·L-1洋芋; (10) MS+6-BA 2.0+NAA
0.2+100 mL·L-1洋芋; (11) MS+KT 0.5+IBA 0.2+100
mL·L-1洋芋; (12) MS+KT 1.5+IBA 0.2+100 mL·L-1洋
芋。壮苗及生根培养基: (13) 3 g·L-1花宝 1号(台
和园艺企业股份有限公司, N:P:K=7:6:19)+IBA 0.5+2
g·L-1活性炭; (14) 3 g·L-1花宝 3号(台和园艺企业股
份有限公司, N:P:K=1:3:2)+IBA 0.5+2 g·L-1活性炭;
(15) 1/2MS+IBA 0.2; (16) 1/2MS+IBA 0.4。以上
培养基均加 3.0%蔗糖和 0.6%琼脂, pH 5.2~5.4, 培养
温度(25±2) ℃, 光照强度为 40 µmol·m-2·s-1, 光照时
间 12 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 材料的无菌处理 取人工授粉 480 d成熟尚未
开列朔果, 经自来水洗净后, 滤纸吸干水份, 在超净
工作台上, 置于 10%次氯酸钠溶液中消毒 20 min,
用 75%的酒精表面消毒 30 s, 再以 0.1%的升汞溶
液消毒 15 min, 最后用无菌水冲洗 5~6次。将洗
净的成熟朔果置于灭菌滤纸上吸干水分, 用解剖刀
切开蒴果, 将种子散落到培养基上。
4.2 种子萌发 发育 480 d的种子分别接种到萌发
培养基(1)~(6)上, 培养 3周左右, 可见虎头兰种子
肿胀继而呈乳白色原球体状; 继续培养8周后原球
茎转绿, 有叶原基出现, 原球茎之间有白色绒毛黏
连(图 1)。培养基(1)、(2)种子萌发率约 40%; 培养
基(5)、(6)种子萌发率约 60%; 培养基(3)、(4)上的
种子萌发率可达90%以上, 种子在各培养基上均有
萌发, 只是萌发率各有不同, 表明添加洋芋有利于
西藏虎头兰种子萌发。培养基(4)较培养基(3)萌发
速度快, 可提前20 d左右, 表明MS培养基较1/2MS
培养基更有利于西藏虎头兰种子萌发生长。
4.3 原球茎增殖和分化成苗 将带有叶原基的原球
茎转移至培养基(7)~(12), 培养 120 d原球茎长出
小芽(图2), 同时小芽的基部又有新的原球芽产生。
培养基(7)、(8)原球茎增殖快, 球与球之间呈块状相
连, 分化出的芽较少; 培养基(11)、(12)分化出的芽
有部分玻璃化; 培养基(9)、(10)原球茎成苗快, 培
养基(9)原球茎大多形成植株且长势好, 培养基(10)
原球茎分化出的苗很多, 比较纤弱, 健壮程度不高。
由此可见, NAA和6-BA组合当中, 随着6-BA浓度
的增加, 植株有弱化的趋势。
4.4 生根培养 将较大的无根苗转入生根培养基(13)~
(16)上培养, 培养 30 d左右, 即可长出 2~3条约 1
cm长的根(图 3)。培养基(13)、(14)不定根的诱导
率为 70%; 培养基(15)、(16)不定根的诱导率达
95%以上, 植株生长旺盛, 7周后形成 3~5 cm的小
苗, 培养基(15)比培养基(16)根系发达, 说明低浓度
的 IBA有利于根的产生, 高浓度IBA对根的萌发有
抑制作用。
4.5 移栽 将培养瓶置于温室中炼苗2周后, 从培养
瓶中取出生根苗, 洗净附着的培养基, 将苔藓用1 000
倍多菌灵溶液浸泡 1 h, 挤干水分, 包裹出瓶苗根
部, 种植于育苗盘中(图 4), 保持适宜温度, 置于阴
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图 1 西藏虎头兰的原球茎萌发
图 2 西藏虎头兰的分化出苗
图 3 西藏虎头兰的生根
图 5 西藏虎头兰的花
图 6 西藏虎头兰的种子
图 4 西藏虎头兰的移栽
凉通风处栽培。在此期间不浇水, 这样有利于新根
生长和防止病害发生, 3周后移入温室中栽培, 正
常水、肥、药管理, 成活率可达 95% 以上。
5 意义与进展 西藏虎头兰属兰科兰属, 分布贵州
西南部、云南和西藏东南部; 缅甸和泰国也有。
附生植物, 生于林中树干上或岩石上。花葶侧生,
外弯或近直立, 总状花序通常具十余朵花, 花直径
达 12~13 cm, 花朵硕大(图 5), 适宜做盆栽或切花,
具有很高的观赏价值, 拥有众多的爱好者, 多用于
作大花蕙兰的杂交亲本。野生西藏虎头兰的资源
再生缓慢, 受到国际植物保护公约的保护。西藏虎
头兰的种子(图6)在自然状况下极难萌发, 主要靠分
株繁殖, 速度慢, 采用无菌播种能加快繁殖速度。
本文结果对西藏虎头兰资源的保护和商业化生产开
发能有一定的参考价值。同属的物种的组培快繁
已有报道(朱国兵等 2008; 徐程等 2002; 吴晓霞等
2002), 但西藏虎头兰的组培快繁尚未见报道。
参考文献
吴晓霞, 姜敦云, 崔月花, 张彪(2002). 大花蕙兰的组织培养与快
速繁殖. 植物生理学通讯, 38 (2): 141
徐程, 詹忠根, 张铭(2002). 中国兰的组织培养. 植物生理学通讯,
38 (2): 171~174
朱国兵, 杨柏云, 敖爱艳(2008). 寒兰的组织培养与试管开花. 植
物生理学通讯, 44 (3): 513~514