全 文 ：植物生理学通讯 第 44卷 第 6期，2008年 12月 1165
欧洲小叶椴的胚培养与快速繁殖
白卉 1,3, 邢亚娟 2,3,*
1东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室, 哈尔滨 150040; 2黑龙江大学, 哈尔滨 150080; 3黑龙江省林业
科学研究所, 哈尔滨 150081
Embryo Culture and Rapid Propagation of Tilia cordata Mill.
BAI Hui1,3, XING Ya-Juan2,3,*
1Key Laboratory of Forest Tree Genetic Improvement and Biotechnology of Ministry of Education, Northeast Forestry University,
Harbin 150040, China; 2Heilongjiang University, Harbin 150080, China; 3Forestry Science Research Institute of Heilongjiang
Province, Harbin 150081, China
收稿 2008-08-15 修定 2008-11-21
* 通讯作者(E-mail: xingyajuan@163.com; Tel: 0451-
8 6 6 1 9 8 7 5 )。
1 植物名称 欧洲小叶椴(Tilia cordata Mill.)。
2 材料类别 成熟胚。
3 培养条件 (1)启动培养基: MS+6-BA 2.0 mg·L-1
(单位下同)+NAA 0.1; (2)增殖培养基: MS+6-BA 1.0+
NAA 0.1; (3)壮苗生根培养基: 1/2MS+IBA 1.0+NAA
0.3。以上培养基均加入 0.55%琼脂和 20 g·L-1蔗
糖, pH 5.8~6.0。培养温度为(25±2) ℃; 光照培养
时间 12 h·d-1, 光照强度 40~50 µmol·m-2·s-1。
4 生长与分化情况
4.1 材料的无菌处理 取欧洲小叶椴果实, 实验室剥
离果皮, 取出种子, 用少量洗涤剂洗净表面污物, 经
流水洗净后, 移入超净工作台上, 用 75%的酒精表
面消毒 30 s, 再用 0.1% 的升汞溶液消毒 10 min, 最
后用无菌水冲洗5次, 置于灭菌滤纸上吸干水分, 用
解剖刀拨去种皮, 取出种胚平放在启动培养基(1)
上。
4.2 种子萌发及生长培养 接种到启动培养基(1)上
的种胚, 光照培养 2 d, 开始见到白色根萌出, 长至
2 cm后不再伸长, 颜色逐渐变深; 培养 4 d, 2片绿
色真叶开始伸展(图 1); 培养 9 d, 根由白色彻底变
为褐色; 12 d时已长出4片真叶(图2); 28 d, 植株高
4~5 cm, 茎段长出 3~6个腋芽, 将其分成带腋芽的
茎段分别转入增殖培养基(2) , 光照下继续培养。
20 d后, 腋芽萌出, 以 40 d为 1个继代周期, 增殖
系数 3~4 (图 3)。
4.3 壮苗和生根培养 将长 2.5 cm左右的芽转入培
养基(3)。14 d后嫩芽逐渐增高, 植株生长旺盛, 开
始生根, 形成小苗。40 d后, 试管苗的生根率达
85% (图 4)。待小苗长至 4~6 cm, 根长 1.5~2.0 cm,
可进行移栽。
4.4 小苗移栽与养护 移栽前15 d, 将小苗移入温室
中接受阳光的照射, 并在 5~10 d内逐渐揭开瓶盖,
以避免小苗叶子失水干枯。移栽时先往瓶里灌入
少量水, 将培养基摇散后, 用镊子轻轻取出小苗, 注
意不要伤及根部。用水洗去根部附着的培养基, 将
根部放入 70%甲基托布津药液中消毒 20 min, 药
液浓度为 800倍。然后将植株置于背阴处定植。
定植材料以消毒后的蛭石、壤土体积比1:1的混合
基质。温度为 22~25 ℃, 空气湿度为 70%~90%, 随
后逐渐降低湿度至与外界自然湿度相近。2个月
后统计移栽成活率达 75% (图 5)。
5 意义与进展 欧洲小叶椴为椴树科椴树属的落
叶乔木, 树冠圆球形, 高可达 30 m, 叶近心形, 花
黄白色, 芳香, 是世界上最流行的庭荫树及行道树
之一。本文采用的欧洲小叶椴果实采自俄罗斯首
都莫斯科, 数量有限, 试验用种子未经处理的发芽
率为 8%, 胚培养发芽率可达 75%, 可见利用胚培
养的方法能够有效解决欧洲小叶椴种子活力低的
问题。文中利用组培快繁的方法, 可以在短时间
内获得大量健康植株, 这可能对我国东北地区利用
和推广此种抗寒性和抗烟力强的优良绿化树种具
有一定作用。与其同属其他种植物的组织培养已
有报道(王彦彬等 2002; 吕校石 2004; 刘芳 2007;
陈罡等2007), 但欧洲小叶椴的组织培养和快速繁
殖的报道未见。
植物生理学通讯 第 44卷 第 6期，2008年 12月1166
图 4 欧洲小叶椴生根培养
图 1 欧洲小叶椴胚根伸长及真叶开始长出
图 2 欧洲小叶椴植株长出 4片真叶
图 3 欧洲小叶椴增殖培养
图 5 欧洲小叶椴炼苗移栽
参考文献
陈罡, 马冬菁, 叶景丰, 潘文利, 范俊岗(2007). 日本椴的组织培养
与快速繁殖. 植物生理学通讯, 43 (2): 327
刘芳(2007). 南京椴组织培养的研究[硕士学位论文]. 南京: 南京
林业大学
吕校石(2004). 椴树组织培养研究[硕士学位论文]. 保定: 河北农业
大学
王彦彬, 颉玉敏, 陈荣, 祁永会(2002). 紫椴的组织培养技术研究.
防护林科技, (2): 37~38