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药用植物鹅毛玉凤花的组织培养与植株再生



全 文 :植物生理学通讯 第 43卷 第 6期,2007年 12月1136
药用植物鹅毛玉凤花的组织培养与植株再生
陈娅娅 1,2,毛堂芬 3,李奇科 1,2,刘作易 2,*
1贵州大学生命科学学院,贵阳 550025;贵州省农业科学院 2生物技术重点实验室,3生物技术研究所,贵阳 550006
Tissue Culture and Plantlet Regeneration of Habenaria dentata (Sw.) Schltr.
CHEN Ya-Ya1,2, MAO Tang-Fen3, Li Qi-Ke1,2, LIU Zuo-Yi2,*
1College of Life Science, Guizhou University, Guiyang 550025, China; 2Key Laboratory for Agricultural Biotechnology of Guizhou,
3Guizhou Biotechnology Institute, Guizhou Academy of Agricultural, Guiyang 550006, China
收稿 2007-09-17 修定  2007-11-07
资助 贵州省优秀青年科技人才培养计划(2 0 03 0 1 )。
* 通讯作者(E-m a i l:l iu z u oyi@ya hoo.com .cn;T el:
08 51 -3 76 17 61 )。
1 植物名称 鹅毛玉凤花[Habenaria dentata (Sw.)
Schltr.]。
2 材料类别 成熟种子。
3 培养条件 以 1/2MS为基本培养基。(1)种子萌
发培养基:1/2MS+NAA 0.5 mg·L-1 (单位下同)+
0.2%活性炭和 1/2MS+NAA 0.5;(2)增殖分化培养
基:1/2MS+ZT 5.0+NAA 0.2+0.2%活性炭;(3)
生根培养基:1/2MS+NAA 0.1+6-BA 3.0+0.2%活
性炭。上述培养基均附加 3% 蔗糖和 0.8% 琼脂
粉,pH 5.8~6.0。培养温度为(25±2) ℃,光照
时间 12 h·d-1,光照强度为 30~40 µmol·m-2·s-1。
4 生长及分化情况
4.1 种子的无菌播种及原球茎的获得 将采集保存
的野生鹅毛玉凤花未开裂蒴果先用 75%的酒精进
行表面消毒处理 20~30 s,再用 0.1%的升汞消毒
灭菌 15 min左右,然后用无菌水冲洗 5~6次,用
灭菌过的滤纸吸干表面水分;用无菌的解剖刀将
消毒处理好的蒴果纵向切开,将其内部的细粉状
种子均匀地撒播于培养基(1)上。培养 10 d后,在
添加有活性炭的培养基上,发育良好的种子开始
膨大,萌发形成白色的原球茎,后逐渐长大,表
面出现白色的细绒毛;而在没有活性炭的培养基
中,种子极少萌发,萌发形成的原球茎表面无绒
毛,生长缓慢,生长一段时间后产生死亡。种
子的萌发是不同步的,萌发形成的原球茎需要分
步转接进行增殖。
4.2 原球茎的增殖分化 在原球茎未分化前将其转
接到增殖培养基(2)上,培养约 20 d,白色原球
茎分化出叶原基,后长出叶片,形成小苗;培
养 30 d左右,在小苗基部增殖新生成丛生原球
茎,后产生分化,最后分化出丛生苗达 3~6株;
随培养时间的延长丛生苗可达 10株以上。
4.3 苗的增殖生根 将丛生的小苗分成单株转接在
固体培养基(3)上,单株苗继续增殖成丛生苗;同
时发生根的同步生长,每株苗长有 1~3条新根和
1~2个椭圆形或长圆形的肉质块茎。后将丛生苗分
株培养,部分用于继代增殖,部分用于炼苗种植。
4.4 炼苗与移栽 将长有新根和 2~3片叶的小苗带
培养瓶置室温条件炼苗 2~3 d,然后揭开封口膜炼
苗 2 d,后用清水冲洗干净苗基部的培养基,栽
种到准备好的基质蛭石:腐殖土(2:1)上,浇淋透
水,适当遮荫保湿 1星期,后按常规管理(喷药、
浇水和营养液),成活率达 80% 左右。
5 意义与进展 鹅毛玉凤花属兰科玉凤花属,别
名双肾参、双肾子、对对参等,地生草本,为
国家二级重点保护野生植物,主要分布于云南、
四川、贵州、西藏、海南、广西等地区。以块茎
入药,具有补肺肾、利尿等功能,主治肾虚腰痛、
病后体虚、肾虚阳痿、疝气痛、胃痛、肺结核咳
嗽、睾丸炎及尿路感染等。该植物生长缓慢,对
生态环境要求较为特殊;主要以地下块茎进行繁
殖,1株苗 1个生长季只发生 1~2个新的块茎,1
个块茎仅萌发生长形成 1棵植株,繁殖系数极低;
在自然条件下,植株开花结实率低,且多数发育
不良,极难萌发成苗。长期以来民间均依靠采挖
野生资源作为药用,只挖不栽,以致资源枯竭。
采用组织培养技术可以周年培养鹅毛玉凤花无菌
苗,以供人工栽培,本文结果对保护这一宝贵的
中药材资源及其持续开发利用有一定的参考价值。
鹅毛玉凤花的组织培养和植株再生尚未见报道。