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大叶补血草的组织培养与快速繁殖



全 文 :植物生理学通讯 第 44卷 第 3期,2008年 6月 509
大叶补血草的组织培养与快速繁殖
范小峰 1,2,杨颖丽 2,*,刘灵霞 1
1陇东学院生命科学系,甘肃庆阳 745000;2西北师范大学生命科学学院,兰州 730070
Tissue Culture and Rapid Propagation of Limonium gmelinii (Willd.) Kuntze
FAN Xiao-Feng1,2, YANG Ying-Li2,*, LIU Ling-Xia1
1Department of Life Sciences, Longdong University, Qingyang, Gansu 745000, China; 2College of Life Sciences, Northwest Normal
University, Lanzhou 730070, China
收稿 2007-12-29 修定 2008-04-10
资助 甘肃省教育厅研究生导师科研项目(0 70 1 -23 )。
* 通讯作者(E-mail:yangyingli2006@sohu.com;Tel:
09 31 -3 35 19 31 )。
1 植物名称 大叶补血草[Limonium gmelinii (Willd.)
Kuntze]。
2 材料类别 种子。
3 培养条件 启动培养基:(1) MS。愈伤组织诱
导与分化培养基:(2) MS+BA 0.3 mg·L-1 (单位下
同)+NAA 0.5;(3) MS+BA 0.3+NAA 1.0;(4)
MS+BA 0.5+NAA 2.0;(5) MS+NAA 0.5;(6)
MS+2,4-D 1.0;(7) MS+BA 1.0+NAA 0.5。生根
培养基:(8) 1/2MS+IAA 0.5;(9) 1/2MS+IBA 0.5;
(10) 1/2MS+NAA 0.5。上述各培养基均加 30
g·L-1蔗糖和 6 g·L-1琼脂,pH 5.8。培养温度为
(20±5) ℃,光照时间为 12 h·d-1,光照强度为 40
µmol·m-2·s-1。
4 生长与分化情况
4.1 无菌材料的获得 选取无病虫害、饱满的大叶
补血草种子,自来水冲洗 20 min,蒸馏水冲洗 2
次移至超净工作台上,75%乙醇浸泡 5 s,无菌
水漂洗 2次后,用 0.1% HgCl2浸泡 8 min,无菌
水漂洗 5~7次,接种于启动培养基(1)上,先暗培
养 1 周,待种子萌发后,再打开光源,光照培
养,获得无菌苗。
4.2 愈伤组织的诱导与分化 利用获得的无菌苗,
将其叶片切割成 0.4 cm×0.4 cm大小的叶块,置
于培养基(2)~(6)上培养。10 d左右培养基(4)上叶
块首先开始卷曲,20 d后愈伤化程度增加,切口
产生大量红色和绿色颗粒状胚性愈伤组织,不经
转接继续培养,愈伤组织表面分化产生大量绿色
芽点;20 d后培养基(2 )、(3 )、(5 )、(6 )上的叶块
均不同程度愈伤化,其中培养基(6)可 100%高频
诱导产生枚红颗粒状或乳白疏松愈伤组织,但愈
伤组织生长一般,培养基(5)可产生少量乳白色非
胚性疏松愈伤组织,诱导率仅为 48.3%,培养基
(2)和(3)产生大量枚红色或少量绿色颗粒状胚性愈
伤组织,且随着NAA浓度的增加愈伤组织诱导率
从 30%提高到 66.7%,说明较高浓度的NAA与6-
BA配合使用,有利于大叶补血草胚性愈伤组织的
产生。
4.3 愈伤组织的继代与分化 将诱导产生的愈伤组
织转至分化培养基(2)~(7)上,其中培养基(3)上愈
伤组织生长一般,继代 2~3次后,才分化产生极
少量不定芽;而培养基(7)上愈伤组织生长良好,
迅速分化产生大量不定芽,平均每块愈伤组织约
能分化出 6~10个不定芽,且叶色浓绿,叶片肥
厚,芽长势良好。结果表明,较高浓度 6-BA有
利于大叶补血草愈伤组织再分化和有效苗的产生。
4.4 生根与移栽 切取高2~3 cm的不定芽转接到生
根培养基上,20 d后开始生根。在所试验的 3种
培养基上,(8)和(9)生根率均为 100%,但(8)生根
早,数量多,且苗生长健壮,而(9 )上根和苗均
不如(8) ;培养基(10)上根发生最迟,生根率仅为
3 0 %,且根伸长缓慢,苗弱。结果表明,附加
适量 IAA,有利于大叶补血草生根及苗的生长。
将生根苗移栽到珍珠岩苗床上,保湿遮荫,成活
率 90 % 以上。
5 意义与进展 大叶补血草属白花丹科(一说蓝雪
科)补血草属多年生草本。本属约有 300种,我
国有 17~18种,主要产于新疆,生长于植被相对
稀少的干旱荒漠生境中。大叶补血草不但膜质花
萼艳美华贵,具有一定的观赏价值,而且其根、
花萼或全草均可入药。更重要的是近年来土地沙
化严重,生态环境急剧恶化,利用其抗旱、抗
盐碱等特性,采用组织培养技术扩大繁殖,对沙
区植物资源开发、改善沙区生态环境和发展经济
可能有一定的应用意义。大叶补血草的组织培养
和植株再生尚未见报道。