全 文 ：植物生理学通讯 第42卷 第1期，2006年2月 95
聚丙烯酰胺凝胶电泳的快速脱色方法
周国权 巫光宏* 黄翠颜 蔡毅 詹福建 黄卓烈
华南农业大学生命科学学院，广州510642
A Rapid Destaining Method of Polyacrylamide Gel Electrophoresis
ZHOU Guo-Quan, WU Guang-Hong*, HUANG Cui-Yan, CAI Yi, ZHAN Fu-Jian, HUANG Zhuo-Lie
College of Life Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China
提要 以牛血清白蛋白为材料进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，凝
胶固定后，用考马斯亮蓝 R-250 染色后比较传统脱色液(冰乙酸 - 甲醇溶液)和不同盐溶液(NaCl、KCl、CuCl2)的脱色效果
的结果表明：PAGE 和 SDS-PAGE 胶，0.25 和 0.5 mol·L-1 NaCl，在 70℃ (PAGE)、50℃ (SDS-PAGE)下脱色，约 2~4 h，
效果好，灵敏度高，背景低。
关键词 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE); SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE); 考马斯亮蓝 R-250; 脱色
收稿 2005-05-27 修定 　2005-10-28
资助 华南农业大学大学生科技创新活动项目(L04104)。
*通讯作者(E-mail: guanghongw@sohu.com, Tel: 020-
85280191)。
聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel
electrophoresis，PAGE)是蛋白质分离纯化和分子
量分析最常用的方法。电泳后的凝胶可以通过多
种染料染色检测，最常用的是考马斯亮蓝
(Coomassie brilliant blue, CBB)染色法。此法具有
特异性强、操作简单及干扰因素少等优点，但也
有灵敏度不高、染色和脱色时间过长等不足之
处。后来，有人创建了NaCl (郭尧君2001)、KCl
(Higgins和Dahmus 1979)、CuCl2 (Lee等1987)等
金属盐类染色法，但迄今这些盐在染色和脱色中
所起的作用却鲜有报道。为此，本文对 PAGE 和
十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳( S D S -
PAGE)凝胶染色后的脱色方法进行了系统的研究，
建立了一种快速、有效的脱色法——盐脱色法。
此法可以提高考马斯亮蓝染色后常规脱色法的灵敏
度、分辨率和脱染效率。现报道如下。
材料与方法
1 材料
牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)。
2 方法
2.1 PAGE 和 SDS-PAGE PAGE 用连续垂直平板
电泳系统；SDS-PAGE 用不连续垂直平板电泳系
统(郭尧君2001)。
2.2 染色和盐脱色 PAGE和 SDS-PAGE电泳后的
凝胶用蒸馏水漂洗 2 次，再用固定液(50% 甲醇，
10%冰醋酸)在常温下固定30 min，后用蒸馏水漂
洗2次，再用考马斯亮蓝R-250于 50℃下染色30
min (PAGE)和45 min (SDS-PAGE) (郭尧君1991)，
最后分别转入不同浓度盐溶液和常规脱色液(冰乙
酸- 甲醇溶液)中脱色 2~4 h，观察结果。
2.3 温度实验 脱色在不同温度下进行，每隔一定
时间观察脱色效果。
2.4 电泳灵敏度的测定 同一块凝胶上，依次加入
不同蛋白含量的BSA 样品，观察电泳灵敏度情况。
实验结果
1 不同浓度NaCl、KCl 和 CuCl2 对脱色的影响
不同浓度NaCl、KCl和CuCl2于室温下对染色
后的凝胶进行脱色的结果表明：盐浓度越高，越
有利于脱色；但盐浓度过高(大于1.0 mol·L-1)，分
辨率会降低，脱色效果也会下降，特别是
PAGE，只能在低浓度(小于 0.5 mol·L-1)条件下才
能获得较好的脱色效果；由于铜离子带有颜色，
所以高浓度(大于1.5 mol·L-1) CuCl2的凝胶会染上
蓝绿色，背景较深(图 1-l)，不利于观察。经过
重复试验和分析统计，要获得较好的脱色效果(背
景较浅，蛋白带较深)，在 PAGE 中 NaCl、KCl
和 CuCl2的最佳脱色浓度均为0.25 mol·L-1，而在
SDS-PAGE 中均为 0.5 mol·L-1 (图 1、2)。
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图1 SDS-PAGE后不同浓度盐溶液脱色效果的比较
a、b、c、d 分别为 0.25、0.5、1.0、1.5 mol ·L-1 的
NaCl; e、f、g、h 分别为 0.25、0.5、1.0、1.5 mol·L-1 的
KCl；i、j、k、l 分别为 0.25、0.5、1.0、1.5 mol·L-1 的
CuCl2; 1、2分别为1.0和0.5 mg BSA (25℃脱色4 h)。
图2 PAGE后不同浓度盐溶液脱色效果的比较
a、b、c 分别为 0.125、0.25、0.5 mol·L-1 的 NaCl; d、
e、f 分别为 0.125、0.25、0.5 mol·L-1 的 KCl；g、k、i 分
别为 0.125、0.25、0.5 mol·L-1 的CuCl2; 1、2 分别为 1.0 和
0.5 mg BSA (25℃脱色2.5 h)。
图3 SDS-PAGE后不同温度下0.5 mol·L-1
盐溶液脱色效果的比较
a、b、c、d 分别为 25、50、60、7 0℃的 Na C l ; e、
f、g、h 分别为 25、50、60、70℃的 NaCl ; i、j、k、l
分别为25、50、60、70℃的 CuCl2; 1、2 分别为1.0和 0.5 mg
BSA (脱色 2 h)。
图5 SDS-PAGE后盐溶液脱色与常规脱色灵敏度比较
a、b、c、d 分别是冰乙酸- 甲醇、0.5 mol·L-1 NaCl、0.5
mol·L-1 KCl、0.5 mol·L-1 CuCl2 脱色；1~9 分别是 6.0、5.0、
4.0、3.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.1 mg BSA。a 是 25℃
脱色 3 d; b、c、d 是 25℃脱色 4 h。
图4 PAGE后不同温度下0.25 mol·L-1
盐溶液脱色效果的比较
a、b、c 分别为 25、50、70℃的 NaCl; d、e、f 分别
为 25、50、70℃的 KC l; g、h、i 分别为 25、50、70℃
的CuCl2; 1、2分别为1.0和0.5 mg BSA (脱色2.5 h)。
图6 PAGE后盐溶液脱色与常规脱色灵敏度比较
a、b、c、d分别是冰乙酸-甲醇、0.25 mol·L-1 NaCl、0.25
mol·L-1 KCl、0.25 mol·L-1 CuCl2 脱色；1~8 分别是 5.0、4.0、
3.0、2.0、1.0、0.5、0.2、0.1 mg BSA (25℃脱色 2.5 h)。
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2 不同温度对盐脱色的影响
在脱色最佳盐浓度下，温度越高，脱色时间
越短。但当温度高于 70℃时，会出现两种情况：
一是脱色过度，导致蛋白带颜色较浅(图3-d); 二
是高温下凝胶皱缩，影响脱色，背景较高(图 3-
h)。高于 70℃的 CuCl2 有漂白凝胶的作用(图3-l、
图4-i)。相比而言，PAGE中，0.25 mol·L-1 NaCl、
KCl和CuCl2的最佳脱色温度分别是70、50、50℃；
SDS-PAGE中，0.5 mol·L-1 NaCl、KCl和 CuCl2 的
最佳脱色温度分别是 50、60、50℃ (图 3、4)。
3 脱色时间对电泳灵敏度影响
在 SDS-PAGE 中，用盐脱色能大大减少脱色
时间，原来的脱色需几天才可以观察到蛋白带，
现在短短几十分钟内蛋白带就出现了，且3~4 h后
的脱色效果达到最佳。0.5 mol·L-1 NaCl、KCl和
CuCl2可检测到0.1 mg的蛋白，而常规脱色法一般
只能检测到0.5 mg的蛋白(表 1、图 5)。
在PAGE中，用盐脱色能在较短时间(2.0~2.5
h)内得到良好效果，而且0.25 mol·L-1 NaCl和KCl
与常规脱色有相同的灵敏度，能检测出0.1 mg的
蛋白含量；0.25 mol·L-1 CuCl2脱色的灵敏度略低
于常规脱色，只能检测0.2 mg的蛋白含量(表 2、
图 6)。
讨 论
经 PAGE 和 SDS-PAGE 后的凝胶，一般先用
考马斯亮蓝R-250染色，再用常规脱色液(冰乙酸-
甲醇溶液)脱色，这样不仅费时低效，而且甲醇
有一定毒性，操作时不够安全(肖亚中等 2002)。
PAGE 和 SDS-PAGE 后，先将凝胶固定，后
表1 SDS-PAGE后不同盐脱色时间与灵敏度的比较
脱色方法 染色时间/ 脱色时间/ 蛋白质最低 min h 检出量/mg
常规脱色 30 >72 0.5
NaCl 脱色 30 4 0.1
KCl 脱色 30 4 0.1
CuCl2 脱色 30 4 0.1
染色温度为50℃，常规脱色、KCl 脱色、CuCl2 脱色温度为
50℃，NaCl 的脱色温度为 70℃，NaCl、KCl、CuCl2 的浓度
为 0.5 mol·L-1。
表2 PAGE后不同盐脱色时间与灵敏度的比较
脱色方法 染色时间/ 脱色时间/ 蛋白质最低 min h 检出量/mg
常规脱色 45 2.5 0.1
NaCl 脱色 45 2.5 0.1
KCl 脱色 45 2.5 0.1
CuCl2 脱色 45 2.5 0.2
染色温度为 50℃，脱色温度为 25℃，NaCl、KCl、CuCl2
的浓度为 0.25 mol·L-1。
用考马斯亮蓝R-250于 50℃下染色30 min (SDS-
PAGE)或 45 min (PAGE)，再用不同的盐溶液
(NaCl、KCl、CuCl2)脱色，相对于常规脱色法而
言有一定的优点，不仅脱色时间大大缩短(由原来
2~5 d 缩短到 2~4 h)，而且灵敏度提高，能够检
测0.1 mg的蛋白质，背景也大大降低，具有较好
的分辨率，稳定性也较好，在盐脱色液中可以存
放半年以上而蛋白带不褪色。
脱色的盐溶液浓度和温度不宜太高：浓度太
高，凝胶会皱缩，而且脱色效果会受到削弱；温
度太高，凝胶也会皱缩和卷曲，而且蛋白带和背
景会一起脱色，分辨率下降，CuCl2 甚至在高温
下对凝胶还有漂白作用。另外，各种盐脱色之间
有一定差别：SDS-PAGE 的 KCl 脱色背景带浅蓝
色，需要较长的时间才能完全脱干净；而 CuCl2
脱色在浓度高时，由于铜离子本身带有颜色，凝
胶会染上蓝绿色，且CuCl2 在 PAGE 中脱色的灵敏
度不高；NaCl 价廉易得，且不含毒性，脱色所
用时间短，背景低、灵敏度高，脱色效果显著。
总之，本文方法的最佳效果是： PAGE用0.25
mol·L-1 NaCl 于 70℃下脱色；SDS-PAGE 用 0.5
mol·L-1 NaCl 于 50℃下脱色。
参考文献
郭尧君(1991). SDS电泳技术的实验考虑及最新进展. 生物化学
与生物物理进展, 19 (1): 32~37
郭尧君(2001). 蛋白质电泳实验技术. 北京: 科学出版社, 54~156
肖亚中, 王军, 蒲春雷(2002). 一种简易的聚丙烯酰胺凝胶脱色
方法. 生物学杂志, 19 (4): 34~35
Higgins RC, Dahmus ME (1979). Rapid visualization of protein
bands in preparative SDS-polyacrylamide gels. Anal Biochem,
93: 257~260
Lee C, Levin A, Branton D (1987). Copper staining: a five-
minute protein stain for sodium dodecyl sulfate-
polyacylamide gels. Anal Biochem, 166: 308~312