全 文 ：植物生理学通讯 第 44卷 第 5期，2008年 10月 959
大苞鞘石斛的离体培养与快速繁殖
王伟 1, 黄卫昌 2,*, 金荷仙 1,3, 陈香波 4
1浙江林学院园林学院, 浙江临安 311300; 2上海植物园, 上海 200232; 3中国园林杂志社, 北京 100835; 4上海市园林科学研究
所, 上海 200232
In vitro Culture and Rapid Propagation of Dendrobium wardianum Warner
WANG Wei1, HUANG Wei-Chang2,*, JIN He-Xian1,3, CHEN Xiang-Bo4
1School of Landscape & Architecture, Zhejiang Forestry University, Lin’an, Zhejiang 311300, China; 2Shanghai Botanical Garden,
Shanghai 200232, China; 3Editorial Department of Chinese Landscape Architecture, Beijing 100835, China; 4Shanghai Land-
scape-Gardening Research Institute, Shanghai 200232, China
收稿 2008-07-18 修定 2008-09-08
资助 上海市绿化(林业)局项目(F059 90 5-1 )。
* 通讯作者 ( E -m a i l : h w c _ z x @ 1 2 6 . c o m ; T e l : 0 2 1 -
5 4 3 6 5 5 2 6 )。
1 植物名称 大苞鞘石斛(Dendrobium wardianum
Warner)。
2 材料类别 种子(授粉 6个月)。
3 培养条件 萌发培养基: (1) 1/2MS+6-BA 0.2 mg·L-1
(单位下同)+NAA 0.2。继代增殖与分化培养基: (2)
1/2MS; (3) 1/2MS+6-BA 0.2+NAA 0.5; (4) 1/2MS+6-
BA 0.5; (5) CHB+6-BA 0.5; (6) 1/2MS+NAA 0.5。
生根壮苗培养基: (7) CHB+IBA 1.0; (8)花宝 1号 3
g·L-1+蛋白胨 2 g·L-1+IBA 1.0; (9) B5。以上萌发培
养基和继代增殖与分化培养基均附加2.0%蔗糖, 生
根壮苗培养基附加 3.0%蔗糖, 椰乳均为100 mL·L-1,
7.6 g·L-1琼脂固化, pH 5.4~5.6。培养温度为(23±
1) ℃, 光照强度 30~40 µmol·m-2·s-1, 光照时间 16 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 材料的消毒与灭菌 用 75%酒精擦拭蒴果表
面, 洗洁精清洗30 min后自来水冲洗1 h, 在超净工
作台上, 用 75%的酒精消毒 60 s, 0.1%升汞溶液消
毒 15 min, 无菌水冲洗 5次, 吸干水分, 切开蒴果,
将种子溶解于无菌水中, 用移液枪吸取种子接种于
萌发培养基上。
4.2 种子萌发 接种在培养基(1)上的种子, 15~20 d
突破种皮形成原球茎, 20~30 d转绿, 30~40 d部分
原球茎叶原基开始分化, 萌发率 30%左右。
4.3 原球茎的增殖与分化 将萌发种子产生的原球
茎转移至培养基(2)中, 经 40 d直接发育为一叶芽,
且长势整齐(图 1); 将芽转至培养基(5)中, 生长 40
d, 苗高可达 4~8 mm。转接萌发的原球茎至培养
基(3)上可实现原球茎增殖, 1个月后原球茎直径 1
mm左右, 再转接于培养基(4)中, 增殖加快, 40 d后
原球茎直径达 4~12 mm不等(图 2)。将增殖后的
原球茎分割为 3 mm的小块接于培养基(6)上, 30 d
后原球茎直径长至9 mm, 色泽鲜绿, 部分叶原基分
化长出 1~2片叶, 分化率为 43%。此后可反复在
培养基(6)上进行增殖培养, 此培养基上原球茎增殖
系数为 9 (图 3)。
4.4 壮苗与生根 将上述增殖、分化培养所得的芽
转入培养基(7)和(8)进行壮苗生根, 20 d左右开始
生根, 2个月后, 在培养基(7)中生根率达 97%, 高
图 1 大苞鞘石斛原球茎分化培养
图 2 大苞鞘石斛原球茎增殖培养
植物生理学通讯 第 44卷 第 5期，2008年 10月960
1.3~2.3 cm, 叶长 9~15 mm, 平均每株 1.3条根, 色
绿, 假鳞茎膨大的产生丛生苗; 接种于培养基(8)上
幼芽生根率为100%, 高1.5~2.8 cm, 叶长9~17 mm,
平均每株 2.8条根, 色鲜绿, 长势齐, 苗壮。将培
养基(8)上的小苗转接至培养基(9)中, 茎迅速增粗,
叶片变宽, 根长和根数也迅速增加, 2个月后生根
4~6条, 苗高 3~4 cm (图 4)。
图 5 大苞鞘石斛炼苗移栽
图 3 大苞鞘石斛原球茎增殖和分化培养
图 4 大苞鞘石斛壮苗生根培养
4.5 移栽 将培养瓶置于温棚中炼苗1周, 取出生根
苗并洗净培养基, 用 0.1%的高锰酸钾溶液浸泡 5
min, 种植于培养盘中, 基质采用高压蒸汽灭菌锅消
毒(121 ℃, 120 min)的木炭块、椰棕、陶粒(1:1:1),
并在其表面覆盖水苔, 保持适宜湿度和温度, 置于
阴凉通风处, 3周后移入温棚进行正常水、肥、药
管理, 成活率 65%以上(图 5)。
5 意义与进展 大苞鞘石斛为兰科石斛属植物, 主要
分布于中国云南东南部至西部以及缅甸、泰国和
印度东北部等地, 属附生兰。总状花序具 3朵花,
花被片白色, 顶端带紫色, 花色艳丽, 具有较高的观
赏价值, 茎可作药用。大苞鞘石斛的种子无胚乳,
在野外需与真菌共生才能萌发, 发芽率极低。人工
栽培中虽然可用常规扦插或分株繁殖, 但繁殖率极
低。采用无菌非共生萌发技术实现试管苗大量繁
殖, 一方面可以更好地满足市场的需求, 另一方面
也为扩大其自然种群数量, 实现兰科植物保育奠定
基础。大苞鞘石斛的无菌播种和组织培养尚未见
报道。