全 文 ：植物生理学通讯 第 4 4 卷 第 l期 , 20 08 年 2 月
三叶青的离体快速繁殖
钱丽华 ’
杭州市农业科学研究院 , 杭州 3 10 0 2 4
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1 植物名称 三叶青(Te rra stig ma he m slexa n u m D ie ls
et Gi lg)
, 别名三叶崖爬藤 、 金钱吊葫芦等 。
2 材料类别 茎段腋芽 、 试管不定芽 。
3 培养条件 腋芽萌发培养基 : (1) 1/2 M s + 6 一B A
0
.
03 m g
·
L
一 ’(单位下同) ; (2 ) l/ ZM S + 6 一B A 0 . 0 5 ;
(3) l/ ZM S + 6
一
B A 0
.
1 ; (4 ) l/ ZM S + 6
一
B A 0
.
2 ; (5 )
l / ZM S + 6
一
B A 0
.
5 ; (6) l/ZM S + 6
一
B A 1
.
0
。 腋芽光
照培养条件 : (A ) 23 林mo l·m 一, ·s 一 , ; (B ) s 林mo l·m 一 , ·s 一 , 。
试管不定芽继代增殖培养基 : (7 )MS+ ‘B A 2. 价NAA
0
.
0 5 ; (8) M S + 6
一
B A 2
.
0 + N A A 0
.
1 ; (9 ) M S + 6
一
B A
2
.
0 + N A A 0
.
15 ; (10 ) M S + 6
一
B A 2
.
0 + N A A 0
.
2 ;
(1 1) M S + 6
一
B A 1
.
5 + N A A 0
.
0 5 ; (1 2 ) M S + 6
一
B A
1
.
5 + N A A 0
.
1 ; (1 3) M S + 6
一
B A 1
.
5 + N A A 0
.
15 ;
(14 ) M S + 6
一
B A 1
.
5 + N A A 0
.
2
。 生根培养基 :
(1 5 ) 1/2 M S + N A A 0
.
2
。 以上除生根培养基蔗糖
含量为 2 % 外 , 其他培养基均为 3 % , 琼脂含量
均为 0 . 7 5 % 。 培养温度为(25 士 1) ℃ , 光照时间为
12 h. d
一’, 不定芽继代增殖和生根培养的光照强度
均为 4 6 林m o l. m 一 , . 5 一 : 。
4 生长与分化情况
4
.
1 腋芽的萌发 将经 0 . 1% 升汞消毒后的单个腋
芽接种到培养基(l )一(6 )上 , 一半置于 (A )光照强度
下培养 , 另一半置于(B )光照强度下培养 , 10 d 左
右就陆续开始萌发 , 25 d 后 23 林m ol ·m 一“· s 一’下腋
芽萌发率最高达 1 00 % 。 A 、 B 两种光照强度下的
腋芽平均萌发率以培养基(1卜(5) 为好 , 之 间不存
在显著差异 , 但都极显著高于培养基(6) 中的腋芽
平均萌发率 , 这说明当 6 一B A 浓度达到 1 . 0 m g. L 一’
时 , 其腋芽萌发率开始显著下降 。 因此 , 三叶
青腋芽萌发培养基中 6 一B A 浓度应低于 1 . 0 m g’L 一’,
否 则腋芽萌发受抑 , 萌发率显著下 降 。
4. 2 不定芽继代增殖 将三叶青不定芽接种于培养
基(7 )一(14) 上 , 培养 巧 d 后各培养基上都陆续有
丛生芽形成 , 35 d 后统计不定芽增殖系数 , 培养
基(8 )、 (10) 、 (1 1) 中不定芽增殖系数均显著优于其
他培养基 , 平均增殖系数分别为 3 . 98 、 5 . 45 、 3 . 68 ,
且新生丛芽粗壮(图 1)。 三叶青主要是通过不定芽
基部膨大的愈伤组织上分化出丛芽来达到增殖的效
果 , 愈伤组织块大 , 其发生的丛生芽也相对要多
(凌征柱等 2 00 5) ; 而且在高浓度的 6 一B A 培养基中
不定芽生长量较大 , 有利于三叶青不定芽的继代
培养(黄衡宇 2 00 5 ) 。 凌征柱等(2 0 0 5) 在中药植物
红大戟的组织培养中 , 认为其丛生芽也是通过茎
尖切 口处膨大的愈伤组织上分化出丛生芽来增
殖 ; 黄衡宇(2 005 )认为在高浓度 6 一B A 的培养基中
生长量较大 , 且不定根分化率较低 , 十分有利于
继代培养 。
图 1 三叶青不定芽的增殖培养
4. 3 生根培养 当不定芽增殖到一定数量后 , 将不
定芽沿节 间分节处切 下 , 转到生根培养基 (1 5) 上
进行生根培养 。 培养 7 d 后即陆续有新生根发生 ,
10 、巧 d , 不定芽生根率达到 9 8 % 以上 , 每株不
定根数为 4 ~ 7 条不等 。
4. 4 炼苗与移栽 将试管生根苗移到自然光照下炼
收稿
资助
2 0 0 7
一
1 0
一
3 1 修定 2 0 0 8 一 0 1 一 1 7
杭州市科技局 科研 院所专项项 目 。
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0 5 7 1
一
8 7 3 1 1 7 9 4
植物生理学通讯 第 44 卷 第 l期 , 20 0 8 年 2 月
苗 2 ~ 3 d 后取出小苗 , 用清水将根部的培养基洗
净 , 然后移栽到装有泥炭的穴苗盆中 , 放置小拱
棚内 , 拱棚覆盖一层无纺布 , 外覆一层尼龙膜保
湿 , 光照强时要注意适时覆盖黑纱遮荫 。 移栽后
10 d
, 注意观察小拱棚内温度和湿度 , 如过高 ,
容易导致烂苗 , 应及时撩起小拱棚两头的无纺布
和尼龙膜进行通风 。 如小拱棚内温度在 2 8 ℃ 左
右 , 4~5 d 即可长出新根 , 成活率可达到 90% 以上
(图 2 )。 1 5 d 后可喷施营养液以促进生长 , 待植
株根团好后可更换至 8 ~ 10 c m 的营养钵中继续生
长 , 植株长至 15 ~ 2 0 c m 以上时可移入大田种植 ,
肥水管理得当 , 温度在 25 一 30 ℃ , 植株生长 、 抽
发新枝很快(图 3 )。
5 意义与进展 三叶青是葡萄科崖爬藤属多年生蔓
生藤本植物 , 分布于浙江 、 江西 、 福建等 10 多
图 3 三叶青的栽培
个省区 。 在医药中有清热解毒 、 消肿散结 、 祛
风化痰 、 活血止痛的功效 , 可用于治疗小儿高
热 、 扁桃体炎 、 肝炎及病毒性脑膜炎等多种疾
病 , 也是抗肿瘤常用药物 。 三叶青乙酸乙酷提取
物是其最有效的成分 , 不但能减慢癌细胞的生
长 , 而且对肝癌和血癌细胞株具有 “促凋亡作
用 ” , 因此有一定的潜在医药价值 。 由于三叶青
野生资源被狂采滥挖 , 现 己濒临灭绝 , 三叶青组
织培养的成功可能有助于解决这一问题 。 其组织
培养和快速繁殖尚未见报道 。
参考文献
图 2 三叶青组织培养苗的移栽
黄衡宇(2 0 0 5) . 药用植物青叶胆的组织培养 . 中草药 , 3 6 (2 ):
2 6 1 ~ 2 6 5
凌征柱, 覃文流 , 余丽莹 , 蓝祖栽 , 吴庆华(2 0 0 5) . 红大戟的组织
培养及植株再生 . 中草药 , 3 6 (1 0) : 15 5一 15 5 7
中国植物生理学会 2 0 08 年工作计划
. 召开 1一 2 次理事会(第一 、 四季度)
. 会员重新网上登记 , 制作 、 发放会员证 (3 一10 月)
. 组团巴西考察学术交流(5 月)
. 召开中国植物生理学会的学术会议 :
首届植物次生代谢国际学术研讨会(6 月 , 昆明)
“逆境 ” 、 “教学 ” 专业委员会会议 (8 月 , 哈尔滨 )
. 纪念殷宏章先生诞辰 10 0 周年系列活动(9 月)
. 第二届上海市植物生理学青年学术研讨会(10 月)
. 编辑科普小册子