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日本菘的组织培养与植株再生



全 文 :植物生理学通讯 第 40 卷 第 3期,2004 年 6 月 347
日本菘的组织培养与植株再生
吕志勇* 李敏 刘倩 姜长阳
辽宁师范大学生命科学学院,大连 116029
Tissue Culture and Plantlet Regeneration of Brassica japonica
LÜ Zhi-Yong*, LI Min, LIU Qian, JIANG Chang-Yang
College of Life Science, Liaoning Normal University, Dalian 116029
收稿 2003-09-08 修定   2004-01-12
* E-mail: jie@163.com, Tel: 0411-83060301
1 材料名称 日本菘(Brassica japonica)。
2 材料类别 下胚轴。
3 培养条件 (1)1/2MS;(2)MS+6-BA 1 mg·L-1(单位
下同) ;(3)MS+6-BA 2;(4)MS+6-BA 1+NAA 0.25;
(5)MS+6-BA 1+NAA 0.5;(6)MS+6-BA 2+NAA
0.25;(7)MS+6-BA 2+NAA 0.5;(8)1/2MS+6-
BA 0.1+IAA 0.2;(9)1/2MS+IAA 0.2。上述培养
基均加琼脂6 g·L-1,pH 5.8~6.0,(1)、(8)和(9)加
15 g·L-1蔗糖,其他加30 g·L1。培养温度为20~26℃,
光照时间12~13 h·d-1,光照度2 000~3 000 lx。
4 生长与分化情况
4.1 无菌苗的获得 把日本菘的种子放到250 mL磨
口广口瓶中,在流水下冲洗30 min后,加入0.05%
的安利洗涤液振荡洗涤10 min,清洗 2次后移至
超净工作台上,用 70% 乙醇灭菌 30 s,然后用
0.05% HgCl2 灭菌 12 min,接着用无菌水清洗 5
次,再接种到培养基(1)上,放到光照培养箱中恒
温培养。7 d后种子发出高约2 cm 的幼苗时,放
到培养室中再培养7 d,就可以获得高约4 cm的
无菌苗。
4.2 愈伤组织的诱导与分化 将无菌苗的下胚轴剪
成0.2 cm左右的切段,接种到培养基(2)~(7)上。
20 d左右,在培养基(4)~(7)上可见有的下胚轴形
成浅黄色的愈伤组织,随着培养时间的延长,愈
伤组织不断地生长变色。培养到 50 d 时,在培
养基(7)上所有的下胚轴都诱导形成了直径为0.5~
1 cm浅黄色的愈伤组织块。把在这种培养基诱导
的愈伤组织接种到培养基(8)上,随着愈伤组织的
不断生长,40 d时约 60% 的愈伤组织出现了绿色
或浅绿色的颗粒状,50 d时开始分化出丛生不定
芽,70 d 时能形成高为0.5~2 cm的丛生不定芽。
4.3 生根、移栽与扦插 把在培养基(8)上形成的株
高 1 cm 以上的不定芽,从基部剪下,接种到培
养基(9)上进行生根培养。8 d时可见插入培养基的
基部形成根原基;20 d 时可长成具有 3~6 条根、
高 2~4 cm 的试管苗,生根率为 96%。此时,将
培养瓶塞打开,放到光照度5 000 lx左右的条件
下炼苗 4 d,从培养瓶中取出,洗净基部的培养
基后,移栽到下部为肥沃的园土、上面为炉灰渣
的花盆中。接着,在花盆的上面罩上塑料薄膜保
湿。在散射光下,移栽苗 1 周成活,并可见生
长,成活率为 98%。把在生根培养中生根状况差
或没有生根的试管苗,放到含70 mg·L-1 IAA 的溶
液中浸泡5 min,扦插到与移栽相同的基质中。10
d 后成活并开始生长,成活率为 92%。移栽苗与
扦插苗长势一致。田间观察证明,移栽和扦插的
试管苗长势明显好于实生苗。平均单株重量增加
1 0 % 左右。
5 意义与进展 日本菘属十字花科芸薹属的栽培植
物,是近年来培育的新品种,因为既可鲜食盐
渍,又可以煲汤炒食,加之营养丰富,口感好,
所以很受消费者的欢迎。从栽培的角度看,日本
菘具有耐寒力强、不易抽薹、适于北方陆地栽
培、产量较高等特点。但是,正由于其不易抽
薹,使其不易制种,导致种子昂贵,甚至无法
购得。采用组织培养的方法,可在短时间内获得
大量的试管苗,从而为这种蔬菜的工厂化育苗和
广泛栽培提供了可能。迄今未见日本菘组织培养
及植株再生的报道。