全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４５(４): ３５０￣３５５(２０１５)
收稿日期: ２０１４￣０７￣０４ꎻ 修回日期: ２０１５￣０３￣１１
基金项目: 农业部公益性行业(农业)科研专项(２０１２０３０７５)ꎻ山东省现代农业产业技术体系水果创新团队专项基金(ＳＤＡＩＴ￣０３￣０２２￣０４)ꎻ中
俄国际科技合作专项(２０１２ＤＦＲ３０７００)
通讯作者: 刘庆忠ꎬ研究员ꎬ主要从事果树生物技术与资源育种研究ꎻＴｅｌ:０５３８￣８２６６６６３ꎬＥ￣ｍａｉｌ:ｑｚｌｉｕ００１＠１２６.ｃｏｍ
第一作者: 徐丽ꎬ女ꎬ山东曲阜人ꎬ助理研究员ꎬ博士ꎬ主要从事果树种质资源和生物技术育种研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ:ｘｕｌｉ１２４５＠ｇｍａｉｌ.ｃｏｍꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１５.０４.００２
甜樱桃流胶病原菌的分子鉴定和致病性检测
徐 丽ꎬ 王甲威ꎬ 陈 新ꎬ 魏海蓉ꎬ 宗晓娟ꎬ 刘庆忠∗
(山东省果树研究所 /山东省果树生物技术重点实验室ꎬ泰安 ２７１０００)
摘要:为明确甜樱桃流胶病的病原菌ꎬ采用普通细菌学方法从 １５ 个病样中分离获得 １０ 个代表性菌株ꎬ对病原菌的形态学
特征、生理生化特性以及致病性进行了研究ꎮ 利用 ＰＣＲ对菌株的 １６Ｓ￣２３Ｓ ｒＤＮＡ转录间隔区( ＩＴＳ)序列进行扩增ꎬ扩增产
物克隆测序ꎬ结果显示该菌株属于丁香假单胞菌(Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ)ꎮ 用 ＭｅｇＡｌｉｇｎ构建系统发育树ꎬ结果显示该菌株
与丁香假单胞菌丁香致病变种(Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ)亲缘关系最近ꎬ两者最先聚在一起ꎮ 分离菌株中均可检测到 ｓｙｒＢ
基因ꎮ 研究结果表明 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ为甜樱桃流胶病的病原菌ꎮ
关键词:甜樱桃流胶病ꎻ 丁香假单胞菌丁香致病变种ꎻ １６Ｓ￣２３Ｓ ｒＤＮＡ转录间隔区序列ꎻ 致病性ꎻ ｓｙｒＢ基因
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｈｅｒｒｙ ｇｕｍｍｏｓｉｓ ｐａｔｈｏｇｅｎ　 ＸＵ Ｌｉꎬ
ＷＡＮＧ Ｊｉａ￣ｗｅｉꎬ ＣＨＥＮ Ｘｉｎꎬ ＷＥＩ Ｈａｉ￣ｒｏｎｇꎬ ＺＯＮＧ Ｘｉａｏ￣ｊｕａｎꎬ ＬＩＵ Ｑｉｎｇ￣ｚｈｏｎｇ　 (Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｏｍｏ￣
ｌｏｇｙ / Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｆｒｕｉｔ Ｔｒｅｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ Ｔａｉ’ａｎ ２７１０００ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｏｆ ｃｈｅｒｒｙ ｇｕｍｍｏｓｉｓꎬ ｔｅｎ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ
１５ ｐｌａｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｉｔｈ ｔｙｐｉｃａｌ ｄｉｓｅａｓｅ ｓｙｍｐｔｏｍｓ. Ｔｈｅｓｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ
ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌꎬ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓꎬ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｎａｌｙ￣
ｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ｉｎｔｅｒｎａｌｌｙ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｓｐａｃｅｒ (ＩＴＳ) ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ １６Ｓ~２３Ｓ ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ＤＮＡ. Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｕｒｔｈｅｒ
ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｓｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｈａｄ ａ ｃｌｏｓｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ. Ｔｈｅ ｓｙｒＢ ｇｅｎｅꎬ ｗｈｉｃｈ
ｉｓ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｉｎ Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ａｌｌ ｔｅｓｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ. Ｏｕｒ ｄａｔａ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈａｔ ｃｈｅｒｒｙ ｇｕｍｍｏｓｉｓ
ｉｎ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅꎬ Ｃｈｉｎａ ｗａｓ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｃｈｅｒｒｙ ｇｕｍｍｏｓｉｓꎻ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅꎻ １６Ｓ￣２３Ｓ ｒＤＮＡ ＩＴＳꎻ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙꎻ
ｓｙｒＢ ｇｅｎｅ
中图分类号: Ｓ４３６.６２１.１　 　 　 　 　 文献标识码: Ａ　 　 　 　 　 文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１５)０４￣０３５０￣０６
　 　 樱桃属于蔷薇科樱桃属落叶乔木ꎬ是我国特色
水果之一ꎮ 随着种植面积的不断扩大ꎬ樱桃流胶病
日趋严重ꎬ已严重影响了樱桃的产量和品质ꎬ并威
胁着我国樱桃产业的进一步发展[１]ꎮ 英国、墨西
哥和法国等国家也有相关报道[２~４]ꎮ 樱桃流胶病
病原属于丁香假单胞菌(Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ)ꎬ
研究表明引起樱桃流胶的丁香假单胞菌变种主要
是 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ 和 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｍｏｒ￣
ｓｐｒｕｎｏｒｕｍ[５~７]ꎮ Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ 造成的危
害较多ꎬ主要危害樱桃树体和枝干ꎬ发病时从主干、
主枝的伤口或者开裂处流出胶状粘液ꎬ也可造成顶
梢枯死ꎬ花枯和芽枯等症状ꎬ导致树势衰弱、减产ꎬ
严重时死树绝产[７ꎬ８]ꎮ 有研究表明丁香霉素是
Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ主要的致病因子[９]ꎬ而 ｓｙｒＢ
基因能编码丁香霉素合成酶参与丁香霉素的合
成[１０ꎬ１１]ꎬ且 ｓｙｒＢ基因在 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ中
　
　 ４期 徐 丽ꎬ等:甜樱桃流胶病原菌的分子鉴定和致病性检测
是保守的[１２ꎬ１３]ꎮ
　 　 目前国内尚未有关于甜樱桃流胶病原菌鉴定
的研究ꎬ其发病规律和防治方法尚不明确ꎮ 本研究
首次从甜樱桃发病枝条中分离纯化到病原菌ꎬ对病
原菌进行了鉴定和致病性测定ꎬ并对获得的菌株进
行了 １６Ｓ￣２３Ｓ ｒＤＮＡ ＩＴＳ 序列分子鉴定和 ｓｙｒＢ 基
因检测ꎬ为该病害的进一步研究奠定了基础ꎮ
１　 材料与方法
１.１　 植物材料和培养基
　 　 用于病菌分离的 １５份感病植物材料采集于山
东省泰安市郊区樱桃园ꎮ ＮＡ (ｎｕｔｒｉｅｎｔ ａｇａｒ)培养
基:牛肉膏 ０.３％ꎬ蛋白胨 １％ꎬ氯化钠 ０.５％ꎬ琼脂
２％ꎬｐＨ ７.０ ~ ７.４ꎻＫＢ (Ｋｉｎｇ′ｓ ｍｅｄｉｕｍ Ｂ)培养基:
月示蛋白胨 Ｎｏ.３ ２％ꎬ磷酸氢二钾 ０.１５％ꎬ七水合
硫酸镁 ０.１５％ꎬ甘油 １.５％ꎬ琼脂 １.５％ꎬ ｐＨ７.０~７.４ꎮ
１.２　 病原菌的分离
　 　 采集的样品采用平板划线分离法进行分离ꎬ首
先将病组织用 ７５％酒精表面消毒ꎬ然后用无菌水
冲洗 ３次ꎬ再用灭菌手术刀切取病健交界处的植物
组织ꎬ切成碎片后放入等量无菌水中浸泡 ３０ ｍｉｎꎬ
然后在 ＮＡ 平板培养基上划线分离ꎬ置 ２８℃恒温
箱中培养 ４８ ｈꎮ 挑取代表性单菌落进行划线分离
纯化ꎬ在 ＫＢ培养基上置 ３６５ ｎｍ 波长紫外光下观
察菌落是否产生荧光ꎮ
１.３　 病原菌的形态学特征及生理生化特性测定
　 　 将各菌株在 ＮＡ 和 ＫＢ 平板上培养 ４８ ｈ 观察
菌落形态和培养性状[１４]ꎮ 生理生化测定主要参照
Ｓｃｈａａｄ等[１５]的方法进行ꎮ
１.４　 病原菌的致病性检测
　 　 将 ２８℃下培养 ４８ ｈ 的菌株用无菌水稀释成
１０８ＣＦＵ􀅰ｍＬ－１的菌悬液用于所有接种试验ꎮ 健康
的离体甜樱桃枝条表面用 ７５％酒精消毒ꎬ用注射
器在枝条表面和叶芽基部针刺造成微伤口ꎬ将稀释
好的菌悬液接种于伤口处ꎬ每处理接种 ５ 个枝条ꎬ
重复 ３次ꎬ以接种无菌水作为对照ꎬ用塑料袋保湿ꎬ
定期观察记录ꎻ花芽萌发前 ５ ｄ 采用喷雾法ꎬ接种
离体带花芽的甜樱桃枝条 ３条ꎬ以接种无菌水作为
对照ꎬ重复 ３次ꎬ定期观察记录ꎻ樱桃成熟前采集樱
桃果实离体接种ꎬ用注射器接种后放在有浸湿滤纸
的培养皿中ꎬ以接种无菌水作为对照ꎬ定期记录观
察结果ꎻ微繁苗接种选用 ２ ~ ３ 周大小的甜樱桃组
培苗ꎬ将菌悬液接种到组培瓶中ꎬ每处理接种 ３ 瓶ꎬ
每瓶 ３ ~ ４ 棵ꎬ重复 ３ 次ꎬ以接种无菌水的作为对
照ꎬ组培苗放置在 ２５±２℃光照培养箱ꎬ１６ ｈ 光照 /
８ ｈ黑暗培养ꎬ每周记录结果ꎬ记录 ４周ꎮ
１.５　 病原菌的 ＩＴＳ序列测定
　 　 将供试菌株接种在 ＮＡ液体培养基中ꎬ２８℃摇
瓶培养(１６０ ｒ􀅰ｍｉｎ－１ ) ４８ ｈꎮ 按照细菌基因组
ＤＮＡ提取试剂盒(天根 ＤＰ３０２￣０２)说明书提取基
因组 ＤＮＡꎮ
　 　 根据已发表的植物病原细菌 ＩＴＳ 序列设计引
物进行 ＰＣＲ 扩增ꎬ特异引物为: Ｐ１ ( ５′￣ＡＣＧＧＴ￣
ＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴＣ￣３′) 和 Ｐ２ ( ５′￣ＧＣＴＴ￣
ＴＡＣＧＣＣＣＡＧＴＡＡＴＴＣＣＣ￣３′)ꎮ ＰＣＲ 反应条件:
９４℃变性 ５ ｍｉｎꎻ ９４℃ ５０ ｓꎬ ５５℃ １ ｍｉｎꎬ ７２℃ １
ｍｉｎꎬ３５个循环ꎻ最后 ７２℃延伸 １０ ｍｉｎꎮ ＰＣＲ 产物
经１.０％琼脂糖凝胶电泳检测ꎬ将目标片段进行回
收和连接ꎬ转化大肠杆菌 ＤＨ５αꎬ菌落 ＰＣＲ 检测后
挑取 ５个阳性菌落送交上海生工生物公司测序ꎮ
测序结果在 ＧｅｎＢａｎｋ 上进行 ＢＬＡＳＴ 搜索ꎬ应用
ＤＮＡＭＥＮ进行同源比对ꎬ并用 ＭｅｇＡｌｉｇｎ 构建系
统发育树ꎬ分析其亲缘关系ꎮ
１.６　 病原菌 ｓｙｒＢ基因的 ＰＣＲ检测
　 　 为检测分离菌株中是否存在编码环式脂肽毒
素的 ｓｙｒＢ基因ꎬ参照 Ｓｏｒｅｎｓｅｎ 等[１６]合成特异性引
物 Ｂ１ ( ５′￣ＣＴＴＴＣＣＧＴＧＧＴＣＴＴＧＡＴＧＡＧＧ￣３′) 和
Ｂ２ ( ５′￣ＴＣＧＡＴＴＴＴＧＣＣＧＴＧＡＴＧＡＧＴＣ￣３′)ꎬ ＰＣＲ
反应条件:９４℃变性 ５ ｍｉｎꎻ９４℃ ５０ ｓꎬ５５℃ １ ｍｉｎꎬ
７２℃ １ ｍｉｎꎬ３５ 个循环ꎻ最后 ７２℃延伸 １０ ｍｉｎꎮ
ＰＣＲ产物经 １.０％琼脂糖凝胶电泳检测ꎮ
２　 结果与分析
２.１　 病原菌的形态与生理生化特性
　 　 挑取典型菌落进行分离纯化ꎬ获得的 １０ 个菌
株依次编号为 ＳＣＧ￣１~ ＳＣＧ￣１０ꎮ 结果表明 １０个菌
株形态特征基本一致ꎬ在 ＮＡ 培养基上培养 ４８ ｈ
的菌落呈灰白色ꎬ圆形ꎬ凸起ꎬ全缘ꎬ表面较粘稠ꎮ
在 ＫＢ培养基上培养 ４８ ｈꎬ形成圆形菌落ꎬ黄白色ꎬ
全缘ꎬ不透明ꎬ表面光滑ꎬ黏稠状ꎬ紫外灯下(３６５
１５３
　
植物病理学报 ４５卷
ｎｍ)产生蓝色荧光 (图 １)ꎮ １０ 个菌株的生理生化
测定结果一致ꎬ革兰氏染色反应阴性ꎻ具有冰核活
性ꎻ氧化酶反应阴性ꎻ精氨酸双水解酶反应阴性ꎻ果
胶不凹陷ꎻ可由蔗糖形成果聚糖ꎻ液化明胶ꎻ能利用
甘露醇、肌醇、山梨醇、赤藓糖醇、葡萄糖ꎻ不能利用
核糖醇、Ｌ￣酒石酸、邻氨基苯甲酸ꎻ七叶苷水解阳
性ꎻ硝酸盐还原阴性ꎻ在 ４１℃下不能生长ꎬ表明该
菌具有典型的丁香假单胞菌丁香致病变种(Ｐ. ｓｙ￣
ｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ)的特征[１５]ꎮ
２.２　 病原菌的致病性
　 　 选取菌株 ＳＣＧ￣５ 进行接种试验(图 ２)ꎬ致病
性检测结果显示:健康枝条离体接种后在伤口处出
现凸起皲裂ꎬ枝条变干ꎬ失绿ꎬ剥开树皮韧皮部和木
质部变褐ꎬ发病时间在 １０ ｄ左右ꎬ对照枝条没有病
变症状ꎻ针刺芽基后 ７ ｄ 左右ꎬ叶芽有的保持休眠
状态而干枯变黑ꎬ有的叶片抽不出或抽出后叶缘变
黑卷曲ꎬ对照叶芽能正常抽出叶片ꎻ花苞喷雾接种
后３ ~ ５ ｄ花苞腐烂或花瓣变为水浸状褐色ꎬ对照
Ｆｉｇ. １　 Ｃｏｌｏｎｉａｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｓｅａｓｅｄ ｐｌａｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ
Ｆｉｇ. ２　 Ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｓｗｅｅｔ ｃｈｅｒｒｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ
Ａ: Ｉｎ ｔｗｉｇｓꎻＢ: Ｉｎ ｆｏｌｉａｒ ｂｕｄｓꎻＣ: Ｉｎ ｂｌｏｓｓｏｍ ｂｕｄｓꎻＤ: Ｉｎ ｆｒｕｉｔꎻ Ｅ: Ｉｎ ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｅｄ ｓｗｅｅｔ ｃｈｅｒｒｙꎻ
ＣＫ: Ｃｏｎｔｒｏｌꎬｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄ ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒ.
２５３
　
　 ４期 徐 丽ꎬ等:甜樱桃流胶病原菌的分子鉴定和致病性检测
花苞正常开花ꎻ樱桃果实注射接种后 ５~７ ｄ 接种部
位出现褐色组织坏死ꎬ对照正常没有病斑出现ꎮ 微
繁苗接种 ３周左右ꎬ出现叶片坏死斑或者变色ꎬ植株
顶稍坏死ꎬ严重者整株枯萎ꎬ对照微繁苗生长正常ꎮ
２.３　 病原菌的 ＩＴＳ序列分析
　 　 鉴于生理生化试验结果ꎬ选取菌株 ＳＣＧ￣５ 用
于进一步的分子鉴定ꎬ以提取的细菌基因组 ＤＮＡ
为模板ꎬ用特异引物 Ｐ１和 Ｐ２进行 ＰＣＲ扩增ꎬ得到
约 １ ０００ ｂｐ 的扩增产物ꎬ测序结果表明该序列长
９５８ ｂｐꎬ 在 ＧｅｎＢａｎｋ 数 据 库 中 的 登 录 号 为
ＫＪ８３１０７０ꎮ 将该序列在 ＧｅｎＢａｎｋ 数据库中进行
ＢＬＡＳＴ搜索分析ꎬＤＮＡＭＡＮ比对结果表明该序列
与丁香假单胞菌菜豆致病变种 (Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ.
ｐｈａｓｅｏｌｉｃｏｌａ)ꎬ丁香假单胞菌丁香致病变种(Ｐ. ｓｙ￣
ｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ)ꎬ丁香假单胞菌枇杷致病变种
(Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａｅ)和丁香假单胞菌桑致
病变种(Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｍｏｒｉ)的 ＩＴＳ序列具有 ９９％
同源性ꎬ表明菌株 ＳＣＧ￣５ 属于丁香假单胞菌
(Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ)ꎮ 用ＭｅｇＡｌｉｇｎ构建系统发育树ꎬ从构
建的发育树可知菌株 ＳＣＧ￣５与 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙ￣
ｒｉｎｇａｅ亲缘关系最近ꎬ两者最先聚在一起(图 ３)ꎮ
２.４　 病原菌 ｓｙｒＢ基因的 ＰＣＲ检测
　 　 环式脂肽毒素中的丁香霉素是引起坏死的毒素ꎬ
大多数 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ 菌株均可产生[９]ꎬ其
合成相关基因 ＳｙｒＢ 的扩增序列对 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ
ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ有高度特异性ꎬ可用来快速检测及鉴定该
病原菌[１６]ꎮ 本研究应用特异引物 Ｂ１ 和 Ｂ２ 检
测 １０个菌株ꎬ均能检测到 ７５０ ｂｐ的目标条带(图 ４)ꎬ
Ｆｉｇ. ３　 Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ １６Ｓ￣２３Ｓ ｒＤＮＡ ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐａｔｈｏｖａｒｓ
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ: Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａｅ (ＡＢ００１４４２.１)ꎻ
Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｇｌｙｃｉｎｅａ (ＡＢ００１４４３.１)ꎻＰ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｍｏｒｉ (ＡＢ００１４４６.１)ꎻＰ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｍｏｒｓｐｒｕｎｏｒｕｍ (ＨＭ０１０３９９.１)ꎻ
Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｍｙｒｉｃａｅ (ＡＢ００１４４７.１)ꎻＰ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｐｈａｓｅｏｌｉｃｏｌａ (ＮＲ＿０７４５９８.１)ꎻ
Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ (ＣＰ００００７５.１)ꎻＰ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｔａｇｅｔｉｓ (ＡＢ００１４４９.１)ꎻＰ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｐｉｓｉ (ＡＢ１０９２１８.１) .
Ｆｉｇ. ４　 Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｆ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｓｙｒＢ ｇｅｎｅ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ
Ｍ: ＤＬ２０００ ｍａｒｋｅｒꎻＬａｎｅ１￣１０: ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＳＣＧ￣１ ｔｏ ＳＣＧ￣１０ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.
３５３
　
植物病理学报 ４５卷
表明分离菌株中存在 ｓｒｙＢ 基因ꎬ进一步证明分离
菌株为 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅꎮ
３　 讨论
　 　 目前樱桃流胶病的大面积发生对我国樱桃产
业的可持续发展已经造成了严重威胁ꎮ 该病原菌
的快速、准确鉴定是对病原菌研究和有效防治的重
要前提ꎬ也是目前樱桃病害防治的研究热点ꎮ 由于
丁香假单胞菌的致病亚种或者变种很多ꎬ所以对丁
香假单胞菌种类的准确鉴定有一定难度ꎮ １６Ｓ￣２３Ｓ
ｒＤＮＡ ＩＴＳ具有保守性ꎬ能够反映物种的亲缘关系ꎬ
又具有变异性ꎬ可揭示物种的特征核苷酸序列ꎬ因
此可将 ＩＴＳ序列作为细菌在种和亚种水平上进行
分类鉴定的工具[１７~１９]ꎮ 本研究利用 ＩＴＳ序列鉴定
出山东泰安樱桃主产区甜樱桃流胶病致病菌为丁
香假单胞菌(Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ)ꎮ 研究表明 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ
的许多菌株可以产生丁香毒素ꎬ丁香霉素ꎬ丁香抑
生素和假单胞霉素四种环式脂肽毒素中的一种ꎬ根
据 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ致病变种产生的不同毒素ꎬ或者通
过直接检测它们的次生代谢物或检测毒素合成相
关的基因ꎬ可以区别这些变种ꎮ 丁香霉素的产生依
赖于 ｓｙｒＢ基因的表达ꎬＰＣＲ扩增 ７５２ ｂｐ的 ｓｙｒＢ基
因可用于快速准确的鉴定丁香假单胞菌丁香致病
变种产生环式脂肽毒素的菌株[１６]ꎮ 本研究分离的
菌株均可检测到 ｓｙｒＢ 基因ꎬ表明这些菌株是可产
生丁香霉素的丁香致病变种(Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎ￣
ｇａｅ)ꎮ
　 　 有研究表明通过接种树枝伤口、叶痕、果实、细
枝和微繁樱桃苗或丁香苗可以确定分离物的致病
性[２ꎬ２０]ꎬ其中接种微繁植株是一种快速和稳定的方
法ꎬ可以替代田间接种或离体接种[２０]ꎮ 本研究采
用离体接种和微繁苗接种两种方法来检测病原菌
的致病性ꎬ结果表明甜樱桃离体接种病菌后可产生
花枯、芽枯、枝条和果实变褐等症状ꎮ 病原菌接种
在樱桃微繁苗上可导致叶片变色坏死ꎬ顶稍枯死等
症状ꎮ 进一步证实通过微繁植株可以有效的进行
病原菌致病性的鉴定ꎮ
　 　 丁香假单胞菌(Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ)有 ５０ 多个致病变
种[２１~２２]ꎬ引起樱桃流胶的变种主要是丁香致病变
种(Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ)和李坏死致病变种
(Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｍｏｒｓｐｒｕｎｏｒｕｍ)ꎮ 这 ２个致病变种
都能引起细菌性溃疡和流胶症状ꎮ 研究表明 Ｐ.
ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ在甜樱桃和其他核果寄主上
致病力较强[２３]ꎬＰ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｍｏｒｓｐｒｕｎｏｒｕｍ在酸
樱桃上好像是更重要的病原菌ꎮ 近来也有学者在
樱桃上分离到 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ 与 Ｐ. ｓｙｒｉｎ￣
ｇａｅ ｐｖ. ｍｏｒｓｐｒｕｎｏｒｕｍ 中间类型的变种[２ꎬ６]ꎮ 在英
国ꎬ樱桃树上的流胶主要是由 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｍｏｒ￣
ｓｐｒｕｎｏｒｕｍ引起[５ꎬ２４~２５]ꎮ 在欧洲的其他国家ꎬ南非
和美国ꎬ樱桃树的流胶病是由丁香假单胞菌的 ２ 个
致病变种及其中间型引起的[２０ꎬ２５~２６]ꎮ 本研究通过
形态学特征、生理生化特性、致病性检测和 ＩＴＳ 序
列分析以及特异基因 ＰＣＲ 扩增等方法ꎬ证实了山
东泰安樱桃流胶病是由丁香假单胞菌丁香致病变
种(Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ)引起的ꎬ为该病害的
进一步深入研究奠定了基础ꎮ 李坏死致病变种以
及 ２个致病变种的中间型是否也在山东泰安存在
有待进一步研究ꎮ
参考文献
[１] 　 Ｓｕｎ Ｙꎬ Ｗｅｉ Ｇ Ｑꎬ Ｓｕｎ Ｙ Ｇ. Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ
ｃｈｅｒｒｙ ｇｕｍｍｏｓｉｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ( ｉｎ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓａｓｔｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ(生物灾害科
学)ꎬ ２０１３ꎬ ３６(２): １８８－１９１.
[２] 　 Ｖｉｃｅｎｔｅ Ｊ Ｇꎬ Ａｌｖｅｓ Ｊ Ｐꎬ Ｒｕｓｓｅｌｌ Ｋꎬ ｅｔ ａｌ. Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ａｎｄ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ
ｆｒｏｍ ｗｉｌｄ ｃｈｅｒｒｙ ｉｎ Ｅｎｇｌａｎｄ [Ｊ] . Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ ２００４ꎬ １１０ (４): ３３７－３５１.
[３] 　 Ｒｅｎｉｃｋ Ｌ Ｊꎬ Ｃｏｇａｌ Ａ Ｇꎬ Ｓｕｎｄｉｎ Ｇ Ｗ. Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ａｎｄ
ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｅｐｉｐｈｙｔｉｃ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｓｗｅｅｔ ｃｈｅｒｒｙ ｉｎ Ｍｉｃｈｉｇａｎ [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ
Ｄｉｓｅａｓｅꎬ ２００８ꎬ ９２(３):３７２－３７８.
[４] 　 Ｍｅ′ｎａｒｄ Ｍꎬ Ｓｕｔｒａ Ｊ Ｌꎬ Ｌｕｉｓｅｔｔｉ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ. Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ａｖｉｉ (ｐｖ. ｎｏｖ.)ꎬ ｔｈｅ ｃａｕｓａｌ ａｇｅｎｔ ｏｆ ｂａｃ￣
ｔｅｒｉａｌ ｃａｎｋｅｒ ｏｆ ｗｉｌｄ ｃｈｅｒｒｉｅｓ ( Ｐｒｕｎｕｓ ａｖｉｕｍ ) ｉｎ
Ｆｒａｎｃｅ [ Ｊ ] . Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ
２００３ꎬ １０９ (６): ５６５－５７６.
[５] 　 Ｃｒｏｓｓｅ Ｊ Ｅ. Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃａｎｋｅｒ ｏｆ ｓｔｏｎｅ￣ｆｒｕｉｔｓ. Ｉ. Ｆｉｅｌｄ ｏｂ￣
ｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ａｖｅｎｕｅｓ ｏｆ ａｕｔｕｍｎａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
ｃｈｅｒｒｙ [Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆Ｂｉｏｔｅｃｈ￣
ｎｏｌｏｇｙꎬ １９５５ꎬ ３０ (２): １３１－２８１.
[６] 　 Ｇａｒｒｅｔｔ Ｃ Ｍ Ｅꎬ Ｂｕｔｌｅｒ Ｍ. Ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ
ｃｈｅｒｒｙ. Ｅａｓｔ Ｍａｌｌｉｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｒｅｐｏｒｔ ｆｏｒ １９８１
[Ｒ] . １９８２ꎬ ７４.
[７] 　 Ｋｅｎｎｅｌｌｙ Ｍ Ｍꎬ Ｃａｚｏｒｌａ Ｆ Ｍꎬ ｄｅ Ｖｉｃｅｎｔｅ Ａꎬ ｅｔ ａｌ.
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｆｒｕｉｔ ｔｒｅｅｓ: ｐｒｏｇｒｅｓｓ
４５３
　
　 ４期 徐 丽ꎬ等:甜樱桃流胶病原菌的分子鉴定和致病性检测
ｔｏｗａｒｄ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅꎬ
２００７ꎬ ９１(１): ４－１７.
[８] 　 Ｅａｓｔｗｅｌｌ Ｋ Ｃꎬ Ｇａｒｙ Ｇ Ａꎬ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｄ Ａꎬ ｅｔ ａｌ. Ｆｉｅｌｄ
ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｓｗｅｅｔ ｃｈｅｒｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ [Ｍ] .
Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ: Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ
ａｎｄ ｔｈｅ Ｕ.Ｓ. Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｒｅｓｓꎬ ２００５.
[９] 　 Ｍｏ Ｙ Ｙꎬ Ｇｒｏｓｓ Ｄ Ｃ. Ｐｌａｎｔ ｓｉｇｎａｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｃｔｉｖａｔｅ
ｔｈｅ ｓｙｒＢ ｇｅｎｅꎬ ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｓｙｒｉｎｇｏｍｙｃｉｎ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ [Ｊ] .
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙꎬ １９９１ꎬ １７３(１８): ５７８４－５７９２.
[１０] Ｇｕｅｎｚｉ Ｅꎬ Ｇａｌｌｉ Ｇꎬ Ｇｒｇｕｒｉｎａ Ｉꎬ ｅｔ ａｌ. Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ
ｏｆ ｔｈｅ ｓｙｒｉｎｇｏｍｙｃｉｎ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｇｅｎｅ ｃｌｕｓｔｅｒ: ａ ｌｉｎｋ
ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ａｎｄ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅｓ
[ Ｊ ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ １９９８ꎬ ２７３
(４９):３２８５７－３２８６３.
[１１] Ｂｅｎｄｅｒ Ｃ Ｌꎬ Ａｌａｒｃóｎ￣Ｃｈａｉｄｅｚ Ｆꎬ Ｇｒｏｓｓ Ｄ Ｃ.
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｈｙｔｏｔｏｘｉｎｓ: ｍｏｄｅ ｏｆ ａｃｔｉｏｎꎬ
ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎꎬ ａｎｄ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｂｙ ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ
ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅｓ [ Ｊ] . Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ
Ｒｅｖｉｅｗｓꎬ １９９９ꎬ ６３(２): ２６６－２９２.
[１２] Ｑｕｉｇｌｅｙ Ｎ Ｂꎬ Ｇｒｏｓｓ Ｄ Ｃ. Ｓｙｒｉｎｇｏｍｙｃｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ａｍｏｎｇ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ:
ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｙｒＢ ａｎｄ ｓｙｒＤ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ
ｏｆ ｐｈｙｔｏｔｏｘｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｐｌａｎｔ ｓｉｇｎａｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ
[Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ￣Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓꎬ １９９４ꎬ ７
(１):７８－９０.
[１３] Ｚｈａｎｇ Ｊ Ｈꎬ Ｑｕｉｇｌｅｙ Ｎ Ｂꎬ Ｇｒｏｓｓ Ｄ Ｃ. Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ
ｓｙｒＢ ａｎｄ ｓｙｒＣ ｇｅｎｅｓ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ.
ｓｙｒｉｎｇａｅ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｔｈａｔ ｓｙｒｉｎｇｏｍｙｃｉｎ ｉｓ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ｂｙ ａ
ｔｈｉｏｔｅｍｐｌａｔｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙꎬ
１９９５ꎬ １７７(１４): ４００９– ４０２０.
[１４] Ｋｉｎｇ Ｅ Ｏꎬ Ｗａｒｄ Ｍ Ｋꎬ Ｒａｎｅｙ Ｄ Ｅ. Ｔｗｏ ｓｉｍｐｌｅ ｍｅｄｉａ
ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｙｏｃｙａｎｉｎ ａｎｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ
[ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅꎬ
１９５４ꎬ ４４(２): ３０１－３０７.
[１５] Ｓｃｈａａｄ Ｎ Ｗꎬ Ｊｏｎｅｓ Ｊ Ｂꎬ Ｃｈｕｎ Ｗ. Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｇｕｉｄｅ
ｆｏｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ (３ｎｄ ｅｄ)
[Ｍ] . Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ ＵＳＡ: ＡＰＳ Ｐｒｅｓｓꎬ ２００１.
[１６] Ｓｏｒｅｎｓｅｎ Ｋ Ｎꎬ Ｋｉｍ Ｋ Ｈꎬ Ｔａｋｅｍｏｔｏ Ｊ Ｙ. ＰＣＲ ｄｅｔｅｃ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｃｌｉｃ ｌｉｐｏｄｅｐｓｉｎｏｎａｐｅｐｔｉｄｅ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｐｓｅｕｄｏ￣
ｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ａｎｄ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｏｆ ｓｔｒａｉｎｓ
[Ｊ] . Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ １９９８ꎬ
６４(１): ２２６－２３０.
[１７] Ｌｉｎ Ｊꎬ Ｃｈｅｎ Ｑ Ｈꎬ Ｌｉ Ｂ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ. Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＩＴＳ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ＰＣＲ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｐｏｔ ｏｆ ｃａｒａｍ￣
ｂｏｌａꎬ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ａｖｅｒｒｈｏｉ ( ｉｎ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ (农
业生物技术学报)ꎬ ２０１１ꎬ １９(４): ７７７－７８４.
[１８] Ｃｈｅｎ Ｈ Ｇꎬ Ｆａｎｇ Ｚꎬ Ｃｈｅｎ Ｈ Ｄꎬ ｅｔ ａｌ. Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ
ｗｈｅａｔ ｓｈａｒｐ ｓｐｏｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｂａｓｅ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒ￣
ｎａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｓｐａｃｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ａｃｔａ
Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ (植物病理学报)ꎬ ２００５ꎬ ３５
(１): ２４－２９.
[１９] Ｃｈｅｎ Ｑ Ｈꎬ Ｗｅｎｇ Ｑ Ｙꎬ Ｗａｎｇ Ｙ Ｃꎬ ｅｔ ａｌ. Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａ￣
ｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｏｆ ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ＤＮＡ￣ＩＴＳ ｏｆ Ｐｈｙｔｏ￣
ｐｈｔｈｏｒａ ｓｏｊａｅ ｉｎ Ｆｕｊｉａｎ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ａｃｔａ Ｐｈｙｔｏ￣
ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ(植物病理学报)ꎬ ２００４ꎬ ３４ (２):
１１２－１１６.
[２０] Ｖｉｃｅｎｔｅ Ｊ Ｇꎬ Ｒｏｂｅｒｔｓ Ｓ Ｊ. Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｗｉｌｄ ｃｈｅｒｒｙ ｍｉｃｒｏ￣
ｐｒｏｐａｇａｔｅｄ ｐｌａｎｔｌｅｔｓ ｆｏｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃａｎｋｅｒ.
Ｉｎ: Ｉａｃｏｂｅｌｌｉｓ Ｎ. Ｓ.ꎬ ｅｔ ａｌ. (Ｅｄｓ.) Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎ￣
ｇａｅ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ: Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ.
Ｄｏｒｄｒｅｃｈｔ [Ｍ] . Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ: Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓꎬ ２００３ꎬ ４６７－４７４.
[２１] Ｙｏｕｎｇ Ｊ Ｍꎬ Ｓａｄｄｌｅｒ Ｇ Ｓꎬ Ｔａｋｉｋａｗａ Ｙꎬ ｅｔ ａｌ. Ｎａｍｅｓ
ｏｆ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ １８６４－１９９５ [Ｊ] . Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ
Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ １９９６ꎬ ７５ (９): ７２１－７６３.
[２２] Ｇａｒｄａｎ Ｌꎬ Ｓｈａｆｉｋ Ｈꎬ Ｂｅｌｏｕｉｎ Ｓꎬ ｅｔ ａｌ. ＤＮＡ ｒｅｌａｔｅｄ￣
ｎｅｓｓ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｖａｒｓ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ａｎｄ
ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｔｒｅｍａｅ ｓｐ. ｎｏｖ. ａｎｄ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃａｎｎａｂｉｎａ ｓｐ. ｎｏｖ. (ｅｘ Ｓｕｔｉｃ ａｎｄ Ｄｏｗ￣
ｓｏｎ １９５９) [ Ｊ] . Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙꎬ １９９９ꎬ ４９ (２): ４６９－４７８.
[２３] Ｊｏｎｅｓ Ａ Ｌ. Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃａｎｋｅｒ ｏｆ ｓｗｅｅｔ ｃｈｅｒｒｙ ｉｎ Ｍｉｃｈｉｇａｎ
[Ｊ]. Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｒｅｐｏｒｔꎬ １９７１ꎬ ５５(１１):９６１－９６５.
[２４] Ｇａｒｒｅｔｔ Ｃ Ｍ Ｅꎬ Ｐａｎａｇｏｐｏｕｌｏｓ Ｃ Ｇꎬ Ｃｒｏｓｓｅ Ｊ Ｅ. Ｃｏｍ￣
ｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄｓ ｆｒｏｍ ｆｒｕｉｔ
ｔｒｅｅｓ [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙꎬ １９６６ꎬ ２９
(２): ３４２－３５６.
[２５] Ｂｕｒｋｏｗｉｃｚ Ａꎬ Ｒｕｄｏｌｐｈ Ｋ. Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ
ａｎｄ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｔｅｓｔｓ ｆｏｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐａｔｈｏｖａｒｓ ｓｙｒｉｎｇａｅꎬ ｍｏｒ￣
ｓｐｒｕｎｏｒｕｍ ａｎｄ ｐｅｒｓｉｃａｅ ｆｒｏｍ ｆｒｕｉｔ￣ｔｒｅｅｓ [Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ １９９４ꎬ １４１(１):５９－７６.
[２６] Ｃｒｏｓｓｅ Ｊ Ｅꎬ Ｇａｒｒｅｔｔ Ｃ Ｍ Ｅ. Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ
ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｙ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍｏｒｓｐｒｕｎｏｒｕｍꎬ Ｐｓ.
ｓｙｒｉｎｇａｅ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ [Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙꎬ １９６３ꎬ ２６(２):１５９－１７７.
责任编辑:李晖　 　
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