全 文 ：植物生理学通讯 第41卷 第5期，2005年10月 623
植物组织培养中琼脂浓度和pH对培养基凝固程度的影响
杜永光1 郝丽珍1,* 王萍1 姚裕祺2 张智芳2
1 内蒙古农业大学农学院，呼和浩特 010019；2 内蒙古马铃薯脱毒种薯繁育中心，呼和浩特 010010
收稿 2004-11-23 修定 　 2005-03-25
资助　 国家自然科学基金(30260067、30460080)、内蒙古
自然科学基金(200108020501)、内蒙古自治区攻关项目。
*通讯作者(E-mail:haolizhe@public.hh.nm.cn，Tel:
0471-4318467)。
植物组织培养中多数植物 pH 要求 5.0~6.2，
琼脂浓度一般选用7~8 mg·L-1，最高可达16 mg·L-1，
较低的 5 mg·L-1，而我们观察到培养基凝固程度
受pH影响较大，适当的降低琼脂浓度不仅可以满
足外植体的正常支撑需求，且培养效果更佳。本
文研究 pH 和琼脂浓度对培养基凝固程度的影响，
以确定组织培养技术中合理的琼脂浓度。实验以
MS 培养基为基本培养基，用琼脂粉(天津市英博
生化试剂有限公司2004年生产)为培养基凝固剂，
以Sarlorius分析天平称量，选用MX300 多功能
测量仪(Schwerzenbach, Switzerland)测定pH。MS
培养基制备参照崔德才等的方法，设计的pH 有：
2.0、4.0、5.0、5.8、6.2、8.0，琼脂浓度有：
2.5、3.0、3.5、4.0、6.0、8.0 mg·L-1，共 36
个处理组合。每个处理重复 3 次。准确量取各母
液并用蒸馏水定容到150 mL容量瓶中，然后倒入
500 mL 烧杯中，加入所需要的琼脂，并在电炉
上加热，使琼脂全部溶解后，降温至50℃时调节
pH，然后分别将150 mL培养液分装到3个150 mL
三角瓶中，置于121℃高压灭菌锅内25 min，室
温下自然凝固后观察。凝固等级分0级(未凝固)、
1级(轻微晃动培养基即碎裂)、2级(轻微晃动培养
基不易碎裂)、3 级(用力晃动培养基易碎裂)，4
级(用力晃动培养基不碎裂)。得到以下结果：
1. pH为2.0时，2.5~8.0 mg·L-1琼脂浓度的
培养基凝固等级均为0级；pH 为 4.0~8.0 时，各
浓度的培养基凝固等级在一定的琼脂浓度内随浓度
增加而增高。在相同琼脂浓度下，凝固等级随pH
增加而提高，其中当pH 5.0~8.0时，同一浓度下
的凝固等级基本相同(表 1)。说明 pH和琼脂浓度
共同影响培养基的凝固等级，pH较低(≤4.0)时，
pH 是影响凝固等级的主要因素，pH 较高(5.0~
8.0)时，琼脂浓度是影响凝固等级的主要因素。
2. 培养以沙芥茎尖诱导形成的愈伤组织、大
蒜和马铃薯芽的结果显示，在 pH 5.5~6.2 范围
内，琼脂浓度为3.0~3.5 mg·L-1 的 B5、1/2B5、MS
培养基上，其外植体均生长正常，并未因培养基
种类而影响凝固等级(表 2)。据此认为，用凝固
等级为2级、3级的培养基即可满足大多数外植体
表2 不同培养基上3种植物外植体的培养情况
植物种类 基本培养基 pH 琼脂浓度/mg·L-1 凝固等级 外植体 培养目标 培养效果
沙芥 B5 5.8~6.0 3.5 3 级 愈伤组织 愈伤组织继代 较好
大蒜 1/2B5 5.5~5.8 3.0 2 级 芽 诱根 较好
马铃薯 M S 5.8~6.2 3.5 3 级 芽 诱根 较好
表1 琼脂浓度和pH对培养基凝固程度的影响

pH
琼脂浓度 /mg·L-1
2.5 3.0 3.5 4.0 6.0 8.0
2.0 0 级 0 级 0 级 0 级 0 级 0 级
4.0 0 级 1 级 2 级 2 级 2 级 3 级
5.0 1 级 2 级 3 级 3 级 4 级 4 级
5.8 1 级 2 级 3 级 3 级 4 级 4 级
6.2 1 级 2 级 3 级 3 级 4 级 4 级
8.0 2 级 2 级 3 级 4 级 4 级 4 级
的正常支撑需求。对要求pH为 5.0~6.2的植物来
说，无论以何种外植体和培养基培养，均可用
3.0~4.0 mg·L-1的琼脂；要求pH为4.0~5.0的植物
可适当提高琼脂浓度。如遇琼脂质量差时，可适
当增加用量。