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豹斑火焰兰的离体快速繁殖



全 文 :植物生理学通讯 第 44卷 第 2期,2008年 4月 283
豹斑火焰兰的离体快速繁殖
周俊 1,2,吴坤林 1,陈之林 1,郑枫 1,段俊 1,曾宋君 1,*
1中国科学院华南植物园,广州 510650;2中国科学院研究生院,北京 100039
In vitro Rapid Propagation of Renanthera monachia Ames
ZHOU Jun1,2, WU Kun-Lin1, CHEN Zhi-Lin1, ZHENG Feng1, DUAN Jun1 , ZENG Song-Jun1,*
1South China Botanical Garden, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510650, China; 2Graduate University of Chinese
Academy of Sciences, Beijing 100039, China
收稿 2007-10-25 修定  2008-01-28
资助 广州市科技计划项目(2007Z3-E0631)和中国科学院知
识创新工程重要方向项目(kscx2-sw-31 9)。
* 通讯作者 (E-mai l:zengsongjun@scib .ac .cn;T el:
02 0-37 25 29 90 )。
1 植物名称 豹斑火焰兰(Renanthera monachica
Ames)。
2 材料类别 种子。
3 培养条件 种子萌发培养基:(1) VW;(2) VW+
100 mL·L-1椰子乳;(3) 1/2MS;(4) 1/2MS+椰子
乳 100 mL·L-1。原球茎继代增殖培养基:(5) VW+
椰子乳100 mL·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1 (单位下同)+NAA
0.5 ;(6) VW+6-BA 2.0+NAA 0.5;原球茎继代分
化培养基:(7) VW+椰子乳 100 mL·L-1+6-BA 0.5
+NAA 1.0 ;(8) VW+6-BA 0.5+NAA 1.0;生根壮
苗培养基:(9) 3 g·L-1花宝 1号 +2 g·L-1蛋白胨+2
g·L-1活性炭+NAA 0.5+6-BA 0.2;(10) 花宝 1号 1
g·L-1 +花宝 2号 1 g·L-1+蛋白胨 2 g·L-1+活性炭
2 g·L-1+NAA 0.5+ 6-BA 0.2。以上培养基均附加 2.0%
蔗糖,0.6%琼脂,pH 5.2~5.4,培养温度为(25±2)
℃,光照强度为 30~40 µmol·m-2·s-1,光照时间为 12
h ·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 材料的无菌处理 人工授粉 140~160 d的荚果
呈黄绿色,经自来水洗净后,用 70% 的酒精表
面消毒 30s,再以 0.1%的升汞溶液消毒 15 min,
最后用无菌水冲洗 4~5次。将洗净的荚果置灭菌
滤纸上吸干水分,用解剖刀切开荚果,将白色粉
沫状的种子散落到培养基上。
4.2 种子萌发 发育 140~160 d的种子在显微观察
发现大部分已发育成球形胚。在种子萌发培养基
(1 )~(4)上,无论是先培养 2 周后再转入光下培
养,还是一直在光下培养,种子的萌发率没有明
显的差异。6周后萌发的部分原球茎上端有芽长
出;培养基(1)、(3)上的萌发率相差不大,都在
50%左右,但培养 4周后发现部分原球茎褐化死
亡。培养基(2)、(4)上萌发率达 60% 以上,萌发
速度和生长速度也比培养基(1)、(3)快,以培养基
(2)效果最好,表明椰子乳对种子萌发有促进作用。
4.3 原球茎增殖培养 在播种后30 d时将未分化出
芽的原球茎培养在原球茎继代增殖培养基(5)、(6)
上,均能进行原球茎的增殖,但培养基(5)的效果
明显比培养基(6)好,在培养基(6)中增殖时有部分
原球茎死亡,而培养基(5)中原球茎的增殖率在 40
d的继代周期内可达到 3倍以上(图 1)。
4.4 原球茎分化培养 将增殖的原球茎转到分化培
养基(7)、(8)上,培养基(8)中的分化率高,但培
养基(7)中分化的小苗生长更健壮。
4.5 生根与壮苗 将种子萌发和继代增殖的小苗转
移到生根壮苗培养基( 9 )、( 1 0 )上培养,生根率
100%,在培养基(9)上比培养基(10)根系发达,每
植物组织培养简报 Brief Communications of Plant Tissue Culture
图 1 豹斑火焰兰原球茎增殖
植物生理学通讯 第 44卷 第 2期,2008年 4月284
株根数 5、6条,但植株较小;培养基(10)中根
数 4、5条,生产中采用培养基(10)做生根壮苗培
养基较佳(图 2)。
图 3 豹斑火焰兰母株
图 2 豹斑火焰兰壮苗和生根培养
4.6 炼苗与移栽 将培养瓶置于温棚中炼苗 2周
后,从培养瓶中取出生根苗,洗净附着的培养基,
在 1 000倍多菌灵溶液中浸泡 5 min,用白水苔包
裹出瓶苗根部,种植于 1.5寸小盆中,注意保持
适宜湿度,置于阴凉通风处栽培,1周内不要浇
水,成活率可达 95%以上。2周后移入温棚栽培,
进行正常的水、肥、药管理。
5 意义与进展 豹斑火焰兰属于兰科火焰兰属,
原产于菲律宾,中国科学院华南植物园近年从国
外引进。附生于树干或岩石上生长,秋季时花序
自叶腋长出,有时几葶花同时开放,每葶着花多
达十多朵,萼片和花瓣黄色缀有深红色斑点,极
为艳丽,具有非常高的观赏价值(图 3)。豹斑火
焰兰的种子在自然状态下需与真菌共生才能萌发,
萌发率极低,人工栽培中虽可用常规的扦插进行
无性繁殖,但繁殖率低,用种子的无菌播种和试
管育苗可获得大量的试管苗,这对豹斑火焰兰的
资源保护和规模化生产来说,是值得考虑的一种
途径。同属植物中虽有云南火焰兰(林丹妮等2006)、
火焰兰(陈之林等 2005)无菌播种成功的报道,但
豹斑火焰兰的无菌播种和试管育苗未见报道。
参考文献
林丹妮, 曾宋君, 陈之林, 段俊(2006). 云南火焰兰的离体快速繁
殖. 植物生理学通讯, 42 (1): 77
陈之林, 曾宋君, 黄向力, 段俊(2005). 火焰兰的种子培养和试管
育苗. 植物生理学通讯, 41 (2): 195