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竹叶兰的无菌播种和试管成苗



全 文 :植物生理学通讯 第42卷 第1期,2006年2月66
竹叶兰的无菌播种和试管成苗
陈之林 曾宋君 温铁龙 段俊*
中国科学院华南植物园,广州 510650
Asepsis Sowing and in vitro Propagation of Arundina graminifolia Hochr
CHEN Zhi-Lin, ZENG Song-Jun, WEN Tie-Long, DUAN Jun*
South China Botanical Garden, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510650, China
收稿 2005-03-23 修定   2005-06-20
资助  中国科学院知识创新工程重要方向项目(kscx2-sw-319)和
中国科学院华南植物园前沿项目(20023301)。
*通讯作者(E-mail:duanj@scib.ac.cn, Tel:020-37252978)。
1 植物名称 竹叶兰(Arundina graminifolia Hochr)。
2 材料类别 种子。
3 培养条件 种子萌发培养基:(1) VW;(2) VW+
椰子乳 100 mL·L-1(单位下同); (3) 1/2MS;(4)
1/2MS+ 椰子乳 100;(5) MS;(6) MS+ 椰子乳
100;(7) 1/2MS+活性炭 2 g·L-1+ 椰子乳 100。生
根壮苗培养基:(8)花宝1号(美国Haponex公司产
品,N∶P∶K=7∶6∶19) 3 g·L-1+ 蛋白胨2 g·L-1+
活性炭2 g·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+ 6-BA 0.2 mg·L-1;(9)
花宝1号 1 g·L-1+花宝2号 (美国Haponex公司产品,
N∶P∶K=20∶20∶20) 1 g·L-1+ 蛋白胨 2 g·L-1+
活性炭 2 g·L-1 ;(10)花宝 1号 1 g·L-1+花宝 2号
1 g·L-1+蛋白胨 2 g·L-1+活性炭2 g·L-1+ NAA 0.5
mg·L-1+6-BA 0.2 mg·L-1。以上培养基均附加1.5%
蔗糖和0.6%琼脂,pH 5.2~5.4。培养温度(25±2)℃,
光强30~40 mmol·m-2·s-1,光照时间 12 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 材料的无菌处理 竹叶兰人工自交授粉的成功
率高,达 90% 以上。授粉后 90 d 左右荚果成熟,
取下经自来水洗净后,用 70% 的酒精表面消毒30
s,再以0.1%的升汞溶液消毒15 min,最后用无
菌水冲洗 5 次。将洗净的荚果置灭菌滤纸上吸干
水分,用解剖刀切开荚果,将种子散落到培养基
(1)~(7)上。
4.2 ÖÖ×ÓÃÈ·¢ 接种到培养基(1)~(7)上的种子,暗
培养 15~20 d 后,均可见白色原球茎突破种皮,
转入光下培养,1 周后原球茎转绿,6~7 周后原
球茎上端出芽。培养基(1)、(3)和(5)上的萌发率
和萌发速度比对应的加入了椰子乳的培养基(2)、
(4)和(6)差,说明椰子乳有利于种子的萌发,其
中盐浓度较低的(4)效果最好,萌发率可达80%以
上。在培养基(7)中由于加入了活性炭,萌发率同
(4)相似,但萌发需要的时间长一些。种子萌发后
的原球茎在培养基(2)、(4)和(6)中继续培养,在
成芽的同时会进行原球茎增殖,(6)中形成新的原
球茎最多。在生根培养前,采用培养基(3)能形成
大量小苗。
4.3 生根壮苗培养 将培养基(1)~(7)中形成的小苗
转移到(8)~(10)中进行生根和壮苗培养,培养基
(10)效果最好,30 d左右能形成3 cm高的健壮植
株,(8)中的苗较细长瘦弱,(9)中的苗生长慢。30
d 后,当苗高 4~6 cm 时可进行炼苗培养。
4.4 移栽 试管苗出瓶前需在温棚中或室温下炼苗2
周。出瓶时从培养瓶中取出生根苗,洗净附着的
培养基,于 800 倍多菌灵溶液浸泡 1 min,用泥
炭土聚盆种植于浅盆中,注意保持适宜湿度,置
于阴凉通风处栽培,成活率可达 85% 以上。小苗
在出瓶后 1 周内不要浇水,有利于防止病害的发
生。2 周后移入温棚栽培,进行正常水、肥、药
管理,待成活后分盆栽培。
5 意义与进展 竹叶兰主要分布于东南亚地区,在
我国产于华南和西南,属地生兰类。根状茎卵球
形,茎丛生或成片生长,叶片线状披针形,花
序自顶部叶腋长出,长 2~8 cm,有花 2~10 朵,
每次开 1 朵花,花期长,花粉红色或略带紫色或
白色,观赏价值高,可盆栽、作墙边绿篱或丛
植观赏。其种子无胚乳,在野外需与真菌共生才
能萌发,发芽率极低,人工栽培中虽然可以用常
规的分株繁殖获得种苗,但繁殖倍率低。我们用
无菌播种已获得了大量的试管苗。竹叶兰的无菌
播种和试管成苗未见报道。