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地宝兰的离体快速繁殖



全 文 :植物生理学通讯 第 43卷 第 2期,2007年 4月 309
地宝兰的离体快速繁殖
胡琦敏,王任翔 *,黄云峰
广西师范大学生命科学学院,广西桂林 541004
In vitro Propagation of Geodorum densiflorum (Lam.) Schltr.
HU Qi-Min, WANG Ren-Xiang*, HUANG Yun-Feng
College of Life Science, Guangxi Normal University, Guilin, Guangxi 541004, China
收稿 2006-11-02 修定  2007-01-31
* 通讯作者(E-ma il:wrx0 5@12 6 .com)。
1 植物名称 地宝兰[Geodorum densiflorum (Lam.)
Schltr.]。
2 材料类别 种子。
3 培养条件 种子萌发培养基:(1) MS;(2) MS+6-
BA 1.0 mg·L-1 (单位下同)+NAA 0.5;(3) 1/2MS;
(4) 1/2MS+6-BA 1.0+NAA 0.5;(5) KC (Kundson
1951) ;(6) KC+6-BA 1.0+NAA 0.5。原球茎增殖
和分化培养基:(7) MS+6-BA 0.5+NAA 0.2;(8)
MS+6-BA 1.0+NAA 0.2;(9) MS+6-BA 3.0+NAA
1.5;(10) 1/2MS+6-BA 0.5+NAA 0.2;(11) 1/2
MS+6-BA 0.5+NAA 0.2+1 g·L-1活性碳;(12) 1/2
MS+6-BA 1.0+NAA 0.2 ;(13) 1/2MS+KT 1.0+NAA
0.1。生根壮苗培养基:(14) MS+6-BA 0.2+NAA
0.5。以上培养基均含 30 g·L-1蔗糖和 7 g·L-1琼脂,
pH为 5.0~5.5。培养温度为(25±2) ℃,光强 30~40
µmol·m-2·s-1,光照时间 12 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 材料的无菌处理 取地宝兰成熟但未开裂的荚
果,自来水洗净后,用 70%酒精表面消毒 30 s,
再以 0.1%升汞溶液消毒 15 min,最后用无菌水
冲洗 4~5次。用灭菌滤纸吸干荚果表面水分,用
解剖刀切开荚果,取出种子,分成 3 份:一部
分直接接种于培养基上;一部分用解剖刀划破种
皮后接种于培养基上;另一部分再用 0.1 mol·L-1
KOH溶液腐蚀种皮 10 min,无菌水冲洗 4~5次后
再将种子接种到培养基上。
4.2 种子萌发 将种子接种到培养基(1)~(6)上,暗
培养,待种子萌发成白色原球茎后转入光下培
养,20 d后原球茎转绿(图 1)。地宝兰种子在 6种
培养基中都有不同程度的萌发,其中培养基(4)中
萌发率最高,达到 95 %,其他培养基萌发率为
40%~80%不等。对种子 3种不同的处理也表现出
不同的萌发率,无任何处理的种子萌发率较低,
用KOH处理的比划破种皮的提前 1周萌发,且转
入光下培养后KOH处理的原球茎易转绿。
4.3 原球茎的增殖及分化 将原球茎转入培养基
(7)~(13)中进行原球茎的增殖和分化。原球茎在培
养基(11)和(13)中增殖,培养基(11)中的原球茎增
殖成块状的丛生型原球茎,增殖倍率为 2.5;培
养基(13)中的原球茎增殖成根状茎,增殖倍率为
3.0。30 d后,原球茎在培养基(7)、(8)、(9)、(10)、
(12)上都能分化成芽;60 d后,分化的芽可增殖
成丛生芽,芽的增殖倍率依次为 2.2、1.4、2.8、
1 . 3、1 . 6。
4.4 生根壮苗培养 在培养基(7)中原球茎分化的芽
可以直接生根,但植株不够健壮。将无根小苗转
入生根培养基(14)中,40 d后能形成 3 cm高的健
壮植株,生根率达 100%,每株生根数为 3条(图
图 1 地宝兰的种子萌发
植物生理学通讯 第 43卷 第 2期,2007年 4月310
2)。植株高 3~5 cm时便可进行炼苗和移栽。
4.5 移栽 试管苗出瓶前需在室温下炼苗 2周。出
瓶时,从培养瓶中取出生根苗,洗净附着的培养
基,用 0.2% 高锰酸钾溶液浸泡 3 min,晾干表
面水分,种植于苔藓、沙、泥土(1:1:1)混合基质
中,移栽的 1 周内不浇水,保持适宜湿度,成
活率可达 80% 以上。
5 意义与进展 地宝兰属兰科地宝兰属,主要分
布于广东南部、海南、广西、台湾、四川南部
等省区,属地生兰类。假鳞茎为块茎状,多个
连接,位于地下。叶 2 ~3 枚,椭圆形、狭椭圆
形或长圆状披针形,长 16~29 cm,具 2~5朵花,
花白色,颇具观赏价值。地宝兰种子无胚乳,在
自然条件下需要共生菌才能萌发,且发芽率极
低。随着兰花市场的不断扩大及对野生兰花的大
量采集,野生兰资源濒临枯竭,本文通过无菌播
种获得大量试管苗,为其种苗面向工业化提供了
可能。目前,已有血叶兰、杜鹃兰等野生兰的
组织培养和快速繁殖的报道(饶秋容等2003;毛唐
芬和丁映2004),而地宝兰的种子离体培养和快速
繁殖尚未见报道。
参考文献
毛唐芬, 丁映(2004). 杜鹃兰的组织培养与植株再生. 植物生理学
通讯, 40 (6): 716
饶秋容, 张芬, 何伟强(2003). 血叶兰的组织培养和快速繁殖. 植
物生理学通讯, 39 (1): 36
Kundson L (1951). Nutrient studies of orchids. Bot Gaz, 112: 528图 2 地宝兰的生根培养