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Research on Tissue Culture for Rapid Propagation and in vitro Bulbils Regeneration System of Dioscorea opposita Thunb

铁棍山药组织培养快繁及试管珠芽离体再生体系研究



全 文 :书西北植物学报!
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文章编号$
#"""("!&
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收稿日期$
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%修改稿收到日期$
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基金项目$江苏省农业科技自主创新资金&
,-
"
#$
#
!""+

作者简介$韩晓勇"
#+.$%
#!男!硕士!助理研究员!主要从事特色经济作物组织培养技术研究(
/0123
$
415-
6
.(
!
#)$7,80
"
通信作者$殷剑美!博士!副研究员!主要从事特色经济作物研究(
/0123
$
6
25
9
0**
!6
14887,807,5
铁棍山药组织培养快繁及试管珠芽
离体再生体系研究
韩晓勇!闫瑞霞!殷剑美"!张培通!郭文琦!李春宏
"江苏省农业科学院经济作物研究所!南京
!#""#(
#

!
要$以河南温县铁棍山药带腋芽的茎段为外植体进行铁棍山药种苗快繁及珠芽离体再生体系的研究(结果表
明$"
#
#
*&:
乙醇浸泡
$";

&: <1=3>
消毒
#&025
配合使用灭菌效果最好%腋芽诱导最适培养基为
?@A"7&
0
B
)
C
%#
)DEA"7#0
B
)
C
%#
!培养
!"F
后诱导的多芽体倍数最高!为
!7!!
!高度最高为
$7$,0
%继代增殖
最适培养基为
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B
)
C
%#
)DE
!增殖倍数可达
(7#
%生根培养最适培养基为
#
*
!?@A"7!0
B
)
C
%#
)DEA
#7"0
B
)
C
%#
活性炭!平均生根天数为
#!F
!生根率达
#"":
!根系最长为
#7"(,0
("
!
#用单芽带外
植体的接种方式!其珠芽诱导率及诱导的珠芽数显著高于只接单芽的接种方式!珠芽诱导率达
..7+:
!平均珠芽数

#7&"
!大小为
"7$.,0G"7&(,0
%蔗糖浓度为
#:
"
$:
有利于珠芽诱导!珠芽整齐度好!形状规则!试管苗叶色
浓绿%离体珠芽芽诱导的最适培养基为
?@A#7&0
B
)
C
%#
)DEA"7!0
B
)
C
%#
!珠芽在
#.
"
!!F
发芽!
$"F
后诱导率最高为
.$7$:
(该实验结果为铁棍山药试管苗的工厂化生产奠定了技术基础(
关键词$铁棍山药%组织培养%腋芽诱导%珠芽诱导%再生体系%快繁
中图分类号$
H.#$7#
文献标志码$
E
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1
+23%(
1
$
4
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B
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6
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B
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Z
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B
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B
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Z
T20131-231Y
6
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B
)
C
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)DEA"7#0
B
)
C
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Z
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B
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T4P0M3T2
Z
3P
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B
4T[PYP$7$,07]4P8
Z
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B
)
C
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Z
Y8
Z
1
B
1T285,8PXX2,2P5T,8M3FYP1,4(7#7]4P8
Z
T2013Y88T25
B
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B
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C
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B
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B
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B
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B
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B
T47
"
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#
]4P,M3TMY130PT48F8XT4PP-
Z
315T;[2T4;25
B
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B
52X2,15T
3
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-
#
"7"&
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42
B
4PYT415T4P,M3TMY130PT48F8XT4P;25
B
3P\MF25T4P25FM,T2^2T
6
15F1^PY1
B
P5M0\PY8X
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!
[42,4T4P25FM,T2^2T
6
!
1^PY1
B
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!
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Z
P,
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Z
XM3T825FM,25
B
T4P\M3\23;[2T441FYP
B
M31Y;41
Z
P15FT4P
,838MY8XT4P
Z
315T3PT;3P1^P;[PYPF1Y`
B
YPP57]4P8
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T2013\M3\23;
B
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B
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C
%#
)DEA"7!0
B
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C
%#
B
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6
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B
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Z
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ZZ
32,1T285 1^3MPX8YTP;TTM\P
Z
315T3PTX1,T8Y
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T4P1-231Y
6
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%
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%
YP
B
P5PY
1T285;
6
;TP0
%
Y1
Z
2F
Z
Y8
Z
1
B
1T285
!!
铁棍山药属于怀山药的一种!主要产区为河南
温县(以其显著的滋阴补阳功能以及细长的块茎!
深灰色厚实的表皮!形似棍棒且耐储存而获得+铁棍
怀山药,-+怀参,的美称!畅销全国!远销国外!被视
为山药中珍品&#(但铁棍山药长期进行营养繁殖!
不仅用种量大-扩繁速度慢!还因连续种植病毒积累
导致种性退化!使其种植面积逐年下降!严重影响了
质量和产量的提高&!(而利用组织培养技术可以获
得一批基因型-长相一致的无毒优良种苗!利于品种
的更新复壮!但试管苗存在驯化要求严格-运输困
难-成活率偏低等问题!离体试管珠芽的诱导及再生
体系的建立可能是解决这一问题的一种好方法(因
为试管珠芽对光-温度的变化抗性更强!易保存!运
输方便!尤其是利用脱毒种苗获得的脱毒试管薯和
试管珠芽!利于国际间种质交换&$(
近年来!关于铁棍山药组织培养的研究较
多&()!建立了铁棍山药的繁殖体系(但这些研究主
要是围绕不同外植体的愈伤诱导和植株再生!而愈
伤诱导过程中易发生变异!不利于保持品种的优良
特性(本实验旨在建立一种从芽到多芽体-多芽体
到试管苗-试管苗到珠芽-珠芽再到试管苗的繁殖方
式(这种繁殖方式不仅可以提高繁殖系数和繁殖速
度!而且利于保持品种的优良特性!保护具有地方特
色的种质资源!提升离体试管苗的实用性(
#
!
材料和方法
=7=
!
材料处理
将河南温县产铁棍山药的块茎浅埋在细沙中!
栽培在恒温"
!&a
#培养室中!长出幼苗时备用(
=7>
!
试验方法
=7>7=
!
外植体的灭菌
!
取铁棍山药的嫩茎!去掉叶
片!用剪刀截成
!
"
$,0
带腋芽的茎段!流动水冲洗
#"025
左右(在超净台上用
*&:
酒精浸泡
$";
!用
&: <1=3>
分别灭菌
#"
-
#&

!"025
!无菌水漂洗
&
"
*
次!用解剖刀切去末端留下约
#7&
"
!,0
左右
的茎段接种在
?@
培养基中!
&F
后观察杀菌效果(
=7>7>
!
腋芽诱导分化
!
外植体经灭菌后接种在添
加不同质量浓度的
)DE


?@
培养基"表
#
#中!接种
!"F
后统计芽数!换算成多芽体倍数-芽
的诱导率-芽高度及芽的长相长势等确定适宜芽分
化的培养基(激素浓度设置
)
个处理!每个处理设
$
次重复!每次重复
+
个茎段(
=7>7?
!
继代增殖
!
诱导培养基上萌发出的不定芽
长到带
!
片和
!
片以上叶时!切取单个不定芽接种
在添加不同质量浓度的
)DE


?@
培养
基"表
!
#中!
$"F
后观察增殖倍数(激素浓度设置
.
个处理!每处理
$
次重复!每次重复
.
个茎段(
=7>7@
!
生根培养
!
将高
!7",0
以上-带有
!
片或
!
片以上叶的健壮小苗切下!转入生根培养基上进
行培养(生根培养基添加质量浓度为
"7"!:
活性
炭作为对照(调查不同处理的平均生根天数-
(&F
的生根苗数-生根率-根系平均长度及根系形态(生
根培养基设置
)
个处理"表
$
#!每个处理设
$
次重
复!每次重复
.
个小苗(
=7>7A
!
离体珠芽的诱导及相关因素研究
!
采用外
植体带单芽直接生根和将外植体上的单芽切下来生

!
种方式观察其对珠芽的诱导影响(每种接种方
式设
$
次重复!每次重复
+
个小苗(
(&F
后调查珠
芽的诱导率-数目及大小%将高
!7",0
以上-带有
!
片或
!
片以上叶的健壮小苗切下!接种于蔗糖的质
量浓度水平分别为
#:
-
$:
-
&:

.:
的生根培养
基上进行培养!培养
(&F
后观察各处理珠芽的诱导
率-数目-大小以及试管苗的长相长势等(每个蔗糖
浓度设
$
次重复!每次重复
+
个小苗(
=7>7B
!
离体珠芽诱导成苗
!
将诱导的试管珠芽接
种在添加不同质量浓度的
)DE


?@

养基"表
)
#中!
$"F
后调查发芽情况(激素浓度设
(
个处理!每处理
$
次重复!每次重复
)
个珠芽(
=7>7C
!
培养基灭菌及培养条件
!
高压灭菌前调整
培养基
Z
I&7.
!保持
#!#a
灭菌
!"025
(培养室温
度为"
!&b!
#
a
!光照度
!&""
"
$"""3-
!每天光照
#!4
(培养基中琼脂的质量分数为
*
B
)
C
%#
!除特
殊标明外蔗糖的质量分数为
$"
B
)
C
%#
(
!
!
结果与分析
>7=
!
不同灭菌时间对外植体灭菌效果的影响
不同灭菌时间对外植体灭菌效果的影响表明!
外植体"图版
#
!
E
#经
&: <1=3>
灭菌
#&025
效果
#!#!
#"

!!!!!!!!!!
韩晓勇!等$铁棍山药组织培养快繁及试管珠芽离体再生体系研究
较好!灭菌成功率达
.&7!:
!死亡率仅为
$7*:
(灭
菌时间太长会增加死亡数!时间太短则会使污染数
增加!影响灭菌成功率(
>7>
!
铁棍山药腋芽诱导分化的最佳激素浓度配比
由表
#
可以看出!
?@A"7&0
B
)
C
%#
)DEA
"7#0
B
)
C
%#
-
?@A"7&0
B
)
C
%#
)DEA
"7"0
B
)
C
%#

?@A#7"0
B
)
C
%#
)DEA
"7#0
B
)
C
%#
培养基诱导的不定芽数和芽的
长势优于其他几个培养基!其中以
?@A"7&0
B
)
C
%#
)DEA"7#0
B
)
C
%#
培养基诱导的芽数
最多"
)"
个#!多芽体倍数最高"
!7!!
#!与其他处理
差异显著"
-
#
"7"&
#!芽高度最高!为
$7$,0
"图版
#
!
D
#(随着
)DE

配比浓度的提高!诱导
的芽数-多芽体倍数及多芽体高度都呈下降趋势!并
且叶片会逐渐发生卷曲!出现变态性状(各处理间
腋芽诱导率无显著差异(
>7?
!
继代增殖
由表
!
可以看出!诱导丛生芽增殖最适宜培养
基为
?@A#7&0
B
)
C
%#
)DEA"7"0
B
)
C
%#
!丛生芽的长势正常!增殖倍数可达
(7#
"图版
#
!
=
#!与其他处理差异显著"
-
#
"7"&
#(降低或升
高培养基中激素浓度均能降低丛生芽的数量(培养
基中单独添加
)DE
时!随着
)DE
浓度的升高诱导
丛生芽增殖倍数逐渐提高!但高浓度"
!7"0
B
)
C
%#
#容易造成叶片黄化"图版
#
!
c
#!两种激素组
合!增值效果不理想(
>7@
!
生根培养
由表
$
可以看出!在培养基中添加
"7"!:
活性
炭后!试管苗的平均生根天数和生根率显著"
-
#
"7"&
#高于未添加活性炭的试管苗!根系长度也优于
未添加活性炭的试管苗!即活性炭利于铁棍山药根
系的形成"图版
#
!
/
#(添加活性炭后!试管苗在
#!
"
#.F
左右基部开始出现白色根点!随后根系逐渐
伸长!
(&F
后平均根系长度在
"7*),0
左右(未添
加活性炭处理!试管苗在
#
个月后才出现白色根点
且试管苗褐化严重(不同浓度
)DE

组合
对铁棍山药生根的影响较大!其中激素浓度为
)DE
d!同时添加
"7"!:
活性炭生根效果
最好!平均生根天数为
#!F
!
(&F
后生根率达
#"":
!形成完整的组培苗"图版
#
!
f
#!且根系长而
粗!根系长度为
#7"(,0
!与其他处理间差异显著(
随着
浓度增大!根系会逐渐缩短变粗!生根率

=
!
不同激素浓度对芽诱导的影响
]1\3P#
!
/XXP,T8X1-231Y
6
\MF;25FM,T285X8YF2XXPYP5T48Y085P,85,P5TY1T285;
)DE
*"
0
B
)
C
%#
#
*"
0
B
)
C
%#
#
接种数
N58,M31T285
5M0\PY;
总芽数
]8T13\MF
5M0\PY;
多芽体倍数
?M3T2
Z
3P
\MF;Y1T28
诱导率
N5FM,T2^2T
6
*
:
平均长度
E^PY1
B
P\MF;
3P5
B
T4
*
,0
生长描述
RY8[T4
FP;,Y2
Z
T285
"7& "7# !* )" !7!!1 #""1 $7$1
生长正常
<8Y013
B
Y8[T4
"7& "7" !* (. #7*.,F #""1 $7"1生长正常
<8Y013
B
Y8[T4
#7" "7# !* &# #7.+\, #""1 !7.生长正常
<8Y013
B
Y8[T4
#7" "7" !* &( !7""\ #""1 #7),
叶变态
CP1^P;1\58Y013
!7" "7# !* ($ #7&+P +)7$1 #7"F
叶变态
CP1^P;1\58Y013
!7" "7" !* (& #7)*FP #""1 #7"F
叶变态
CP1^P;1\58Y013
!!
注$同列不同小写字母表示在
"7"&
水平上的差异显著性%下同(
<8TP
$
]4PF2XXPYP5T58Y0133PTTPY;[2T425T4P;10P,83M050P15T4P;2
B
52X2,15,P1TT4P"7"&3P^P3
%
]4P;10P1;\P38[7

>
!
不同激素浓度对芽增殖的影响
]1\3P!
!
/XXP,T8X\MF;
Z
Y8
Z
1
B
1T285X8YF2XXPYP5T48Y085P,85,P5TY1T285;
)DE
*"
0
B
)
C
%#
#
*"
0
B
)
C
%#
#
继代数
@M\,M3TMYP
5M0\PY;
不定芽总数
]8T13\MF
5M0\PY;
增殖系数
SY8
Z
1
B
1T285
,8PXX2,2P5T
生长描述
RY8[T4FP;,Y2
Z
T285
"7& "7# !( (. !7",
易生根
L88T25
B
P1;23
6
"7& "7" !( &# !7#,
芽细长
DMF;385
B
15FT425
#7" "7# !( (! #7.F
生长正常
<8Y013
B
Y8[T4
#7" "7" !( $" $7.P
生长正常
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B
Y8[T4
#7& "7# !( &+ !7&生长正常
<8Y013
B
Y8[T4
#7& "7" !( +. (7#1
生长正常
<8Y013
B
Y8[T4
!7" "7# !( (! #7.F
叶片易黄化
CP1^P;\P,80P
6
P38[P1;23
6
!7" "7" !( !( #7"X
叶片易黄化
CP1^P;\P,80P
6
P38[P1;23
6
!!#!
西
!

!

!

!

!

!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
$$

也呈下降趋势(
>7A
!
铁棍山药离体试管珠芽的诱导
>7A7=
!
不同接种方式对试管珠芽诱导的影响
!

(
显示!单芽带外植体的接种方式珠芽的诱导率及
平均珠芽数显著高于"
-
#
"7"&
#只接单芽的接种方
式!珠芽也较大(单芽带外植体接种方式珠芽的诱
导率为
..7+:
!平均珠芽数为
#7&"
!大小为
"7$.
,0G"7&(,0
!珠芽的形状较规则"图版
#
!
R
#(
>7A7>
!
不同蔗糖浓度对试管珠芽诱导的影响
!

&
显示!
#:
"
$:
蔗糖对珠芽的诱导率显著高于
&:
"
.:
!且珠芽整齐度好!形状规则!叶色浓绿!试管
苗长相长势正常(其中!蔗糖浓度为
#:
时!珠芽的
诱导率最高"
*(7#:
#!平均珠芽数最多"
#7(&
#!并与
蔗糖浓度为
$:
珠芽的诱导率差异不显著!但珠芽
大小较蔗糖浓度为
$:
小!为
"7$$,0G"7(&,0
(
随着蔗糖浓度的升高!珠芽的诱导率显著下降!但大
小会增大!出现不规则形状!珠芽偏长!而且蔗糖浓
度的提高易造成叶片和茎的黄化!最终导致死亡(
>7B
!
离体珠芽诱导成苗
由表
)
可知!在培养基
?@A#7&0
B
)
C
%#
)
DEA"7!0
B
)
C
%#
中试管珠芽的芽诱导率最
高"
.$7$:
#!与其他处理差异显著(随着
)DE

配比浓度的提高!试管珠芽的诱导率呈上升
趋势(不同培养基芽诱导率不同!通常培养
#.
"
!!
F
会诱导出芽!发芽后继续培养!离体珠芽直接长出
新的根系!
$"F
后成山药试管苗"图版
#
!
I
#(

B
!
不同激素浓度对离体珠芽芽诱导的影响
]1\3P)
!
/XXP,T;8X\MF;25FM,T2858X!"#!%$&
\M3\23;X8YF2XXPYP5T48Y085P,85,P5TY1T285;
)DE
*"
0
B
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C
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#
*"
0
B
)
C
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#
接种数
N58,M31T285
5M0\PY;
发芽数
RPY0251T285
5M0\PY;
诱导率
N5FM,T2^2T
6
*
:
"7& "7! #. ) $$7$#7" "7! #. ) $$7$#7& "7! #. #& .$7$1
!7" "7! #. ! ##7#,

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!
不同激素浓度和活性炭对生根的影响
]1\3P$
!
/XXP,T8XY88T;
B
Y8[T4X8Y1,T2^1TPF,1Y\8515FF2XXPYP5T48Y085P,85,P5TY1T285;
)DE
*"
0
B
)
C
%#
#
*"
0
B
)
C
%#
#
活性炭有无
EFF1,T2^1TPF
,1Y\858Y58
接种数
N58,M31T285
5M0\PY;
生根天数
L88T25
B
F1
6
*
F
生根苗数
L88T25
B
5M0\PY;
生根率
L88T25
B
Y1TP
*
:
平均根长
E^PY1
B
PY88T
3P5
B
T4
*
,0
表现
SPYX8Y015,P
"7& "7! A !( #( !( #""1 "7."1
根系细长
L88T;385
B
15FT425
#7" "7! A !( #! !( #""1 #7"(1
根系长而粗
L88T;385
B
15FT42,`
#7& "7! A !( #. #& )$\ "7((,
根系短粗
L88T;T42,` 15F;48YT
"7& "7! % !( !. #! ($, "7$&F
培养基褐化轻
?PF2132TT3P\Y8[5
#7" "7! % !( $& + $.F "7&"\,
培养基褐化较轻
?PF21132TT3P\Y8[5
#7& "7! % !( $" + $.F "7&*培养基褐化重
?PF21;PY28M;\Y8[5
!!
注$
A
表示添加活性炭%
%
表示不添加活性炭(
<8TP
$
A;48[1FF1,T2^1TPF,1Y\85
%
%;48[58T1FF1,T2^1TPF,1Y\857

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!
不同培养方式对珠芽诱导的影响
]1\3P(
!
/XXP,T;8X\M3\2325FM,T285X8YF2XXPYP5T,M3TMY130PT48F;
接种方式
=M3TMY130PT48F
接种数
N58,M31T285
5M0\PY;
出现珠芽的单芽数
@25
B
3P\MF5M0\PY;
[2T4\M3\23;
诱导率
N5FM,T2^2T
6
*
:
珠芽总数
]8T13\M3\23
5M0\PY;
平均珠芽数
E^PY1
B
P5M0\PY
8X\M3\23;
珠芽大小
DM3\23;2_P
*
,0
单芽
@25
B
3P\MF !* #. ))7*\ !" #7##\ "7$#G"7&$
单芽带外植体
/-
Z
315T[2T4;25
B
3P\MF !* !( ..7+1 $) #7&"1 "7$.G"7&(

A
!
不同蔗糖浓度对珠芽诱导的影响
]1\3P&
!
/XXP,T;8X\M3\2325FM,T285X8YF2XXPYP5T;M,Y8;P,85,P5TY1T285;
蔗糖浓度
@M,Y8;P
,85,P5TY1T285
*
:
接种数
N58,M31T285
5M0\PY;
出现珠芽的单芽数
@25
B
3P\MF
5M0\PY;
[2T4\M3\23;
诱导率
N5FM,T2^2T
6
*
:
珠芽总数
]8T13\M3\23
5M0\PY;
平均珠芽数
E^PY1
B
P
5M0\PY
8X\M3\23;
珠芽大小
DM3\23
;2_P
*
,0
植株长相
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ZZ
P1Y15,P
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叶色浓绿
CP1^P;F1Y`
B
YPP5
$ !* #+ *"7(1 !* #7(!1 "7$.G"7&)
叶色浓绿
CP1^P;F1Y`
B
YPP5
& !* #" $*7"\ #" #7""\ "7$.G"7+#
部分茎和叶片呈黄色!易死亡
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;TP0;15F3P1^P;[PYP
6
P38[
!
P1;
6
FP1T4
. !* + $$7$\ #! #7$$\ "7!#G"7*&
大部分茎和叶片呈黄色!易死亡
?8;T
;TP0;15F3P1^P;[PYP
6
P38[
!
P1;
6
FP1T4
$!#!
#"

!!!!!!!!!!
韩晓勇!等$铁棍山药组织培养快繁及试管珠芽离体再生体系研究
$!

!

本研究初步筛选出适宜铁棍山药带腋芽的茎段
芽分化的培养基为
?@A"7&
"
#7"0
B
)
C
%#
)DE
A"7#0
B
)
C
%#
!其中以
?@A"7&0
B
)
C
%#
)DEA"7#0
B
)
C
%#
的培养基诱导的多芽体
倍数和芽的高度方面表现最好!这与苗丽娟等&的
结果不同(苗丽娟等认为
?@A#7"0
B
)
C
%#
)DE
A"7&0
B
)
C
%#
是铁棍山药茎段快繁最理想
的培养基!且
)DE

各种配比浓度组合下!
腋芽诱导率几乎未达到
#"":
(而本研究认为
)
DE

配比浓度不同!腋芽诱导率无显著差
异!这可能与茎段灭菌方法的选择有关(
I
B
=3
!

然灭菌效果好于
<1=3>
!但对外植体的伤害也
大&*(随着
)DE

配比浓度的提高!叶片会
逐渐发生卷曲!出现变态性状!这与苗丽娟等&观察
结果一致(当培养基为
?@A"7&0
B
)
C
%#
)DEA
"7#0
B
)
C
%#
时!腋芽诱导率为
+)7$:
!可能
是实验误差所致(继代增殖培养中!单独添加
)
DE
!随着
)DE
浓度的逐渐增加!丛生苗增殖倍数
逐渐提高!但两种激素组合!增殖效果不理想!这可
能与铁棍山药的增殖系数取决于培养基中
)DE

浓度有关(当
)DE
浓度达到
!7"0
B
)
C
%#时!易
造成叶片黄化!可能是高浓度的
)DE
促进细胞衰
老所致(
活性炭作为吸附物质一方面可以吸附外植体培
养过程中产生的有害物质!降低盐离子浓度减少褐
化!另一方面可以模拟根系生长的黑暗环境!提高生
根率&.(在培养基中添加
"7"!:
活性炭后!试管苗
的平均生根天数和生根率显著高于未添加活性炭的
试管苗!根系长度也优于未添加活性炭的试管苗(
彭琴等&+在瑞昌山药组培快繁研究和瞿宏杰等&#"
在花籽山药组织培养快繁研究中添加活性炭后都认
为活性炭可以缩短山药试管苗的生根时间!增加根
数和根长!促进组培苗上部叶片浓绿!生长旺盛(至
于活性炭的浓度!通常认为!使用浓度在
"7"!:
"
#7":
!尤以
"7#:
"
"7&:
最常用&##(在一定的浓
度范围内!提高
的浓度有利于山药试管苗生
根(但
浓度不能太高!当
浓度达到
#7&
0
B
)
C
%#时!生根率反而下降(这说明高浓度的
对诱导生根会产生抑制作用&#!(蔗糖浓度对
试管珠芽诱导起着决定性的作用!高浓度蔗糖有利
于试管珠芽的发生和形成!低浓度蔗糖和液体培养
基则有利于试管薯的诱导形成&#$#((李明军等&#&
曾对铁棍山药微型块茎的形成进行研究!认为
):
的蔗糖利于铁棍山药微型块茎的形成(本研究对铁
棍山药试管珠芽诱导发现!
#:
"
$:
的蔗糖浓度有
利于试管珠芽的形成和生长!虽然
&:
"
.:
的蔗糖
浓度下诱导的试管珠芽较大!但是形状不规则!珠芽
的诱导率也显著下降!并且易造成叶片和茎的黄化!
最终导致死亡(这一结果与前人研究结论不一致!
可能是由于高浓度蔗糖对试管珠芽诱导的正效应和
对试管苗根系生长的负效应相互作用的结果!低浓
度的蔗糖利于根系的生长!高浓度的蔗糖有利于珠
芽诱导&#)(不同研究对象对蔗糖浓度敏感度不同!
都有各自的适应范围!超出范围就不再利于试管苗
的生长(此外!我们还发现单芽带外植体的接种方
式珠芽的诱导率及诱导的平均珠芽数显著高于只接
单芽的接种方式(两种接种方式显著差异的原因可
能是单芽从外植体切取的时候!不可避免会伤害到
单芽!腋芽已经适应了外植体的生长状态(但带有
单芽的外植体通常只有一个!因此!在切取单芽的过
程中!应尽量小心!避免伤害单芽(
段廷碧等&#*曾利用禄丰县勤丰镇地方山药品
种带芽茎段诱导出珠芽并发芽!她认为

)
DE
在诱导珠芽的发芽中具有一定的互作效应!当
)DE

"0
B
)
C
%#时!

"7&0
B
)
C
%#增加

#7"0
B
)
C
%#时!出芽率有所降低!当
)DE

"7!0
B
)
C
%#时!

"7&0
B
)
C
%#增加至
#7"
0
B
)
C
%#时出芽率显著增加(而本研究认为!

)DE
在离体试管珠芽的发芽过程中可能存在互
作效应!但主要取决于培养基中
)DE
浓度(随着
)DE

配比浓度的提高!试管珠芽芽诱导率
呈上升的趋势!这与
)DE
促进细胞的分裂和芽的
形成&#.的观点一致(导致这一差异的原因可能是
由于不同的品种基因型不同!其内源激素含量也不
同!需要添加的外源激素自然也不同(
总之!山药组织培养和试管薯诱导是受多种因
素共同调控的!基因型-光照强度-光照时间-温度和
激素等因素都相互影响试管苗的生长及试管薯的结
薯情况(在植物组织培养中!培养基中添加的生长
调节剂的绝对浓度和配比及培养基的状态等研究上
仍存在较大分歧(因此!应结合各方面的参考资料
去找寻最佳的诱导条件!来获得最大的生产效益(
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