全 文 ：植物生理学通讯 第 40 卷 第 1期，2004 年 2 月72
大叶黑桫椤孢子的无菌培养
徐 艳1,2 石 雷1,﹡ 刘 燕2 李 东1
1中国科学院植物研究所, 北京 100093; 2北京林业大学园林学院, 北京 100083
Spore Sterile Culture in Alsophila gigantea var. gigantea
XU Yan1,2, SHI Lei1,*, LIU Yan2, LI Dong1
1Institute of Botany, Chinese Academy of Sciences, Beijng 100093; 2College of Landscape Architecture, Beijing Forestry University,
Beijing 100083
收稿 2003-07-29 修定　 2003-11-13
资助　中国科学院知识创新重要方向项目（KSCX2-3-04）和
中国科学院农办项目(NK- 十五 -C-13)。
* 通讯作者（E-mail:shilei67@263.net, Tel:010-82593616）。
1 植物名称 大叶黑桫椤（Alsophila gigantea var.
gigantea）。
2 材料类别 成熟的孢子。
3 培养条件 （1）MS；（2）1/2MS；（3）1/5MS；
（4）1/10MS；（5）MS+NAA 0.1 mg.L -1 (单
位下同)+6-BA 0.1+3% 蔗糖 +0.7% 活性炭。
1/2MS、1/5MS、1/10MS 指大量和微量元素为 MS
培养基全量的1/2、1/5、1/10，上述培养基均使
用 M S 培养基全量的铁盐和有机成分，0. 5 % 琼
脂，pH 5.8。培养室温度为 25℃；日光灯光源，
昼夜光照，光照度2 000~2 300 lx。
4 生长与分化情况
4.1 孢子的灭菌 取成熟的孢子置于1.5 mL离心
管内，滴入无菌水，充分振荡使成悬浊液，静
置2 h，4 000 r.min-1 离心 1 min，弃去上清夜。
离心管内再滴入约1.2 mL 的 5% NaOCl 溶液，灭
菌 4 min，无菌水冲洗 4~5 次，用上述离心方法
获得无菌的孢子悬浊液。
4.2 原叶体的形成及增殖 用滴管将无菌的孢子悬
浊液分别接种至培养基（1 ）~ （4 ）上，5 ~ 7
d 后出现肉眼可见的绿色小点，显示孢子已萌发
（孢子壁破裂，具有1个含叶绿素的绿细胞和1条
不含叶绿素的假根）。30~32 d 后，镜检结果表
明：培养基（3 ）、（4 ）最适于大叶黑桫椤孢
子的萌发，萌发率达 9 0 % 以上。此时，4 种培
养基上均可见到心形或丝状的原叶体，但不同培
养基中的原叶体长势不一，以培养基（4）中的
长势最好。若将培养基（1）中长出的原叶体转
接至培养基（5）中，可形成类似兰科植物原球
茎的绿色小球（green globular bodies，GGB），
球状体大量增殖。如果想得到大量的繁殖材料，
可以在培养基（5）中进行继代培养，短期内达
到很大数量的球状体，再将球状体诱导形成孢子
体。
4.3 孢子体的形成 接种后90~100 d，培养基
（3 ）、（4 ）上均有孢子体形成，形成率可达
60%，幼孢子体苗第一叶始终无拳卷现象，叶脉
呈二叉状分枝。培养基（1 ）、（2 ）中未见孢
子体形成， 但经长期（120 d 左右）培养，老
的原叶体上会形成数量不等的新原叶体，老原叶
体逐渐变褐、死亡。
4.4 孢子体的移栽 孢子体长出2片叶子（叶长
约 3~4 cm）时，将三角瓶放在自然光照下炼苗
7 d，再打开瓶盖炼苗7 d。用镊子轻轻夹出试管
苗，洗净培养基，移栽至经0.1%多菌灵消毒4 h
的素砂中，保持适宜的空气湿度及基质的温度。
1 个月后可定植到穴盘中（培养基质为草炭土∶
松针土∶蛭石∶细砂∶有机肥＝ 4∶4∶2∶2∶
1）。移栽成活率达 8 0 ％以上。
5 意义与进展 全世界约有桫椤科植物500种，
我国目前已知的仅有 14 种和 2 变种，均被列为
《濒危野生动植物物种国际贸易公约》附录植
物。大叶黑桫椤为桫椤科大型树蕨，其株形美
观，植株高大，是室内外园林造景的优良植物材
料，在我国主要分布于广东、海南、广西、云
南等省区，海拔130~1 200 m 处的山沟林下及溪
边灌丛中。由于分布零星，生境要求较严，种
群一般较小，又由于观赏价值较高，人为破坏很
大，资源保存面临很大的危险。目前，大叶黑
桫椤孢子的无菌培养尚未见报道。该种孢子无菌
培养的成功，不仅使桫椤科植物的保护及开发利
用成为可能，还为进一步研究其濒危机制提供了
良好的试验体系。