全 文 ：植物保护学报 允燥怎则灶葬造 燥枣 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 圆园员缘袁 源圆渊圆冤院 员怨源 原 圆园园 阅韵陨院 员园郾 员猿愿园圆 辕 躁援 糟灶噪蚤援 扎憎遭澡曾遭援 圆园员缘郾 园圆郾 园园愿
基金项目院 国家公益性行业渊农业冤科研专项渊圆园员猿园猿园员远冤袁江苏省科技支撑项目渊月耘圆园员圆猿园远冤袁江苏省自主创新项目渊悦载渊员员冤源园猿缘冤
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则泽 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 澡曾皂葬岳 躁葬葬泽援 葬糟援 糟灶袁 曾怎扎澡葬灶早岳 躁葬葬泽援 葬糟援 糟灶
收稿日期院 圆园员源 原 园猿 原 员苑
运用噬菌体随机肽库筛选与 阅韵晕毒素特异
结合的亲和肽段
邢锦城员袁圆 摇 张摇 旭员鄢摇 马鸿翔员鄢摇 徐摇 海猿 摇 侯继波猿
渊员援江苏省农业科学院袁 江苏省农业生物学重点实验室袁 南京 圆员园园员源曰 圆援江苏沿海地区农业科学研究所袁 盐城 圆圆源园园圆曰
猿援江苏省农业科学院袁 国家兽用生物制品工程技术研究中心袁 南京 圆员园园员源冤
摘要院 为获得与毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇渊凿藻燥曾赠灶蚤增葬造藻灶燥造袁阅韵晕冤高亲和力的特异性多肽袁利用丁基
硼酸封闭法制备 阅韵晕 人工抗原 阅韵晕鄄匀郧鄄月杂粤袁以其为靶分子筛选噬菌体肽库袁对阳性克隆进行
阅晕粤序列测定与氨基酸推导袁并进行亲和特异性验证遥 结果显示袁经过 源 轮亲和肽段筛选与酶联
免疫检测法鉴定袁从 酝员猿 噬菌体随机 苑 肽库中得到 员缘 个 阅韵晕 人工抗原包被孔与牛血清白蛋白包
被孔 韵阅比值大于 猿郾 愿 的阳性克隆袁其中 员园 个与 阅韵晕 人工抗原高亲和力结合的阳性克隆经测序
后共推导出 源 种多肽序列遥 经抗原梯度酶联免疫检测法验证袁多肽酝粤孕郧宰灾孕与 阅韵晕人工抗原浓
度的相关性高达 园郾 怨怨袁对人工抗原具有高亲和力遥 该多肽的获得将为进一步开发高效的 阅韵晕 诊
断试剂盒奠定基础遥
关键词院 脱氧雪腐镰刀菌烯醇渊阅韵晕冤曰 噬菌体展示随机肽库曰 酶联免疫检测曰 小麦赤霉病
匀蚤早澡鄄葬枣枣蚤灶蚤贼赠 责藻责贼蚤凿藻泽 遭蚤灶凿蚤灶早 贼燥 凿藻燥曾赠灶藻增葬造藻灶燥造 泽糟则藻藻灶藻凿 枣则燥皂
责澡葬早藻 凿蚤泽责造葬赠 责藻责贼蚤凿藻 造蚤遭则葬则赠
载蚤灶早 允蚤灶糟澡藻灶早员袁圆 摇 在澡葬灶早 载怎员鄢摇 酝葬 匀燥灶早曾蚤葬灶早员鄢摇 载怎 匀葬蚤猿 摇 匀燥怎 允蚤遭燥猿
渊员援 孕则燥增蚤灶糟蚤葬造 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 粤早则燥遭蚤燥造燥早赠袁 允蚤葬灶早泽怎 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 晕葬灶躁蚤灶早 圆员园园员源袁 允蚤葬灶早泽怎
孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬曰 圆援 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽 蚤灶 允蚤葬灶早泽怎 悦燥葬泽贼葬造 粤则藻葬泽袁 再葬灶糟澡藻灶早 圆圆源园园圆袁 允蚤葬灶早泽怎
孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬曰 猿援 晕葬贼蚤燥灶葬造 灾藻贼藻则蚤灶葬则赠 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 酝藻凿蚤糟蚤灶藻 耘灶早蚤灶藻藻则蚤灶早 砸藻泽藻葬则糟澡 悦藻灶贼藻则袁
允蚤葬灶早泽怎 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 晕葬灶躁蚤灶早 圆员园园员源袁 允蚤葬灶早泽怎 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 栽燥 燥遭贼葬蚤灶 泽责藻糟蚤枣蚤糟 责燥造赠责藻责贼蚤凿藻泽 贼澡葬贼 遭蚤灶凿 贼燥 皂赠糟燥贼燥曾蚤灶 凿藻燥曾赠灶蚤增葬造藻灶燥造 渊 阅韵晕冤 憎蚤贼澡 澡蚤早澡
葬枣枣蚤灶蚤贼赠袁 阅韵晕 憎葬泽 糟燥灶增藻则贼藻凿 贼燥 猿鄄匀郧鄄阅韵晕 葬枣贼藻则 责则燥贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 悦苑鄄 葬灶凿 悦员缘鄄澡赠凿则燥曾赠造泽 憎蚤贼澡 葬 糟赠糟造蚤糟
遭燥则燥灶葬贼藻 藻泽贼藻则袁 葬灶凿 贼澡藻灶 糟燥灶躁怎早葬贼藻凿 贼燥 遭燥增蚤灶藻 泽藻则怎皂 葬造遭怎皂蚤灶 渊月杂粤冤 贼燥 皂葬噪藻 葬则贼蚤枣蚤糟蚤葬造 葬灶贼蚤早藻灶 阅韵晕鄄匀郧鄄
月杂粤援 栽澡藻 孕澡援 阅援 栽酝鄄苑 责澡葬早藻 凿蚤泽责造葬赠 责藻责贼蚤凿藻 造蚤遭则葬则赠 憎葬泽 泽糟则藻藻灶藻凿 遭赠 阅韵晕鄄匀郧鄄月杂粤 葬灶凿 贼澡藻 责燥泽蚤贼蚤增藻
糟造燥灶藻泽 憎藻则藻 泽藻择怎藻灶糟藻凿 贼燥 凿藻凿怎糟藻 贼澡藻 糟燥则藻 责藻责贼蚤凿藻泽援 粤枣贼藻则 枣燥怎则 则燥怎灶凿泽 燥枣 遭蚤燥责葬灶灶蚤灶早袁 员缘 责燥泽蚤贼蚤增藻 糟造燥灶藻泽袁
燥枣 憎澡蚤糟澡 贼澡藻 韵阅 则葬贼蚤燥 燥枣 糟燥葬贼藻凿 葬灶贼蚤早藻灶 贼燥 糟燥葬贼藻凿 月杂粤 憎葬泽 早则藻葬贼藻则 贼澡葬灶 猿郾 愿袁 憎藻则藻 泽藻造藻糟贼藻凿 遭赠 藻灶扎赠皂藻鄄
造蚤灶噪藻凿 蚤皂皂怎灶燥泽燥则遭藻灶贼 葬泽泽葬赠 渊耘蕴陨杂粤冤援 郧藻灶藻 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼藻灶 泽藻造藻糟贼藻凿 责燥泽蚤贼蚤增藻 糟造燥灶藻泽 藻灶糟燥凿藻凿
枣燥怎则 责藻责贼蚤凿藻泽援 耘蕴陨杂粤 葬灶葬造赠泽蚤泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 糟燥则藻 责藻责贼蚤凿藻 酝粤孕郧宰灾孕 澡葬凿 贼澡藻 澡蚤早澡藻泽贼 葬枣枣蚤灶蚤贼赠 贼燥 贼澡藻
葬灶贼蚤早藻灶 憎蚤贼澡 葬 糟燥则则藻造葬贼蚤燥灶 糟燥藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼 燥枣 园郾 怨怨援 栽澡藻 责藻责贼蚤凿藻泽 憎蚤贼澡 澡蚤早澡 葬枣枣蚤灶蚤贼赠 贼燥 阅韵晕 糟燥怎造凿 遭藻 燥遭贼葬蚤灶藻凿
枣则燥皂 责澡葬早藻 凿蚤泽责造葬赠 则葬灶凿燥皂 责藻责贼蚤凿藻 造蚤遭则葬则赠袁 憎澡蚤糟澡 责则燥增蚤凿藻泽 葬 责燥贼藻灶贼蚤葬造 贼燥燥造 枣燥则 凿藻增藻造燥责蚤灶早 澡蚤早澡造赠 泽藻灶泽蚤贼蚤增藻
阅韵晕 凿蚤葬早灶燥泽贼蚤糟 噪蚤贼泽援
运藻赠 憎燥则凿泽院 凿藻燥曾赠灶蚤增葬造藻灶燥造 渊阅韵晕冤曰 责澡葬早藻 凿蚤泽责造葬赠 责藻责贼蚤凿藻 造蚤遭则葬则赠曰 藻灶扎赠皂藻鄄造蚤灶噪藻凿 蚤皂皂怎灶燥泽燥则遭藻灶贼 葬泽泽葬赠
渊耘蕴陨杂粤冤曰 云怎泽葬则蚤怎皂 澡藻葬凿 遭造蚤早澡贼
摇 摇 由禾谷镰刀菌 云怎泽葬则蚤怎皂 早则葬皂蚤灶藻葬则怎皂 引起的赤
霉病渊云怎泽葬则蚤怎皂 澡藻葬凿 遭造蚤早澡贼冤是世界性流行病害袁为
害小麦尧大麦尧玉米生产袁不仅造成作物严重减产尧品
质降低袁而且侵染籽粒后产生脱氧雪腐镰刀菌烯醇
渊凿藻燥曾赠灶蚤增葬造藻灶燥造袁阅韵晕冤等真菌毒素袁严重危害食品安
全和人畜健康渊月葬蚤 驭 杂澡葬灶藻则袁圆园园源曰酝葬 藻贼 葬造援 袁圆园园愿曰
张丽等袁圆园员员冤遥 中国尧欧盟尧美国和加拿大均要求
面粉尧面包尧饼干等食品中 阅韵晕 毒素的限量标准为
员 园园园 滋早 辕 噪早 渊 月怎藻则泽贼皂葬赠则 藻贼 葬造援 袁 圆园园怨曰 郧月圆苑远员袁
圆园员员冤遥 及时有效地对食品及其原料中的真菌毒素
进行检测袁对预防其进入食物链袁减少对人和畜禽产
生危害具有重要意义遥
目前 阅韵晕 的检测方法主要包括薄层色谱法
渊吴小荣等袁员怨怨园冤尧高效液相色谱法渊 栽则怎糟噪泽藻泽泽 藻贼
葬造援 袁员怨怨愿曰酝葬贼藻燥 藻贼 葬造援 袁圆园园员冤尧气相色谱法渊酝燥泽燥泽遭葬
藻贼 葬造援 袁员怨怨远曰黄志兵等袁圆园园苑冤尧酶联免疫检测法等
渊悦葬泽葬造藻 藻贼 葬造援 袁员怨愿愿曰杂糟澡灶藻蚤凿藻则 藻贼 葬造援 袁圆园园园冤遥 酶联
免疫吸附检测法渊 藻灶扎赠皂藻鄄造蚤灶噪藻凿 蚤皂皂怎灶燥泽燥则遭藻灶贼 葬泽鄄
泽葬赠袁耘蕴陨杂粤冤具有选择性高尧特异性强尧灵敏度高尧速
度快尧操作简单等特点袁是目前应用较多的快速检测
阅韵晕的方法渊吴杰等袁圆园园怨曰肖娟等袁圆园员猿冤遥 为研发
自主知识产权的 耘蕴陨杂粤试剂盒袁张燕等渊圆园员园冤制备
了 阅韵晕 多克隆抗体袁金萍等 渊 圆园员员 冤尧 赵丽等
渊圆园员园冤尧祭芳等渊圆园园愿冤也进一步研究制备了 阅韵晕
单克隆抗体袁尝试建立直接或间接竞争 耘蕴陨杂粤 的检
测方法渊阳传和等袁员怨怨源曰张银志等袁圆园员圆冤遥 但是袁
阅韵晕是小分子半抗原袁在制备 阅韵晕 抗体之前需合
成完全抗原袁过程繁琐袁且由于动物免疫的局限性袁
制备高效价的 阅韵晕单克隆抗体比较困难遥
噬菌体表面展示技术是一种新型基因表达筛选
技术袁即将外源蛋白分子或多肽与噬菌体外膜蛋白
融合表达袁展示在噬菌体表面渊杂皂蚤贼澡袁员怨愿缘冤遥 噬菌
体随机肽库具有容量大尧体积小尧筛选简便尧制备成
本低等突出优点渊杂皂蚤贼澡袁员怨愿缘曰运葬赠 藻贼 葬造援 袁圆园园员冤袁因
此利用该技术可直接从庞大的噬菌体表面展示库中
筛选到能与目标抗原特异结合的肽段袁抗体的制备
可以不经过免疫过程袁既省去了制备单克隆抗体的
细胞融合袁又避免了动物免疫的局限性遥 且噬菌体
可多次扩增袁大量制备多肽和蛋白质袁适合大规模生
产各种免疫诊断试剂盒袁在蛋白分子相互识别尧新型
疫苗研制及药物开发等领域具有广泛的应用前景
渊孕藻则澡葬皂 藻贼 葬造援 袁员怨怨缘曰孙美艳等袁圆园园怨冤遥
噬菌体展示技术在玉米赤霉烯酮渊扎藻葬则葬造藻灶燥灶藻袁
在耘晕冤毒素检测方面已得到广泛应用遥 再怎葬灶 藻贼 葬造援
渊员怨怨苑冤首次从抗 在耘晕 的杂交瘤细胞株中分离克隆
了抗体重链可变区渊 增葬则蚤葬遭造藻 澡藻葬增赠鄄糟澡葬蚤灶袁灾匀冤和轻
链可变区渊 增葬则蚤葬遭造藻 造蚤早澡贼鄄糟澡葬蚤灶袁灾蕴冤基因袁并利用该
技术制备了抗 在耘晕 的单链抗体渊 泽蚤灶早造藻 糟澡葬蚤灶 枣则葬早鄄
皂藻灶贼 增葬则蚤葬遭造藻 燥枣 葬灶贼蚤遭燥凿赠袁杂糟云增冤 杂糟云增匝再 员郾 缘袁并通过
间接竞争 耘蕴陨杂粤验证了 杂糟云增匝再 员郾 缘 对抗原的亲和
力曰庄振宏等渊圆园园怨冤将 灾匀和 灾蕴基因克隆入噬菌粒
表达载体 孕糟葬灶贼葬遭缘耘 中袁构建了 杂糟云增 文库袁利用该
技术制备了抗黄曲霉毒素 月员 杂糟云增 抗体遥 噬菌体展
示技术还可用于真菌毒素模拟抗原的筛选袁如何庆
华等渊圆园园苑冤以抗 在耘晕苑郧缘 为配体袁在噬菌体 苑 肽库
中筛选到 在耘晕毒素的模拟表位袁希望用该噬菌体替
代 在耘晕毒素标准品袁建立无毒 耘蕴陨杂粤 检测 在耘晕 体
系曰邓舜洲等渊圆园园远冤也从噬菌体随机 苑 肽库中筛选
到 阅韵晕 的模拟表位袁以替代 阅韵晕 人工抗原建立无
毒的 阅韵晕检测方法遥 本研究利用噬菌体展示技术
筛选 阅韵晕特异亲和肽段袁用该肽段代替 耘蕴陨杂粤检测
中的 阅韵晕 抗体袁为进一步简化禾谷镰刀菌毒素
阅韵晕的检测技术和相关免疫检测试剂盒的生产提
供依据遥
员 材料与方法
员郾 员 材料
供试菌株与肽库院噬菌体随机 苑肽库孕澡援 阅援 鄄苑栽酝与
宿主菌 耘砸圆苑猿愿均购自美国 晕藻憎 耘灶早造葬灶凿 月蚤燥造葬遭泽公司遥
试剂院脱氧雪腐镰刀菌烯醇标品尧丁基硼酸渊遭怎鄄
贼葬灶藻遭燥则燥灶蚤糟 葬糟蚤凿袁月月粤冤尧戊二酸酐尧源鄄二甲基氨基吡
啶渊源鄄凿蚤皂藻贼澡赠造葬皂蚤灶燥责赠则蚤凿蚤灶藻袁阅酝粤孕冤尧晕鄄羟基琥珀酰
亚胺渊晕鄄澡赠凿则燥曾赠泽怎糟糟蚤灶蚤皂蚤凿藻袁晕匀杂冤尧晕袁晕忆鄄二环己基
碳二亚胺渊晕袁晕忆鄄凿蚤糟赠糟造燥澡藻曾赠糟葬则遭燥凿蚤蚤皂蚤凿藻袁阅悦悦冤尧牛
血清白蛋白渊遭燥增蚤灶藻 泽藻则怎皂 葬造遭怎皂藻灶袁月杂粤冤等化学试
剂均购自美国 杂蚤早皂葬 公司曰二甲基亚砜 渊 凿蚤皂藻贼澡赠造
泽怎造枣燥曾蚤凿藻袁阅酝杂韵冤尧磷酸盐缓冲液 渊 责澡燥泽责澡葬贼藻 遭怎枣枣藻则
泽葬造蚤灶藻袁孕月杂冤尧栽则蚤泽 缓冲液渊 贼则蚤泽 遭怎枣枣藻则 泽葬造蚤灶藻袁栽月杂冤尧聚
乙二醇渊责燥造赠藻贼澡赠造藻灶藻 早造赠糟燥造袁孕耘郧冤愿园园园 等化学试剂
均购自南京生兴生物技术有限公司曰兔抗 酝员猿 抗体
购自美国 粤枣枣蚤灶蚤贼赠 月蚤燥则藻葬早藻灶贼泽公司曰辣根过氧化物酶
渊澡燥则泽藻 则葬凿蚤泽澡 责藻则燥曾蚤凿葬泽藻袁匀砸孕冤标记的羊抗兔抗体购
自北京博奥森公司遥
仪器院酝蚤噪则燥 圆圆砸 高速离心机袁德国 匀藻贼贼蚤糟澡 公
缘怨员圆 期 邢锦城等院 运用噬菌体随机肽库筛选与 阅韵晕毒素特异结合的亲和肽段
司曰杂贼葬则 云葬曾 圆员园园 酶标仪尧杂贼葬则 云葬曾 圆远园园 洗板机袁美国
粤憎葬则藻灶藻泽泽公司遥
员郾 圆 方法
员郾 圆郾 员 阅韵晕人工抗原渊阅韵晕鄄匀郧鄄月杂粤冤的合成
参照 悦葬泽葬造藻 藻贼 葬造援 渊员怨愿愿冤和邓舜洲等渊圆园园苑冤方
法合成遥 源 皂早 阅韵晕 溶于 源园园 滋蕴 无水四氢呋喃袁加
入 月月粤 猿源郾 源 皂早袁室温振摇过夜袁至 阅韵晕封闭完全遥
分别加入 员圆郾 愿 皂早 阅酝粤孕 与 圆怨郾 远 皂早 戊二酸酐袁猿苑
益振摇 圆 澡袁终止反应后氯仿萃取得到 猿鄄匀郧鄄阅韵晕鄄
月月粤 接臂产物遥 猿鄄匀郧鄄阅韵晕鄄月月粤 溶于 愿园园 滋蕴 甲
醇袁室温振摇解封闭过夜袁薄层层析纯化袁甲醇洗脱尧
真空干燥后经 愿鄄酮基染色检测得到 猿鄄匀郧鄄阅韵晕遥
缘园园 滋早 猿鄄匀郧鄄阅韵晕与 园郾 缘愿 滋早 晕匀杂尧员郾 猿愿 滋早 阅悦悦溶
于 圆园园 滋蕴无水四氢呋喃袁员园 耀 员源 益振摇后袁真空抽
干四氢呋喃袁加入 圆园园 滋蕴 阅酝杂韵袁缓慢加至溶于 员郾 圆
皂蕴 园郾 员猿 皂燥造 辕 蕴 晕葬匀悦韵猿 溶液的 远 皂早 月杂粤 中袁员缘 益
低速振荡反应过夜遥 用 园郾 园员 皂燥造 辕 蕴 责匀 苑郾 源 孕月杂 透
析 猿 凿得到 阅韵晕鄄匀郧鄄月杂粤袁冷冻真空干燥袁源 益保存遥
员郾 圆郾 圆 亲和肽段筛选
员园 滋早纯化的 阅韵晕 人工抗原溶于 员园园 滋蕴 孕月杂
渊园郾 园造 皂燥造 辕 蕴袁 责匀 苑郾 源冤后包被微孔板袁源 益过夜遥 加
入 猿豫 月杂粤封阻缓冲液 源 益封闭 圆 澡袁用含 园郾 员豫 吐
温 原 圆园 的 栽月杂 洗涤袁加入 员园园 滋蕴 滴度为 员郾 缘园 伊
员园员圆 孕云哉 辕 皂蕴的噬菌体袁室温振摇 员 澡遥 栽月杂洗涤后袁
加入竞争性洗脱液 员园园 滋蕴 渊缘园 滋早 辕 皂蕴 阅韵晕 溶于
员 皂蕴 孕月杂溶液冤袁振摇 员园 皂蚤灶袁回收洗脱产物遥 取 员园
滋蕴进行噬菌体滴度测定袁剩余洗脱液加入生长至对
数生长前期的宿主菌 耘砸圆苑猿愿 培养液中袁猿苑 益振摇
源郾 缘 澡袁源 益 员园 园园园 则 辕 皂蚤灶 离心 员园 皂蚤灶袁上清液加入
员 辕 远 体积 孕耘郧愿园园园 辕 晕葬悦造 沉淀噬菌体遥 测定扩增噬
菌体的滴度袁重复上述步聚袁进行 源 轮筛选遥 第 圆 耀
源 轮筛选时抗原包被量分别降低至 缘尧缘尧圆郾 缘 滋早袁同
时 栽月杂中吐温 原 圆园 浓度增加至 园郾 缘豫 袁以获得高亲
和力噬菌体遥
员郾 圆郾 猿 耘蕴陨粤杂方法鉴定阳性噬菌体克隆
将 圆缘 滋早 辕 皂蕴 阅韵晕 人工抗原和 圆缘 滋早 辕 皂蕴 月杂粤
分别包被 耘蕴陨杂粤板袁每孔均包被 员园园 滋蕴袁猿苑 益孵育
远 澡袁采用 孕月杂 垣园郾 缘豫 渊增 辕 增冤吐温 原 圆园 混合液洗板 猿
次袁员豫明胶封闭液 源 益封阻过夜袁再洗板 猿 次遥 每
孔加入 员园园 滋蕴 滴度为 员郾 园 伊 员园员园 孕云哉 辕 皂蕴 的噬菌
体袁猿苑 益孵育 员 澡袁洗板 远 次遥 每孔加入 员园园 滋蕴 员颐
员园 园园园稀释的兔抗 酝员猿 噬菌体抗体袁猿苑 益孵育 员 澡袁
洗板 源 次遥 每孔加 员园园 滋蕴 员颐 猿 园园园 稀释 匀砸孕 标记
的羊抗兔抗体袁猿苑 益孵育 员 澡遥 此后洗涤尧显色尧终
止按常规方法进行袁酶标仪读取 韵阅源怨圆值遥 将 阅韵晕
人工抗原包被孔中的 韵阅 值设为 孕尧月杂粤 包被孔中
的 韵阅值设为 晕袁选取 圆 次重复检测 孕 辕 晕 平均值大
于 猿 的噬菌体单克隆扩增尧甘油保种并委托生工生
物工程渊上海冤股份有限公司测序遥
员郾 圆郾 源 阳性噬菌体克隆亲和力测定
将纯化的 阅韵晕 人工抗原从 缘园 滋早 辕 皂蕴 至 员郾 缘远
滋早 辕 皂蕴按 员 颐 圆分 远 个梯度稀释袁溶于 园郾 园员 皂燥造 辕 蕴 责匀
苑郾 源 员园园 滋蕴 孕月杂包被微孔板遥 按 员郾 圆郾 猿 方法测定各
阳性克隆的 韵阅源怨圆值遥
员郾 猿 数据分析
采用 杂孕杂杂 员怨郾 园园 软件进行数据处理袁应用 阅怎灶鄄
糟葬灶 氏新复极差法进行噬菌体单克隆间亲和力差异
显著性检验遥 采用 耘曾糟藻造 圆园园猿 进行克隆亲和力特异
性分析遥
圆 结果与分析
圆郾 员 阅韵晕人工抗原渊阅韵晕鄄匀郧鄄月杂粤冤的合成
薄层层析检测表明渊图 员冤袁阅韵晕 的封闭尧接臂尧
解封闭均已成功遥 阅韵晕鄄月月粤带型单一无拖尾袁说明
封闭合成 阅韵晕鄄月月粤的反应完全遥 接臂反应合成的
猿鄄匀郧鄄阅韵晕鄄月月粤极性在 阅韵晕 和 阅韵晕鄄月月粤 之间袁且
阅韵晕分子中影响免疫原性的重要基团 愿鄄酮基在化
学反应过程中未被改变遥 源 种化合物极性大小为院
猿鄄匀郧鄄阅韵晕 跃 阅韵晕 跃 月月粤鄄阅韵晕鄄匀郧 跃 阅韵晕鄄月月粤遥
圆郾 圆 与 阅韵晕人工抗原特异性结合 苑 肽的筛选
以 阅韵晕人工抗原为靶分子袁使噬菌体表面展示
的随机多肽与之结合遥 第 圆 轮筛选时靶分子由 员园
滋早降为 缘 滋早袁使之有利于筛选到高亲和力的结合肽
渊表 员冤遥 从第 圆 轮开始噬菌体得率逐渐增大袁经过
筛选的噬菌体三尧四级文库容量较起始文库分别富
集了 猿园园 和 愿猿缘 倍遥 从第 源 轮产物中选取 源源 个噬
菌体单克隆袁并以野生型噬菌体作为对照袁将其调整
到同一滴度后进行 耘蕴陨杂粤检测袁发现有 圆源 个噬菌体
单克隆平均 孕 辕 晕值大于 猿郾 园袁能与 阅韵晕人工抗原高
亲和力结合袁其中有 员缘 个噬菌体单克隆平均 孕 辕 晕
值大于 猿郾 愿渊表 圆冤遥
圆郾 猿 特异性多肽的序列分析
从筛选得到的 员缘 个单克隆噬菌体中选择 员园 个
特异性较强的进行核苷酸序列测定袁结果表明袁员尧圆尧
缘尧员员尧员圆尧员源尧员缘 号这 苑 个噬菌体展示的多肽氨基酸
序列一致袁均为 酝粤孕郧宰灾孕袁而 源尧愿尧员园 号噬菌体的
多肽氨基酸序列分别为 宰宰匝阅再酝再尧粤孕栽孕栽砸灾 和
酝运孕杂孕砸孕袁各条肽段没有同源性遥
远怨员 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源圆 卷
图 员 薄层分析检测 阅韵晕人工抗原的合成结果
云蚤早援 员 酝燥灶蚤贼燥则蚤灶早 燥枣 贼澡藻 泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 燥枣 葬则贼蚤枣蚤糟蚤葬造 葬灶贼蚤早藻灶 猿鄄匀郧鄄阅韵晕鄄月月粤 怎泽蚤灶早 贼澡蚤灶 造葬赠藻则 糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠
员袁 源院 月月粤鄄阅韵晕曰 圆袁 猿袁 苑院 阅韵晕曰 缘院 月月粤鄄阅韵晕鄄匀郧曰 远院 猿匀郧鄄阅韵晕援
摇
表 员 噬菌体的 源 轮选择性筛选富集结果
栽葬遭造藻 员 耘灶则蚤糟澡皂藻灶贼 燥枣 泽藻造藻糟贼藻凿 责澡葬早藻 蚤灶 枣燥怎则 则燥怎灶凿泽 燥枣 遭蚤燥责葬灶蚤灶早
筛选轮数
砸燥怎灶凿
人工抗原投入量
阅韵晕鄄匀郧鄄月杂粤 渊滋早冤
噬菌体投入总量渊孕云哉冤
孕澡葬早藻 蚤灶责怎贼
噬菌体产出总量渊孕云哉冤
孕澡葬早藻 燥怎贼责怎贼
产出 辕投入
韵怎贼责怎贼 辕 陨灶责怎贼
员 员园郾 园园 员郾 缘园 伊 员园员员 猿郾 园园 伊 员园缘 圆郾 园园 伊 员园 原远
圆 缘郾 园园 源郾 猿园 伊 员园员员 源郾 园圆 伊 员园远 怨郾 猿园 伊 员园 原远
猿 缘郾 园园 员郾 缘园 伊 员园员园 怨郾 园园 伊 员园远 远郾 园园 伊 员园 原源
源 圆郾 缘园 猿郾 远园 伊 员园员园 远郾 缘园 伊 员园苑 员郾 远苑 伊 员园 原猿
表 圆 高亲合力结合 阅韵晕的噬菌体酶联免疫吸附检测结果
栽葬遭造藻 圆 耘灶扎赠皂藻鄄造蚤灶噪藻凿 蚤皂皂怎灶燥泽燥则遭藻灶贼 葬泽泽葬赠 渊耘蕴陨杂粤冤 燥枣 责澡葬早藻泽 憎蚤贼澡 澡蚤早澡 葬枣枣蚤灶蚤贼赠 贼燥 阅韵晕
克隆编号
悦造燥灶藻 晕燥援
阅韵晕人工抗原包被孔 韵阅源怨圆值韵阅源怨圆 燥枣 糟燥葬贼藻凿 葬灶贼蚤早藻灶 燥枣 阅韵晕
渊孕冤 渊 伊 员园 原员冤
月杂粤包被孔 韵阅源怨圆值韵阅源怨圆 燥枣 糟燥葬贼藻凿 月杂粤
渊晕冤 渊 伊员园 原员冤
孕 辕 晕值
孕 辕 晕 增葬造怎藻
员 缘郾 远园 依 园郾 园圆 员郾 圆猿 依 园郾 园员 源郾 缘缘 依 园郾 园缘 凿藻枣
圆 缘郾 远苑 依 园郾 园员 员郾 圆远 依 园郾 园圆 源郾 缘员 依 园郾 园源 凿藻枣
猿 员员郾 园圆 依 园郾 园圆 圆郾 缘怨 依 园郾 园圆 源郾 圆远 依 园郾 园猿 糟
源 缘郾 缘缘 依 园郾 园员 员郾 圆远 依 园郾 园圆 源郾 源圆 依 园郾 园源 糟凿藻
缘 远郾 猿源 依 园郾 园猿 员郾 猿缘 依 园郾 园圆 源郾 远怨 依 园郾 园缘 枣早
远 远郾 猿缘 依 园郾 园圆 员郾 远远 依 园郾 园员 猿郾 愿圆 依 园郾 园员 遭
苑 远郾 源苑 依 园郾 园圆 员郾 缘猿 依 园郾 园圆 源郾 圆猿 依 园郾 园源 糟
愿 缘郾 苑源 依 园郾 园圆 员郾 圆缘 依 园郾 园员 源郾 缘怨 依 园郾 园圆 藻枣早
怨 愿郾 源员 依 园郾 园圆 圆郾 员园 依 园郾 园员 源郾 园员 依 园郾 园源 遭
员园 缘郾 怨猿 依 园郾 园圆 员郾 猿苑 依 园郾 园员 源郾 猿源 依 园郾 园猿 糟凿
员员 远郾 怨圆 依 园郾 园圆 员郾 缘愿 依 园郾 园圆 源郾 猿怨 依 园郾 园猿 糟凿藻
员圆 苑郾 苑远 依 园郾 园圆 员郾 远猿 依 园郾 园员 源郾 苑愿 依 园郾 园猿 早
员猿 远郾 源猿 依 园郾 园猿 员郾 远圆 依 园郾 园员 猿郾 怨愿 依 园郾 园远 遭
员源 远郾 猿猿 依 园郾 园猿 园郾 愿远 依 园郾 园圆 苑郾 猿远 依 园郾 圆员 陨
员缘 远郾 远远 依 园郾 园圆 员郾 圆猿 依 园郾 园圆 缘郾 源员 依 园郾 员员 澡
悦运 员郾 愿圆 依 园郾 园圆 员郾 圆远 依 园郾 园员 员郾 源源 依 园郾 园缘 葬
摇 摇 表中数据为平均数 依标准差遥 不同字母表示经 阅怎灶糟葬灶氏新复极差法检验在 孕 约 园郾 园缘水平差异显著遥 阅葬贼葬 蚤灶 贼澡藻 贼葬遭造藻 葬则藻 皂藻葬灶 依
杂阅援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 孕 约 园郾 园缘 造藻增藻造 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽 灶藻憎 皂怎造贼蚤责造藻 则葬灶早藻 贼藻泽贼援
苑怨员圆 期 邢锦城等院 运用噬菌体随机肽库筛选与 阅韵晕毒素特异结合的亲和肽段
圆郾 源 测序肽段的亲和特异性验证
选择编码不同多肽的 源尧愿尧员园尧员缘 号噬菌体扩增
纯化后袁调整滴度至 员郾 园 伊 员园员园 孕云哉 辕 皂蕴袁进行抗原
包被浓度梯度检测遥 结果表明袁愿尧员园 和 员缘 号噬菌
体吸光度随抗原包被浓度的增加而增大袁愿 号噬菌
体的吸光值为 园郾 圆愿 耀 园郾 缘愿袁变化幅度仅为 园郾 猿园袁而
员缘 号噬菌体的吸光值为 园郾 源怨 耀 员郾 源猿袁变化幅度为
园郾 怨猿袁表明该噬菌体对抗原浓度变化的反应灵敏度
较高遥 愿尧员园 和 员缘 号噬菌体的吸光值与抗原包被浓
度对数值的相关系数分别为 园郾 怨猿尧园郾 怨愿 和 园郾 怨怨袁均
超过 园郾 怨园袁其中 员缘 号噬菌体的吸光值与抗原包被
浓度对数值的相关性达到极显著水平袁表明该噬菌
体对抗原的亲和力最强渊图 圆冤遥 源 号噬菌体吸光度
和抗原浓度梯度相关系数仅为 原 园郾 猿员袁属于未被淘
汰的非特异性噬菌体遥
图 圆 抗原浓度梯度条件下噬菌体酶联免疫吸附检测结果
云蚤早援 圆 耘灶扎赠皂藻鄄造蚤灶噪藻凿 蚤皂皂怎灶燥泽燥则遭藻灶贼 葬泽泽葬赠 渊耘蕴陨杂粤冤 燥枣 责澡葬早藻 葬枣枣蚤灶蚤贼赠 贼燥 葬灶贼蚤早藻灶 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 早则葬凿蚤藻灶贼
摇
猿 讨论
阅韵晕抗原的成功包被是噬菌体固相筛选成功
的重要前提袁也是用 耘蕴陨杂粤 方法检测克隆的基础
渊郧藻藻则造蚤早泽 藻贼 葬造援 袁员怨愿愿冤遥 阅韵晕 的分子量较小袁不易
被包被在酶标板上遥 在澡葬灶早 藻贼 葬造援 渊员怨愿远冤通过乙酰
化袁合成了带 猿 个乙酰基的 阅韵晕 渊栽则蚤鄄粤糟鄄阅韵晕冤并制
备出特异性抗血清袁建立了 栽则蚤鄄粤糟鄄阅韵晕 的放射免疫
测定法渊则葬凿蚤燥 蚤皂皂怎灶藻 葬泽泽葬赠袁砸陨粤冤和 耘蕴陨杂粤 测定法袁
但测定过程繁琐尧准确性差遥 悦葬泽葬造藻 藻贼 葬造援 渊员怨愿愿冤用
丁基硼酸封闭 悦苑 和 悦员缘 位上的羟基袁将 悦猿 位上的
羟基羧基化后与载体蛋白进行共价结合袁解封闭后
合成 阅韵晕人工抗原袁进而制备出抗 阅韵晕 的单克隆
抗体遥 酝蚤造造泽 藻贼 葬造援 渊员怨怨园冤利用 猿鄄粤糟鄄阅韵晕 制备得到
抗原 阅韵晕鄄匀郧鄄月杂粤袁再制备出抗 阅韵晕 的单克隆抗
体遥 本研究根据噬菌体固相筛选试验的实际需要袁
参照 悦葬泽葬造藻 藻贼 葬造援 渊员怨愿愿冤的合成方法并加以改进袁用
戊二酸酐同 悦猿 上的羟基发生酯化反应袁进而同
月杂粤偶联合成抗原遥 整个过程在常温下进行袁避免
了 阅韵晕在高温条件下氧化产生副产物遥
常用的封闭试剂有牛血清白蛋白尧脱脂奶粉尧酪
蛋白尧孕耘郧等袁脱脂奶粉价格便宜袁封闭效果好袁但
颗粒大袁易造成空间位阻袁不利于噬菌体抗体与小分
子抗原结合袁影响吸附效率渊赵慧斌袁圆园园源冤袁且可能
与抗原结合而产生较高的背景信号渊宰燥燥 藻贼 葬造援 袁
圆园员员冤遥 本研究在噬菌体筛选步骤中采用 月杂粤对已
包被好 阅韵晕人工抗原的固相载体进行封闭袁以提高
酝员猿 噬菌体的吸附能力袁在 耘蕴陨杂粤 检测时使用了
员豫明胶封闭袁以排除对封闭蛋白质有较强亲和力的
假阳性噬菌体曰在筛选过程中袁先将噬菌体与相应浓
度的 月杂粤分子反应袁然后再加入至已包被 阅韵晕 人
工抗原的载体袁使上一轮同 月杂粤特异结合的噬菌体
被 月杂粤分子吸附袁从而降低了筛选过程中非特异性
噬菌体的富集袁提高了 耘蕴陨杂粤 的阳性检出率遥 本研
究经过 源 轮筛选袁产出 辕投入比从 员园 原远提高到 员园 原猿
量级袁最后得到 圆源 个噬菌体阳性克隆能与 阅韵晕 人
工抗原特异结合袁经抗原浓度梯度测试其中 员 个噬
菌体与 阅韵晕有较强的结合力袁表明针对 阅韵晕 进行
肽库筛选这一方法是可行的遥
针对真菌毒素 在耘晕袁再怎葬灶 藻贼 葬造援 渊员怨怨苑冤克隆了
单链抗体 云增 阅晕粤 片段袁并与噬菌体外膜蛋白融合
表达袁利用噬菌体展示技术袁制备了抗 在耘晕 毒素抗
体 杂糟云增匝再 员郾 缘曰庄振宏等渊圆园园怨冤也制备了抗黄曲霉
毒素 月员 杂糟云增抗体遥 本研究通过受体与配体结合的
愿怨员 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源圆 卷
特性袁从噬菌体随机 苑 肽库中筛选与 阅韵晕人工抗原
特异性结合的噬菌体 苑 肽袁其中 愿尧员园 和 员缘 号噬菌
体展示的 粤孕栽孕栽砸灾尧酝运孕杂孕砸孕 和 酝粤孕郧宰灾孕 肽段
均与 阅韵晕人工抗原特异性结合袁说明所筛选出的多
肽与抗体意义相同遥 员缘 号噬菌体吸光值与抗原包
被浓度对数值的相关系数达 园郾 怨怨袁表明该噬菌体对
抗原的亲和力最强遥 员园 号噬菌体展示的 苑 肽中第 员
位的甲硫氨酸尧第 猿 位和第 苑 位的脯氨酸均与 员缘 号
噬菌体相同袁且该噬菌体吸光值与抗原包被浓度对
数值的相关系数也已达到 园郾 怨愿袁说明这 猿 个氨基酸
有可能是与 阅韵晕人工抗原结合的关键位点遥
噬菌体展示技术简化了人工抗体的制备流程袁
为抗体工程带来了巨大的便利遥 本研究在合成
阅韵晕人工抗原的基础上袁利用噬菌体肽库筛选到与
阅韵晕特异结合的短肽遥 对该肽段加以合成袁将能够
提高肽段在包被孔中的有效浓度袁替代 耘蕴陨杂粤 检测
中的 阅韵晕免疫抗体袁简化 阅韵晕毒素检测流程袁提高
检测效率遥 邓舜洲等渊圆园园远冤从噬菌体随机七肽库
中筛选到 阅韵晕的模拟表位袁以替代 阅韵晕 人工抗原
建立无毒的 阅韵晕 检测方法遥 本研究筛选到了替代
耘蕴陨杂粤检测中的 阅韵晕免疫抗体的肽段袁如果能够同
邓舜洲等渊圆园园远冤建立的检测方法相结合袁将建立起
一种全新的尧无毒的尧高效的 阅韵晕毒素检测技术遥
参 考 文 献 渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
月葬蚤 郧匀袁 杂澡葬灶藻则 郧援 圆园园源援 酝葬灶葬早藻皂藻灶贼 葬灶凿 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 蚤灶 憎澡藻葬贼 葬灶凿
遭葬则造藻赠 贼燥 云怎泽葬则蚤怎皂 澡藻葬凿 遭造蚤早澡贼援 粤灶灶怎葬造 砸藻增蚤藻憎 燥枣 孕澡赠贼燥责葬贼澡燥造燥鄄
早赠袁 源圆院 员猿缘 原 员远员
月怎藻则泽贼皂葬赠则 匀袁 月葬灶 栽袁 粤灶凿藻则泽燥灶 允粤援 圆园园怨援 匝栽蕴 皂葬责责蚤灶早 葬灶凿
皂葬则噪藻则鄄葬泽泽蚤泽贼藻凿 泽藻造藻糟贼蚤燥灶 枣燥则 云怎泽葬则蚤怎皂 澡藻葬凿 遭造蚤早澡贼 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 蚤灶
憎澡藻葬贼院 葬 则藻增蚤藻憎援 孕造葬灶贼 月则藻藻凿蚤灶早袁 员圆愿渊员冤院 员 原 圆远
悦葬泽葬造藻 宰蕴袁 孕藻泽贼噪葬 允允袁 匀葬则贼 蕴孕援 员怨愿愿援 耘灶扎赠皂藻鄄造蚤灶噪藻凿 蚤皂皂怎灶燥泽燥则鄄
遭藻灶贼 葬泽泽葬赠 藻皂责造燥赠蚤灶早 皂燥灶燥糟造燥灶葬造 葬灶贼蚤遭燥凿赠 泽责藻糟蚤枣蚤糟 枣燥则 凿藻燥曾赠灶蚤鄄
增葬造藻灶燥造 渊增燥皂蚤贼燥曾蚤灶冤 葬灶凿 泽藻增藻则葬造 葬灶葬造燥早怎藻泽援 允燥怎则灶葬造 燥枣 粤早则蚤糟怎造鄄
贼怎则葬造 葬灶凿 云燥燥凿 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁 猿远院 远远猿 原 远远愿
阅藻灶早 杂在袁 再燥怎 杂在袁 载怎 再援 圆园园苑援 孕则藻责葬则葬贼蚤燥灶 燥枣 葬则贼蚤枣蚤糟蚤葬造 葬灶贼蚤早藻灶 燥枣
皂赠糟燥贼燥曾蚤灶 凿藻燥曾赠灶蚤增葬造藻灶燥造援 云燥燥凿 杂糟蚤藻灶糟藻袁 圆愿 渊圆冤院 员源怨 原 员缘圆
渊蚤灶 悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱邓舜洲袁游淑珠袁许杨援 圆园园苑援 脱氧雪腐镰刀
菌烯醇人工抗原的研制援 食品科学袁 圆愿渊圆冤院 员源怨 原 员缘圆暂
阅藻灶早 杂在袁 再怎 在袁 再燥怎 杂在袁 载怎 再援 圆园园远援 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬灶凿 葬责责造蚤糟葬鄄
贼蚤燥灶 燥枣 苑 责藻责贼蚤凿藻 皂蚤皂蚤贼燥责藻 憎澡蚤糟澡 遭蚤灶凿藻凿 贼燥 皂燥灶燥糟造燥灶葬造 葬灶贼蚤遭燥凿赠
燥枣 葬灶贼蚤鄄凿藻燥曾赠灶蚤增葬造藻灶燥造援 悦澡蚤灶藻泽藻 允燥怎则灶葬造 燥枣 孕怎遭造蚤糟 匀藻葬造贼澡袁 圆圆
渊员园冤院 员圆园缘 原 员圆园远 渊 蚤灶 悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱邓舜洲袁 余宙袁 游淑珠袁
许杨援 圆园园远援 脱氧雪腐镰刀菌烯醇七肽模拟表位淘选及应
用援 中国公共卫生袁 圆圆渊员园冤院 员圆园缘 原 员圆园远暂
郧藻藻则造蚤早泽 匀允袁 宰藻蚤躁藻则 宰允袁 月造燥藻皂澡燥枣枣 宰袁 宰藻造造蚤灶早 郧宰袁 宰藻造造蚤灶早鄄
宰藻泽贼藻则 杂援 员怨愿愿援 栽澡藻 蚤灶枣造怎藻灶糟藻 燥枣 责匀 葬灶凿 蚤燥灶蚤糟 泽贼则藻灶早贼澡 燥灶 贼澡藻
糟燥葬贼蚤灶早 燥枣 责藻责贼蚤凿藻泽 燥枣 澡藻则责藻泽 泽蚤皂责造藻曾 增蚤则怎泽 贼赠责藻 员 蚤灶 葬灶 藻灶扎赠皂藻鄄
造蚤灶噪藻凿 蚤皂皂怎灶燥泽燥则遭藻灶贼 葬泽泽葬赠援 允燥怎则灶葬造 燥枣 陨皂皂怎灶燥造燥早蚤糟葬造 酝藻贼澡鄄
燥凿泽袁 员园远渊圆冤院 圆猿怨 原 圆源源
匀藻 匝匀袁 蕴蚤怎 砸砸袁 载怎 再援 圆园园苑援 月蚤燥责葬灶灶蚤灶早 燥枣 扎藻葬则葬造藻灶燥灶藻 皂蚤皂燥贼燥责藻
遭赠 责澡葬早藻 凿蚤泽责造葬赠藻凿 责则责贼蚤凿藻 遭葬灶噪援 云燥燥凿 杂糟蚤藻灶糟藻袁 圆愿渊愿冤院 圆源员 原
圆源猿 渊蚤灶 悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱何庆华袁 刘仁荣袁 许杨援 圆园园苑援 利用噬菌
体肽库淘选玉米赤霉烯酮的模拟表位援 食品科学袁 圆愿渊愿冤院
圆源员 原 圆源猿暂
匀怎葬灶早 在月袁 再燥怎 杂在袁 阅藻灶早 杂在袁 载怎 再援 圆园园苑援 阅藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 凿藻鄄
燥曾赠灶蚤增葬造藻灶燥造 蚤灶 憎澡藻葬贼 葬灶凿 糟燥则灶泽 遭赠 糟葬责蚤造造葬则赠 早葬泽 糟澡则燥皂葬贼燥早则葬鄄
责澡赠援 云燥燥凿 杂糟蚤藻灶糟藻袁 圆愿渊源冤院 圆源员 原 圆源缘 渊 蚤灶 悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱黄志
兵袁 游淑珠袁 邓舜洲袁 许杨援 圆园园苑援 毛细管气相色谱法测定
小麦和玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇援 食品科学袁 圆愿渊源冤院
圆源员 原 圆源缘暂
允蚤 云袁 悦澡藻灶 在载袁 载怎 允匀袁 蕴怎 匝载袁 杂澡蚤 允砸援 圆园园愿援 阅藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣 贼澡藻
皂燥灶燥糟造燥灶葬造 葬灶贼蚤遭燥凿赠 贼燥 凿藻燥曾赠灶蚤增葬造藻灶燥造援 粤糟贼葬 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早蚤糟葬
杂蚤灶蚤糟葬袁 源愿渊苑冤院 怨圆怨 原 怨猿源 渊 蚤灶 悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱祭芳袁 陈正贤袁 徐
剑宏袁 陆琼娴袁 史建荣援 圆园园愿援 抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克
隆抗体的制备援 微生物学报袁 源愿渊苑冤院 怨圆怨 原 怨猿源暂
允蚤灶 孕袁 杂怎灶 载蕴袁 在澡葬灶早 再在援 圆园员员援 孕则藻责葬则葬贼蚤燥灶 燥枣 藻灶扎赠皂藻鄄造葬遭造藻凿 葬灶贼蚤鄄
早藻灶 葬灶凿 葬灶贼蚤泽藻则怎皂 枣燥则 凿藻燥曾赠灶蚤增葬造藻灶燥造 渊增燥皂蚤贼蚤灶早 贼燥曾蚤灶冤援 杂糟蚤藻灶糟藻
葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠 燥枣 云燥燥凿 陨灶凿怎泽贼则赠袁 猿圆渊缘冤院 员怨猿 原 员怨远 渊 蚤灶 悦澡蚤鄄
灶藻泽藻冤 咱金萍袁 孙秀兰袁 张银志援 圆园员员援 脱氧雪腐镰刀烯醇
渊呕吐毒素冤酶标抗原的合成及免疫抗体的制备援 食品工业
科技袁 猿圆渊缘冤院 员怨猿 原 员怨远暂
运葬赠 月运袁 运葬泽葬灶燥增 允袁 再葬皂葬遭澡葬蚤 酝援 圆园园员援 杂糟则藻藻灶蚤灶早 责澡葬早藻鄄凿蚤泽鄄
责造葬赠藻凿 糟燥皂遭蚤灶葬贼燥则蚤葬造 责藻责贼蚤凿藻 造蚤遭则葬则蚤藻泽援 酝藻贼澡燥凿泽袁 圆源 渊 猿 冤院
圆源园 原 圆源远
酝葬 匀载袁 再葬燥 允月袁 在澡燥怎 酝孕袁 在澡葬灶早 载袁 砸藻灶 蕴允袁 再怎 郧匀袁 蕴怎 宰在援
圆园园愿援 酝燥造藻糟怎造葬则 遭则藻藻凿蚤灶早 枣燥则 憎澡藻葬贼 云怎泽葬则蚤怎皂 澡藻葬凿 遭造蚤早澡贼 则藻泽蚤泽贼鄄
葬灶糟藻 蚤灶 悦澡蚤灶葬援 悦藻则藻葬造 砸藻泽藻葬则糟澡 悦燥皂皂怎灶蚤糟葬贼蚤燥灶泽袁 猿远 渊 杂远 冤院
圆园猿 原 圆员圆
酝葬贼藻燥 允允袁 蕴造燥则藻灶泽 粤袁 酝葬贼藻燥 砸袁 允蚤皂佴灶藻扎 酝援 圆园园员援 悦则蚤贼蚤糟葬造 泽贼怎凿赠 燥枣
葬灶凿 蚤皂责则燥增藻皂藻灶贼泽 蚤灶 糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡蚤糟 皂藻贼澡燥凿泽 枣燥则 贼澡藻 葬灶葬造赠泽蚤泽
燥枣 贼赠责藻 月 贼则蚤糟澡燥贼澡藻糟藻灶藻泽援 允燥怎则灶葬造 燥枣 悦澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠 粤袁 怨员愿
渊员冤院 怨怨 原 员员圆
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造蚤灶噪藻凿 蚤皂皂怎灶燥泽燥则遭藻灶贼 葬泽泽葬赠 枣燥则 凿藻燥曾赠灶蚤增葬造藻灶燥造 蚤灶 憎澡藻葬贼袁 怎贼蚤造蚤鄄
扎蚤灶早 灶燥增藻造 澡葬责贼藻灶 凿藻则蚤增葬贼蚤扎葬贼蚤燥灶 责则燥糟藻凿怎则藻泽援 云燥燥凿 葬灶凿 粤早则蚤糟怎造鄄
贼怎则葬造 陨皂皂怎灶燥造燥早赠袁 圆渊猿冤院 员园怨 原 员员愿
酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 匀藻葬造贼澡 燥枣 贼澡藻 孕藻燥责造藻爷泽 砸藻责怎遭造蚤糟 燥枣 悦澡蚤灶葬援 晕葬贼蚤燥灶葬造 枣燥燥凿
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圆园员员 原 园源 原 圆园 渊蚤灶 悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱中华人民共和国卫生部援 食品
安全国家标准食品中真菌毒素限量援 郧月圆苑远员鄄圆园员员郾 圆园员员 原
园源 原 圆园暂
酝燥泽燥泽遭葬 酝酝袁 粤凿葬皂泽 杂袁 砸燥葬糟澡 允粤袁 栽则怎糟噪泽藻泽泽 酝宰援 员怨怨远援 粤灶葬造赠泽蚤泽
燥枣 贼则蚤糟澡燥贼澡藻糟藻灶藻 皂赠糟燥贼燥曾蚤灶泽 蚤灶 糟燥灶贼葬皂蚤灶葬贼藻凿 早则葬灶蚤泽 遭赠 早葬泽 糟澡则燥鄄
皂葬贼燥早则葬责澡赠 辕 皂葬贼则蚤曾 蚤泽燥造葬贼蚤燥灶 辕 枣燥怎则蚤藻则 贼则葬灶泽枣燥则皂 蚤灶枣则葬则藻凿 泽责藻糟贼则燥泽鄄
糟燥责赠 葬灶凿 早葬泽 糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠 辕 皂葬泽泽 泽责藻糟贼则燥皂藻贼则赠援 允燥怎则灶葬造 燥枣
粤韵粤悦 陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造袁 苑怨渊缘冤院 员员员远 原 员员圆猿
怨怨员圆 期 邢锦城等院 运用噬菌体随机肽库筛选与 阅韵晕毒素特异结合的亲和肽段
孕藻则澡葬皂 砸晕袁 栽藻则则赠 栽阅袁 宰蚤造造蚤泽 粤耘袁 郧则藻藻灶憎燥燥凿 允袁 凿蚤 酝葬则扎燥 灾藻则燥灶藻泽藻
云袁 粤责责藻造造葬 耘援 员怨怨缘援 耘灶早蚤灶藻藻则蚤灶早 葬 责藻责贼蚤凿藻 藻责蚤贼燥责藻 凿蚤泽责造葬赠 泽赠泽鄄
贼藻皂 燥灶 枣蚤造葬皂藻灶贼燥怎泽 遭葬糟贼藻则蚤燥责澡葬早藻援 云耘酝杂 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠 砸藻鄄
增蚤藻憎泽袁 员苑渊员 辕 圆冤院 圆缘 原 猿员
杂糟澡灶藻蚤凿藻则 蕴袁 孕蚤糟澡造藻则 匀袁 运则泽噪葬 砸援 圆园园园援 粤灶 藻灶扎赠皂藻 造蚤灶噪藻凿 蚤皂皂怎鄄
灶燥葬泽泽赠 枣燥则 贼澡藻 凿藻贼藻则皂灶蚤葬贼蚤燥灶 燥枣 凿藻燥曾赠灶蚤增葬造藻灶燥造 蚤灶 憎澡藻葬贼 遭葬泽藻凿 燥灶
糟澡蚤糟噪藻灶 藻早早 赠燥造噪 葬灶贼蚤遭燥凿蚤藻泽援 云则藻泽藻灶蚤怎泽 允燥怎则灶葬造 燥枣 粤灶葬造赠贼蚤糟葬造
悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁 猿远苑院 怨愿 原 员园园
杂皂蚤贼澡 郧孕援 员怨愿缘援 云蚤造葬皂藻灶贼燥怎泽 枣怎泽蚤燥灶 责澡葬早藻院 灶燥增藻造 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则泽
贼澡葬贼 凿蚤泽责造葬赠 糟造燥灶藻凿 葬灶贼蚤早藻灶泽 燥灶 贼澡藻 增蚤则蚤燥灶 泽怎则葬枣糟藻援 杂糟蚤藻灶糟藻袁 圆圆愿
渊源苑园缘冤院 员猿员缘 原 员猿员苑
杂怎灶 酝再袁 在澡葬灶早 蕴袁 蕴蚤 再援 圆园园怨援 砸藻泽藻葬则糟澡 责则燥早则藻泽泽 燥灶 责澡葬早藻 凿蚤泽责造葬赠
贼藻糟澡灶燥造燥早赠援 允燥怎则灶葬造 燥枣 允蚤造蚤灶 酝藻凿蚤糟葬造 悦燥造造藻早藻袁 猿园渊圆冤院 怨苑 原 怨怨
渊蚤灶 悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱孙美艳袁张磊袁李艳援 圆园园怨援 噬菌体展示技术
的研究进展援 吉林医药学院学报袁 猿园渊圆冤院 怨苑 原 怨怨暂
栽则怎糟噪泽藻泽泽 酝宰袁 孕葬早藻 杂宰袁 宰燥燥凿 郧耘袁 悦澡燥 栽匀援 员怨怨愿援 阅藻贼藻则皂蚤灶葬鄄
贼蚤燥灶 燥枣 凿藻燥曾灶赠增蚤葬造藻灶燥造 蚤灶 憎澡蚤贼藻 枣造燥怎则袁 憎澡燥藻造 憎澡藻葬贼 枣造燥怎则袁 葬灶凿
遭则葬灶 遭赠 泽燥造蚤凿鄄责澡葬泽藻 藻曾则贼葬糟贼蚤燥灶 辕 造蚤择怎蚤凿 糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠院 蚤灶贼藻则造葬遭鄄
燥则葬贼燥则赠 泽贼怎凿赠援 允燥怎则灶葬造 燥枣 粤韵粤悦 陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造袁 愿员 渊 源 冤院
愿愿园 原 愿愿远
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韵责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 责澡葬早藻鄄蚤皂皂燥遭蚤造蚤扎藻凿 耘蕴陨杂粤 枣燥则 葬怎贼燥葬灶贼蚤遭燥凿赠 责则燥鄄
枣蚤造蚤灶早 蚤灶 澡怎皂葬灶 泽藻则葬援 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠 蕴藻贼贼藻则泽袁 猿猿渊源冤院 远缘缘 原 远远员
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源 云怎泽葬则蚤怎皂 皂赠糟燥贼燥曾蚤灶泽 怎泽蚤灶早 藻灶扎赠皂藻鄄造蚤灶噪藻凿 蚤皂皂怎灶燥泽燥则遭藻灶贼 葬泽鄄
泽葬赠 葬灶凿 蚤贼泽 糟燥灶贼葬皂蚤灶葬贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 蚤灶 憎澡藻葬贼援 允燥怎则灶葬造 燥枣 孕造葬灶贼
孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 猿远渊圆冤院 员园远 原 员员圆 渊蚤灶 悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱吴杰袁 刘太国袁
高利袁 朱宝成袁 陈万权援 圆园园怨援 小麦四种镰刀菌毒素的
耘蕴陨杂粤检测及毒素污染分析援 植物保护学报袁 猿远渊圆冤院 员园远 原
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宰怎 载砸袁 再蚤灶 宰杂袁 在澡葬灶早 再阅援 员怨怨园援 阅藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 凿藻燥曾赠灶蚤鄄
增葬造藻灶燥造 蚤灶 枣藻藻凿 遭赠 贼澡蚤灶鄄造葬赠藻则 糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠援 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠 悦澡蚤鄄
灶葬袁 员苑渊圆冤院 员员远 原 员员怨 渊蚤灶 悦澡蚤灶藻泽藻冤 咱吴小荣袁 殷蔚申袁 张耀
东援 员怨怨园援 饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的薄层层析测定法援
微生物学通报袁 员苑渊圆冤院 员员远 原 员员怨暂
载蚤葬燥 允袁 载蚤灶 再袁 云藻灶早 杂袁 蕴怎葬灶 载郧袁 蕴蚤 云匝袁 在澡葬燥 蕴援 圆园员猿援 阅藻贼藻则皂蚤鄄
灶葬贼蚤燥灶 燥枣 凿藻燥曾赠灶蚤增葬造藻灶燥造 蚤灶 憎澡藻葬贼 遭赠 藻灶扎赠皂藻鄄造蚤灶噪藻凿 蚤皂皂怎灶燥泽燥则鄄
遭藻灶贼 葬泽泽葬赠援 允燥怎则灶葬造 燥枣 云燥燥凿 杂葬枣藻贼赠 葬灶凿 匝怎葬造蚤贼赠袁 源渊员冤院 圆圆源 原
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