全 文 ：植物保护学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， ２０１５， ４２（６）： ９９７ － １００３ ＤＯＩ： １０􀆰 １３８０２ ／ ｊ． ｃｎｋｉ． ｚｗｂｈｘｂ． ２０１５􀆰 ０６􀆰 ０２０
基金项目：国家公益性行业（农业）科研专项（２０１３０３０２６），河南科技大学青年科学基金（２０１５ＱＮ０２９）
∗通讯作者（Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ）， Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｊｕｎｆｅｎｇｄｏｎｇ＠ ｈａｕｓｔ． ｅｄｕ． ｃｎ
收稿日期： ２０１５ － ０７ － ０２
双委夜蛾非典型嗅觉受体 Ｏｒｃｏ的克隆、分子特征及表达
宋月芹１ 　 李文亮１ 　 刘顺通２ 　 孙会忠１ 　 石　 洁３ 　 董钧锋１∗
（１．河南科技大学林学院， 洛阳 ４７１００３； ２．河南省农林科学院植物保护研究所， 洛阳 ４７１０２２；
３．河北省农林科学院植物保护研究所， 保定 ０７１０００）
摘要： 为了解新发现的农业害虫双委夜蛾 Ａｔｈｅｔｉｓ ｄｉｓｓｉｍｉｌｉｓ （Ｈａｍｐｓｏｎ）非典型嗅觉受体 Ｏｒｃｏ的分子
特征与表达，通过分析转录组数据并利用 ＲＴ⁃ＰＣＲ 技术克隆了双委夜蛾 Ｏｒｃｏ 基因，并采用实时定
量 ＰＣＲ技术研究了该基因的组织表达谱。 结果显示，双委夜蛾非典型嗅觉受体 Ｏｒｃｏ 基因开放阅
读框全长 １ ４２２ ｂｐ，编码 ４７３ 个氨基酸，经氨基酸结构预测具有 ７ 个跨膜区，Ｎ端在膜内，Ｃ 端在膜
外；该基因编码的氨基酸序列与其它昆虫 Ｏｒｃｏ 序列相似性极高，因此将该基因命名为 ＡｄｉｓＯｒｃｏ
（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＫＲ６３２９８７），此氨基酸序列 Ｃ末端第 ６ 跨膜区和第 ７ 跨膜区之间以及第 ７ 跨膜
区的序列保守性最高；ＰＣＲ结果显示，ＡｄｉｓＯｒｃｏ 主要在成虫触角中表达，且在雄蛾触角中的表达量
是雌蛾触角中的 ４􀆰 ２ 倍，在足、翅、下唇须和喙等组织中也有少量表达。
关键词： 双委夜蛾； 非典型嗅觉受体； 基因克隆； 分子特征； 表达模式
Ｃｌｏｎｉｎｇ， ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ ｔｈｅ
ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏ⁃ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇｅｎｅ ｏｆ Ａｔｈｅｔｉｓ ｄｉｓｓｉｍｉｌｉｓ
Ｓｏｎｇ Ｙｕｅｑｉｎ１ 　 Ｌｉ Ｗｅｎｌｉａｎｇ１ 　 Ｌｉｕ Ｓｈｕｎｔｏｎｇ２ 　 Ｓｕｎ Ｈｕｉｚｈｏｎｇ１ 　 Ｓｈｉ Ｊｉｅ３ 　 Ｄｏｎｇ Ｊｕｎｆｅｎｇ１∗
（１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ， Ｈｅｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｌｕｏｙａｎｇ ４７１００３， Ｈｅｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎａ；
２． Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， Ｌｕｏｙａｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｌｕｏｙａｎｇ ４７１０２２，
Ｈｅｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎａ； ３． Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， Ｈｅｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，
Ｂａｏｄｉｎｇ ０７１０００， Ｈｅｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ
ｃｏ⁃ｒｅｃｅｐｔｏｒ （Ｏｒｃｏ） ｇｅｎｅ ｏｆ Ａｔｈｅｔｉｓ ｄｉｓｓｉｍｉｌｉｓ （Ｈａｍｐｓｏｎ）， ａ ｎｅｗ ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ｐｅｓｔ， ｔｈｅ Ｏｒｃｏ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ
ｔｈｒｏｕｇｈ ｕｓｉｎｇ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ ｄａｔａ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ＲＴ⁃ＰＣＲ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， ａｎｄ ｉｔｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｗａｓ
ａｎａｌｙｚｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ｂｙ ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ Ｏｒｃｏ ｇｅｎｅ
ｏｆ Ａ． ｄｉｓｓｉｍｉｌｉｓ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ａ １ ４２２⁃ｂｐ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ （ＯＲＦ） ｔｈａｔ ｅｎｃｏｄｅｄ ４７３ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓ，
ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｄｕｃｅｄ Ｏｒｃｏ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｏｓｓｅｓｓｅｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｓｅｖｅｎ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｄｏｍａｉｎｓ， ａｎ
ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｎ⁃ｔｅｒｍｉｎｕｓ ａｎｄ ａｎ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕａｒ Ｃ⁃ｔｅｒｍｉｎｕｓ． Ｔｈｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｏｒｃｏ ｇｅｎｅ ｈａｄ ｈｉｇｈ
ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ Ｏｒｃｏ ｆｒｏｍ ｏｔｈｅｒ ｉｎｓｅｃｔｓ； ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ， ｔｈｉｓ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ ａｓ ＡｄｉｓＯｒｃｏ
（ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｏ． ＫＲ６３２９８７）． Ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｓｉｘｔｈ ａｎｄ ｓｅｖｅｎｔｈ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ
ｄｏｍａｉｎｓ， ａｎｄ ｔｈｅ ｓｅｖｅｎｔｈ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｄｏｍａｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｃ⁃ｔｅｒｍｉｎｕｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ． Ｔｈｅ
ＡｄｉｓＯｒｃｏ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｈｉｇｈｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ａｎｔｅｎｎａｅ ｏｆ ａｄｕｌｔ Ａ． ｄｉｓｓｉｍｉｌｉｓ， ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ａｄｕｌｔ
ｍａｌｅｓ ｗａｓ ４􀆰 ２ ｔｉｍｅｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ａｄｕｌｔ ｆｅｍａｌｅ， ａｎｄ ｌｏｗ⁃ｌｅｖｅｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ａｌｓｏ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ
ｌａｂｉａｌ ｐａｌｐｉ， ｐｒｏｂｏｓｃｉｓ， ｌｅｇｓ ａｎｄ ｗｉｎｇｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ａｔｈｅｔｉｓ ｄｉｓｓｉｍｉｌｉｓ； ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｃｏ⁃ｒｅｃｅｐｔｏｒ； ｇｅｎｅ ｃｌｏｎｉｎｇ； ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ； ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ
　 　 双委夜蛾 Ａｔｈｅｔｉｓ ｄｉｓｓｉｍｉｌｉｓ （Ｈａｍｐｓｏｎ）属鳞翅目
夜蛾科委夜蛾属，主要分布于日本、朝鲜、印度、菲律
宾、印度尼西亚和中国台湾等地（ Ｔａｋａｈａｓｈｉ，１９７５；
Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ． ，２０１０），主要为害玉米、小麦、大豆、花生
和甘薯等作物，是一种新发现的农业害虫。 ２０１２ 年
在我国山东玉米田首次发现其幼虫 （李静雯等，
２０１４），随后在河南、陕西和安徽等地也发现此害虫
为害，且逐年加重。 双委夜蛾幼虫与近年来在黄淮
海夏玉米区为害严重的二点委夜蛾 Ａｔｈｅｔｉｓ ｌｅｐｉｇｏｎｅ
（Ｍöｓｃｈｌｅｒ）幼虫习性相似（江幸福等，２０１１；石洁等，
２０１１），多潜伏在田间作物枯枝落叶下，具有隐蔽为
害的习性，严重影响了化学防治效果。
特异的传统嗅觉受体（ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＯＲ）与
高度保守的非典型嗅觉受体（ ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏ⁃
ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｏｒｃｏ）共同形成异源二聚体配体门控阳离
子通道，对昆虫嗅觉具有至关重要的作用。 Ｏｒｃｏ 本
身不参与气味的识别或结合反应，但对离子通道的
形成十分重要 （ Ｌａｒｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ． ，２００４； Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ． ，
２０１１）。 Ｆａｎ ｅｔ ａｌ． （２０１５）通过 ＲＮＡ 干扰降低 Ｓａｖｅ⁃
Ｏｒｃｏ在麦长管蚜 Ｓｉｔｏｂｉｏｎ ａｖｅｎａｅ中的表达，使麦长管
蚜对植物气味和信息素反应减弱； Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．
（２０１４）通过干扰 Ｏｒｃｏ 表达后，绿盲蝽 Ａｐｏｌｙｇｕｓ ｌｕ⁃
ｃｏｒｕｍ对化学信息素的反应降低 ８０％ 。 将编码家蚕
Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ和烟芽夜蛾 Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ的 Ｏｒｃｏ受
体 ｃＲＮＡ，分别在非洲爪蟾 Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ 卵母细胞
中与家蚕的 ＢｍＯｒ１ 传统气味受体 ｃＲＮＡ 共同表达，
发现烟芽夜蛾的 Ｏｒｃｏ 可提高 ＢｍＯｒ１ 对蚕蛾醇的反
应，且提高程度与家蚕 Ｏｒｃｏ 类似，说明 Ｏｒｃｏ 家族成
员不仅在氨基酸序列上保守，而且在功能上也是高
度保守的（Ｎａｋａｇａｗａ ｅｔ ａｌ． ，２００５）。 目前关于 Ｏｒｃｏ
的功能基本明确，但是对昆虫嗅觉受体信号传导的
机制尚不清楚。 因此，研究对不同昆虫间 Ｏｒｃｏ 高度
保守的特性给害虫防治带来了新机遇。
目前关于其它昆虫 Ｏｒｃｏ同源基因组织特异性的
研究较多，如 Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ． （２０１２）对东亚飞蝗 Ｌｏｃｕｓｔａ
ｍｉｇｒａｔｏｒｉａ和沙漠蝗 Ｓｃｈｉｓｔｏｃｅｒｃａ ｇｒｅｇａｒｉａ的 Ｏｒｃｏ 进行
克隆，发现 Ｏｒｃｏ 在口器、颊和翅中都有表达；斜纹夜
蛾 Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ 的 Ｏｒｃｏ 主要在成虫触角中表达
（Ｗｕ ｅｔ ａｌ． ，２０１３）；葛星等（２０１３）发现桃蛀螟 Ｃｏｎｏ⁃
ｇｅｔｈｅｓ ｐｕｎｃｔｉｆｅｒａｌｉｓ的 Ｏｒｃｏ除在触角中大量表达外，在
下唇须中表达量也较高；董钧锋等（２０１５）发现 Ｏｒｃｏ
主要在棉铃虫齿唇姬蜂 Ｃａｍｐｏｌｅｔｉｓ ｃｈｌｏｒｉｄｅａｅ雌、雄蜂
触角中表达，在其它组织中表达量极低，而未见对双
委夜蛾 Ｏｒｃｏ基因组织特异性的相关研究。
因此，基于本课题组前期对双委夜蛾触角转录
组测序结果，本试验结合 ＲＴ⁃ＰＣＲ 技术，克隆和鉴定
出双委夜蛾非典型嗅觉受体 Ｏｒｃｏ 基因，并通过实时
定量 ＰＣＲ方法对其在成虫不同组织中的表达谱进
行分析，以期为下一步研究嗅觉受体的功能奠定理
论基础。
１ 材料与方法
１􀆰 １ 材料
供试昆虫：双委夜蛾幼虫于 ２０１２ 年 ５ 月采自河
南省洛阳市郊区小麦田，带回室内用人工饲料连续
饲养至今。 化蛹后，将雌雄分开放入直径 ２０ ｃｍ、高
３５ ｃｍ的羽化笼内，羽化后用 １０％蜂蜜水补充营养，
饲养条件为温度 ２７ ± １℃、相对湿度 ７０％ ～ ８０％ 、光
周期 １６ Ｌ ∶ ８ Ｄ。
试剂：总 ＲＮＡ 提取试剂盒 ＲＮＡｉｓｏＴＭ Ｐｌｕｓ、反转
录试剂盒 ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ、 Ｏｌｉｇｏ（ ｄＴ）
１８ Ｐｒｉｍｅｒ、 ｄＮＴＰ Ｍｉｘｔｕｒｅ、 ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐ Ｂｕｆｆｅｒ、 Ｐｒｉｍｅ⁃
Ｓｃｒｉｐ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ、ＲＮａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、ＤＮＡ 聚
合酶 ＴａＫａＲａ Ｅｘ Ｔａｑ®试剂盒、 Ｅｘ Ｔａｑ Ｂｕｆｆｅｒ、 Ｅｘ
Ｔａｑ、ｄＮＴＰ Ｍｉｘｔｕｒｅ、琼脂糖凝胶回收试剂盒 ＴａＫａＲａ
ＭｉｎｉＢＥＳＴ Ａｇａｒｏｓｅ Ｇｅｌ ＤＮＡ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ Ｖｅｒ． ４􀆰 ０、
ＤＮａｓｅ消化酶、ＴＡ 克隆载体 ｐＭＤ１８⁃Ｔ 和实时定量
试剂盒 ＳＹＢＲ® Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ ＴａｑＴＭ ＩＩ，宝生物工程（大
连）有限公司；５⁃溴⁃４⁃氯⁃３⁃吲哚⁃β⁃Ｄ⁃半乳糖苷 （５⁃
ｂｒｏｍｏ⁃４⁃ｃｈｌｏｒｏ⁃３⁃ｉｎｄｏｌｙｌ⁃Ｄ⁃ｇａｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ，Ｘ⁃ｇａｌ）、
异丙基⁃Ｄ⁃硫代吡喃半乳糖苷（ ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ⁃Ｄ⁃１⁃ｔｈｉｏｇａ⁃
ｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ， ＩＰＴＧ ）、 氨苄青霉素 （ ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ，
Ａｍｐ）和大肠杆菌 Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＤＨ５２α 感受态细
胞，生工生物工程（上海）有限公司。
ＬＢ（Ｌｕｒｉａ⁃Ｂｅｒｔａｎｉ）培养基：胰蛋白胨 １０ ｇ、酵母
提取物 ５ ｇ、氯化钠 １０ ｇ、蒸馏水 １ ０００ ｍＬ。 加入琼
脂 １８ ｇ配制成 ＬＢ固体培养基。
仪器：ＴＰ６００ 型梯度 ＰＣＲ 仪，日本 ＴａＫａＲａ 公
司；ＮａｎｏＤｒｏｐ ２０００ 紫外微量分光光度计，美国 Ｔｈｅｒ⁃
ｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ 公司；ＤＹＹ⁃１２Ｃ 电泳仪，北京六
一仪器厂；Ｂｉｏ⁃Ｒａｄ ＣＦＸ９６ＴＭ Ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ＰＣＲ 仪，美国
Ｂｉｏ⁃Ｒａｄ 公司。
１􀆰 ２ 方法
１􀆰 ２􀆰 １ 总 ＲＮＡ的提取
选取羽化 ３ ｄ未交配的雌、雄成虫各 ３００ 头，取
其触角、下唇须、喙、胸、腹、足、翅和卵巢 ／精巢等组
织后，立即放入盛有液氮的 １􀆰 ５ ｍＬ 离心管中，充分
研磨，按照总 ＲＮＡ 提取试剂盒 ＲＮＡｉｓｏＴＭ Ｐｌｕｓ 说明
８９９ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４２ 卷
书提取双委夜蛾雌、雄成虫各组织的总 ＲＮＡ。 用
ＤＮａｓｅ消化酶去染后，通过 １􀆰 ０％的琼脂糖凝胶电泳
和紫外微量分光光度计对 ＲＮＡ 的完整性及纯度进
行检测。 重复 ３ 次。
１􀆰 ２􀆰 ２ 第一链 ｃＤＮＡ的合成
第一链 ｃＤＮＡ的合成按照反转录试剂盒 Ｐｒｉｍｅ⁃
Ｓｃｒｉｐｔ® ＲＴ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ 操作指南进行。 各组织分别
取 ２ μｇ总 ＲＮＡ作模板，加入 ５０ μｍｏｌ ／ Ｌ Ｏｌｉｇｏ （ｄＴ）
１８ Ｐｒｉｍｅｒ １ μＬ、 １０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ ｄＮＴＰ Ｍｉｘｔｕｒｅ １ μＬ，
ＲＮａｓｅ ｆｒｅｅ ｄｄＨ２Ｏ补充到 １０ μＬ，６５℃保温 ５ ｍｉｎ，冷
却 ２ ｍｉｎ，然后加入 ５ × ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐ Ｂｕｆｆｅｒ ４ μＬ、Ｐｒｉ⁃
ｍｅＳｃｒｉｐ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ １ μＬ、ＲＮａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
０􀆰 ５ μＬ，加 ＲＮａｓｅ ｆｒｅｅ ｄｄＨ２Ｏ 补充到 ２０ μＬ，４２℃反
应 ６０ ｍｉｎ，７０℃保温 １５ ｍｉｎ， － ２０℃保存备用。
１􀆰 ２􀆰 ３ 目的基因的扩增及鉴定
根据本实验室测定的双委夜蛾成虫触角转录组
数据，用 Ｐｒｉｍｅｒ Ｐｒｅｍｉｅｒ ５􀆰 ０ 设计双委夜蛾 Ｏｒｃｏ特异
性引物（表 １）。 ＲＴ⁃ＰＣＲ 反应体系为 ２０ μＬ：ｃＤＮＡ
模板 １ μＬ、１０ × Ｅｘ Ｔａｑ Ｂｕｆｆｅｒ ２ μＬ、２􀆰 ５ ｍｍｏｌ ／ Ｌ
ｄＮＴＰ Ｍｉｘｔｕｒｅ １􀆰 ６ μＬ、Ｅｘ Ｔａｑ ０􀆰 ２ μＬ、１０ μｍｏｌ ／ Ｌ 上
下游引物各 ０􀆰 ８ μＬ、去离子水 １３􀆰 ６ μＬ。 反应条件
为：９５℃预变性 ５ ｍｉｎ；９５℃变性 ３０ ｓ，５３℃退火 ３０
ｓ，７２℃延伸 １􀆰 ５ ｍｉｎ，４０ 个循环；７２℃延伸 １０ ｍｉｎ。
ＰＣＲ产物通过 １􀆰 ０％的琼脂糖凝胶电泳检测目的条
带。 ＤＮＡ引物合成和测序由北京奥科鼎盛生物科
技有限公司完成。
表 １ 本研究所用引物名称及序列
Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ｐｒｉｍｅｒｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
引物名称
Ｐｒｉｍｅｒ ｎａｍｅ
引物序列 （５′⁃３′）
Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ （５′⁃３′）
引物用途
Ｕｓｅ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒｓ
ＡｄｉｓＯｒｃｏ⁃Ｆ ＣＣＧＡＴＧＡＴＧＡＣＣＡＡＡＧＴＧＡ ｃＤＮＡ克隆
ＡｄｉｓＯｒｃｏ⁃Ｒ ＣＧＴＴＡＣＴＴＧＡＧＴＴＧＣＡＣＣＡ ｃＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ
ＧＡＰＤＨ⁃Ｆ ＡＴＧＴＣＣＡＡＡＡＴＣＧＧＴＡＴＣＡＡＣＧＧ
ＧＡＰＤＨ⁃Ｒ ＴＴＡＡＴＣＣＴＴＧＧＴＣＴＧＧＡＴＧＴＡＣＴＴＧ
ＡｄｉｓＯｒｃｏ⁃ＲＴＦ ＧＣＣＡＧＣＡＧＡＡＣＧＣＣＡＡＴＣＣＴＡ 实时定量 ＰＣＲ
ＡｄｉｓＯｒｃｏ⁃ＲＴＲ ＧＧＴＡＡＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＡＧＴＧＴ Ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ
ＧＡＰＤＨ⁃ＲＴＦ ＣＴＧＣＴＣＡＴＴＴＡＧＡＧＧＧＴＧＧＴＧＣ
ＧＡＰＤＨ⁃ＲＴＲ ＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＡＧＣＧＧＴＧＧＴＡＧ
１􀆰 ２􀆰 ４ ＰＣＲ产物回收、克隆及测序
将琼脂糖凝胶上与预测大小相符的目的片段切
下，用琼脂糖凝胶回收试剂盒回收目的片段。 然后
将目的片段连接到 ｐＭＤ１８⁃Ｔ载体上，再转化到大肠
杆菌 ＤＨ５２α 感受态细胞中，摇菌并涂在含 ２０ ｍｇ ／
ｍＬ Ｘ⁃ｇａｌ ４０ μＬ、２４ ｍｇ ／ ｍＬ ＩＰＴＧ ８ μＬ和 １００ ｍｇ ／ ｍＬ
Ａｍｐ ８ μＬ的 ＬＢ平板上，过夜培养后，进行蓝白斑筛
选，挑取白色单菌落进行 ＰＣＲ 检测。 检测合格后，
再在 ＬＢ 液体培养基中振荡过夜培养后进行测序
验证。
１􀆰 ２􀆰 ５ 序列分析
蛋白质翻译和 ＯＲＦ 预测使用在线工具 Ｅｘｐａｓｙ
（ｈｔｔｐ： ／ ／ ｗｅｂ． ｅｘｐａｓｙ． ｏｒｇ ／ ｔｒａｎｓｌａｔｅ ／ ）进行，蛋白质理
化性质预测使用在线软件 Ｅｘｐａｓｙ（ ｈｔｔｐ： ／ ／ ｗｅｂ． ｅｘ⁃
ｐａｓｙ． ｏｒｇ ／ ｐｒｏｔｐａｒａｍ ／ ）分析；利用在线工具 ＢＬＡＳＴＮ
（ｈｔｔｐ： ／ ／ ｂｌａｓｔ． ｎｃｂｉ． ｎｌｍ． ｎｉｈ． ｇｏｖ）进行序列相似性比
对；使用 ＤＮＡＭＡＮ ６􀆰 ０ 软件进行序列相似性分析；
用 ＴＭＨＭＭ Ｓｅｒｖｅｒ ２􀆰 ０ （ ｈｔｔｐ： ／ ／ ｗｗｗ． ｃｂｓ． ｄｔｕ． ｄｋ ／
ｓｅｒｖｉｃｅｓ ／ ＴＭＨＭＭ）在线工具进行跨膜区域预测；系
统进 化 树 利 用 ＭＥＧＡ ５􀆰 ０ 软 件 中 的 邻 接 法
（ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃ｊｏｉｎｉｎｇ，ＮＪ）进行 １ ０００ 次重复构建。
１􀆰 ２􀆰 ６ 实时定量 ＰＣＲ反应
根据 １􀆰 ２􀆰 ３ 中获得的测序结果设计双委夜蛾
Ｏｒｃｏ特异引物（表 １），用于不同组织实时定量 ＰＣＲ
反应。 同时根据近缘物种的 ＧＡＰＤＨ 基因序列，设
计特异性引物，获得双委夜蛾 ＧＡＰＤＨ 基因的全长
序列（ＧｅｎＢａｎｋ 登陆号：ＫＴ３６１８８３），并根据此序列
设计特异引物，用于实时定量 ＰＣＲ 的内参基因测
定。 实时定量 ＰＣＲ 反应体系为 ２０ μＬ： ＳＹＢＲ®
Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ ＴａｑＴＭ ＩＩ １０ μＬ、 ｃＤＮＡ 模板 ２ μＬ、 １０
μｍｏＬ ／ Ｌ正反向引物各 ０􀆰 ８ μＬ、去离子水 ６􀆰 ４ μＬ。
反应条件：９５℃预变性 ３０ ｓ；９５℃变性 ５ ｓ，５５℃退火
３０ ｓ，７２℃延伸 ３０ ｓ，进行 ４０ 个循环。 实时定量 ＰＣＲ
反应在 Ｂｉｏ⁃Ｒａｄ ＣＦＸ９６ＴＭ Ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ＰＣＲ检测系统上
进行，重复 ３ 次。
１􀆰 ３ 数据分析
以双委夜蛾雌蛾触角中 ＡｄｉｓＯｒｃｏ基因的表达量
为基准，利用 ２ － ΔΔＣＴ分析该基因在不同组织中的表
９９９６ 期 宋月芹等： 双委夜蛾非典型嗅觉受体 Ｏｒｃｏ的克隆、分子特征及表达
达情况，表达量采用 ＳＰＳＳ １７􀆰 ０ 软件进行统计分析，
使用 Ｄｕｎｃａｎ氏新复极差法进行差异显著性检验，并
用 Ｏｒｉｇｉｎ Ｐｒｏ ８􀆰 ０ 软件绘图。
图 １ 双委夜蛾与其它昆虫非典型嗅觉受体氨基酸序列比较
Ｆｉｇ． １ Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｒｃｏ ｆｒｏｍ Ａｔｈｅｔｉｓ ｄｉｓｓｉｍｉｌｉｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｉｎｓｅｃｔｓ
ＡｄｉｓＯｒｃｏ： 双委夜蛾（ＫＲ６３２９８７）； ＡｓｅｇＯｒｃｏ： 黄地老虎（ＡＧＳ４１４４０）； ＣｐｕｎＯｒｃｏ： 桃蛀螟（ＡＧＦ２９８８６）； ＨａｒｍＯｒｃｏ： 棉铃
虫（ＡＤＱ１３１７７）； ＣｃｈｌＯｒｃｏ： 棉铃虫齿唇姬蜂（ＫＰ２５５４４４）； ＤｍｅｌＯｒｃｏ： 黑腹果蝇（ＡＥＯ０１７１８）； ＨｏｂｌＯｒｃｏ： 华北大黑鳃金龟
（ＡＥＥ６９０３３）。 图中黑色区域代表 １００％的相似度， 粉红色代表大于 ７５％的相似度， 浅蓝色代表大于 ５０％的相似度； ＴＭ：
跨膜区； ＥＣ： 膜外区域； ＩＣ： 膜内区域； 磷酸化位点苏氨酸（Ｔ）和酪氨酸（Ｙ）用红色方框圈出。 ＡｄｉｓＯｒｃｏ： Ａｔｈｅｔｉｓ ｄｉｓｓｉｍｉｌｉｓ
（ＫＲ６３２９８７）； ＡｓｅｇＯｒｃｏ： Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｅｇｅｔｕｍ （ＡＧＳ４１４４０）； ＣｐｕｎＯｒｃｏ： Ｃｏｎｏｇｅｔｈｅｓ ｐｕｎｃｔｉｆｅｒａｌｉｓ （ＡＧＦ２９８８６）； ＨａｒｍＯｒｃｏ： Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒ⁃
ｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ （ＡＤＱ１３１７７）； ＣｃｈｌＯｒｃｏ： Ｃａｍｐｏｌｅｔｉｓ ｃｈｌｏｒｉｄｅａｅ （ＫＰ２５５４４４）； ＤｍｅｌＯｒｃｏ： Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ （ＡＥＯ０１７１８）；
ＨｏｂｌＯｒｃｏ： Ｈｏｌｏｔｒｉｃｈｉａ ｏｂｌｉｔａ （ＡＥＥ６９０３３）． Ｂｌａｃｋ ａｒｅａｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ １００％ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ， ｐｉｎｋ ａｒｅａｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ７５％ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ，
ａｎｄ ｂｌｕｅ ａｒｅａｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ａｔ ｌｅａｓｔ ５０％ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ； ＴＭ： ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｄｏｍａｉｎｓ； ＥＣ： ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎｓ； ＩＣ： ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｏ⁃
ｍａｉｎｓ； ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ （Ｔ） ａｎｄ ｔｙｒｏｓｉｎｅ （Ｙ） ｉｎ ｒｅｄ ｂｏｘｅｓ ａｒｅ ｓｉｔｅｓ ｏｆ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ． 　
２ 结果与分析
２􀆰 １ 目的基因序列分析
结果显示，所获得的目的基因全长开放阅读框
为 １ ４２２ ｂｐ，编码 ４７３ 个氨基酸，预测分子量为
５３􀆰 ３３ ｋＤ，等电点为 ８􀆰 ５９。 ＢＬＡＳＴＮ 序列比对结果
表明，该基因与其它鳞翅目昆虫的 Ｏｒｃｏ 具有极高的
序列相似性，与粘虫 Ｍｙｔｈｉｍｎａ ｓｅｐａｒａｔａ 相似性为
９７％ ，与大螟 Ｓｅｓａｍｉａ ｉｎｆｅｒｅｎｓ、甜菜夜蛾 Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ
ｅｘｉｇｕａ和黄地老虎 Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｅｇｅｔｕｍ相似性均为 ９６％ 。
因此，将该基因命名为 ＡｄｉｓＯｒｃｏ，ＧｅｎＢａｎｋ 登录号
为 ＫＲ６３２９８７。
ＡｄｉｓＯｒｃｏ受体序列具有 ７ 个 α螺旋跨膜区，跨膜
区氨基酸的位置分别是第 ４６ ～ ６５、７５ ～ ９７、１３６ ～ １５８、
１９４ ～２１６、３３４ ～３５６、３７６ ～３９８和 ４４７ ～４６９位，并且该
序列 Ｎ端在细胞膜内，Ｃ端在细胞膜外。 将此序列与
来自 ４目 ７ 种昆虫的 Ｏｒｃｏ 氨基酸序列进行对比，发
现在其 Ｃ末端均具有 １个高度保守的区域，特别是在
第 ６与第 ７跨膜区之间及第 ７ 跨膜区（图 １）。 系统
０００１ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４２ 卷
进化树结果表明，同目昆虫 Ｏｒｃｏ 聚类在同一分支，此
外，鳞翅目与双翅目、膜翅目与鞘翅目又分别聚为一
簇（图 ２）。
图 ２ 以邻接法构建的双委夜蛾与其它昆虫 Ｏｒｃｏ氨基酸序列的系统进化树
Ｆｉｇ． ２ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｏｒｃｏ ｏｆ Ａｔｈｅｔｉｓ ｄｉｓｓｉｍｉｌｉｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｉｎｓｅｃｔ ｓｐｅｃｉｅｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃ｊｏｉｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ
括号外字母为基因名，括号内编号为基因 ＧｅｎＢａｃｋ 登录号。 Ｔｈｅ ｌｅｔｔｅｒｓ ｏｕｔｓｉｄｅ ｔｈｅ ｂｒａｃｋｅｔｓ ｄｅｎｏｔｅ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｎａｍｅｓ， ａｎｄ
ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒｓ ｉｎ ｂｒａｃｋｅｔｓ ｄｅｎｏｔｅ ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒｓ． 　
２􀆰 ２ 双委夜蛾 Ｏｒｃｏ基因的组织特异性表达
ＰＣＲ结果表明，ＡｄｉｓＯｒｃｏ 在成虫触角中表达量
显著高于其它组织，在雄蛾触角中 ＡｄｉｓＯｒｃｏ 的表达
量是雌蛾触角中的 ４􀆰 ２ 倍，且差异显著；ＡｄｉｓＯｒｃｏ 在
双委夜蛾雌蛾足、翅和下唇须等组织中均有少量表
达；在雄蛾下唇须和喙组织中也有少量表达，但二者
间无显著差异；在雌、雄蛾胸部和腹部、雌蛾喙和卵
巢以及雄蛾足、翅和精巢中均未检测到 ＡｄｉｓＯｒｃｏ 的
表达（图 ３）。
３ 讨论
本研究首次对双委夜蛾的非典型嗅觉受体基因
ＡｄｉｓＯｒｃｏ进行了克隆和鉴定。 结果表明，该基因所
编码的氨基酸具有昆虫 Ｏｒｃｏ的共同特性，即氨基酸
Ｎ端在膜内，Ｃ 端在膜外，具有 ７ 个 α 螺旋跨膜区，
序列保守性高 （ Ｋｒｉｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ． ，２００３； Ｓｍａｒｔ ｅｔ ａｌ． ，
２００８）。 并将双委夜蛾 Ｏｒｃｏ氨基酸序列与其它 ４ 目
１００１６ 期 宋月芹等： 双委夜蛾非典型嗅觉受体 Ｏｒｃｏ的克隆、分子特征及表达
图 ３ ＡｄｉｓＯｒｃｏ在双委夜蛾雌、雄成虫不同组织中的相对表达量
Ｆｉｇ． ３ Ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡｄｉｓＯｒｃｏ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ Ａｔｈｅｔｉｓ ｄｉｓｓｉｍｉｌｉｓ ａｄｕｌｔ ｆｅｍａｌｅｓ ａｎｄ ｍａｌｅｓ
图中数据为平均数 ±标准误。 图中不同字母表示经 Ｄｕｎｃａｎ 氏新复极差法检验在 Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ 水平差异显著。 Ｄａｔａ ａｒｅ
ｍｅａｎ ± ＳＥ． Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ ｂｙ Ｄｕｎｃａｎ’ｓ ｎｅｗ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒａｎｇｅ ｔｅｓｔ．
　
７ 种昆虫进行对比，证实 Ｏｒｃｏ 序列在 Ｃ 末端序列具
有 １ 个高度保守的区域，尤其在第 ６ 与第 ７ 跨膜区
之间以及第 ７ 跨膜区保守性最高，这与对斜纹夜蛾
和棉铃虫齿唇姬蜂的研究结果一致 （Ｗｕ ｅｔ ａｌ． ，
２０１３；董钧锋等，２０１５）。 Ｏｒｃｏ 经过长期进化后，在
不同昆虫间仍具有高度的保守性，说明在昆虫纲中
Ｏｒｃｏ可能来自于同一祖先。
本研究表明，ＡｄｉｓＯｒｃｏ 主要在成虫触角中表达，
此结果与大多数昆虫 Ｏｒｃｏ 的表达分布情况一致
（Ｗｕ ｅｔ ａｌ． ，２０１３；董钧锋等，２０１５），这种现象可能
由于触角是昆虫感受外界环境气味的主要器官，该
组织分布有大量的嗅觉感受器。 本研究发现，Ａｄｉｓ⁃
Ｏｒｃｏ在雄蛾触角中的表达量最高，是雌蛾的 ４􀆰 ２ 倍，
这与大部分研究结果一致，如桃蛀螟的 Ｏｒｃｏ 在雄蛾
触角中的表达量是雌蛾的 １􀆰 ３ 倍（葛星等，２０１３）；
斜纹夜蛾 Ｏｒｃｏ 在雄蛾触角中表达量是雌蛾的 ３􀆰 ０
倍（Ｗｕ ｅｔ ａｌ． ，２０１３）；甜菜夜蛾 Ｏｒｃｏ 在雄蛾触角中
表达量是雌蛾的 ５􀆰 ５ 倍（张逸凡等，２０１１）；棉铃虫
齿唇姬蜂 Ｏｒｃｏ在雄蜂触角中的表达量是雌蜂的 ８􀆰 ０
倍（董钧锋等，２０１５）。 此现象可能是因为雄蛾除了
接受寄主植物气味外，还要识别和感知同类异性发
出的性信息素。
本研究发现，Ｏｒｃｏ 除在触角中有表达外，在喙、
下唇须、足、翅、胸和腹等组织中也有表达，这与已有
的研究报道一致，如葛星等（２０１３）发现桃蛀螟雌蛾
下唇须中 Ｏｒｃｏ 有一定量的表达；在埃及伊蚊 Ａｅｄｅｓ
ａｅｇｙｐｔｉ和致倦库蚊 Ｃｕｌｅｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆａｓｃｉａｔｕｓ 喙中也检
测到 Ｏｒｃｏ的存在（Ｍｅｌｏ ｅｔ ａｌ． ，２００４；Ｘｉａ ＆ Ｚｗｉｅｂｅｌ，
２００６）；Ｏｒｃｏ在 ４ 种榕小蜂雌蜂的足和腹部也有表
达（Ｌｕ ｅｔ ａｌ． ，２００９）。 本研究未在精巢和卵巢中检
测到 Ｏｒｃｏ的表达，这与 Ｐｉｔｔｓ ｅｔ ａｌ． （２０１３）的研究结
果相同。
Ｏｒｃｏ序列上的高度保守性以及在嗅觉识别中
的独特地位，暗示 Ｏｒｃｏ可能成为破坏嗅觉信号的一
个潜在靶标。 对嗅觉的有效干扰或破坏，将严重影
响昆虫对气味和性信息素的反应，进而影响到昆虫
的取食、交配和产卵等重要生命活动。 通过嗅觉干
扰达到防治害虫的目的，将是未来害虫综合防治的
新思路。
参 考 文 献 （Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）
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ｓｏｐｈｉｌａ ｏｄｏｒａｎｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｒｅ ｎｏｖｅｌ ｓｅｖｅｎ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｄｏｍａｉｎ
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ｑｕｅｆａｓｃｉａｔｕｓ． Ｉｎｓｅｃｔ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ３６
（３）： １６９ － １７６
Ｙａｎｇ Ｙ， Ｋｒｉｅｇｅｒ Ｊ， Ｚｈａｎｇ Ｌ， Ｂｒｅｅｒ Ｈ． ２０１２． Ｔｈｅ ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｃｏ⁃ｒｅ⁃
ｃｅｐｔｏｒ Ｏｒｃｏ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍｉｇｒａｔｏｒｙ ｌｏｃｕｓｔ （Ｌｏｃｕｓｔａ ｍｉｇｒａｔｏｒｉａ） ａｎｄ
ｔｈｅ ｄｅｓｅｒｔ ｌｏｃｕｓｔ （Ｓｃｈｉｓｔｏｃｅｒｃａ ｇｒｅｇａｒｉａ）： ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘ⁃
ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ． Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ８
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Ｚｈａｎｇ ＹＦ， Ｘｉｕ ＷＭ， Ｙａｎｇ ＤＬ， Ｄｏｎｇ ＳＬ， Ｌｉｕ ＹＳ． ２０１１． Ｔｉｓｓｕｅ⁃
ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｔｅｍｐｏｒａｌ ａｎｄ ｓｐａｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｔｙｐｉ⁃
ｃａｌ ｏｄｏｒａｎｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇｅｎｅ ＯＲ２ ｉｎ Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ （Ｈüｂｎｅｒ）．
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ， ２７（７）： ２３１ － ２３５ （ ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［张逸凡， 修伟明， 杨殿林， 董双林， 刘玉升．
２０１１． 甜菜夜蛾非典型嗅觉受体基因 ＯＲ２ 的组织特异性和
时空表达． 中国农学通报， ２７（７）： ２３１ － ２３５］
Ｚｈｏｕ ＹＬ， Ｚｈｕ ＸＱ， Ｇｕ ＳＨ， Ｃｕｉ ＨＨ， Ｇｕｏ ＹＹ， Ｚｈｏｕ ＪＪ， Ｚｈａｎｇ ＹＪ．
２０１４． Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｉｎ Ａｐｏｌｙｇｕｓ ｌｕｃｏｒｕｍ ｏｆ ｔｈｅ ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｃｏｒｅｃｅｐｔｏｒ
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ｔｏ ｔｗｏ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｓｅｍｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｓｅｃｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，
６０： ３１ － ３９
（责任编辑：王　 璇）
３００１６ 期 宋月芹等： 双委夜蛾非典型嗅觉受体 Ｏｒｃｏ的克隆、分子特征及表达