全 文 ：萝卜软腐病生防菌株 匀赠员员的筛选尧
鉴定及定殖特性
杨瑞先员袁 圆 摇 宋美仙员 摇 邱思鑫猿 摇 胡方平员鄢
渊员援福建农林大学植物保护学院袁 福州 猿缘园园园圆曰 圆援洛阳理工学院环境工程与化学系袁
洛阳 源苑员园圆猿曰 猿援福建省农业科学院作物研究所袁 福州 猿缘园园员猿冤
摘要院 为探讨银杏内生细菌对萝卜软腐病的防病作用袁通过块根接种和温室盆栽试验筛选对萝卜
软腐菌 孕藻糟贼燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 糟葬则燥贼燥增燥则怎皂 泽怎遭泽责援 糟葬则燥贼燥增燥则怎皂具有高效抑制作用的生防菌株袁 共获得 愿 株拮
抗作用较强的内生细菌袁其中菌株 匀赠员员 抑菌作用明显遥 对生防菌株 匀赠员员 进行了形态观察尧生理
生化特性测定尧员远杂 则阅晕粤和 早赠则月基因序列分析袁并应用绿色荧光蛋白基因标记菌株 匀赠员员袁研究该
菌株在萝卜体内的定殖动态遥 结果显示袁该菌株对萝卜软腐病具有较好的防效袁对萝卜块根和幼苗
的防治效果分别为 苑苑援 怨豫和 远远援 苑豫 曰对萝卜幼苗的促生率达 员员猿援 圆愿豫 遥 经鉴定袁菌株 匀赠员员 为解
淀粉芽胞杆菌 月葬糟蚤造造怎泽 葬皂赠造燥造蚤择怎藻枣葬糟蚤藻灶泽遥 标记菌株 匀赠员员鄄早枣责在喷雾接种银杏叶片后 园 耀 猿 凿种群数
量呈急剧下降趋势袁员园 凿后保持相对稳定曰其在萝卜的根尧茎和叶中均能够定殖袁在根中的定殖数量
最高可达 员援 圆 伊 员园源 悦云哉 辕 早遥
关键词院 萝卜软腐病曰 内生细菌曰 生物防治曰 鉴定曰 定殖
杂糟则藻藻灶蚤灶早袁 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 遭蚤燥糟燥灶贼则燥造 遭葬糟贼藻则蚤葬造 泽贼则葬蚤灶 匀赠员员 葬早葬蚤灶泽贼 憎澡蚤贼藻
则葬凿蚤泽澡 泽燥枣贼 则燥贼 葬灶凿 蚤贼泽 糟燥造燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽
再葬灶早 砸怎蚤曾蚤葬灶员袁 圆 摇 杂燥灶早 酝藻蚤曾蚤葬灶员 摇 匝蚤怎 杂蚤曾蚤灶猿 摇 匀怎 云葬灶早责蚤灶早员鄢
渊员援 悦燥造造藻早藻 燥枣 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 云怎躁蚤葬灶 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻 葬灶凿 云燥则藻泽贼则赠 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 云怎扎澡燥怎 猿缘园园园圆袁 云怎躁蚤葬灶 孕则燥增蚤灶糟藻袁
悦澡蚤灶葬曰 圆援 阅藻责葬则贼皂藻灶贼 燥枣 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造 耘灶早蚤灶藻藻则蚤灶早 葬灶凿 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁 蕴怎燥赠葬灶早 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿
栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 蕴怎燥赠葬灶早 源苑员园圆猿袁 匀藻灶葬灶 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬曰 猿援 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 悦则燥责 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 云怎躁蚤葬灶
粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 云怎扎澡燥怎 猿缘园园员猿袁 云怎躁蚤葬灶 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 陨灶 燥则凿藻则 贼燥 泽贼怎凿赠 贼澡藻 遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 糟燥灶贼则燥造 藻枣枣蚤糟葬糟赠 燥枣 贼澡藻 藻灶凿燥责澡赠贼蚤糟 遭葬糟贼藻则蚤葬造 泽贼则葬蚤灶泽 蚤泽燥造葬贼藻凿 枣则燥皂
郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 造藻葬增藻泽 葬早葬蚤灶泽贼 孕藻糟贼燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 糟葬则燥贼燥增燥则怎皂 泽怎遭泽责援 糟葬则燥贼燥增燥则怎皂袁 贼澡藻 糟燥灶贼则燥造 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠 燥枣 藻灶鄄
凿燥责澡赠贼蚤糟 遭葬糟贼藻则蚤葬 憎葬泽 泽糟则藻藻灶藻凿 怎泽蚤灶早 贼澡藻 贼怎遭藻则 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 责燥贼 藻曾责藻则皂蚤藻灶贼 蚤灶 早则藻藻灶 澡燥怎泽藻援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽
则藻增藻葬造藻凿 贼澡葬贼 愿 遭葬糟贼藻则蚤葬造 蚤泽燥造葬贼藻泽 泽澡燥憎藻凿 泽贼则燥灶早 蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则赠 葬糟贼蚤增蚤贼赠袁 葬皂燥灶早 憎澡蚤糟澡 泽贼则葬蚤灶 匀赠员员 泽怎责责则藻泽泽藻凿
贼澡藻 早则燥憎贼澡 燥枣 贼澡藻 责葬贼澡燥早藻灶 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠援 栽澡藻 泽贼则葬蚤灶 匀赠员员 憎葬泽 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿 葬糟糟燥则凿蚤灶早 贼燥 贼澡藻 皂燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造袁
责澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟葬造袁 遭蚤燥糟澡藻皂蚤糟葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽袁 葬灶葬造赠泽蚤泽 则藻泽怎造贼 燥枣 员远杂 则阅晕粤 葬灶凿 早赠则月 早藻灶藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽援 酝藻葬灶鄄
憎澡蚤造藻袁 贼澡藻 泽贼则葬蚤灶 匀赠员员 憎葬泽 造葬遭藻造藻凿 憎蚤贼澡 早则藻藻灶 枣造怎燥则藻泽糟藻灶贼 责则燥贼藻蚤灶 早藻灶藻 贼燥 蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻 蚤贼泽 糟燥造燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶 蚤灶
憎澡蚤贼藻 则葬凿蚤泽澡援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 则藻增藻葬造藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 泽贼则葬蚤灶 匀赠员员 责藻则枣燥则皂藻凿 早燥燥凿 糟燥灶贼则燥造 责燥贼藻灶贼蚤葬造 葬早葬蚤灶泽贼 憎澡蚤贼藻
则葬凿蚤泽澡 泽燥枣贼 则燥贼 凿蚤泽藻葬泽藻 憎蚤贼澡 苑苑援 怨豫 糟燥灶贼则燥造 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠 蚤灶 贼怎遭藻则泽 藻曾责藻则皂蚤藻灶贼 葬灶凿 远远援 苑豫 蚤灶 责燥贼 藻曾责藻则皂蚤藻灶贼袁
则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 栽澡藻 泽贼则葬蚤灶 匀赠员员 憎葬泽 葬造泽燥 枣燥怎灶凿 贼燥 责则燥皂燥贼藻 憎澡蚤贼藻 则葬凿蚤泽澡 泽藻藻凿造蚤灶早泽 早则燥憎贼澡 则藻皂葬则噪葬遭造赠 憎蚤贼澡
员员猿援 圆愿豫 早则燥憎贼澡鄄责则燥皂燥贼蚤灶早 藻枣枣藻糟贼援 栽澡藻 泽贼则葬蚤灶 匀赠员员 憎葬泽 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿 葬泽 月葬糟蚤造造怎泽 葬皂赠造燥造蚤择怎藻枣葬糟蚤藻灶泽援 栽澡藻
基金项目院 国家自然科学基金渊猿园远苑员源远猿冤袁福建省发改委项目渊运再园园猿园园远园冤
作者简介院 杨瑞先袁女袁员怨苑怨年生袁博士研究生袁研究方向为植物内生细菌袁 耘鄄皂葬蚤造院 枣葬蚤则赠员怨苑怨园愿园缘岳 员远猿援 糟燥皂
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 澡怎枣岳 枣躁葬怎援 藻凿怎援 糟灶曰 收稿日期院 圆园员圆 原 员员 原 员远
第 源园 卷摇 第 圆 期
圆园员猿 年摇 源 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源园摇 晕燥援 圆
粤责则援 摇 圆园员猿
摇 摇 责燥责怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 泽贼则葬蚤灶 匀赠员员鄄早枣责 蚤灶 造藻葬增藻泽 燥枣 郧援 遭蚤造燥遭葬 凿藻糟则藻葬泽藻凿 泽澡葬则责造赠 蚤灶 贼澡藻 枣蚤则泽贼 猿 凿葬赠泽 葬枣贼藻则 泽责则葬赠蚤灶早
葬灶凿 则藻皂葬蚤灶藻凿 糟燥灶泽贼葬灶贼 造藻增藻造 葬枣贼藻则 贼澡藻 员园贼澡 凿葬赠援 栽澡藻 泽贼则葬蚤灶 匀赠员员鄄早枣责 糟燥怎造凿 糟燥造燥灶蚤扎藻 蚤灶 则燥燥贼袁泽贼藻皂 葬灶凿 造藻葬增鄄
藻泽 燥枣 憎澡蚤贼藻 则葬凿蚤泽澡 泽藻藻凿造蚤灶早泽援 栽澡藻 糟燥造燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶 葬皂燥怎灶贼 燥枣 贼澡藻 泽贼则葬蚤灶 匀赠员员鄄早枣责 糟燥怎造凿 则藻葬糟澡 贼燥 员援 圆 伊 员园源
悦云哉 辕 早 蚤灶 憎澡蚤贼藻 则葬凿蚤泽澡 则燥燥贼援
运藻赠 憎燥则凿泽院 憎澡蚤贼藻 则葬凿蚤泽澡 泽燥枣贼 则燥贼曰 藻灶凿燥责澡赠贼蚤糟 遭葬糟贼藻则蚤葬曰 遭蚤燥糟燥灶贼则燥造曰 蚤灶凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶曰 糟燥造燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶
摇 摇 萝卜细菌性软腐病是由胡萝卜果胶杆菌胡萝卜
亚种 孕藻糟贼燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 糟葬则燥贼燥增燥则怎皂 泽怎遭泽责援 糟葬则燥贼燥增燥则怎皂
侵染引起的常见病害咱员暂 袁可危害萝卜根茎尧叶柄或
叶片袁多发生在萝卜生长的中后期和贮藏期袁使萝卜
肉质根失去商品和食用价值袁造成较大的经济损失遥
该病害的防治主要依赖于化学农药袁但是长期使用
化学农药造成的环境污染尧病原抗药性以及农药残
留等问题日益严重袁生物防治已逐渐成为植物病害
生物防治研究的热点和发展方向遥 植物内生细菌存
在于植物体内袁不易受外界恶劣环境的影响袁有充足
的营养物质和稳定的生态环境袁与其它生防菌相比
更有利于发挥其作用咱圆暂 遥 石晶盈等咱猿暂报道袁已从棉
花尧水稻尧辣椒尧番茄及马铃薯等多种植物体内分离
到对植物病害具有良好防治效果和对植物有促生作
用的内生细菌遥
银杏 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬是植物界中的野活化石冶袁几
乎不感染病虫害袁寿命极长袁其内部微生物种群也相
对丰富并具有独特性遥 目前袁国内外关于银杏内生
真菌的研究报道相对较多袁已分离获得了多种内生
真菌袁并从这些内生真菌中筛选获得具有抑制植物
病原菌活性的菌株遥 如郭建新等咱源暂报道从银杏根尧
茎尧叶和果实中分离获得了 缘圆圆 株内生真菌袁其中
猿园圆 株对植物病原真菌具有不同程度的抑菌活性曰
邓振山等咱缘暂报道从银杏叶和茎部中分离出 员远 株内
生真菌袁有 怨 株能够抑制苹果腐烂病病原菌 灾葬造泽葬
皂葬造蚤的生长曰许灵波等咱远暂从银杏茎中分离到 员 株内
生真菌袁其代谢产物对重要作物真菌病害病原菌具
有明显的抑制作用遥 而关于银杏内生细菌的研究较
少袁尤其将银杏内生细菌用于防治植物细菌性病害
的研究尚未见报道遥 作者等从分离自银杏叶片的内
生细菌中袁筛选出对萝卜软腐病菌具有较强拮抗作
用的菌株袁测定该菌株对萝卜软腐病的防治效果袁并
利用绿色荧光蛋白基因标记菌株袁 研究生防菌株在
萝卜体内的定殖能力袁从而探讨其生防潜力遥
员 材料与方法
员援 员 材料
供试菌株院内生细菌袁分离自健康银杏叶片曰萝
卜软腐病菌 孕援 糟葬则燥贼燥增燥则怎皂 泽怎遭泽责援 糟葬则燥贼燥增燥则怎皂由福建
农林大学细菌实验室分离鉴定保存遥
供试植物院福建农林大学校区银杏植株曰萝卜种
子袁短叶十三品种袁青岛市胶州大白菜研究所培育曰
萝卜购自福州农贸市场遥
主要试剂院阅晕粤 皂葬则噪藻则尧克隆载体 责酝阅员愿鄄栽尧栽葬择
阅晕粤聚合酶尧限制性内切酶 孕泽贼玉尧载遭葬玉购自宝生
物工程渊大连冤有限公司曰阅晕粤纯化回收试剂盒购自
天根生化科技渊北京冤有限公司曰卡那霉素渊噪葬灶葬皂赠鄄
糟蚤灶冤尧氨苄青霉素渊 葬皂责蚤糟蚤造造蚤灶冤和酚 颐 氯仿 颐 异戊醇
渊圆缘 颐 圆源 颐 员冤购自生工生物工程渊上海冤股份有限
公司遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 生防菌株对萝卜软腐病的防治效果
平板抑菌试验院参照洪鹏翔等咱苑暂方法测定银杏
内生细菌菌株对萝卜软腐病病原菌的平板拮抗
作用遥
萝卜块根防治试验院参照蔡学清等咱愿暂方法袁挑
选出对萝卜软腐病菌抑制能力较强的 愿 株拮抗菌株
进行萝卜块根软腐病的生防试验遥 选择健康尧大小
均一尧外表皮无伤口的萝卜袁经自来水冲洗干净和
苑缘豫酒精消毒后袁用灭菌大头针在萝卜中央刺破表
皮造成伤口袁在伤口处接种浓度为 员 伊 员园愿 悦云哉 辕 皂蕴
拮抗菌株发酵液袁置 圆缘益培养袁圆源 澡 后再接种浓度
为 员 伊 员园远 悦云哉 辕 皂蕴 萝卜软腐病菌发酵液袁清水处理
作对照袁每处理 员园 个萝卜袁重复 猿 次袁圆愿益保湿培养
猿 凿后观察发病情况并记录遥 病害发生的分级标准
参照鲁燕汶等咱怨暂方法袁园 级院无病斑曰员 级院腐烂部 约
员 辕 源曰圆 级院腐烂部 跃 员 辕 源曰猿 级院腐烂部 跃 员 辕 圆曰源 级院腐
烂部 跃 猿 辕 源曰缘 级院全部腐烂遥 病情指数 越 移 渊病害
果数 伊 病害级值冤 辕 渊总果数 伊 最高病害级值冤 伊
员园园遥 防病效果渊豫 冤 越 渊对照病情指数 原处理病情
指数冤 辕对照病情指数 伊员园园遥
盆栽萝卜幼苗防治试验院萝卜种子播种于盛有
灭菌土的 员圆 糟皂 伊 员缘 糟皂 盆钵中袁出苗后每钵保留 缘
株袁待长出 源 片真叶时袁每钵浇灌 员园 皂蕴 浓度为 员 伊
员园愿 悦云哉 辕 皂蕴生防菌株发酵液袁猿凿后灌根接种浓度
园员员 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷
为 员 伊 员园远 悦云哉 辕 皂蕴 萝卜软腐病菌发酵液袁清水处理
作对照袁每处理 远 钵袁重复 猿 次遥 圆愿 益保湿培养袁观
察萝卜幼苗的发病情况袁记录病株数和计算防病
效果遥
员援 圆援 圆 生防菌株对萝卜幼苗的促生作用
萝卜种子播种于盛有灭菌土的 员圆 糟皂 伊员缘 糟皂盆
钵中袁出苗后每钵保留 缘 株袁当萝卜幼苗长出真叶
时袁每钵浇灌 员园 皂蕴 浓度为 员 伊 员园愿 悦云哉 辕 皂蕴 生防菌
株发酵液袁每处理 远 钵袁猿 次重复袁清水作对照遥 猿园 凿
后测量萝卜幼苗的株高尧根系长度尧植株及根系鲜
重袁计算促生增长率遥 促生增长率渊豫 冤 越 渊处理植
株鲜重 原对照植株鲜重冤 辕对照植株鲜重 伊员园园遥
员援 圆援 猿 菌株 匀赠员员 的鉴定
参照东秀珠和蔡妙英咱员园暂方法对菌株 匀赠员员 进行
形态观察和生理生化指标的测定遥 细菌基因组
阅晕粤提取参照何红等咱员员暂的方法遥 细菌通用引物扩
增 员远杂 则阅晕粤袁引物 圆苑云院缘忆鄄粤郧粤郧栽栽栽郧粤栽悦悦栽郧郧悦栽鄄
悦粤郧鄄猿忆曰员源怨圆砸院缘忆鄄悦郧郧悦栽粤悦悦栽栽郧栽栽粤悦郧粤悦鄄猿忆咱员圆暂 遥
孕悦砸反应条件院怨源 益 缘 皂蚤灶曰怨源 益 猿园 泽袁缘远 益 猿园 泽袁苑圆
益 员 皂蚤灶袁猿园 个循环曰苑圆 益 员园 皂蚤灶遥 兼并引物扩增
早赠则月 基因袁引物 哉孕鄄员院缘忆鄄郧粤粤郧栽悦粤栽悦粤栽郧粤悦悦郧栽鄄
栽悦栽郧悦粤再郧悦晕郧郧晕郧郧晕粤粤砸栽栽再郧粤鄄猿忆曰哉孕鄄圆则院缘忆鄄粤鄄
郧悦粤郧郧郧栽粤悦郧郧粤栽郧栽郧悦郧粤郧悦悦砸栽悦晕粤悦砸栽悦晕郧悦鄄
砸栽悦晕郧栽悦粤栽鄄猿忆渊其中 再 越 悦 辕 栽袁砸 越 粤 辕 郧袁晕 越 粤 辕 郧 辕
悦 辕 栽冤 咱员猿暂 遥 孕悦砸反应条件院怨源 益 缘 皂蚤灶曰怨源 益 猿园 泽袁缘猿
益 猿园 泽袁苑圆益 员皂蚤灶袁猿园 个循环曰苑圆益 员园皂蚤灶遥 扩增产
物用 员援 园豫琼脂糖凝胶电泳检测袁阅晕粤 琼脂糖凝胶
回收试剂盒回收目的片段袁克隆至 责酝阅员愿鄄栽 载体袁
转化至大肠杆菌 耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤 允酝员园怨 感受态细胞袁
筛选阳性克隆子遥
阳性克隆子委托生工生物工程渊上海冤股份有
限公司进行测序袁获得的 员远杂 则阅晕粤 序列和 早赠则月 基
因序列袁用 郧藻灶月葬灶噪 中 月蕴粤杂栽 软件进行同源性分
析袁酝耘郧粤 源援 圆 软件邻接法渊晕允 法冤构建系统发育
树袁 利用 月燥燥贼泽贼则葬责渊员 园园园 次重复冤检验各分支的置
信度遥
员援 圆援 源 生防菌株 匀赠员员 的定殖特性
早枣责基因标记菌株的构建院利用绿色荧光蛋白
渊早则藻藻灶 枣造怎燥则藻泽糟藻灶贼 责则燥贼藻蚤灶袁郧云孕冤基因标记生防菌株袁
以范晓静等咱员源暂构建的 责杂源郧 载体为质粒袁将目标菌
株制备感受态细胞袁经转化获得克隆子袁观察菌落形
态袁并利用荧光显微镜进行阳性克隆子的发光表型
检测遥
标记菌株在银杏植株内的定殖院菌株 匀赠员员鄄早枣责
在含 员园 滋早 辕 皂蕴卡那霉素的 蕴月液体培养基中 猿苑 益尧
员愿园 则 辕 皂蚤灶振荡培养 圆源 澡 后袁喷雾法接种银杏叶片袁
接种后 圆尧猿尧缘尧苑尧员园尧员缘尧圆园尧圆愿 和 源园 凿 随机采样袁以
未接菌的银杏叶片为对照样品遥标记菌株回收时
每个处理随机取 猿 片银杏叶袁自来水冲洗后袁剪成 员
糟皂 伊员 糟皂大小混匀后袁称取 员 早 用于标记菌株的分
离遥 分离方法为 苑缘豫酒精浸泡 猿园 泽袁圆园豫次氯酸钠
浸泡 源 皂蚤灶袁无菌水冲洗 猿 次袁晾干后转入无菌研钵
中袁加定量无菌水研磨匀浆袁静止 员缘 皂蚤灶 后袁吸取适
量液体涂于含有卡那霉素和无卡那霉素的 蕴月 平板
上袁每个处理重复 猿 次袁猿苑 益黑暗培养 源愿 澡袁根据每
皿出现菌落数折算为每克组织中的细菌数渊悦云哉 辕
早冤袁表面印迹培养作对照袁排除无效处理遥
标记菌株在萝卜植株内的定殖院萝卜种子播种
于装有灭菌土的 员圆 糟皂 伊 员缘 糟皂 盆钵中袁出苗后每钵
保留 缘 株袁待萝卜长出 源 片真叶时袁每钵浇灌 员园 皂蕴
浓度为 员 伊 员园愿 悦云哉 辕 皂蕴发酵液袁每处理 远 钵袁重复 猿
次袁分别于浇灌后 圆尧猿尧缘尧苑尧员园尧员缘尧圆园尧圆愿 和 源园 凿 取
样分离遥 标记菌株的回收为每个处理随机取 猿 株萝
卜幼苗袁自来水冲洗袁将根尧茎尧叶分开袁分别称重后
进行分离遥 分离方法同上遥
员援 猿 数据处理
试验数据分析采用 阅孕杂 远援 愿缘 数据处理系统袁用
阅怎灶糟葬灶氏新复极差法进行差异显著性分析遥
圆 结果与分析
圆援 员 生防菌株对萝卜软腐病的防治效果
从 员圆园 株银杏内生细菌菌株中共筛选获得 愿 株
对萝卜软腐病菌具有较强抑制作用的拮抗菌株袁各
菌株抑菌圈半径均在 远援 缘 皂皂 以上袁其中菌株 匀赠员员
的抑菌活性最强袁其抑菌圈半径为 苑援 愿 皂皂遥
愿 个拮抗菌株对萝卜块根软腐病均有不同程度
的防治作用袁其中菌株 在赠圆尧匀赠员尧匀赠员员 在病原菌接
种 缘 凿时的防效分别为 远源援 苑豫 尧苑猿援 缘豫和 愿远援 愿豫 袁菌
株 匀赠员员 的防病效果最为显著袁第 苑 天时仍维持在
苑园豫以上袁显著高于其它菌株渊表 员冤袁表明该菌株对
萝卜块根软腐病的发生具有较强的抑制作用遥
温室盆栽试验结果表明袁接种萝卜软腐病菌 苑 凿
后袁生防菌株 匀赠员 和 匀赠员员 处理萝卜幼苗的发病率
分别为 源远援 苑豫和 猿猿援 猿豫 袁防治效果分别为 缘猿援 猿豫和
远远援 苑豫 袁表明生防菌株 匀赠员员 能够较好地控制萝卜
软腐病的发生遥
员员员圆 期 杨瑞先等院萝卜软腐病生防菌株 匀赠员员 的筛选尧鉴定及定殖特性
表 员 生防菌株对萝卜块根软腐病的防治效果
栽葬遭造藻 员 悦燥灶贼则燥造 藻枣枣蚤糟葬糟赠 燥枣 遭蚤燥糟燥灶贼则燥造 泽贼则葬蚤灶泽 贼燥 贼澡藻 贼怎遭藻则 泽燥枣贼 则燥贼 燥枣 憎澡蚤贼藻 则葬凿蚤泽澡 豫
菌株摇
杂贼则葬蚤灶摇
接种后天数 栽澡藻 凿葬赠泽 葬枣贼藻则 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶 渊凿冤
猿 缘 苑
菌株
杂贼则葬蚤灶
接种后天数 栽澡藻 凿葬赠泽 葬枣贼藻则 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶 渊凿冤
猿 缘 苑
在赠圆 员园园援 园 依 园援 园 葬 远源援 苑 依 员援 源 遭 圆怨援 圆 依 员援 缘 糟 杂赠遭苑 苑猿援 缘 依 猿援 愿 糟凿 圆缘援 园 依 员援 愿 藻 员愿援 愿 依 圆援 圆 糟凿
匀赠遭苑 远缘援 怨 依 圆援 缘 凿 猿猿援 园 依 猿援 源 凿藻 员愿援 缘 依 源援 员 糟凿 匀赠员 怨员援 圆 依 园援 园 遭 苑猿援 缘 依 猿援 苑 遭 缘园援 园 依 源援 源 遭
匀赠员猿 愿圆援 源 依 猿援 圆 糟 圆缘援 园 依 员援 缘 藻 圆员援 愿 依 猿援 远 糟凿 在赠猿 愿圆援 源 依 源援 员 糟 源猿援 苑 依 猿援 园 糟凿 员源援 愿 依 猿援 愿 凿
匀赠员员 员园园援 园 依 园援 园 葬 愿远援 愿 依 圆援 缘 葬 苑苑援 怨 依 员援 怨 葬 在遭鄄苑 远源援 苑 依 猿援 猿 凿 缘园援 园 依 圆援 园 糟 圆苑援 源 依 员援 园 糟凿
摇 摇 注院表中数据为平均数 依标准差遥 同列数据后不同小写字母表示经 阅怎灶糟葬灶氏新复极差法检验在 孕 约 园援 园缘 水平差异显著遥 晕燥贼藻院
栽澡藻 凿葬贼葬 葬则藻 皂藻葬灶 依 杂阅援 栽澡藻 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 造燥憎藻则糟葬泽藻 造藻贼贼藻则泽 蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 葬贼 孕 约园援 园缘 造藻增藻造 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽 灶藻憎
皂怎造贼蚤责造藻 则葬灶早藻 贼藻泽贼 渊阅酝砸栽冤援
圆援 圆 生防菌株对萝卜幼苗的促生效果
生防菌株 匀赠员 和 匀赠员员 对萝卜幼苗均具有显著
的促生作用遥 生防菌株处理的萝卜幼苗生长健壮袁
植株高度显著大于对照袁处理植株根系发达袁根系的
长度和根系鲜重高于清水处理袁整株植物的鲜重也
显著大于对照处理遥 其中菌株 匀赠员员 的促生效果最
为显著袁其促生率达到了 员员猿援 圆愿豫 渊表 圆冤遥
表 圆 生防菌株对萝卜幼苗的促生作用
栽葬遭造藻 圆 栽澡藻 早则燥憎贼澡鄄责则燥皂燥贼蚤灶早 藻枣枣蚤糟葬糟赠 燥枣 遭蚤燥糟燥灶贼则燥造 泽贼则葬蚤灶泽 贼燥 贼澡藻 憎澡蚤贼藻 则葬凿蚤泽澡 泽藻藻凿造蚤灶早泽
处理摇
栽则藻葬贼皂藻灶贼摇
植株高度渊皂皂冤
匀藻蚤早澡贼 燥枣 责造葬灶贼
根系长度渊皂皂冤
蕴藻灶早贼澡 燥枣 则燥燥贼
根系鲜重渊早冤
宰藻蚤早澡贼 燥枣 则燥燥贼
植株鲜重渊早冤
宰藻蚤早澡贼 燥枣 责造葬灶贼
促生率渊豫 冤
郧则燥憎贼澡鄄责则燥皂燥贼蚤灶早 藻枣枣藻糟贼
悦运 猿圆园 依 猿援 愿 员源园 依 缘援 源 员援 猿 依 园援 远 圆圆援 苑 依 员援 源 要
匀赠员 猿怨园 依 圆援 怨 员远园 依 源援 远 员援 源 依 园援 猿 猿远援 员 依 圆援 园 远园援 苑 依 圆援 缘 遭
匀赠员员 源圆园 依 源援 园 圆员园 依 缘援 愿 圆援 猿 依 园援 愿 源愿援 猿 依 员援 愿 员员猿援 猿 依 猿援 圆 葬
摇 摇 注院表中数据为平均数 依标准差遥 同列数据后不同小写字母表示经 阅怎灶糟葬灶氏新复极差法检验在 孕 约 园援 园缘 水平差异显著遥 晕燥贼藻院
栽澡藻 凿葬贼葬 葬则藻 皂藻葬灶 依 杂阅援 栽澡藻 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 造燥憎藻则糟葬泽藻 造藻贼贼藻则泽 蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 葬贼 孕 约园援 园缘 造藻增藻造 遭赠 阅酝砸栽援
圆援 猿 菌株 匀赠员员 的鉴定
圆援 猿援 员 匀赠员员 形态鉴定及生理生化特性
菌株 匀赠员员 的菌落在 蕴月 培养基上前期呈水滴
状尧无色尧边缘整齐尧粘稠袁后期呈不规则状尧表面凹
陷尧有褶皱遥 菌体长杆状袁鞭毛周生袁芽胞内生袁革兰
氏染色阳性遥 该菌株为兼性厌氧菌袁生长温度范围
广袁在 圆园 耀 缘缘 益均可生长袁最适生长温度 猿圆 益袁能
在 员园豫晕葬悦造中生长袁甲基红反应呈阴性袁灾鄄孕 反应尧
氧化酶测定尧接触酶测定为阳性袁可利用多种单糖袁
不能产生吲哚袁能水解淀粉袁但不能液化明胶袁苯丙
氨酸脱氨酶反应呈阴性袁纤维素酶反应呈阳性袁茁 原
员袁猿 原 员袁源 葡聚糖酶反应呈阳性遥 根据形态特征和
生理生化特征袁将该菌株归于芽胞杆菌属 月葬糟蚤造造怎泽遥
圆援 猿援 圆 菌株 匀赠员员 员远杂 则阅晕粤和 早赠则月基因序列分析
菌株 匀赠员员 的 员远杂 则阅晕粤 序列长度为 员 源苑猿 遭责袁
早赠则月基因序列长度为 员 员苑源 遭责袁郧藻灶月葬灶噪登录号分别
为 允晕员圆园愿远员 和 允晕员圆园愿远园遥 月蕴粤杂栽软件分析发现菌
株 匀赠员员 的 员远杂 则阅晕粤 序列与解淀粉芽胞杆菌 月援
葬皂赠造燥造蚤择怎藻枣葬糟蚤藻灶泽尧枯草芽胞杆菌 月援 泽怎遭贼蚤造蚤泽尧地衣芽胞
杆菌 月援 造蚤糟澡藻灶蚤枣燥则皂蚤泽尧萎缩芽胞杆菌 月援 葬贼则燥责澡葬藻怎泽 等
同属近缘种序列同源性达 怨怨豫 袁表明根据 员远杂 则阅晕粤
序列无法将菌株 匀赠员员 准确鉴定到种遥 菌株 匀赠员员
的 早赠则月基因序列与已知解淀粉芽胞杆菌 云在月源圆 和
阅杂酝苑 的 早赠则月基因序列同源性分别为 怨愿豫和 怨缘豫 袁
与其它同属近缘种的 早赠则月 基因序列同源性均低于
愿员豫 遥 根据 早赠则月基因序列构建的系统发育树袁在自
展值为 员园园 的基础上可将菌株 匀赠员员 鉴定为解淀粉
芽胞杆菌袁也可将更接近的解淀粉芽胞杆菌和枯草
芽胞杆菌清晰区分为 圆 个分支渊图 员冤遥
圆援 源 菌株 匀赠员员 在银杏叶片和萝卜体内的定殖
荧光显微镜下观察发现生防菌株菌体成功表达
绿色荧光蛋白袁聚发荧光渊图 圆冤袁命名为 匀赠员员鄄早枣责袁
继代培养后袁荧光并无消退袁说明 郧云孕 基因可在受
体菌中稳定遗传和表达遥
摇 摇 菌株 匀赠员员鄄早枣责在银杏叶片内的定殖试验显示袁
接种 员 凿 后袁种群数量为 圆援 园员 伊 员园缘 悦云哉 辕 早袁之后种
群数量持续下降袁苑 凿后种群数量有所回升袁达到
员援 圆猿 伊 员园缘 悦云哉 辕 早袁 员园 凿后标记菌株的种群数量趋于
圆员员 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷
图 员 基于 早赠则月基因序列构建的菌株 匀赠员员 系统发育树
云蚤早援 员 孕澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 贼则藻藻 燥枣 泽贼则葬蚤灶 匀赠员员 遭葬泽藻凿 燥灶 贼澡藻 早赠则月 早藻灶藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽
图 圆 菌株 匀赠员员鄄早枣责的菌落渊葬冤和菌体渊遭冤所发荧光
云蚤早援 圆 郧则藻藻灶 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 燥枣 遭葬糟贼藻则蚤葬造 糟燥造燥灶赠 渊葬冤 葬灶凿 糟藻造造泽 渊遭冤 藻皂蚤贼贼藻凿 遭赠 泽贼则葬蚤灶 匀赠员员鄄早枣责
平稳袁在 圆援 缘源 伊 员园猿 悦云哉 辕 早上下波动袁接种 源园 凿后仍
可检测到标记细菌袁而在无菌水处理的银杏叶片中
未分离到有荧光标记的内生细菌遥
菌株 匀赠员员鄄早枣责 在萝卜植株组织内的定殖试验
显示袁标记菌株在萝卜根茎叶组织中均可定殖袁并可
由根部向茎尧叶等组织转移遥 接种后 圆 凿袁标记菌株
在萝卜根中的种群数量为 怨援 远圆 伊 员园圆 悦云哉 辕 早袁苑 凿 后
标记菌株在根部组织中的种群数量达到最大袁为
员援 圆 伊 员园源 悦云哉 辕 早袁之后种群数量开始持续下降曰接种
图 猿 菌株 匀赠员员鄄早枣责在萝卜植株组织内的定殖动态
云蚤早援 猿 栽澡藻 糟燥造燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶 凿赠灶葬皂蚤糟 燥枣 泽贼则葬蚤灶 匀赠员员鄄早枣责 蚤灶
贼澡藻 贼蚤泽泽怎藻泽 燥枣 贼澡藻 憎澡蚤贼藻 则葬凿蚤泽澡
后 圆园 凿袁标记菌株在茎部组织中种群数量达到最大袁
为 源援 圆 伊 员园猿 悦云哉 辕 早遥 接种后 源园 凿 仍能从萝卜根茎
组织中分离得到标记细菌袁但菌量已经极低渊图 猿冤遥
猿 讨论
植物内生细菌防病的主要机制有位点竞争尧产
生抗菌物质或诱导植物产生诱导抗性等咱员缘暂 袁但是生
防菌能否起到稳定尧持久防病作用的一个重要因素
是生防菌在植物体内能否有效定殖并产生有效定殖
量遥 殷幼平等咱员远暂研究表明袁许多生防菌在植物体内
无法有效定殖而失去应用价值遥 本研究测定了生防
菌株 匀赠员员 在萝卜组织内的定殖动态袁发现该菌株
可在萝卜体内长期定殖袁且可由根部转移到茎部和
叶部袁表明该菌株可在萝卜根茎组织内大量定殖袁与
软腐病菌进行空间位点的竞争袁有效地排斥尧阻止和
干扰软腐病菌在萝卜根系内的侵染与定殖袁从而达
到控制病害的目的袁因此生存位点的竞争可能是菌
株 匀赠员员 防治萝卜幼苗软腐病的机制遥 同时袁该菌
株对萝卜幼苗具有明显的促生作用袁植株生长健壮袁
提高了植物的抗病性袁这可能是该菌株间接的防病机
制遥 生防菌株 匀赠员员 能否产生一些次生拮抗物质袁直
接抑制萝卜软腐病菌的生长袁还需作进一步研究遥
猿员员圆 期 杨瑞先等院萝卜软腐病生防菌株 匀赠员员 的筛选尧鉴定及定殖特性
摇 摇 同源性很高的一些细菌种群袁仅通过表型特征
和生理生化特征难以区分遥 员远杂 则阅晕粤 序列广泛应
用于细菌鉴定或构建细菌的系统进化关系袁但在亲
缘关系很近的类群间袁由于序列间相似度太高而无
法区分咱员苑暂 袁并且许多研究表明 员远杂 则阅晕粤 序列也不
能有效区分枯草芽胞杆菌组的种群咱员愿暂 袁正如本研究
中对菌株 匀赠员员 的 员远杂 则阅晕粤 序列进行 月蕴粤杂栽 分析
时袁发现该菌株与多种芽胞杆菌的同源性都相对较
高袁同时生理生化特性会因菌株来源不同与模式菌
株存在差异袁因此仅通过生理生化鉴定和 员远杂 则阅晕粤
序列的分析还无法将生防菌株鉴定到种遥 近年来研
究发现以编码蛋白的基因作为系统发育鉴定标记可
以弥补 员远杂 则阅晕粤 序列的不足袁如 早赠则粤尧早赠则月尧 则燥责阅
基因等咱员怨 原 圆园暂 遥 宰葬灶早等咱圆员暂利用 早赠则月 基因对枯草芽
胞杆菌组的 愿 个组成成员 圆源 个代表菌株进行分析袁
发现 早赠则月 基因的分子进化速率大于 员远杂 则阅晕粤 序
列袁早赠则月基因可有效地区分和鉴定枯草芽胞杆菌组
中的近缘种遥 本研究结果显示袁从菌株 匀赠员员 的
早赠则月基因序列及其近缘种序列构建的系统发育树
中袁可以明确菌株 匀赠员员 与已知芽胞杆菌间的亲缘
关系袁另外袁其中亲缘关系非常接近的解淀粉芽胞杆
菌和枯草芽胞杆菌在系统发育树中也被明显地区分
为 圆 个分支袁证明细菌 早赠则月 基因可以有效地弥补
员远杂则 阅晕粤序列的不足袁从而准确地鉴定亲缘关系相
近的细菌种群遥
参 考 文 献渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
咱员暂 冉茂林袁彭化贤袁刘独臣袁等援 泡菜萝卜软腐病防治技术研
究援山西农业科学袁圆园员圆袁源园渊怨冤院 怨苑怨 原 怨愿圆
咱圆暂 砸赠葬灶 砸 孕袁 郧藻则皂葬蚤灶藻 运袁 云则葬灶噪泽 粤袁 藻贼 葬造援 月葬糟贼藻则蚤葬造 藻灶凿燥鄄
责澡赠贼藻泽院 则藻糟藻灶贼 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼泽 葬灶凿 葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽援 云耘酝杂 酝蚤糟则燥遭蚤燥造鄄
燥早赠 蕴藻贼贼藻则泽袁 圆园园愿袁 圆苑愿渊员冤院 员 原 怨
咱猿暂 石晶盈袁陈维信袁刘爱媛援 植物内生菌及其防治植物病害的
研究进展援生态学报袁圆园园远袁圆远渊苑冤院圆猿怨缘 原 圆源园员
咱源暂 郭建新袁孙广宇袁张荣袁等援 银杏内生真菌抗真菌活性菌株的
分离和筛选援西北农业学报袁圆园园缘袁员源渊源冤院员源 原 员苑
咱缘暂 邓振山袁赵龙飞袁张薇薇袁等援 银杏内生真菌的分离及其对苹
果腐烂病病原菌的拮抗作用援西北植物学报袁圆园园怨袁圆怨渊猿冤院
远园愿 原 远员猿
咱远暂 许灵波袁申屠旭萍袁陈宵峰袁等援 银杏内生真菌 晕燥援 员园圆愿的培
养条件及其代谢产物对作物真菌病害的抑制作用援 菌物研
究袁圆园园远袁源渊圆冤院圆缘 原 圆怨
咱苑暂 洪鹏翔袁邱思鑫袁陈航袁等援 源 种茄科作物内生细菌的分离及
拮抗菌的筛选援福建农林大学学报渊自然科学版冤袁圆园园苑袁猿远
渊源冤院猿源苑 原 猿缘员
咱愿暂 蔡学清袁鄢凤娇袁林玉袁等援 西瓜细菌性果斑病拮抗内生细菌
的分离和筛选援福建农林大学学报渊自然科学版冤袁圆园园怨袁猿愿
渊缘冤院源远缘 原 源苑园
咱怨暂 鲁燕汶袁张长清袁盛存波袁等援 夏季大白菜软腐病的生物农药
防治援农药袁圆园园远袁源缘渊圆冤院员猿怨 原 员源员
咱员园暂 东秀珠袁蔡妙英援 常见细菌系统鉴定手册援北京院科学出版
社袁圆园园员
咱员员暂 何红袁邱思鑫袁蔡学清袁等援 辣椒内生细菌 月杂鄄员 和 月杂鄄圆 在
植物体内的定殖及鉴定援微生物学报袁圆园园源袁源源渊员冤院员猿 原 员愿
咱员圆暂 宰藻蚤泽遭怎则早 宰 郧袁 月葬则灶泽 杂 酝袁 孕藻造造藻贼蚤藻则 阅 粤袁 藻贼 葬造援 员远杂 则蚤遭燥泽燥鄄
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咱员猿暂 再葬皂葬皂燥贼燥 杂袁 匀葬则葬赠葬皂葬 杂援 孕悦砸 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬灶凿 凿蚤则藻糟贼 泽藻鄄
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员怨怨缘袁 远员渊猿冤院 员员园源 原 员员园怨
咱员源暂范晓静袁邱思鑫袁吴小平袁等 援 绿色荧光蛋白基因标记内
生枯草芽孢杆菌 援 应用与环境生物学报袁圆园园苑袁员猿渊源冤 院
缘猿园 原 缘猿源
咱员缘暂 悦燥皂责葬灶贼 杂袁 阅怎枣枣赠 月袁 晕燥憎葬噪 允袁 藻贼 葬造援 哉泽藻 燥枣 责造葬灶贼 早则燥憎贼澡鄄责则燥鄄
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咱员远暂 殷幼平袁袁训娥袁李强袁等援 生防菌枯草芽孢杆菌 悦匝月杂园猿
的绿色荧光蛋白基因标记及其在柑橘叶片上的定殖援中国
农业科学袁圆园员园袁源猿渊员苑冤院猿缘缘缘 原 猿缘远猿
咱员苑暂 悦澡则蚤泽贼藻灶泽藻灶 匀袁 晕燥则凿藻灶贼燥枣贼 杂袁 韵造泽藻灶 允 耘援 孕澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 则藻造葬鄄
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允燥怎则灶葬造 燥枣 杂赠泽贼藻皂葬贼蚤糟 月葬糟贼藻则蚤燥造燥早赠袁 员怨怨愿袁 源愿渊圆冤院 远园缘 原 远员园
咱员愿暂 喻国辉袁 牛春艳袁 陈远凤袁等援 利用 员远杂 则阅晕粤结合 早赠则粤和
早赠则月基因对生防芽孢杆菌 砸猿员 的快速鉴定援 中国生物防
治袁圆园员园袁圆远渊圆冤院员远园 原 员远远
咱员怨暂 悦澡怎灶 允袁 月葬藻 运 杂援 孕澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 月葬糟蚤造造怎泽 泽怎遭贼蚤造蚤泽 葬灶凿
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增葬灶 蕴藻藻怎憎藻灶澡燥藻噪袁 圆园园园袁 苑愿渊圆冤院 员圆猿 原 员圆苑
咱圆园 暂 再葬皂葬皂燥贼燥 杂袁 匀葬则葬赠葬皂葬 杂援 孕澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 则藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责泽 燥枣
孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽 责怎贼蚤凿葬 泽贼则葬蚤灶泽 凿藻凿怎糟藻凿 枣则燥皂 贼澡藻 灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 泽藻鄄
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咱圆员暂 宰葬灶早 蕴 栽袁 蕴藻藻 云 蕴袁 栽葬蚤 悦 允袁 藻贼 葬造援 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 早赠则月 早藻灶藻
泽藻择怎藻灶糟藻泽袁 员远杂 则砸晕粤 早藻灶藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽 葬灶凿 阅晕粤鄄阅晕粤 澡赠遭则蚤凿鄄
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员愿源远 原 员愿缘园
渊责任编辑院谢小帆冤
源员员 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷