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球花石斛的组织培养与快速繁殖



全 文 :植物生理学通讯 第 43卷 第 5期,2007年 10月894
球花石斛的组织培养与快速繁殖
王莲辉 1,*,朱玉琴 2,姜运力 1,冯育才 3
1贵州省林业科学研究院生物技术中心,贵阳 550005;2贵州省道真县林业局,贵州道真 563000;3 贵州省大沙河自
然保护区,贵州道真 563000
Tissue Culture and Rapid Propagation of Dendrobium thyrsiflorum Rchb. f.
WANG Lian-Hui1,*, ZHU Yu-Qin2, JIANG Yun-Li1, FENG Yu-Cai3
1Center of Biological Technology, Guizhou Academy of Forestry, Guiyang 550005, China; 2Forestry Bueau of Daozhen County,
Daozhen, Guizhou 563000, China; 3Administration Bureau of Dashahe Nature Reserve, Daozhen, Guizhou 563000, China
收稿 2007-07-12 修定  2007-09-11
资助 贵州省科技厅农业、社会发展科技攻关项目(黔科合
NY 字[2006]3062 号)。
* E -ma il:gz wa ng l ia nh u i @1 6 3 . co m;T el:0 8 5 1 -
3921038
1 植物名称 球花石斛(Dendrobium thyrsiflorum
Rchb. f.)。
2 材料类别 种子。
3 培养条件 种子萌发培养基:(1 ) 1 /2VW+ 100
mL·L-1香蕉汁;(2) VW+100 mL·L-1香蕉汁。原球
茎继代增殖培养基:(3) VW+KT 0.1+IBA 0.02
mg·L-1 (单位下同)+100 mL·L-1香蕉汁;(4) VW+KT
1.0+IBA 0.02+100 mL·L-1香蕉汁。壮苗及生根培养
基:(5) 3 g·L-1花宝 1号(台和园艺企业股份有限公
司,N:P:K=7:6:19)+IBA 0.5+2 g·L-1活性炭。以上
培养基均加 2.0%蔗糖、0.6%琼脂,pH 5.2~5.4,
培养温度(25±2) ℃,光照度 30~40 µmol·m-2·s-1,光
照时间 12 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 材料的无菌处理 人工授粉 180 d的荚果经自
来水洗净后,用75%乙醇表面消毒30 s,置于10%
次氯酸钠溶液中消毒 20 min,再以 0.1%的升汞
溶液消毒 15 min,最后用无菌水冲洗 5次。
4.2 原球茎的诱导 将洗净的成熟荚果置于灭菌滤
纸上吸干水分,用解剖刀切开荚果,将粉末状种
子均匀撒在培养基(1)、(2)中培养。20~30 d后,
种子开始由黄变绿,逐渐膨大;50~60 d后,种
胚突破种皮,长成顶端有绿色叶原基的原球茎,
种子萌发率达 95%以上。
4.3 原球茎的增殖 将培养基(1)、(2)中的原球茎转
入到培养基(3)、(4)中,原球茎都有增殖。培养
基(4 )增殖速度很快,增殖倍数可达 3~4倍,同
时,部分原球茎开始分化出芽点,并长出 1~2片
小叶,原球茎的增殖与芽分化同时进行。待芽数
量较多时,将高 1~2 cm、带有 2~3片叶的小芽
切下转入生根培养基(5)上进行生根培养。
4.4 生根与移栽 小苗在生根培养基(5)进行不定根
的诱导。培养 30 d左右,基部开始出现 2~3条
约 1 cm长的白色根,随后逐渐伸长,生根率达
到 90%以上。当苗高 3 cm以上、具 3~4片叶时,
便可出瓶移栽。移栽前,打开瓶盖,移至常温
下炼苗 7 d,然后,取出瓶苗,洗去附着在根部
的培养基,用 0.01%的高锰酸钾溶液浸泡 8~10
min,栽种于已灭菌的碎树皮基质中(移栽前浇透
水),放置在遮光度 50%~60%、湿度达 80%以上的
温室中。2 个月后,成活率达 90% 以上。
5 意义与进展 球花石斛是兰科石斛属植物,为
名贵中药材。花序生于有叶的茎的上部节上,下
垂,密生多花,具白色的萼片和花瓣以及金黄色
奔唇瓣,有一定的观赏价值,可盆栽或地栽观
赏。由于过度采挖,再加上种子无胚乳,在野
外需与真菌共生才能萌发,自然条件下萌发率极
低,已濒临灭绝。人工栽培中虽然可以用常规的
分株繁殖获得种苗,但繁殖倍率低。本文用无菌
播种已获得了大量的试管苗,为这一物种的保护
和开发应用开辟了一条值得考虑的繁殖途径。同
属的D. moniliforme等已有报道(王再花等 2006),
但球花石斛的组织培养和快速繁殖未见报道。
参考文献
王再花, 涂红艳, 叶庆生(2006). 细茎石斛的快速繁殖和试管开花
诱导. 42 (6): 1143~1114