全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４４(１): ５４￣６４(２０１４)
收稿日期: ２０１３￣０２￣３０ꎻ 修回日期: ２０１３￣１０￣２０
基金项目: 国家自然科学基金资助项目(３１１７１５２８)
通讯作者: 李莉云ꎬ教授ꎬ主要从事分子生物学研究ꎻ Ｔｅｌ:０３１２￣７５２８２５０ꎬ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｌｉｌｉｙｕｎ＠ｈｅｂａｕ.ｅｄｕ.ｃｎꎻ
刘国振ꎬ教授ꎬ主要从事分子生物学、蛋白质组学研究ꎻ Ｔｅｌ: ０３１２￣７５２８７８７ꎬ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｇｚｈｌｉｕ＠ｇｅｎｏｍｉｃｓ.ｏｒｇ.ｃｎ
第一作者: 史佳楠ꎬ男ꎬ河北保定人ꎬ硕士生ꎬ主要从事植物分子生物学研究ꎻ Ｅ￣ｍａｉｌ:ｓｈｉｊｉａｎａｎ＿ｍｂｂ＠１２６.ｃｏｍꎮ
８个 ＷＲＫＹ转录因子在水稻叶片生长和
抗病过程中的表达分析
史佳楠ꎬ 李莉云∗ꎬ 徐文静ꎬ 关明俐ꎬ 李雪姣ꎬ 牛东东ꎬ
兰金苹ꎬ 窦世娟ꎬ 刘丽娟ꎬ 刘国振∗
(河北农业大学生命科学学院ꎬ 保定 ０７１００１)
摘要:ＷＲＫＹ是植物体内最大的转录因子家族之一ꎬ其成员在植物生长发育和抗逆过程中发挥重要作用ꎮ 为了解水稻
ＷＲＫＹ的功能ꎬ本研究利用蛋白质免疫印迹(ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇꎬＷＢ)技术ꎬ检测了 ８ 个 ＷＲＫＹ 转录因子在水稻叶片生长和
Ｘａ２１介导的抗白叶枯病过程中的表达丰度变化ꎮ 结果表明:ＯｓＷＲＫＹ１２、４３、５５和 ８６在苗期表达量较低ꎬ随叶片的生长表
达逐步增加ꎻＯｓＷＲＫＹ５０和 ８４在苗期叶片中的表达量相对较高ꎬ成熟期下降ꎻ未检测到 ＯｓＷＲＫＹ４０ / ６４ 和 ５２ 在叶片中的
表达ꎮ 在 Ｘａ２１介导的白叶枯病抗性反应中ꎬＯｓＷＲＫＹ４０ / ６４、５０ 和 ５２ 受白叶枯病菌诱导表达ꎬＯｓＷＲＫＹ８４ 受侵染后表达
量上调ꎬＯｓＷＲＫＹ１２、４３、５５和 ８６在抗病过程中没有检测到表达丰度的变化ꎮ 进一步比较这些转录因子在抗、感和对照
(Ｍｏｃｋ)反应中的表达ꎬ发现抗、感反应间蛋白质的表达变化是相似的ꎮ 研究结果提示:ＯｓＷＲＫＹ１２、４３、５５ 和 ８６ 可能在叶
片正常生长中发挥作用ꎻＯｓＷＲＫＹ４０ / ６４和 ５２可能在水稻￣白叶枯病菌互作过程中发挥作用ꎻＯｓＷＲＫＹ５０和 ８４则在叶片生
长和抗白叶枯病过程中都有一定的功能ꎮ
关键词:ＷＲＫＹꎻ 水稻ꎻ 免疫印迹ꎻ 白叶枯病ꎻ 转录因子
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｅｉｇｈｔ ＷＲＫＹ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｒｉｃｅ ｌｅａｆ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ
ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ　 ＳＨＩ Ｊｉａ￣ｎａｎꎬ ＬＩ Ｌｉ￣ｙｕｎꎬ ＸＵ Ｗｅｎ￣ｊｉｎｇꎬ ＧＵＡＮ Ｍｉｎｇ￣ｌｉꎬ ＬＩ Ｘｕｅ￣ｊｉａｏꎬ
ＮＩＵ Ｄｏｎｇ￣ｄｏｎｇꎬ ＬＡＮ Ｊｉｎ￣ｐｉｎｇꎬ ＤＯＵ Ｓｈｉ￣ｊｕａｎꎬ ＬＩＵ Ｌｉ￣ｊｕａｎꎬ ＬＩＵ Ｇｕｏ￣ｚｈｅｎ　 (Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｈｅｂｅｉ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｂａｏｄｉｎｇ ０７１００１ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ａｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｌａｒｇｅｓｔ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｆａｍｉｌｉｅｓ ｉｎ ｐｌａｎｔꎬ ｍａｎｙ ＷＲＫＹ ｍｕｍｂｅｒｓ ｗｅｒｅ ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｔｏ
ｐｌａｙ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｐｒｏｃｅｓｓ ａｎｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｂｉｏｔｉｃ / ａｂｉｏｔｉｃ ｓｔｒｅｓｓ. Ｔｏ ｂｅｔｔｅｒ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ ｔｈｅ
ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｉｃｅ ＷＲＫＹ ｐｒｏｔｅｉｎｓꎬ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ｅｉｇｈｔ ＷＲＫＹ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｌｅａｆ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ Ｘａ２１￣ｍｅｄｉａ￣
ｔｅｄ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ. ｏｒｙｚａｅ (Ｘｏｏ) ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｗａｓ ｓｕｒｖｅｙｅｄ ｂｙ ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ (ＷＢ) . Ｔｈｅ ｒｅ￣
ｓｕｌｔｓ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ＯｓＷＲＫＹ１２ꎬ ４３ꎬ ５５ ａｎｄ ８６ ｗｅｒｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ａ ｌｏｗ ｌｅｖｅｌ ａｔ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｓｔａｇｅ ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ
ｇｒａｄｕａｌｌｙ ｉｎ ｌａｔｅｒ ｓｔａｇｅｓ. ＯｓＷＲＫＹ５０ ａｎｄ ８４ ｗｅｒｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ａ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌ ａｔ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｓｔａｇｅꎬ ｗｈｉｌｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ
ｔｈｅ ｌａｔｅｒ ｓｔａｇｅｓ. Ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＯｓＷＲＫＹ４０ / ６４ ａｎｄ ５２ ｗａｓ ｎｏｔ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ｒｉｃｅ ｌｅａｖｅｓ ａｔ ａｌｌ
ｓｔａｇｅｓ. Ｉｎ ｔｈｅ ｒｉｃｅ￣Ｘｏｏ ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓꎬ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＯｓＷＲＫＹ４０ / ６４ꎬ ５０ ａｎｄ ５２ ｗａｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｒａ￣
ｍａｔｉｃａｌｌｙꎬ ａｎｄ ｔｈａｔ ｏｆ ＯｓＷＲＫＹ８４ ｗａｓ ａｌｓｏ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ. Ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＯｓＷＲＫＹ１２ꎬ ４３ꎬ ５５ ａｎｄ
８６ ｗｅｒｅ ｓｔａｂｌｅ. Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｍｏｎｇ ｒｉｃｅ￣Ｘｏｏ ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｌｅꎬ ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ａｎｄ ｍｏｃｋ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ａ
ｐａｒａｌｌｅｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ａｎｄ ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ. Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅｓｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓꎬ ｗｅ
ｐｏｓｔｕｌａｔｅｄ ｔｈａｔ ＯｓＷＲＫＹ１２ꎬ ４３ꎬ ５５ ａｎｄ ８６ ｍｉｇｈｔ ｐｌａｙ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｒｉｃｅ ｌｅａｆ ｇｒｏｗｔｈꎬ ＯｓＷＲＫＹ４０ / ６４ ａｎｄ ５２ ｍｉｇｈｔ
　
　 １期 　 　 史佳楠ꎬ等:８个ＷＲＫＹ转录因子在水稻叶片生长和抗病过程中的表达分析
ｂｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｒｉｃｅ ａｎｄ Ｘｏｏꎬ ｗｈｉｌｅ ＯｓＷＲＫＹ５０ ａｎｄ ８４ ｍｉｇｈｔ ｂｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｂｏｔｈ ｐｒｏｃｅｓ￣
ｓｅｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ＷＲＫＹꎻ ｒｉｃｅꎻ ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇꎻ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｌｉｇｈｔꎻ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ
中图分类号: Ｓ４３２.１ꎻ Ｓ４３５.１１１.４７　 　 　 　 　 文献标识码: Ａ　 　 　 　 　 文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１４)０１￣００５４￣１１
　 　 ＷＲＫＹ是植物中最大的一类转录因子家族ꎬ
该家族蛋白质中都含有 ＷＲＫＹ 结构域ꎬ这种结构
域由 ６０ 个氨基酸残基组成ꎬ其 Ｎ 端有保守的
ＷＲＫＹＧＱＫ序列ꎬＷＲＫＹ 由此得名ꎬＷＲＫＹ 结构
域的 Ｃ 端是锌指结构[１]ꎮ 根据蛋白质中 ＷＲＫＹ
结构域的数目和锌指结构特征ꎬＷＲＫＹ 家族被分
为三类[２]ꎮ ＷＲＫＹ家族成员广泛地参与植物的各
个生理过程ꎬ如 ＯｓＷＲＫＹ１３ 参与了抗病、氧还平衡
(Ｒｅｄｏｘ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ)、生物胁迫响应和生长发育等
过程ꎬ超量表达 ＯｓＷＲＫＹ１３影响了这些途径中 ５００
多个基因的转录[３]ꎮ ＯｓＷＲＫＹ２３ 的表达部位主要
在根和衰老叶片中[４]ꎬ而 ＯｓＷＲＫＹ５１ 和 ＯｓＷＲＫＹ￣
７１的主要表达部位是在胚和糊粉层细胞中[５]ꎬ超
表达 ＯｓＷＲＫＹ８９的转基因植株会对水稻早期生长
造成影响[６]ꎮ
除在水稻正常生长中发挥作用外ꎬ也有多篇
ＷＲＫＹ转录因子与抗病相关的报道ꎮ 在拟南芥中
异源表达水稻的 ＯｓＷＲＫＹ６ 可以加强 ＯｓＰＲ１ 启动
子驱动的报告基因的表达ꎬ在植物防卫基因的转录
过程中起正调控作用[７]ꎮ 超表达 ＯｓＷＲＫＹ１２(原
文编号为 ＯｓＷＲＫＹ０３)会导致 ＯｓＰＲ１ｂ和 ＮＢ８等防
御相关基因的表达量下降ꎬ表明其对水稻抗病是一
个负调控因子[８]ꎻＯｓＷＲＫＹ２２缺失的水稻突变体对
稻瘟病菌感病ꎬ而超表达 ＯｓＷＲＫＹ２２ 可增强稻瘟
病抗性[９]ꎻ ＯｓＷＲＫＹ４５ 缺失会使苯并噻二唑
(ＢＴＨ)诱导的水稻稻瘟病抗性明显下降ꎬ超表达
则可显著提高叶片对白叶枯病和穗颈瘟的抗
性[１０ꎬ １１]ꎻ ＯｓＷＲＫＹ５３可特异性地结合在 Ｗ 盒序
列元件上ꎬ调控病程相关基因如 ＰＲ１０ (ＰＢＺ１)、
ＰＲ５、ＰＲ１４、过氧化物酶和几丁质酶等的表达ꎬ超表
达 ＯｓＷＲＫＹ５３可以提高水稻对稻瘟病的抗性[１２]ꎮ
超表达 ＯｓＷＲＫＹ５５(原文编号为 ＯｓＷＲＫＹ３１)的水
稻提高了对稻瘟病的抗性ꎬ并使防卫相关基因(如
ＰＢＺ１ 和 ＯｓＳｃｉ２)和早期生长素应答基因(如 Ｏｓ￣
ＩＡＡ４和 ＯｓＣｒｌ１)组成型表达ꎮ 另外ꎬ超表达植株对
高浓度吲哚丁酸( ＩＢＡ)、萘乙酸(ＮＡＡ)和 ２ꎬ４￣二
氯苯氧乙酸 ( ２ꎬ ４￣Ｄ) 的敏感度降低ꎬ提示 Ｏｓ￣
ＷＲＫＹ５５ 可能是水稻生长素应答和防卫应答信号
转导途径的共享成员[１３]ꎻ超表达 ＯｓＷＲＫＹ６２ 抑制
了 ４个 ＰＲ相关基因(Ｂｅｔｖ１、ＰＲ１ａ、ＰＲ１０ 和 ＰＢＺ１)
的转录ꎬ并提高了对病原物侵染的敏感性[１４]ꎻＯｓ￣
ＷＲＫＹ８４ (原文编号为 ＯｓＷＲＫＹ３３) 可被 ＯｓＢ￣
ＷＭＫ１ 磷酸化ꎬ进而与 Ｗ 盒元件结合ꎬ将 Ｏｓ￣
ＷＲＫＹ８４和 ＯｓＢＷＭＫ１ 的共表达可增强 Ｗ 盒元
件和 ＰＲ１基因的表达[１５]ꎻＪＡ 和紫外线￣Ｂ 强烈诱
导 ＯｓＷＲＫＹ８９ 的转录ꎬ超表达 ＯｓＷＲＫＹ８９ 可以增
强水稻对白叶枯病菌、白背飞虱的抗性以及对紫外
线￣Ｂ的耐受能力[６]ꎮ 从现有报道不难看出ꎬ通过
遗传手段改变ＷＲＫＹ的表达对水稻抗性有较大的
影响ꎬ说明ＷＲＫＹ与抗病途径存在着密切的关联ꎮ
Ｘａ２１是最早克隆的水稻白叶枯病广谱抗性基
因ꎬ编码受体激酶[１６]ꎮ 通过酵母双杂交鉴定了多
个 Ｘａ２１ 抗病途径元件ꎬ包括编码 ＡＴＰａｓｅ 的
ＸＢ２４[１７]、泛素连接酶 ＸＢ３ [１８]、ＸＢ１５(蛋白磷酸酶
２Ｃ) [１９]和 ＸＢ１０(ＷＲＫＹ６２) [１４]ꎮ 来自白叶枯病菌
的 Ａｘ２１可以被 ＸＡ２１蛋白质识别ꎬ从而启动抗病
反应[２０]ꎮ 在抗病过程中ꎬＸＡ２１的激酶区会转位至
细胞核中并与 ＷＲＫＹ 转录因子结合[２１]ꎮ 本实验
室也鉴定了多个在 Ｘａ２１ 介导的抗病过程中表达
发生变化的 ＰＲ 蛋白质[２２ꎬ ２３]、ＷＲＫＹ 转录因子[２４]
等ꎬ为进一步的功能鉴定提供了基础数据ꎮ
在前期工作中ꎬ采用水稻全基因组基因芯片鉴
定到 ４００多个在抗病过程中转录发生变化的基因ꎬ
其中涉及多个 ＷＲＫＹ 成员[２５]ꎮ 另外ꎬ 根据
ＲｉｃｅＮｅｔ的预测ꎬＸａ２１介导的抗病途径可能涉及的
基因有 ８００ 多个[２６]ꎮ 以往对 ＷＲＫＹ 的研究主要
靠遗传手段改变 ＷＲＫＹ 的表达ꎬ但在大多数情况
下ꎬ对自然状态下 ＷＲＫＹ 在水稻体内的表达变化
情况知之甚少ꎮ 为了获得ＷＲＫＹ在水稻正常生长
和 Ｘａ２１介导的抗病过程中的表达数据ꎬ本研究分
析了 ８ 个 ＷＲＫＹ 家族成员ꎬ包括 ５ 个用芯片鉴定
的差异转录基因和 ３ 个相关文献报道的 ＷＲＫＹꎮ
通过制备这些 ＷＲＫＹ 特异的抗体ꎬ利用免疫印迹
(ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇꎬＷＢ)技术检测了它们在正常生
５５
　
植物病理学报 ４４卷
长和抗病过程中的表达丰度变化ꎬ为探索 ＷＲＫＹ
成员的功能ꎬ了解水稻抗病机理提供了蛋白质水平
的实验数据ꎮ
１　 材料与方法
１.１　 水稻材料
叶片材料取自水稻品种 ９３１１ 苗期地上部(株
高分别为 １ ｃｍ、２ ｃｍ、５ ｃｍ、１０ ｃｍ 和 １５ ｃｍ)以及
大田生长的分蘖期、孕穗期、开花期和成熟期的叶
片ꎻ４０２１是将 Ｘａ２１基因转入 ＴＰ３０９而获得的纯合
转基因株系[１８]ꎬ对白叶枯病菌 ＰＸＯ９９ 野生型呈现
抗病反应 ( Ｒ)ꎬ对白叶枯病菌突变株 ＰＸＯ９９￣
ΔｒａｘＳＴ表现感病反应[２０](Ｓ)ꎮ
１.２　 接种
白叶枯病菌菌株 ＰＸＯ９９由中国科学院遗传发
育所朱立煌研究员提供ꎬΔｒａｘＳＴ质粒 ＤＮＡ由美国
加州大学戴维斯分校 Ｒｏｎａｌｄ 教授提供ꎬ将该质粒
转化 ＰＸＯ９９菌株后获得了 ＰＸＯ９９ΔｒａｘＳＴ菌株ꎬ该
菌株表现为 ａｖｒ 缺失的表型[２７]ꎮ 白叶枯病菌在
ＰＳＡ 培养基中 ( ０. ５％ 细菌蛋白胨ꎬ ２％ 蔗糖ꎬ
０􀆰 ０５％ Ｌ￣谷氨酸) ３０℃培养 ４８~７２ ｈ后ꎬ用水稀释
至 １０９ 个 ＣＦＵ / ｍＬꎬ用灭菌剪刀蘸取菌液剪切叶片
进行接种ꎬ以灭菌蒸馏水作为对照(Ｍｏｃｋ)ꎮ 水稻
接种一般在 ６周左右进行ꎬ接种后分别于 ０ ｈ、２ ｈ、
８ ｈ、２４ ｈ、４８ ｈ、７２ ｈ、１２０ ｈ、１６８ ｈ 和 ２４０ ｈ 在距剪
切部位 １ ~ ２ ｃｍ 处采集叶片材料ꎬ液氮速冻后于
－７０℃保存ꎮ
１.３　 多克隆抗体制备
目标蛋白质序列来自水稻基因组数据库
( ｈｔｔｐ: / / ｒｉｃｅ. ｐｌａｎｔｂｉｏｌｏｇｙ. ｍｓｕ. ｅｄｕ )ꎮ 利 用
ＢＥＰＩＴＯＰＥ 软件[２８]预测抗原决定簇ꎬ选择峰值较
高的片段ꎬ面向水稻全蛋白质组进行设计后用
ＢＬＡＳＴＰ软件对水稻蛋白质库( ｈｔｔｐ: / / ｒｉｃｅ. ｐｌａｎｔ￣
ｂｉｏｌｏｇｙ.ｍｓｕ.ｅｄｕ / ａｎａｌｙｓｅｓ＿ｓｅａｒｃｈ＿ｂｌａｓｔ. ｓｈｔｍｌ)进行
唯一性检测ꎬ确定目标多肽片段ꎮ 以合成多肽作为
免疫原ꎬ多克隆抗体的制备由北京华大蛋白质研发
中心有限公司完成ꎮ
１.４　 Ｄｏｔ￣ｂｌｏｔ
双蒸水溶解多肽ꎬ用 １０ μＬ 点样枪将溶解的
多肽点在 ＮＣ 膜(１ ｃｍ×９ ｃｍ)上ꎬ点样体积为 ２
μＬꎬ同时点 ＢＳＡ 作为对照ꎮ ３７℃干燥后ꎬ用 ５％
ＢＳＡ的 ＴＢＳ￣Ｔ(２０ ｍｍｏｌ / Ｌ Ｔｒｉｓ￣ＨＣｌ、１５０ ｍｍｏｌ / Ｌ
ＮａＣｌ、０.０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０、ｐＨ ７.５) 室温封闭 １ ｈꎬ然
后分别将 ＮＣ膜与ＷＲＫＹ抗体(１ ∶ １ ０００ 稀释)孵
育 ３０ ｍｉｎꎬ用 ＴＢＳ￣Ｔ溶液漂洗 ３ 次(３×５ ｍｉｎ)ꎬ用
辣根过氧化酶(ＨＲＰ)标记的羊抗兔二抗孵育 ３０
ｍｉｎꎬ用 ＴＢＳ￣Ｔ溶液漂洗 ３次(３×５ ｍｉｎ)ꎬ再用 ＴＢＳ
洗 １次(５ ｍｉｎ)ꎬ加入 ＥＣＬ 显色试剂ꎬ用保鲜膜包
好后在暗室中用 􀱽光片检测ꎮ
１.５　 水稻蛋白质提取
将－７０℃冻存的水稻叶片在液氮中充分研磨
成细粉状ꎬ加入蛋白质提取液[６２.５ ｍｍｏｌ / Ｌ Ｔｒｉｓ￣
ＨＣｌ ( ｐＨ ７. ４)、１０％甘油、０. １％ ＳＤＳ、２ ｍｍｏｌ / Ｌ
ＥＤＴＡ、１ ｍｍｏｌ / Ｌ ＰＭＳＦ、５％β￣巯基乙醇]ꎬ混匀冰
上放置 １０ ｍｉｎꎬ然后 １２ ０００ ｒｐｍ ４℃离心 ２０ ｍｉｎꎬ
取上清即为总蛋白质ꎬ具体方法参考文献[１８]ꎮ
１.６　 ＷＢ分析和信号采集
ＷＢ分析方法参考文献[２９]ꎬ试验至少重复 ３
次ꎬ并使用 ＨＳＰ蛋白质进行检测ꎬ作为等量加样的
内参[３０]ꎮ 用 Ｉｍａｇｅ Ｊ 软件扫描 χ 光片上的 ＷＢ 条
带信号ꎬ计算 ３次 ＷＢ 信号的平均值及偏差ꎬ比较
其信号的相对强度ꎮ
１.７　 ＷＲＫＹ编码基因的转录分析
从水稻 ＭＰＳＳ (Ｍａｓｓｉｖｅｌｙ ｐａｒａｌｌｅｌ ｓｉｇｎａｔｕｒｅ ｓｅ￣
ｑｕｅｎｃｉｎｇ)网站( ｈｔｔｐ: / / ｍｐｓｓ. ｕｄｅｌ. ｅｄｕ / ｒｉｃｅ / ) [３１]下
载数据ꎬ统计目标基因的转录信息ꎬ按每千万条
ＭＰＳＳ标签的基因转录次数进行不同样品间转录
信号强度的相对比较ꎮ
２　 结果与分析
２.１　 目标基因的选择
本研究选取了 ８个 ＷＲＫＹ 家族成员作为靶基
因ꎬ其中 ＯｓＷＲＫＹ４０ / ６４、４３、５０、５２和 ８６选自用水稻
全基因组基因芯片鉴定的白叶枯病抗性过程中的差
异转录基因[２５]ꎬＯｓＷＲＫＹ１２[８]、ＯｓＷＲＫＹ５５[１３]和 Ｏｓ￣
ＷＲＫＹ８４[１５]则为文献报道与水稻抗病相关ꎮ 表 １列
出了所选目标基因的信息ꎬ包括功能注释、蛋白质分
子量、所属类别和抗原决定簇的多肽序列等ꎮ
６５
　
　 １期 　 　 史佳楠ꎬ等:８个ＷＲＫＹ转录因子在水稻叶片生长和抗病过程中的表达分析
Ｔａｂｌｅ １　 Ｔｈｅ ｌｉｓｔ ｏｆ ｔａｒｇｅｔ ＷＲＫＹ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ
Ｇｅｎｅ ｎａｍｅ Ｌｏｃｕｓ＃ Ｂｒｉｅｆ ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ ＭＷ(ｋＤ) Ｃａｔｅｇｏｒｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ
ＯｓＷＲＫＹ１２ ０１ｇ４３５５０
ＴＦｓ ｈａｖｉｎｇ ＷＲＫＹ ａｎｄ ｚｉｎｃ
ｆｉｎｇｅｒ ｄｏｍａｉｎｓꎬｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
３７ Ⅱ
ＴＱＬＮＡＬＡ
ＧＴＴＲＨＫＳ
[２４]
ＯｓＷＲＫＹ４０ / ６４
１１ｇ０２５３０ /
１２ｇ０２４５０
ＴＦｓ ｈａｖｉｎｇ ＷＲＫＹ ａｎｄ ｚｉｎｃ
ｆｉｎｇｅｒ ｄｏｍａｉｎｓꎬｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
３６ / ３６ Ⅲ
ＥＤＬＨＨＡＮＳ
ＹＮＧＤＨＰ
[３３]
ＯｓＷＲＫＹ４３ ０５ｇ４９２１０
ＴＦｓ ｈａｖｉｎｇ ＷＲＫＹ ａｎｄ ｚｉｎｃ
ｆｉｎｇｅｒ ｄｏｍａｉｎｓꎬｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
６５ Ⅱ
ＳＥＥＮＫＲＬＫ
ＮＭＬＳＮＶＴ
[３３]
ＯｓＷＲＫＹ５０ １１ｇ０２５４０
ＴＦｓ ｈａｖｉｎｇ ＷＲＫＹ ａｎｄ ｚｉｎｃ
ｆｉｎｇｅｒ ｄｏｍａｉｎｓꎬｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
３６ Ⅲ
ＮＧＧＮＳＴＣ
ＡＥＤＩＥＬＬ
[３３]
ＯｓＷＲＫＹ５２ １１ｇ０２４７０
ＴＦｓ ｈａｖｉｎｇ ＷＲＫＹ ａｎｄ ｚｉｎｃ
ｆｉｎｇｅｒ ｄｏｍａｉｎｓꎬｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
３７ Ⅲ
ＫＰＲＲＳＳＳＡ
ＡＫＲＲＲ
[３３]
ＯｓＷＲＫＹ５５ ０３ｇ２０５５０
ＴＦｓ ｈａｖｉｎｇ ＷＲＫＹ ａｎｄ ｚｉｎｃ
ｆｉｎｇｅｒ ｄｏｍａｉｎｓꎬｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
２４ Ⅲ
ＱＳＨＨＬＧＨ
ＧＳＲＫＥＫＲ
[２９]
ＯｓＷＲＫＹ８４ ０３ｇ３３０１２
ＷＲＫＹ ＮＤＡ￣ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ
ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎꎬｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
５１ Ⅰ
ＥＤＡＳＴＲＳＥ
ＱＧＳＱＤＹ
[３１]
ＯｓＷＲＫＹ８６ ０１ｇ６０６００
ＷＲＫＹ ＮＤＡ￣ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ
ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎꎬｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
３８ Ⅰ
ＴＤＳＮＳＹＤＧ
ＮＬＴＳＴＲ
[３３]
Ｌｏｃｕｓ＃: ＭＳＵ ＲＧＡＰ (Ｒｉｃｅ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｊｅｃｔ) ｌｏｃｕｓ ｎａｍｅｓ.
２.２　 抗体制备与特异性鉴定
为了保证抗体的特异性ꎬ用 ＢＥＰＩＴＯＰＥ 软件
预测靶蛋白质的抗原决定簇ꎬ具体序列见表 １ꎮ 为
了检验这些多肽在水稻全基因组序列中的唯一性ꎬ
又采用 ＢＬＡＳＴＰ 软件对水稻蛋白质库 ( ｈｔｔｐ: / /
ｒｉｃｅ.ｐｌａｎｔｂｉｏｌｏｇｙ.ｍｓｕ.ｅｄｕ / ａｎａｌｙｓｅｓ＿ｓｅａｒｃｈ＿ｂｌａｓｔ.ｓｈｔ￣
ｍｌ)进行分析ꎬ结果表明ꎬ表 １ 中多肽序列均是靶
蛋白质特异的(数据未显示)ꎮ 为了进一步鉴定抗
体的特异性ꎬ将多肽点在 ＮＣ膜上ꎬ用 ＷＲＫＹ抗体
进行 Ｄｏｔ￣ｂｌｏｔ 检测ꎬ由图 １ 可见ꎬ所制备的抗体仅
特异识别相应的多肽ꎬ与其他多肽间没有交叉
反应ꎮ
Ｆｉｇ. １　 Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｂｙ Ｄｏｔ￣ｂｌｏｔ
Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｗｅｒｅ ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｉｎ ｄｄＨ２Ｏꎬ ｓｐｏｔ ２ μＬ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｎｔｏ ｔｈｅ ＮＣ ｍｅｍｂｒａｎｅ ａｔ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｅｄ ｐｏｓｉｔｉｏｎ.
Ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｓｅｒｕｍ ａｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ａｔ ｔｈｅ ｌｅｆｔ ｅａｃｈ ｐａｎｅｌ (１ ∶ １ ０００ ｄｉｌｕｔｉｏｎ) ｉｎ ＢＳＡ / ＴＢＳ￣Ｔ ｆｏｒ ３０ ｍｉｎ ａｔ ＲＴ.
Ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＥＣＬ ｒｅａｇｅｎｔ ｆｏｒ １ ｍｉｎꎬ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｉｍａｇｅ ｓｔａｔｉｏｎ.
７５
　
植物病理学报 ４４卷
２.３　 ＷＲＫＹ 蛋白质在水稻叶片生长过程中的
表达
取水稻苗期叶片(１ ｃｍ、２ ｃｍ、５ ｃｍ、１０ ｃｍ 和
１５ ｃｍ)和分蘖期、孕穗期、开花期与成熟期展开叶
片ꎬ提取总蛋白质ꎬ用ＷＲＫＹ蛋白质特异抗体进行
ＷＢ检测(图 ２)ꎮ 从图 ２ 可见ꎬＯｓＷＲＫＹ１２、４３、５５
和 ８６表现为苗期表达量较低ꎬ但随叶片的生长蛋
白质表达量也逐步增加ꎬ一般在成株期表达量达到
最高ꎻＯｓＷＲＫＹ５０ 和 ８４ 在苗期表达量相对较高ꎬ
成熟期下降ꎮ 在叶片生长各时期均未检测到 Ｏｓ￣
ＷＲＫＹ４０ / ６４和 ５２蛋白质的表达(数据未附)ꎮ 上
述结果表明ꎬＯｓＷＲＫＹ１２、４３、５５ 和 ８６ 可能在水稻
叶片正常生长方面发挥着作用ꎬＯｓＷＲＫＹ５０ 和 ８４
可能主要在苗期发挥作用ꎮ
Ｆｉｇ. ２　 Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔａｒｇｅｔ ＷＲＫＹ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｒｉｃｅ ｌｅａｖｅｓ ａｔ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
Ｕｐｐｅｒ ｐａｎｅｌｓ: ＷＢ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＷＲＫＹ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔｓꎻ Ｍｉｄｄｌｅ ｐａｎｅｌｓ: Ｔｈｅ ｓｉｇｎａｌ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｂｙ
ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉ￣ＨＳＰ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｅｑｕａｌ ｌｏａｄｉｎｇ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍａｒｋｅｒ. Ｌｏｗｅｒ ｐａｎｅｌｓ: Ｐｌｏｔ ｏｆ ａｖｅｒａｇｅ ａｎｄ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ
ｔｈｒｅｅ ｒｅｐｅａｔｓ ｏｆ ＷＢ ａｎａｌｙｓｉｓ. １ꎬ ２ꎬ ５ꎬ １０ꎬ １５ ａｒｅ ｆｒｏｍ ｓｈｏｏｔｓ ａｔ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｓｔａｇｅ ｏｆ １ꎬ ２ꎬ ５ꎬ １０ ａｎｄ １５ ｃｍꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｉ ｉｓ
ｌｅａｖｅｓ ａｔ ｔｉｌｌｅｒｉｎｇ ｓｔａｇｅꎬ Ｂｔ ｉｓ ｌｅａｖｅｓ ａｔ ｂｏｏｔｉｎｇ ｓｔａｇｅꎬ Ｆｗ ｉｓ ｌｅａｖｅｓ ａｔ ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ ｓｔａｇｅꎬ Ｆｉ ｉｓ ｌｅａｖｅｓ ａｔ ｆｉｌｌｉｎｇ ｓｔａｇｅ.
Ｔｈｅ ｏｒｄｉｎａｔｅ ｖａｌｕｅｓ ａｒｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ｓｉｇｎａｌ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ.
８５
　
　 １期 　 　 史佳楠ꎬ等:８个ＷＲＫＹ转录因子在水稻叶片生长和抗病过程中的表达分析
２.４　 水稻与白叶枯病菌的互作
在水稻分蘖期接种白叶枯病菌 １５ ｄ 后ꎬ比较
病斑长度并拍照(图 ３)ꎮ 带有 Ｘａ２１ 的 ４０２１ 接种
ＰＸＯ９９ 野生型后呈典型的抗病反应ꎬ病斑长度小
于 １.０ ｃｍꎬ４０２１接种 ＰＸＯ９９ΔｒａｘＳＴ 后呈现感病反
应ꎬ病斑长度均超过 １０ ｃｍꎬＭｏｃｋ(４０２１￣Ｈ２Ｏ)反应
没有形成明显的病斑ꎮ
２.５　 ＷＲＫＹ 蛋白质在水稻抗白叶枯病反应中的
表达
为了解 ＷＲＫＹ 蛋白质在 Ｘａ２１ 介导的水稻抗
白叶枯病菌过程中的表达情况ꎬ用 ＷＢ 检测了在
抗病反应不同时间点 ＷＲＫＹ 蛋白质的表达丰度
(图 ４)ꎮ 结果显示 ＯｓＷＲＫＹ４０ / ６４、５０ 在接种后
５ ｄ、ＯｓＷＲＫＹ５２在接种后 １ ｄ有明显的诱导条带出
Ｆｉｇ. ３　 Ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈ ｏｆ ｒｉｃｅ ｌｅａｖｅｓ ｔａｋｅｎ ａｔ １５
ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｘａｎ￣
ｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ. ｏｒｙｚａｅ (Ｘｏｏ)
Ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ４０２１ ｒｉｃｅ ｐｌａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｉｎｏｃｕｌａｔｅ Ｘｏｏ ＰＸＯ９９
(ＷＴ)ꎬＰＸＯ９９(ΔｒａｘＳＴ ｍｕｔａｎｔ) ｏｒ Ｈ２Ｏꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.
Ｆｉｇ. ４　 Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ ＷＲＫＹ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ
ｂｅｔｗｅｅｎ ｒｉｃｅ ａｎｄ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ. ｏｒｙｚａｅ (Ｘｏｏ)
Ｕｐｐｅｒ ｐａｎｅｌｓ: ＷＢ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＷＲＫＹ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｘｏｏ. Ｍｉｄｄｌｅ ｐａｎｅｌ:
Ｔｈｅ ｓｉｇｎａｌ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉ￣ＨＳＰ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｅｑｕａｌ ｌｏａｄｉｎｇ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍａｒｋｅｒ. Ｌｏｗｅｒ ｐａｎｅｌｓ: Ｐｌｏｔ ｏｆ ａｖｅｒａｇｅ ａｎｄ
ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ ｔｈｒｅｅ ｒｅｐｅａｔｓ ｏｆ ＷＢ ａｎａｌｙｓｉｓ. Ｌａｎｅｓ １￣９: Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｘｏｏ(０ ｈꎬ ２ ｈꎬ ８ ｈꎬ
２４ ｈꎬ ４８ ｈꎬ ７２ ｈꎬ １２０ ｈꎬ １６８ ｈ ａｎｄ ２４０ ｈ) . Ｔｈｅ ｏｒｄｉｎａｔｅ ｖａｌｕｅｓ ａｒｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ｓｉｇｎａｌ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ
９５
　
植物病理学报 ４４卷
现ꎬ其表达量随接种时间延长呈现明显的增加ꎮ
ＯｓＷＲＫＹ８４在接菌前期有一定的本底表达ꎬ从第 ５
ｄ开始可检测到表达量的明显上升ꎮ ＯｓＷＲＫＹ４０ /
６４和 ５０的诱导条带出现在 ４５ ｋＤ 处ꎬ比预测分子
量(３６ ｋＤ)略大ꎬ但在叶片中未检测到这 ２ 个蛋白
质的表达ꎬ所以 ＯｓＷＲＫＹ４０ / ６４ 和 ５０ 的表达是受
白叶枯病菌诱导的ꎮ ＯｓＷＲＫＹ５２ 的诱导条带出现
在 ７５ ｋＤ左右ꎬ约为预测分子量(３７ ｋＤ)的 ２ 倍ꎬ
推测接菌后 ＯｓＷＲＫＹ５２ 的表达量上升ꎬ且以二聚
体的形式出现ꎮ ＯｓＷＲＫＹ１２、４３、５５ 和 ８６ 在接种
后不同时间点没有检测到可见的变化ꎮ
２.６　 ＷＲＫＹ蛋白质在不同水稻￣Ｘｏｏ互作反应中的表达
为了解ＷＲＫＹ蛋白质在水稻与白叶枯病菌互
作过程中的表达情况ꎬ对 ４个在抗性反应中发生丰
度变化的 ＷＲＫＹ 蛋白质做了进一步分析ꎬ比较了
它们在抗病 ( Ｒ: ４０２１￣ＰＸＯ９９)、感病 ( Ｓ: ４０２１￣
ＰＸＯ９９Δ ｒａｘＳＴ)和对照(Ｍ:４０２１￣Ｈ２Ｏ)反应 ３ 个
时间点(０、 ７２和 １２０ ｈ)的表达量变化(图 ５)ꎮ 从
图 ５ 可以看出ꎬ与对照相比水稻接种 Ｘｏｏ 后 Ｏｓ￣
ＷＲＫＹ４０ / ６４、５０、５２ 和 ８４ 蛋白质在抗、感反应中
均发生了明显可见且相似的表达变化ꎬ提示在抗感
反应间有相对保守的分子特征ꎮ 具体比较抗、感反
应中ＷＲＫＹ蛋白质的表达变化幅度可以看出(图
５￣Ｂ)ꎬＯｓＷＲＫＹ５０、５２ 和 ８４ 在抗病反应中的表达
量均高于感病反应中的表达量ꎬ说明这 ３ 个
ＷＲＫＹ蛋白质的表达变化具有抗病反应的特异
性ꎮ 有意思的是ꎬＷＲＫＹ４０ / ６４ 在抗病反应中的表
达量低于在感病反应中的表达量ꎬ该蛋白质的表达
具有一定的感病依赖性ꎮ
２.７　 ＷＲＫＹ基因转录与蛋白质表达的关联分析
为了对ＷＲＫＹ的基因转录和蛋白质表达信号
进行关联分析ꎬ根据采集的 ＭＰＳＳ 数据统计了
ＷＲＫＹ基因的转录信息ꎬ连同上述蛋白质表达信
息进行汇总(表 ２)ꎮ 由表 ２可见ꎬ与ＷＢ检测的蛋
Ｆｉｇ. ５　 Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＷＲＫＹ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｍｏｎｇ ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｌｅꎬ
ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ａｎｄ ｍｏｃｋ ｃｏｎｔｒｏｌ
Ａ: Ｌａｎｅ Ｒꎬ Ｓ ａｎｄ Ｍ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ４０２１￣ＰＸＯ９９ꎬ ４０２１￣ＰＸＯ９９ΔｒａｘＳＴ ａｎｄ ４０２１￣Ｈ２Ｏꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｈｅ
ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔｓ ｆｏｒ ｓａｍｐｌｅ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｌａｂｅｌｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｔｏｐ ｏｆ ｅａｃｈ ｐａｎｅｌ. Ｌｏｗｅｒ ｐａｎｅｌ: Ｔｈｅ ｓｉｇｎａｌ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉ￣ＨＳＰ
ａｎｔｉｂｏｄｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｅｑｕａｌ ｌｏａｄｉｎｇ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍａｒｋｅｒ. Ｂ: Ｂａｒｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｏｆ ｓｉｇｎａｌ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｓｔａｎｄａｒｄ
ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｒｅｐｅａｔｓ ｏｆ ＷＢ ａｎａｌｙｓｉｓ. Ｔｈｅ ｏｒｄｉｎａｔｅ ｖａｌｕｅｓ ａｒｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ｓｉｇｎａｌ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ.
０６
　
　 １期 　 　 史佳楠ꎬ等:８个ＷＲＫＹ转录因子在水稻叶片生长和抗病过程中的表达分析
书书书
!"
#$
%
&
()
*
+"
,-.
)/
"/
"$
0.
-.
)1
2
34
5
6%
/%
7,
"/
.8
,-+
7-)
/
"/
9
+,
)7
%-
/
%:
+,
%.
.-
)/
!
"#
"
#$
%
"
&
(
%
$)
)"
$*
+(
,
-.
/
01"
$1
"
("
101
-$
#2
"
3(
-
"0
#
"4
5(
"1
10
#
6"
-"
2-
"6
78
9
:
;(
$#
1 2
(05
- 0
#
6"
-"
2-
"6
78
<
3=
=
3(
-
"0
#
"4
5 (
"1
10
#
6"
-"
2-
"6
78
9
:
;(
$#
12
(05
-0
#
6"
-"
2-
"6
78
<
3=
=
!
"#
$%
&!
"
&
-
"4
5(
"1
1"
6
$-
8
>#
+
1"
"6
)0#
+
1-$
+"
!?
@ A
2%
"#
"4
5(
"1
1"
6
$-
-
."
(
1-$
+"
1
&

10+
#$
)
B
#1
-$
#-
"4
5(
"1
10
#
&

10+
#$
)
!"
#
$%
&#
$
%#
&

10+
# $
)
&

10+
#$
)
C#
6>
2"
6
"4
5(
"1
10
#
&

10+
#$
)
!
"#
$%
&#
&
&
-
"4
5(
"1
1"
6
0#
8
>#
+
$#
6
)
6
)"
$D
"1
#
"4
5(
"1
1"
6
0#
$6
>)
-)
"$
D"
1
E
,
10+
#$
)#
2
#1
-$
#-
-($
#1
2(
05
-0
#
B
#1
-$
#-
"4
5(
"1
10
#
&

10+
#$
)
!
"#
$%
&
$
F4
5(
"1
1"
6
0#
8
>#
+
)"
$D
"1
#
#
-"
45
("
11
"6
0#
-
."
(
1-$
+"
1
&

10+
#$
)
C#
6>
2"
6
"4
5(
" 1
10
#
C#
6>
2"
6
-($
#1
2(
05
-0
#
!
"#
$%
&
"
&

10+
#$
)
B
#1
-$
#-
-($
#1
2(
05
- 0
#
C#
6>
2"
6
"4
5 (
"1
10
#
&

10+
#$
)
!
" #
$%
&

&
-
"4
5(
"1
1"
6
$-
8
>#
+
1"
"6
)0#
+
1-$
+"
!?
@ A
2%
"#
"4
5(
"1
1"
6
$-
-
."
(
1-$
+"
1
&

10+
#$
)
B
#1
-$
#-
" 4
5(
"1
10
#
C#
6>
2"
6
-($
#1
2(
05
-0
#
!
"#
$%
&(
#
B
#1
-$
#-
"4
5 (
"1
10
#
E
,
10+
#$
)$
-1
""
6)
0#
+
1-$
+"
#
$ #
6
0#
2(
"$
1"
6
10#
2"
-0)
)"
(0#
+
1-$
+"
C#
6>
2"
6
"4
5(
"1
10
#
C#
6>
2"
6
-($
#1
2(
05
- 0
#
!
"#
$%
&(
%
&
-
"4
5(
"1
1"
6
$-
1"
"6
)0#
+
1-$
+"
#
"4
5(
"1
1"
6
$-
-
."
(
1-$
+"
1
E
,
10+
#$
)$
-1
" "
6)
0#
+
1-$
+"
#
$#
6
0#
2(
"$
1"
6
10#
2"
-0)
)"
(0#
+
1-$
+"
B
# 1
-$
#-
"4
5(
"1
10
#
B
#1
-$
#-
-( $
#1
2(
05
-0
#
１６
　
植物病理学报 ４４卷
白质表达信息相比ꎬＭＰＳＳ检测提供的转录信号较
低ꎬ在叶片生长和抗病过程都分别有 ４ 个 ＷＲＫＹ
没有 ＭＰＳＳ 信号ꎮ 在抗病反应中ꎬＯｓＷＲＫＹ５０ 和
８４的蛋白质表达和 ＲＮＡ 转录的变化趋势比较符
合ꎬ都呈现受诱导表达提高的特征ꎬ除此之外没有
发现二者间明显的关联性ꎮ 这一比较说明ꎬＷＲＫＹ
基因的转录和蛋白质翻译间的关联性较低ꎬ独立地
了解二者的变化对其功能的了解都是有帮助的ꎮ
３　 讨论
在水稻基因组中有 １２０ 多个 ＷＲＫＹ 家族成
员ꎬ是最大的转录因子家族之一ꎮ 现有证据表明ꎬ
ＷＲＫＹ在多种生命活动中都发挥着重要作用ꎬ通
过转基因提高或降低 ＷＲＫＹ 基因的表达ꎬ可以对
水稻的抗病性产生影响ꎮ 了解水稻体内ＷＲＫＹ在
正常生长和抗病过程中的表达模式ꎬ本研究选择了
８个ＷＲＫＹ成员ꎬ制备了其抗体ꎬ并通过 ＷＢ技术
调查了在水稻叶片生长过程和 Ｘａ２１ 介导的白叶
枯病抗性过程中的表达ꎬ发现这些 ＷＲＫＹ 成员有
不同的表达模式ꎮ 众所周知ꎬ蛋白质是生命活动的
直接执行者ꎬ对蛋白质表达特征的了解可以为功能
研究提供有价值的线索ꎮ
在水稻叶片正常生长过程中没有检测到 Ｏｓ￣
ＷＲＫＹ４０ / ６４和 ５２ 的表达信号ꎬ基本排除了它们
在叶片生长中发挥功能的可能性ꎮ ＯｓＷＲＫＹ１２、
４３、５５和 ８６在苗期表达量较低ꎬ随生长逐渐升高ꎬ
而 ＯｓＷＲＫＹ５０和 ８４在前期表达信号较高ꎬ而后期
有所下降ꎮ 在 Ｘａ２１介导的白叶枯病抗性过程中ꎬ
ＯｓＷＲＫＹ４０ / ６４、５０、５２ 和 ８４ 受诱导表达ꎬ其余的
ＷＲＫＹ表达量没有变化ꎮ 综合这些数据可以推
测ꎬＯｓＷＲＫＹ４０ / ６４ 和 ５２ 可能只在抗病过程中发
挥作用ꎬ而 ＯｓＷＲＫＹ１２、４３、５５和 ８６主要是在叶片
正常生长过程中有功能ꎮ 有意思的是ꎬ Ｏｓ￣
ＷＲＫＹ５０和 ８４ 既受白叶枯病菌的诱导又在水稻
苗期表达ꎬ说明它们在 ２ 种生长过程中都发挥作
用ꎮ 本研究涉及的 ８个ＷＲＫＹ分别属于不同的类
别ꎬＯｓＷＲＫＹ８４和 ８６属于Ⅰ类 ＷＲＫＹ 家族成员ꎬ
ＯｓＷＲＫＹ１２ 和 ４３ 属Ⅱ类ꎬＯｓＷＲＫＹ４０ / ６４、５０、５２
和 ５５属Ⅲ类(表 １)ꎬ未发现蛋白质表达特征与所
属类别的相关性ꎮ 遗传分析表明ꎬ超表达 Ｏｓ￣
ＷＲＫＹ１２对水稻抗病性有负面的影响[８]ꎬ而超表达
ＯｓＷＲＫＹ５５可提高水稻对稻瘟病菌的抗性[１３]ꎬ但
本试验没有检测到二者在白叶枯病抗性过程中的
蛋白质丰度变化ꎬ说明人为改变 ＷＲＫＹ 表达所产
生的抗性和抗病基因介导的抗性其机理并不完全
一致ꎮ 值得指出的是ꎬ超表达 ＯｓＷＲＫＹ８４ 可增强
水稻的抗性ꎬ在 Ｘａ２１ 介导的抗病过程中也发现了
ＯｓＷＲＫＹ８４的诱导表达ꎬ二个来源的数据比较符
合ꎮ
　 　 本研究观察到 ＯｓＷＲＫＹ５０ 在叶片和抗病过
程中的表观分子量明显不同ꎬ为了验证这一现象ꎬ
将 ２种水稻材料同时进行 ＷＢ 分析也获得了相同
的结果(数据未附)ꎮ 推测发生这种现象的原因:
一是源自基因选择性拼接造成的ꎬＯｓＷＲＫＹ５０ 蛋
白质的不同表达形式ꎬ对此检索了水稻的基因组数
据库ꎬ未见到其他的表达版本ꎻ二是源自蛋白质的
不同修饰形式或二聚化ꎬ虽然二者的分子量均较理
论分子量有较大的增加ꎬ但也不太符合修饰或二聚
化现象ꎻ三是源自抗体的非特异性识别ꎬ尽管通过
Ｄｏｔ￣ｂｌｏｔ实验和生物信息分析提供了一些抗体特
异性的证据ꎬ但仍不能排除这种可能性ꎮ 若进一步
究其原因ꎬ可结合转基因试验展开后续研究ꎮ
比较ＷＲＫＹ 蛋白质的 ＷＢ 表达结果和基于
ＭＰＳＳ 的转录数据ꎬ 发现在抗病反应中 Ｏｓ￣
ＷＲＫＹ５０和 ８４的蛋白质表达和 ＲＮＡ 转录间的变
化趋势比较符合ꎬ除此之外ꎬ大部分数据之间的关
联并不明显ꎮ 本研究有 ５个候选ＷＲＫＹ来自用芯
片鉴定的抗病过程中的差异转录基因(表 １)ꎬ其中
有 ３ 个 ＷＲＫＹ(ＯｓＷＲＫＹ４０ / ６４、５０ 和 ５２)在抗病
过程中呈现蛋白质表达受诱导(图 ４)ꎬ其符合率略
高ꎬ但二者间也不是完全对应ꎮ 据报道ꎬ基因转录
和蛋白质合成之间变化的不一致是普遍现象[３２]ꎬ
这一现象提示人们在关注基因转录的基础上ꎬ要加
强对蛋白质的表达特征的了解ꎮ 显然ꎬ蛋白质表达
信息能够为功能研究提供更为直接的数据ꎮ 在本
试验中ꎬ用 ＷＢ 检测到一些高于靶蛋白质理论分
子量的条带ꎬ可能是蛋白质修饰或多聚化的结果ꎬ
当然也不能完全排除非特异杂交的可能ꎮ
通过制备目标蛋白质特异的抗体ꎬ可以了解特
定蛋白质的表达ꎬ这种策略被称为基于抗体的水稻
蛋白质组学策略(Ａｎｔｉｂｏｄｙ￣ｂａｓｅｄ Ｒｉｃｅ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓꎬ
ＡｂＲＰ) [３３]ꎮ 这种策略可以直观地鉴定特定蛋白质
的表达变化ꎬ相对基于质谱的蛋白质组学策略而
言ꎬ该策略具有更高的灵敏度、特异性并易于操作ꎮ
２６
　
　 １期 　 　 史佳楠ꎬ等:８个ＷＲＫＹ转录因子在水稻叶片生长和抗病过程中的表达分析
利用这一策略ꎬ鉴定了多个 ＰＲ 基因及其他抗病相
关基因的表达[２２~２４]ꎮ 本试验中所制备的抗体大都
具有良好的检测效果ꎬ能够特异性地识别目的条
带ꎬ这些抗体还可能用于 ＷＲＫＹ 蛋白质的相关研
究ꎬ如检测它们在其他生物或非生物逆境胁迫的表
达ꎬ进行蛋白质的组织或亚细胞定位以及调查与其
他蛋白质的相互作用等ꎮ
参考文献
[１] 　 Ｅｕｌｇｅｍ Ｔꎬ Ｒｕｓｈｔｏｎ Ｐ Ｊꎬ Ｒｏｂａｔｚｅｋ Ｓꎬ ｅｔ ａｌ. Ｔｈｅ
ＷＲＫＹ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ [ Ｊ] .
Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉ.ꎬ ２０００ꎬ ５(５): １９９－２０６.
[２] 　 Ｒｕｓｈｔｏｎ Ｐ Ｊꎬ Ｓｏｍｓｓｉｃｈ Ｉ Ｅꎬ Ｒｉｎｇｌｅｒ Ｐꎬ ｅｔ ａｌ. ＷＲＫＹ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ [Ｊ] . Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉ.ꎬ ２０１０ꎬ １５
(５): ２４７－２５８.
[３] 　 Ｑｉｕ Ｄꎬ Ｘｉａｏ Ｊꎬ Ｘｉｅ Ｗꎬ ｅｔ ａｌ. Ｅｘｐｌｏｒｉｎｇ ｔｒａｎｓｃｒｉｐ￣
ｔｉｏｎａｌ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ＯｓＷＲＫＹ１３ꎬ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ
ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｉｎ ｒｉｃｅ
[Ｊ] . ＢＭＣ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌ.ꎬ ２００９ꎬ ９: ７４－８５.
[４] 　 Ｊｉｎｇ Ｓꎬ Ｚｈｏｕ Ｘꎬ Ｓｏｎｇ Ｙꎬ ｅｔ ａｌ. Ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｅｘｐｒｅｓ￣
ｓｉｏｎ ｏｆ ＯｓＷＲＫＹ ２３ ｇｅｎｅ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｄｅｆｅｎｓｅ
ａｎｄ ｄａｒｋ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｌｅａｆ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ [ Ｊ] .
Ｐｌａｎｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｒｅｇｕｌꎬ ２００９ꎬ ５８: １８１－１９０.
[５] 　 Ｘｉｅ Ｚꎬ Ｚｈａｎｇ Ｚ Ｌꎬ Ｚｏｕ Ｘꎬ ｅｔ ａｌ. Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｗｏ
ａｂｓｃｉｓｉｃ￣ａｃｉｄ ｉｎｄｕｃｅｄ ＷＲＫＹ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｒｅｐｒｅｓｓｉｎｇ
ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ａｌｅｕｒｏｎｅ ｃｅｌｌｓ [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｊ.ꎬ
２００６ꎬ ４６(２): ２３１－２４２.
[６] 　 Ｗａｎｇ Ｈꎬ Ｈａｏ Ｊꎬ Ｃｈｅｎ Ｘꎬ ｅｔ ａｌ. Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ
ｒｉｃｅ ＷＲＫＹ８９ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ Ｂ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ａｎｄ
ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｒｉｃｅ ｐｌａｎｔｓ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ. Ｂｉｏｌ.ꎬ
２００７ꎬ ６５(６): ７９９－８１５.
[７] 　 Ｈｗａｎｇ Ｓ Ｈꎬ Ｙｉｅ Ｓ Ｗꎬ Ｈｗａｎｇ Ｄ Ｊ. Ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＯｓＷＲＫＹ６ ｇｅｎｅ ｉｎ ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ａｃｔｉｖａｔｅｓ
ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｄｅｆｅｎｓｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅｓ
ｒｅｓｉｓ￣ｔａｎｃｅ ｔｏ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉ.ꎬ ２０１１ꎬ １８１
(３): ３１６－３２３.
[８] 　 Ｌｉｕ Ｘ Ｑꎬ Ｂａｉ Ｘ Ｑꎬ Ｃｈｕ Ｃ Ｃ. ＯｓＷＲＫＹ０３ꎬ ａ ｒｉｃｅ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｔｈａｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｄｅｆｅｎｓｅ ｓｉｇｎａ￣
ｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｕｐｓｔｒｅａｍ ｏｆ ＯｓＮＰＲ１ [Ｊ] . Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈꎬ
２００５ꎬ １５(８): ５９３－６０３.
[９] 　 Ａｂｂｒｕｓｃａｔｏ Ｐꎬ Ｎｅｐｕｓｚ Ｔꎬ Ｍｉｚｚｉ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ. Ｏｓ￣
ＷＲＫＹ２２ꎬ ａ ｍｏｎｏｃｏｔ ＷＲＫＹ ｇｅｎｅꎬ ｐｌａｙｓ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ
ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｂｌａｓｔ [ Ｊ] . Ｍｏｌ. Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌ.ꎬ
２０１２ꎬ １３(８): ８２８－８４１
[１０] Ｓｈｉｍｏｎｏ Ｍꎬ Ｋｏｇａ Ｈꎬ Ａｋａｇｉ Ａꎬ ｅｔ ａｌ. Ｒｉｃｅ ＷＲＫＹ４５
ｐｌａｙｓ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｆｕｎｇａｌ ａｎｄ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｄｉｓｅａｓｅ
ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ [Ｊ] . Ｍｏｌ. Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌ.ꎬ ２０１２ꎬ １３(１): ８３－
９４.
[１１] Ｓｈｉｍｏｎｏ Ｍꎬ Ｓｕｇａｎｏ Ｓꎬ Ｎａｋａｙａｍａ Ａꎬ ｅｔ ａｌ. Ｒｉｃｅ
ＷＲＫＹ４５ ｐｌａｙｓ ａ ｃｒｕｃｉａｌ ｒｏｌｅ ｉｎ ｂｅｎｚｏｔｈｉａｄｉａｚｏｌｅ￣ｉｎ￣
ｄｕｃｉｂｌｅ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ ２００７ꎬ １９(６):
２０６４－２０７６.
[１２] Ｃｈｕｊｏ Ｔꎬ Ｔａｋａｉ Ｒꎬ Ａｋｉｍｏｔｏ￣Ｔｏｍｉｙａｍａ Ｃꎬ ｅｔ ａｌ. Ｉｎ￣
ｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｅｌｉｃｉｔｏｒ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｇｅｎｅ ＯｓＷＲＫＹ５３ ｉｎ
ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｄｅｆｅｎｓｅ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｒｉｃｅ [ Ｊ] .
Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａꎬ ２００７ꎬ １７６９: ４９７－５０５.
[１３] Ｚｈａｎｇ Ｊꎬ Ｐｅｎｇ Ｙꎬ Ｇｕｏ Ｚ. Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ
ｐａｔｈｏｇｅｎ￣ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ＯｓＷＲＫＹ３１ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｄｉｓｅａｓｅ
ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ａｆｆｅｃｔｓ ｒｏｏｔ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ａｕｘｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ
ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｒｉｃｅ ｐｌａｎｔｓ [ Ｊ] . Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈꎬ ２００８ꎬ １８:
５０８－５２１.
[１４] Ｐｅｎｇ Ｙꎬ Ｂａｒｔｌｅｙ Ｌ Ｅꎬ Ｃｈｅｎ Ｘꎬ ｅｔ ａｌ. ＯｓＷＲＫＹ６２ ｉｓ ａ
ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｂａｓａｌ ａｎｄ Ｘａ２１￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄｅｆｅｎｓｅ
ａｇａｉｎｓｔ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ. ｏｒｙｚａｅ ｉｎ ｒｉｃｅ [ Ｊ] .
Ｍｏｌ. Ｐｌａｎｔꎬ ２００８ꎬ １(３): ４４６－４５８.
[１５] Ｋｏｏ Ｓ Ｃꎬ Ｍｏｏｎ Ｂ Ｃꎬ Ｋｉｍ Ｊ Ｋꎬ ｅｔ ａｌ. ＯｓＢＷＭＫ１
ｍｅｄｉａｔｅｓ ｓａ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｄｅｆｅｎｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ
ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＯｓＷＲＫＹ３３ [ Ｊ] . Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓꎬ ２００９ꎬ
３８７: ３６５－３７０.
[１６] Ｓｏｎｇ Ｗ Ｙꎬ Ｗａｎｇ Ｇ Ｌꎬ Ｃｈｅｎ Ｌ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ. Ａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ
ｋｉｎａｓｅ￣ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｃｏｄｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｒｉｃｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓ￣
ｔａｎｃｅ ｇｅｎｅꎬ Ｘａ２１ [ Ｊ] . Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ １９９５ꎬ ２７０(５２４３):
１８０４－１８０６.
[１７] Ｃｈｅｎ Ｘꎬ Ｃｈｅｒｎ Ｍꎬ Ｃａｎｌａｓ Ｐ Ｅꎬ ｅｔ ａｌ. Ａｎ ＡＴＰａｓｅ ｐｒｏ￣
ｍｏｔｅｓ ａｕｔｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｔｅｒｎ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｒｅ￣
ｃｅｐｔｏｒ Ｘａ２１ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｘａ２１￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ [Ｊ] .
Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ
ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａꎬ ２０１０ꎬ １０７: ８０２９－８０３４.
[１８] Ｗａｎｇ Ｙ Ｓꎬ Ｐｉ Ｌ Ｙꎬ Ｃｈｅｎ Ｘꎬ ｅｔ ａｌ. Ｒｉｃｅ Ｘａ２１ ｂｉｎｄｉｎｇ
ｐｒｏｔｅｉｎ ３ ｉｓ ａ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｌｉｇａｓｅ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｆｕｌｌ Ｘａ２１￣
ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ ２００６ꎬ １８
(１２): ３６３５－３６４６.
[１９] Ｐａｒｋ Ｃ Ｊꎬ Ｐｅｎｇ Ｙꎬ Ｃｈｅｎ Ｘꎬ ｅｔ ａｌ. Ｒｉｃｅ ＸＢ１５ꎬ ａ
３６
　
植物病理学报 ４４卷
ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ２ｃꎬ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ
ａｎｄ Ｘａ２１￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ [ Ｊ] . ＰＬｏＳ Ｂｉｏｌ.ꎬ
２００８ꎬ ６(９): １９１０－１９２５.
[２０] Ｌｅｅ Ｓ Ｗꎬ Ｈａｎ Ｓ Ｗꎬ Ｓｒｉｒｉｙａｎｕｍ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ. Ａ ｔｙｐｅ Ｉ￣ｓｅ￣
ｃｒｅｔｅｄꎬ ｓｕｌｆａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｔｒｉｇｇｅｒｓ Ｘａ２１￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｎａｔｅ
ｉｍｍｕｎｉｔｙ [Ｊ] . Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ ２００９ꎬ ３２６(５９５４): ８５０－８５３.
[２１] Ｐａｒｋ Ｃ Ｊꎬ Ｒｏｎａｌｄ Ｐ Ｃ. Ｃｌｅａｖａｇｅ ａｎｄ ｎｕｃｌｅａｒ ｌｏｃａｌｉｚａ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｉｃｅ Ｘａ２１ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ [ Ｊ] . Ｎａｔｕｒｅ
Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓꎬ ２０１２ꎬ ３: ９２０－９２５
[２２] Ｗｕ Ｑꎬ Ｈｏｕ Ｍ Ｍꎬ Ｌｉｕ Ｇ Ｚꎬ ｅｔ ａｌ. Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｈｏ￣
ｇｅｎｅｓｉｓ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｒｉｃｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｌｉｇｈｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ
ｇｅｎｅ Ｘａ２１￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
ｏｒｙｚａｅ ｐｖ. ｏｒｙｚａｅ [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ
２０１１ꎬ ９３: ４５５－４５９.
[２３] Ｈｏｕ Ｍ Ｍꎬ Ｘｕ Ｗ Ｊꎬ Ｂａｉ Ｈꎬ ｅｔ ａｌ. Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｒｉｃｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｒｉｃｅ
ｌｅａｖｅｓ ｄｕｒｉｎｇ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ.
ｏｒｙｚａｅ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ.ꎬ ２０１２ꎬ ３１(５): ８９５－９０４.
[２４] Ｘｕ Ｗ Ｊꎬ Ｍｉａｏ Ｌ Ｙꎬ Ｌｉｕ Ｇ Ｚꎬ ｅｔ ａｌ. Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｆｉｖｅ ＷＲＫＹ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ
ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｒｉｃｅ ｌｅａｆ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ. ｏｒｙｚａｅ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] .
Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ (生物化学与
生物物理进展)ꎬ ２０１３ꎬ ４０(３): １－９.
[２５] Ｇａｎ Ｑꎬ Ｂａｉ Ｈꎬ Ｚｈａｏ Ｘꎬ ｅｔ ａｌ. Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｃｈａｒａｃ￣
ｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ Ｘａ２１￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄｅｆｅｎｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｒｉｃｅ
[Ｊ] . Ｊ. Ｉｎｔｅｇｒ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌ.ꎬ ２０１１ꎬ ５３(４): ３００－３１１.
[２６] Ｌｅｅ Ｉꎬ Ｓｅｏ Ｙ Ｓꎬ Ｃｏｌｔｒａｎｅ Ｄꎬ ｅｔ ａｌ. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ
ｏｆ ｔｈｅ ｂｉｏｔｉｃ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｕｓｉｎｇ ａ ｇｅｎｏｍｅ￣ｓｃａｌｅ ｇｅｎｅ
ｎｅｔｗｏｒｋ ｆｏｒ ｒｉｃｅ [ Ｊ ] . Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａꎬ
２０１１ꎬ １０８(４５): １８５４８－１８５５３.
[２７] Ｄａ Ｓｉｌｖａ Ｆ Ｇꎬ Ｓｈｅｎ Ｙꎬ Ｄａｒｄｉｃｋ Ｃꎬ ｅｔ ａｌ. Ｂａｃｔｅｒｉａｌ
ｇｅｎｅｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｙｐｅ Ｉ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｕｌｆａｔｉｏｎ ａｒｅ
ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｔｏ ｅｌｉｃｉｔ ｔｈｅ ｒｉｃｅ Ｘａ２１￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ
ｒｅｓｐｏｎｓｅ [ Ｊ] . Ｍｏｌ. Ｐｌａｎｔ Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔꎬ ２００４ꎬ １７
(６): ５９３－６０１.
[２８] Ｏｄｏｒｉｃｏ Ｍꎬ Ｐｅｌｌｅｑｕｅｒ Ｊ Ｌ. Ｂｅｐｉｔｏｐｅ: Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｔｈｅ
ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ａｎｄ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ
[Ｊ] . Ｊ. Ｍｏｌ. Ｒｅｃｏｇｎｉｔꎬ ２００３ꎬ １６(１): ２０－２２.
[２９] Ｌａｎ Ｊ Ｐꎬ Ｌｉ Ｌ Ｙꎬ Ｌｉｕ Ｇ Ｚꎬ ｅｔ ａｌ. Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ
ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ￣ｅｎｃｏｄｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｒｉｃｅ ｌｅａｖｅｓ ａｔ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｓｔａｇｅｓ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ (生物化学与生物物理
进展)ꎬ ２０１１ꎬ ３８: ６５２－６６０.
[３０] Ｌｉ Ｘꎬ Ｂａｉ Ｈꎬ Ｗａｎｇ Ｘꎬ ｅｔ ａｌ. Ｉｄｅｎｔｉfiｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｖａｌｉｄａ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ ｒｉｃｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｏｒ ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ [Ｊ] .
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｂｏｔａｎｙꎬ ２０１１ꎬ ６２(１４): ４７６３
－４７７２.
[３１] Ｎａｋａｎｏ Ｍꎬ Ｎｏｂｕｔａ Ｋꎬ Ｖｅｍａｒａｊｕ Ｋꎬ ｅｔ ａｌ. Ｐｌａｎｔ ｍｐｓｓ
ｄａｔａｂａｓｅｓ: Ｓｉｇｎａｔｕｒｅ￣ｂａｓｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｆｏｒ
ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｓｍａｌｌ ＲＮＡ [Ｊ] . Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓꎬ ２００６ꎬ ３４: Ｄ７３１－Ｄ７３５.
[３２] Ｌｉ Ｇ Ｗꎬ Ｘｉｅ Ｘ Ｓ. Ｃｅｎｔｒａｌ ｄｏｇｍａ ａｔ ｔｈｅ ｓｉｎｇｌｅ￣ｍｏｌｅ￣
ｃｕｌｅ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｌｉｖｉｎｇ ｃｅｌｌｓ [ Ｊ ] . Ｎａｔｕｒｅꎬ ２０１１ꎬ ４７５
(７３５６): ３０８－３１５.
[３３] Ｌｉｕ Ｇ Ｚꎬ Ｌｉｕ Ｓ Ｑꎬ Ｗｕ Ｌ. Ａｎｔｉｂｏｄｙ￣ｂａｓｅｄ ｒｉｃｅ
ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ￣ｔｈｅ ｂｅｇｉｎｎｉｎｇ ａｎｄ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ( ｉｎ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ｓｃｉｅｎｔｉａ Ｓｉｎｉｃａ Ｖｉｔａｅ (中国科学)ꎬ ２０１１ꎬ
４１: １７３－１７７.
责任编辑:于金枝
４６