全 文 ：书西北植物学报!
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文章编号$
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收稿日期$
!"#$*")*!-
&修改稿收到日期$
!"#$*#"*"&
基金项目$十一五(国家科技支撑计划项目"
!""(2342#2"#
#&油茶产业升级关键技术研究与示范项目"
!""(2342#2""
#
作者简介$胡玉玲"
#(,,
#!男!博士!主要从事经济林栽培和育种研究)
5*67/8
$
9:
;
:8/1
!
#!-+<=6
"
通信作者$姚小华!研究员!博士生导师!主要从事经济林栽培和育种研究)
5*67/8
$
;
7=>9#-&
!
#-%+<=6
*长林
$%
号+油茶胚发育特征分析
及体胚再生体系优化
胡玉玲!姚小华"!任华东!王开良!龙
!
伟
"中国林业科学研究院亚热带林业研究所!浙江富阳
%##$""
#
摘
!
要$为了进一步优化普通油茶再生体系并了解外植体生理变化特点!选择普通油茶*长林
)%
号+不同时期的胚
作为体胚再生体系的外植体!进行多因素多水平正交试验!同时测定和分析不同胚龄的胚生理生化指标)结果表
明$
,
,
&
月份为茶果的快速生长期!此时胚中可溶性蛋白,果糖和蔗糖含量逐渐上升!可溶性总糖含量呈双峰曲线变
化!
,
月
!,
日!幼胚中
323
含量"
##"+#%1
?
-
?
#
#及
323
与
@A
含量比值"
#%+$,
#都达到最高&体胚再生体系构建
过程表明!!
$*4
对体胚诱导影响最大!其次是胚龄&*长林
)%
号+油茶最佳体胚诱导方法为选择茶果快速膨大期"
,
月
!,
日#的幼胚作为外植体!最佳诱导配方为
BCD"+)6
?
-
E
#
!
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$*4D"+)6
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-
E
#
FGD"+")6
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-
E
#
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D)""6
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-
E
#
H8
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I33
对胚状体萌发影响最大!胚状体萌发和组培苗生长最佳配方为
BCD!6
?
-
E
#
I33D
"+)6
?
-
E
#
-*23D"+)6
?
-
E
#
G4@D)""6
?
-
E
#
JK
)
关键词$再生体系优化&长林
)%
号&生理生化&胚龄
中图分类号$
L&#%+#
&
L($)+-
文献标志码$
3
&

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*
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AT0T7U<9I10V/V:VT=WC:XVU=
Y
/<78Z=UT0VU
;
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J9/1T0T3<7RT6
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J9/17
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Y
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T1TU7V/=10
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Y
9
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Y
871V0
!
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*
J971
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T6XU
;
=
!
67RT6:8V/*W771R6:8V/*8T]T8=UV9=
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=178T>
Y
TU/6T1V+G9TUT0:8V009=\TRV97V
$
G9TWU:/VU7
Y
/R
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U=\V9/1 :^8
;
71R3:*
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:0V
!
V9T<=1VT1V=W0=8:X8T
Y
U=VT/1
!
V=V780=8:X8T0:
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7U71R0:;
/1VT1V=W323
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-
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#
#!
V9TU7V/=32371R@A
"
#%+$,
#
UT7<9TRV9T9/
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9T0V/1/667V:UTT6XU
;
=+
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!
!
$*4=10=67V/;
=\70V9T87U
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T0V
!
W=8=\TRX
;
\70T6XU
;
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T+G9T=
Y
V/678
W=U6:87=W
*
J971
?
8/1)%
+
0=67V/;
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-
E
#
!
!
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-
E
#
FG
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E
#
G4@71R)""6
?
-
E
#
H8
;
!
V9T1V==_V9T/667V:UTT6XU
;
=/1U7
Y
/RT>
Y
71R/1
?Y
T*
U/=R70T>
Y
871V0+HUT7V/1W8:T1;
=/R0
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TU6/17V/=1
!
V9T=
Y
V/678W=U6:87=W0=67V/XU
;
=
?
TU6/17V/=171R
Y
871V8TV
?
U=\V9\70/1BC7RRTR!6
?
-
E
#
I33
!
"+)6
?
-
E
#
-*23
!
"+)6
?
-
E
#
G4@71R)""6
?
-
E
#
JK+
?8
7
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$
UT
?
T1TU7V/=10
;
0VT6=
Y
V/6/[7V/=1
&
J971
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Y
9
;
0/=8=
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71RX/=<9T6/0VU
;
&
T6XU
;
=7
?
T
!!
普通油茶"
!"#$%%&"%$&
(
$)" 3XT8
#是中国目
前油茶栽培的重要物种!无论其产量,栽培面积和适
生范围都比其他油茶明显大!因此开展对普通油茶
研究具有重要意义.#/)中国油茶经过近
-"
年的发
展!普通油茶的常规育种和栽培研究达到了空前水
平!进入
!#
世纪以来!国家投入了大量人力和物力!
油茶产量虽有相当程度的提高!但是依然没有从根
本上解决油茶产量问题!从而制约了油茶产业的可
持续发展.!*%/)因油茶生产要素成本增加,环境恶化
和茶油品质市场要求提高!对油茶分子水平的研究
优势日益凸显!其中基因工程和油茶功能基因组学
是油茶分子水平研究的重要内容!油茶组培再生体
系是油茶基因工程和功能基因组学研究的重要基
础!因此构建高效稳定油茶组培再生体系!对油茶的
发展具有重要作用)
油茶组培再生体系构建与外植体基因型"品
种#,生理状态"胚龄#关系非常紧密.$*-/!本课题组前
期的研究发现!普通油茶*长林
)%
号+较易实现体胚
再生!并初步确定了基础培养基和加入植物激素及
添加物的种类.,/)为了进一步优化普通油茶组培再
生体系和选择最合适胚龄的外植体!并筛选出较容
易进行体胚再生的外植体类型!以普通油茶*长林
)%
号+不同时期的幼胚为外植体材料!进一步进行
组培再生体系优化!构建高效而稳定的组培再生体
系!并确定最易诱导体胚幼胚的胚龄!分析外植体形
态和生理特征!以期凭此外植体特征进一步筛选出
更多的油茶品种及外植体类型!为油茶基因工程和
功能基因组学的研究奠定基础)
#
!
材料和方法
A+A
!
材料及方法
采样地点为浙江金华东方红林场!于
!"#%
年
,
月
,
日开始采样!每隔
#"R
采样
#
次!采样标准为
选择健康,发育程度和大小接近一致的茶果!当日完
成接种)具体如步骤下$幼果采回后!马上取出幼
胚!用无菌水冲洗
%
次!然后在超净台用
,)`
酒精
灭菌
#6/1
!再用
"+#`
的
K
?
J8
!
灭菌
#)6/1
!最后
用无菌水冲洗
$
"
)
次!灭菌好的幼胚!用手术刀去
除种壳和种皮!将幼胚切成
$
"
&
块!接种于
-"66
培养皿中!每皿接种
,
"
##
个外植体"图版
#
!
3
#!
每处理为
#&
皿!重复
%
次然后在室温为
!)a
!日照
长度为
#$9
!光照度为
#"""8>
-
6
!条件下培养)
A+B
!
外植体形态和生理指标测定
随机选择
%"
个油茶果!用游标卡尺测定果高和
果径大小!用电子称测定果重及籽重!计算出籽率&
用考马斯亮蓝比色法测定幼胚中可溶性蛋白含量!用
蒽酮比色法测定幼胚中可溶性糖含量!用间苯二酚比
色法测定幼胚中蔗糖和果糖含量!用酶联免疫法(测
定幼胚中激素"
I33
,
H3
,
@A
和
323
#含量.&*#"/)
A+%
!
再生体系优化试验
A+%+A
!
体胚诱导
!
外植体经灭菌后接种在添加不
同质量浓度的
!
!
$*4
,
FG
,
G4@
及
JK
和
H8
;
的
BC
培养基中!处理安排采用不同水平的正交试验
设计!即
#
个因素为
(
个水平!
$
个因素为
%
个水
平!试验因素安排及水平见表
#
设计!每
$"R
后进
行
#
次继代培养!
#!"R
后对体胚发生情况进行调查
表
A
!
C
!,
"
(
#
b%
$
#正交试验因素和水平
G7X8T#
!
Z7!,
"
(
#
b%
$
#
=UV9=
?
=178T>
Y
TU/6T1V
%"
6
?
-
E
#
#
水平
ET]T8
采样时间"月
*
日#
C76
Y
8/1
?
V/6T
"
6=1V9*R7
;
#
激素水平
K=U6=1T
!+$*4 FG G4@
添加物
3RR/V/]T
第
-
列
C/>V9
第
,
列
CT]T1V9
第
&
列
5/
?
9V9
第
(
列
Q/1V9
# ",*", "+) "+) "+") "
! ",*#, # # "+) )""
"
JK
#
% ",*!, ) ) ! )""
"
H8
;
#
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) "&*#-
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, "(*")
& "(*#)
( "(*!)
!!
注$本次试验的添加物为水解络蛋白"
JK
#和
E*
甘氨酸"
H8
;
#&第
-
列为不同胚龄的胚与
G4@
及
!
!
$*4
与
FG
互作!第
,
列为
!
!
$*4
与添加物及
FG
与
G4@
互
作!第
(
列为
FG
与添加物互作!下面出现表示都相同)
Q=VT
$
3RR/V/]T0/1V9/0VT0VUTWTUUTRV=9
;
RU=8
;
0/0<=6
Y
8T>
Y
U=VT/1
"
JK
#
71R
?
8
;
"
E*H8
;
#&
G9T0/>V9<=8:61UTWTUUTRV=R/WWTUT1VT6XU
;
=1/<7
?
T=WT6XU
;
=
\/V9G4@71R!
!
$*4\/V9FG/1VTU7!
V9T0T]T1V9<=8:61UTWTUUTRV=!
!
$*4\/V9V9T7RR/V/]T071RFG\/V9G4@/1VTU7!
V9T1/1V9<=8:61UTWTUUTR
V=FG\/V9V9T7RR/V/]T0/1VTU7(&!!
##
期
!!!!!!!!!!
胡玉玲!等$*长林
)%
号+油茶胚发育特征分析及体胚再生体系优化
表
B
!
C
&
"
$
#
b!
$
#正交试验因素和水平
G7X8T!
!
Z7&
"
$
#
b!
$
#
=UV9=
?
=178T>
Y
TU/6T1V
%"
6
?
-
E
#
#
水平
ET]T8
激素水平
K=U6=1T
I33 -*23 G4@
水解酪蛋白
JK
甘氨酸
H8
;
第
-
列
C/>V9
# " # "+) " "
! # ! # )"" )""
% !
$ $
"图版
#
!
J
#!并统计诱导率!胚性愈伤组织诱导率
c
胚性愈伤组织块数%接种外植体数)
A+%+B
!
体胚萌发及生长
!
将已经诱导出胚状体"图
版
#
!
4
#的愈伤组织接种在添加不同质量浓度的
I33
,
-*23
,
G4@
,
JK
和
H8
;
的
BC
培养基中!处理
安排也采用混水平的正交试验设计!即
#
个因素为
$
个水平!
$
个因素为
!
个水平!试验因素安排及水
平见表头设计"表
!
#!第
-
列为
I33
与
H8
;
和
-*23
与
JK
互作项!接种
$"R
后调查体胚生长状况"图
版
#
!
5
#!并统计体胚萌发率!体胚萌发率
c
已萌发
数%胚状体总数!通过不断继代培养观察组培苗的生
长情况"图版
#
!
H
#)
A+D
!
数据分析
采用
4dC#!+#
.
##
/和
B/进
行相关数据处理和分析!
*
#
"+")
表示显著差异!
*
#
"+"#
表示极显著差异)
!
!
结果与分析
B+A
!
油茶果生长发育过程茶果相关指标变化
从图
#
可以看出!*长林
)%
号+油茶果重随着果
实发育!重量逐渐增加!其中在
,
月份增加幅度较
大!果径和果高也逐步增加!其中果径在
,
月份增加
明显!在
&
月份后增加幅度较小&油茶果的出籽率总
体呈上升趋势!其中在
,
月
!,
日,
&
月
!-
日和
(
月
!)
日出籽率相对较低!在
,
月
!,
日时出籽率最小!
仅为
$!+,,`
)
B+B
!
幼胚中生理指标变化
B+B+A
!
碳氮化合物含量变化
!
从图
!
可以看出!幼
胚中可溶性蛋白含量随着幼胚发育稳定上升!
(
月
)
日后上升幅度非常明显!在
(
月
#)
日达到了最高点
"
!!+"#`
#!随着种子成熟胚中可溶性蛋白含量又下
降&幼胚中可溶性总糖含量随着幼胚发育总体呈现
%
峰曲线变化!峰值出现时间点分别为
,
月
#,
日,
&
月
#-
及
(
月
)
日!峰值随着茶果发育略有下降!在
(
月
)
日开始随着幼胚成熟可溶性总店含量急剧下
图
#
!
茶果相关指标变化
Z/
?
+#
!
J971
?
T0=W/1RT>=1WU:/V
图
!
!
幼胚中碳氮化合物含量变化
Z/
?
+!
!
J971
?
T0=W1/VU=
?
T171R<7UX=1
<=6
Y
=:1R0/1/667V:UTT6XU
;
=
降&幼胚中蔗糖和果糖含量在
(
月
)
日前缓慢上升!
(
月
)
日后开始缓慢下降!幼胚中蔗糖和果糖含量
变化在一定程度上呈相互消长的关系)
B+B+B
!
幼胚中激素含量变化
!
由图
%
可知!幼胚中
323
和
I33
含量比
H3
和
@A
含量高!在幼胚发育
早期!幼胚中
323
含量随环境温度的升高迅速增
加!在环境温度超过
$"a
时"
,
月
!,
日#!幼胚中
323
含量达到
##"+#%1
?
-
?
#
!超过了正常水平的
%
倍!在该过程中
I33
,
H3
和
@A
含量都略有上升
趋势!
&
月份开始由于下雨及对油茶进行人工灌溉!
茶果中的幼胚
323
含量迅速下降!其他
%
种激素
也有不同程度的下降!在其后随着幼胚生长发育及
环境温度变化
323
含量呈上下波动变化!
(
月份开
始则呈现持续下降趋势!
I33
和
H3
含量则出现上
升
*
下降
*
上升变化趋势!
@A
含量变化不明显)
"(!!
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
B+B+%
!
幼胚中不同激素含量比值变化
!
从图
$
可
以看出!
323
与
@A
比值在采用初期随着环境温度
升高!比值迅速增大!在
,
月
!,
日最高!接近其他生
长时期的
$
倍!随后又迅速下降!随着幼胚的成熟比
值不断变小&
I33
与
H3
和
I33
与
@A
比值变化呈
现双峰曲线!后者峰型较平缓!前者开始比值下降而
后者则略有上升趋势&幼胚中
@A
与
H3
比值在整
个发育过程中变化较平缓!
I33
与
323
比值在发
育初期下降幅度明显!随后出现上升
*
下降
*
上升
*
下
降
*
上升变化!在
(
月
!)
日比值达到最大)
B+%
!
油茶胚性愈伤组织诱导体系优化
B+%+A
!
试验因素对胚性愈伤组织诱导影响
!
为了
解不同试验因素及不同试验因素间的互作对胚性愈
伤组织诱导率的影响!对试验结果进行了方差分析!
从表
%
可看出胚龄及
!
!
$*4
对体胚诱导率有极显著
图
%
!
幼胚中激素含量变化
Z/
?
+%
!
J971
?
T0=WT1R=
?
T1=:09=U6=1T
<=1VT1V/1/667V:UTT6XU
;
=
影响!胚龄和添加物互作及
!
!
$*4
和
G4@
互作!对
体胚诱导率有显著影响!从极差可看出!!
$*4
对体
胚诱导率影响最大!其次是胚龄!随后是
FG
与添加
物互作!胚龄和添加物互作及
!
!
$*4
和
G4@
互作!
随后为
FG
和
G4@
!影响最小的是添加物)
B+%+B
!
试验各因素互作效应分析
!
从表
$
可以看
出!胚龄第三水平"
,
月
!,
日#和
!
!
$*4
第一水平
"
+)6
?
-
E
#
#互作时体胚诱导率最高!胚龄第三
水平"
,
月
!,
日#和
FG
第一水平"
+)6
?
-
E
#
#互
作时体胚诱导率最高!胚龄第三水平"
,
月
!,
日#和
G4@
第一水平"
+")6
?
-
E
#
#互作时体胚诱导率
最高!胚龄第三水平"
,
月
!,
日#和
H8
;
互作时体胚
诱导率最高!胚诱导率都为
"+&%
)从同水平因子互
作表"表
)
#可以看出!
!
!
$*4
第一水平"
+)6
?
-
E
#
#和
FG
第一水平
"+)6
?
-
E
#
#互作对体胚诱
图
$
!
幼胚中不同激素对比变化
Z/
?
+$
!
J=6
Y
7U/0=1=WR/WWTUT1V9=U6=1T0
/1/667V:UTT6XU
;
=
表
%
!
正交设计方差分析表
G7X8T%
!
OUV9=
?
=178T>
Y
TU/6T1V78RT0/
?
17178
;
0/0=W]7U/71变异来源
C=:U]7U/7V/=1
平方和
L:7RU7V/<
0:6
自由度
4T
?
UTT=W
WUTTR=6
均方
BT71
0
e
:7UT
+ *
极差
A71
?
T
区组
28=<_ "+")!% ! "+"!-!
胚龄
3
?
T #+"!)) & "+#!&! &+,%&& " "+#&%%
!
!
$*4 "+((#( ! "+$()( %%+&",& " "+$#%
FG "+"&,( ! "+"$$" !+((,! "+")&- "+#!$
G4@ "+"-"" ! "+"%"" !+"$$- "+#%(, "+#"!,
添加物
3RR/V/]T0 "+"#-( ! "+""&) "+),-# "+)-)- "+")",
第
-
列
G9T0/>V9<=8:61 "+##-% ! "+")&! %+(-$! "+"!)" "+#$#,
第
,
列
G9T0T]T1V9<=8:61 "+"#&% ! "+""(! "+-!)) "+)%(" "+"))$
第
&
列
G9TT/
?
9V9<=8:61 "+#$)- ! "+",!& $+(-!- "+"#", "+#-!
第
(
列
G9T1/1V9<=8:61 "+"%)) ! "+"#,, #+!"&( "+%"-& "+",,(
误差
5UU=U "+,-!& )! "+"#$,
总和
C:6 %+$$%&
#(!!
##
期
!!!!!!!!!!
胡玉玲!等$*长林
)%
号+油茶胚发育特征分析及体胚再生体系优化
表
D
!
不同因子间不同水平互作效应
G7X8T$
!
I1VTU7?
R/WWTUT1VW7水平
ET]T8
胚龄与
!
!
$*4
56XU
;
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T71R!
!
$*4
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胚龄与
FG
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胚龄与
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56XU
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胚龄与添加物
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导率最高"
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第一水平"
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-
E
#
#和
G4@
第一水平"
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?
-
E
#
#互作对体胚诱导率
最高"
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第一水平"
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E
#
#和
JK
互作对体胚诱导率最高"
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第一水平"
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-
E
#
#和
G4@
第一水平"
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-
E
#
#互作
对体胚诱导率最高"
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FG
第一水平"
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E
#
#和
H8
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互作对体胚诱导率最高"
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G4@
第
一水平"
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-
E
#
#和
JK
互作或者
G4@
第三
水平"
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-
E
#
#和
H8
;
互作对体胚诱导率最
高"
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#)综合各因子间的互作效益可以初步判
断!在
G/6T
%
!
!
$*4
#
FG
#
G4@
#
JK
组合时对体胚诱
导率最高!从正交表中可以找到该处理组合刚好是
正交设计表中的处理
,
!从各处理的体胚诱导均值
比较来看也为处理
,
最高"
+&%
#!因此得出最佳处
理组合较可靠)
B+D
!
胚状体萌发及生长的培养基配方优化
B+D+A
!
试验因素对胚状体萌发及生长的影响
!
为
探讨不同试验因素对胚状体的萌发及生长的影响!
对试验结果进行了观察!并对萌发率数据进行方差
表
$
!
不同因素相同水平间互作效应
G7X8T)
!
I1VTU7?
R/WWTUT1VW7水平
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自由度
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均方
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西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
分析!从表
-
可看出!多因子互作对体胚萌发效率有
极显著影响!生长素对体胚萌发效率有显著影响!其
他因素则影响不显著)从极差可看出多因子互作对
体胚萌发影响最大!其次是生长素!再次为
-*23
!
JK
和
H8
;
影响程度接近)
B+D+B
!
试验各因素互作效应分析
!
从表
,
可以看
出!
I33
第三水平"
!6
?
-
E
#
#和
-*23
第二水平
"
!6
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-
E
#
#互作对胚状体萌发诱导率最高!
I33
第三水平"
!6
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-
E
#
#和
H8
;
"
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?
-
E
#
#互作
对胚状体萌发诱导率最高!胚状体萌发诱导率都为
"+,%
)因此初步可以判定在处理组合
I33
%
-*
23
!
H8
;
!
对胚状体萌发最为有利"
+,%
#!该处理组
合刚好在正交表中第
-
处理!从表
&
多重比较可以
看出!最好的处理也是处理
-
!在处理
-
时胚苗生长
状态也最好!说明试验结果可靠性较高!因此选择处
理
-
组合最佳!即在
BC
培养基中添加
!6
?
-
E
#
的
I33
和
-*23
!同时添加
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-
E
#
H8
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表
F
!
不同因素间互作效应
G7X8T,
!
I1VTU7?
R/WWTUT1VW7水平
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!
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处理号
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均值
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处理
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中
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!
讨
!
论
%+A
!
外植体发育状况对体胚诱导影响
研究胚龄对体胚再生的文献比较多!特定的胚
龄代表了幼胚中特定的生理,内含物及发育状态!因
此研究特定胚龄中的物质成分与培养基中的各种因
素互作机制意义非常大!但无论何种外植体!其类
型,所处的发育和生理状态以及取材部位等均会影
响体细胞胚的发生.#!*#%/)在本次试验中!对普通油
茶幼胚在切块接种于培养基后进行不断观察!发现
白色的子叶块慢慢变绿!而已经成绿色则表面慢慢
粗糙并不断出现突起!可见油茶最有利于体胚再生
的胚龄!是在幼胚子叶肉质由白变成绿色!果实迅速
膨大期)这与其他体胚再生的相关文献描述情况接
近$丛建民等认为生理代谢旺盛!分化程度较低的外
植体有利于诱导出体细胞胚!幼嫩的生殖器官比幼
嫩的营养器官更有利于诱导出体细胞胚!幼嫩的营
养器官比多年生的营养器官更易于诱导出体细胞
胚&许智宏等认为以未成熟合子胚作为外植体时!在
其发育过程中往往只有一段很短的时期最适用于体
细胞胚诱导!一般认为越是幼嫩的合子胚!其体细胞
胚发生频率越高.#$*#)/)
%+B
!
外植体中碳氮化合物含量对体胚诱导影响
碳氮化合物是外植体特定状态的重要生理特
征!外植体中各种内含物质与培养基中的物质相互
作用对胚性愈伤组织产生的重要原因!因此了解较
易诱导出体胚外植体中的可溶性蛋白和可溶性糖含
量!对快速选择其他外植体类型具有较好的指导作
用)植物体细胞胚胎发生过程的实质是基因顺序表
达的结果!因此会出现各种蛋白质含量的变化!包括
特异蛋白质的出现与消失.#-/)外植体中可溶性蛋
白可以作为体胚发生过程中的相关蛋白合成原料!
也可能与培养基中含氮化合物相互作用成为体胚诱
导的重要影响因子!因此了解较易产生胚性愈伤组
织外植体中可溶性蛋白含量!对选择合适的外植体
具有重要参考作用)本研究可以看出幼胚中可溶性
蛋白含量较低时"
#"+#)`
#有利于胚性愈伤组织诱
导!这与合子胚储藏蛋白的积累不利于诱导体胚发
生.#)/的观点是一致的)
碳水化合物的种类和浓度除会影响愈伤的诱导
效果!同时还会影响体细胞胚的生长!不同类型的碳
水化合物对体胚生长差异较明显!如葡萄糖对体细
胞胚的生长发育效果大于蔗糖的作用.#,*#&/)糖类主
要作用是为各种细胞提供能源!另外一个作用就是
作为渗透调节剂影响体细胞胚的生长发育和不同分
化!可见本研究通过在一定蔗糖浓度"
%`
#条件下培
养!了解最佳状态外植体中的可溶性糖含量!对油茶
体胚诱导,选择外植体状态"包括基因型#选择及体
胚再生的相关机制具有较好的借鉴作用)从本研究
可以看出较低的可溶性总糖及蔗糖和果糖含量有利
于胚性愈伤组织的诱导!处于迅速膨大期的油茶幼
%(!!
##
期
!!!!!!!!!!
胡玉玲!等$*长林
)%
号+油茶胚发育特征分析及体胚再生体系优化
胚中糖含量就有这样的特点.#(/)
%+%
!
外植体内源激素水平对体胚诱导影响
在培养基中加入相应植物生长调节剂!目的在
于调节外植体中内源激素的变化!内源激素的变化
则会引起一系列的生命活动!其中包括胚性细胞的
产生!不同外植体状态代表了不同的内源激素状态!
因此了解外植体中的内源激素含量对判定选择合适
外植体状态具有指导作用)有研究发现!内源
I33
含量上升或保持在较高的浓度是胚性细胞出现的一
个共同标志!因为当外源激素
I33
进入细胞后!
I33
就会和氨基酸形成复合体!从而影响细胞的分
化方向!因此直接添加
I33
对其合成有反馈抑制!
从而影响体胚形成!但是
!
!
$*4
对
I33
的合成不存
在反馈抑制.!"*!#/!这与本结论一致!较易产生胚性愈
伤组织阶段的幼胚中
I33
含量"
%$+,#1
?
-
?
#
#相
对较高!!
$*4
对愈伤组织诱导起重要作用)
323
是
植物生长的重要抑制物质!有研究认为较高的
323
浓度有利于提高体细胞胚的发生!因为内源
323
含
量升高植物的体胚就会加快成熟!并且
323
具有间
接促进各项储藏物质积累!另外
323
能够被生长素
刺激而含量升高.!!*!$/!这与本结论是一致的!较易产
生胚性愈伤组织阶段"
,
月
!,
日#幼胚中
323
含量
"
##"+#%1
?
-
?
#
#明显高于其他时期!此时
I33
含
量也较高)由于去年"
!"#%
年
,
月
!,
日#的严重干
旱导致外植体的
323
含量迅速升高!反而有利于
体胚再生!这个现象是与前一年的体胚初步构建过
程中体胚诱导率略有差异的重要原因.,/)
%+D
!
胚状体萌发及生长的相关影响因素
体胚萌发不仅仅是要实现体胚根的伸长!更要
最后完成具有功能的根和茎的生长!正是基于转化
这一过程!才能产生后期可成活的小植株!因此提高
胚状体萌发率和胚苗的生长!对提高转基因得率具
有重要的价值)通过前期的体胚再生初步研究已经
清楚!在无激素的
BC
培养基中!胚状体也可以长成
植株!但是生长速度缓慢!为了进一步优化胚状体的
萌发和后期组培苗生长!需要进一步完善培养配方)
有研究表明!
I33
和
-*23
对胚状体萌发及生长具
有重用影响!还有研究认为添加合适类型的氨基酸
和蛋白对组培苗生长影响较大!因此探讨以上各种
物质对胚状体萌发的影响有重要意义.$*)/!本研究表
明$因子互作对体胚萌发影响最大!其次是生长素!
再次为
-*23
!两种添加物影响接近)
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培养
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后的胚状体&
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培养
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后芽分化情况&
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培养
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后根分化情
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胡玉玲!等$*长林
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号+油茶胚发育特征分析及体胚再生体系优化