全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４４(１): １０７￣１０９(２０１４)
收稿日期: ２０１３￣０３￣１５ꎻ 修回日期: ２０１３￣１０￣１６
基金项目: 浙江省自然科学基金项目(ＬＹ１２Ｃ１４００５)ꎻ浙江农林大学科研启动项目(２０１０ＦＲ０２６)ꎻ浙江农林大学研究生科研创新基金项目
(３１２２０１３２４０１３６)
通讯作者: 林海萍ꎬ教授ꎬ从事生物防治教学与研究ꎻ Ｔｅｌ: ０５７１￣６３７４０５２８ꎬＦａｘ: ０５７１￣６３７４０８０９ꎬ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｚｊｌｘｙｌｈｐ＠１６３.ｃｏｍꎮ
􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃
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研究简报
竹红菌甲素对 １８种植物病原菌的抑制作用
朱齐超ꎬ 林海萍∗ꎬ 李朋举ꎬ 郎倩萍ꎬ 张隐夕
(亚热带森林培育国家重点实验室培育基地ꎬ 浙江农林大学生物农药高效制备技术浙江省工程实验室ꎬ 临安 ３１１３００)
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｙｐｏｃｒｅｌｌｉｎ Ａ ａｇａｉｎｓｔ １８ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ 　 ＺＨＵ Ｑｉ￣ｃｈａｏꎬ ＬＩＮ Ｈａｉ￣ｐｉｎｇꎬ
ＬＩ Ｐｅｎｇ￣ｊｕꎬ ＬＡＮＧ Ｑｉａｎ￣ｐｉｎｇꎬ ＺＨＡＮＧ Ｙｉｎ￣ｘｉ 　 (Ｔｈｅ Ｎｕｒｔｕｒｉｎｇ Ｓｔａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｓｕｂｔｒｏｐｉｃａｌ
Ｓｉｌｖｉｃｕｌｔｕｒｅꎬ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｐｅｓｔｉｃｉｄｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｉｎ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅꎬ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ａ＆Ｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ
Ｌｉｎ’ａｎ ３１１３００ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｙｐｏｃｒｅｌｌｉｎ Ａ (ＨＡ) ａｇａｉｎｓｔ １８ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ ｂｙ ｍｙｃｅｌｉｕｍ ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ ｉｎ ｌｉｇｈｔ
ａｎｄ ｄａｒｋ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗａｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ５０ ｍｇ􀅰Ｌ－１ ＨＡ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
ａｇａｉｎｓｔ ａｌｌ ｏｆ １８ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ ｕｎｄｅｒ ｌｕｍｉｎｏｕｓ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｏｆ １２ ０００ Ｌｘ. Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ ｏｆ ＨＡ ｔｏ
Ｌｅｃａｎｏｓｔｉｃｔａ ａｃｉｃｏｌａꎬ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍꎬ Ｖａｌｓａ ｍａｌｉ ａｎｄ Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ ｄｏｔｈｉｄｅａ ｗｅｒｅ ａｌｌ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ
９０％. Ｔｈｅ ＥＣ５０ ｏｆ ＨＡ ｔｏ Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ ｄｏｔｈｉｄｅａ ａｎｄ Ｌｅｃａｎｏｓｔｉｃｔａ ａｃｉｃｏｌａ ｗａｓ ０.６０ ｍｇ􀅰Ｌ
－１ ａｎｄ ０.７７ ｍｇ􀅰
Ｌ－１ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ＨＡ ｓｈｏｗｅｄ ｗｅａｋ ａｎｄ ｅｖｅｎ ｎｏ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｄａｒｋ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ. Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ
ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ＨＡ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｓ ａ ｎｅｗ ｋｉｎｄ ｏｆ ｐｈｏｔｏａｃｔｉｖａｔｅｄ ｂｉｏｐｅｓｔｉｃｉｄｅ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｈｙｐｏｃｒｅｌｌｉｎ Ａꎻ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉꎻ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ
文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１４)０１￣０１０７￣０３
　 　 竹红菌甲素(Ｈｙｐｏｃｒｅｌｌｉｎ ＡꎬＨＡ)是我国特有
的一种苝醌类色素ꎬ具有光敏性ꎬ目前发现其具有
抗菌、消炎、抗病毒、抗肿瘤等生理功能ꎮ 近年来
ＨＡ作为一种应用前景广阔的光疗药物ꎬ在医学上
已引起国内外极大关注并被成功开发ꎮ 本实验测
定了 ＨＡ对 １８种主要植物病原菌的抑制作用ꎬ为
ＨＡ开发绿色高效生物农药提供理论依据ꎮ
１　 材料与方法
１.１　 供试菌株
１８种植物病原菌(表 １)来自浙江省生物农药
高效制备技术工程实验室ꎬ由浙江农林大学张立钦
教授鉴定ꎮ
１.２　 试剂
丙酮、二甲亚砜(ＤＭＳＯ)等均为国产分析纯ꎻ
ＨＡ购自上海诗丹德生物技术有限公司ꎬ纯度为
９５％ꎮ
１.３　 实验方法
１.３.１　 光照条件下 ５０ ｍｇ􀅰Ｌ－１ＨＡ 抑菌活性测定
将 ＨＡ溶于定量的 ＤＭＳＯ溶剂中ꎬ用无菌水稀释至
浓度为 ５００ ｍｇ􀅰Ｌ－１的 ＨＡ￣ＤＭＳＯ 水溶液(ＤＭＳＯ
浓度为 １.５％(ｍ / Ｖ))ꎬ吸取 １ ｍＬ 该水溶液滴入 ９
ｍＬ ＰＤＡ培养基中混合均匀ꎬ制得 ５０ ｍｇ􀅰Ｌ－１的
ＰＤＡ带毒培养基ꎬ作为抑菌活性测定培养基ꎮ 对
照组为含 ０.１５％ ＤＭＳＯ 的 ＰＤＡ 培养基ꎮ 分别在
带毒和对照培养基平板中心接入 １ 块生长旺盛的
直径为 ４ ｍｍ的 １８种植物病原菌菌饼ꎮ
在光照强度为 １２ ０００ Ｌｘ 和 ２６℃恒温条件下
　
植物病理学报 ４４卷
培养 ５ ｄ后ꎬ用“十字交叉法”测量菌落直径ꎬ每组
实验重复 ３ 次ꎮ 用下列公式计算 ＨＡ 对植物病原
菌的抑制率:
菌落直径(ｍｍ) ＝ 菌落总直径－ ４(病原菌菌
饼直径)
抑制率(％) ＝ (对照菌落直径－处理菌落直
径) /对照菌落直径×１００％
用 ＳＰＳＳ软件对抑制率进行差异性分析ꎮ
１.３.２　 光照条件下不同浓度 ＨＡ 抑菌活性测定
　 在上述 ＨＡ对 １８ 种植物病原菌抑菌实验结果
基础上ꎬ选取 ２ 种 ＨＡ 对其抑制率较高同时又比
较重要的植物病原菌ꎬ分别测定 ８.００ ｍｇ􀅰Ｌ－１、
４􀆰 ００ ｍｇ􀅰Ｌ－１、２. ００ ｍｇ􀅰Ｌ－１、１. ００ ｍｇ􀅰Ｌ－１和
０􀆰 ５０ ｍｇ􀅰Ｌ－１浓度的 ＨＡ 对其抑制率ꎮ 用 ＳＰＳＳ
软件将质量浓度对数值与抑制率之间进行线性
回归分析ꎬ根据毒力回归方程做毒力曲线ꎬ计算
ＨＡ对 ２ 种植物病原菌的抑制中浓度 ＥＣ５０及相关
系数(Ｒ) [３] ꎮ
１.３.３　 不同光照强度对 ＨＡ 抑菌率的影响　 按照
１.３.１的方法ꎬ测定 ０.６０ ｍｇ􀅰Ｌ－１ＨＡ 光照强度分别
为 ０、２ ４００、６ ０００、９ ６００ 和 １２ ０００ Ｌｘ 时对山核桃
干腐病菌的抑菌活性ꎮ
１.３.４　 黑暗条件下 ＨＡ抑菌活性测定　 按照 １􀆰 ３.１
方法ꎬ将光照培养改成黑暗培养ꎬ测定该条件下
ＨＡ￣ＤＭＳＯ 水溶液对松针褐斑病菌、大麦赤霉病
菌、苹果腐烂病菌与山核桃干腐病菌 ４种植物病原
菌的的抑制率ꎮ
２　 结果与分析
２.１　 光照条件下 ５０ ｍｇ􀅰Ｌ－１ ＨＡ对 １８种植物病
原菌的抑菌活性
在光照条件下ꎬＨＡ 对 １８ 种供试植物病原菌
均具有抑制活性ꎬ其中对松针褐斑病菌、大麦赤霉
病菌、苹果腐烂病菌和山核桃干腐病菌抑制活性较
高ꎬ抑制率均在 ９０％以上ꎬ差异性分析显示与 ＨＡ
对其他 １４ 种植物病原菌的抑制率差异性显著
(Ｐ<０.０５)(表 １)ꎮ
２.２　 光照条件下不同浓度 ＨＡ抑菌活性测定
结果显示ꎬ在光照条件下ꎬ随着 ＨＡ 浓度逐渐
降低ꎬ对 ２种植物病原菌的抑制率也随之减小ꎮ 计
算得出ꎬＨＡ对山核桃干腐病菌和松针褐斑病菌的
ＥＣ５０分别为 ０.６０ ｍｇ􀅰Ｌ
－１(Ｒ＝ ０.９ ８０１)和 ０.７７ ｍｇ
􀅰Ｌ－１(Ｒ＝０.９ ８５１)(表 ２)ꎮ
Ｔａｂｌｅ １　 Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ＨＡ ｉｎ ＤＭＳＯ ａｑｕｅ￣
ｏｕｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ １８ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ
ｆｕｎｇｉ ｕｎｄｅｒ ｖｉｓｉｂｌｅ ｌｉｇｈｔ
Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ(％)
Ｌｅｃａｎｏｓｔｉｃｔａ ａｃｉｃｏｌａ ９２.６４ ａ
Ｅｘｓｅｒｏｈｉｌｕｍ ｔｕｒｃｉｃｕｍ ４７.７１ ｈ
Ｂｉｐｏｌａｒｉｓ ｍａｙｄｉｓ ２４.９８ ｊ
Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ ３９.３５ ｉ
Ｆ. ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ ９０.４４ ａ
Ａｌｔｅｍａｒｉａ ｓｏｌａｎｉ ５４.１６ ｆ
Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ６３.３２ ｄｅ
Ｖａｌｓａ ｍａｌｉ ９５.０３ ａ
Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ.ｓｐ.ｃｕｃｕｍｅｒｉｓ ５９.５９ ｅ
Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｌａｇｅｎａｒｉｕｍ ７７.２４ ｃ
Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ Ｐｅｒｓ ８４.７３ ｂ
Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ ５３.３８ ｆｇ
Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ. ２３.７４ ｊ
Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｖａｓｉｎｆｅｃｔｕｍ ４８.５４ ｇｈ
Ｖｅｎｔｕｒｉａ ｎａｓｈｉｃｏｌａ ４３.７３ ｈｉ
Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｃｕｂｅｎｓｅ ６７.７４ ｄ
Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ Ｓｃｈｌ ２３.９１ ｊ
Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ ｄｏｔｈｉｄｅａ ９０.７５ ａ
Ｎｏｔｅ:Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｍａｌｌ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｃｏｌｕｍｎｓ ｍｅａｎ ｓｉｇｎｉｆｉ￣
ｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｔ (Ｐ<０.０５) .
Ｔａｂｌｅ ２ 　 Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎ￣
ｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＨＡ ｔｏ Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ
ｄｏｔｈｉｄｅａ ａｎｄ Ｌｅｃａｎｏｓｔｉｃｔａ ａｃｉｃｏｌａ
ｕｎｄｅｒ ｖｉｓｉｂｌｅ ｌｉｇｈｔ
ＣＨＡ(ｍｇ􀅰Ｌ－１)
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ(％)
Ｂ. ｄｏｔｈｉｄｅａ Ｌ. ａｃｉｃｏｌａ
８.００ ７５.６４ ７７.４７
４.００ ７０.３９ ７４.３８
２.００ ６３.９１ ６６.０９
１.００ ５９.２２ ５２.６５
０.５０ ４４.８３ ４２.３９
８０１
　
　 １期 　 　 朱齐超ꎬ等:竹红菌甲素对 １８种植物病原菌的抑制作用
２.３　 不同光照强度对 ＨＡ抑菌率的影响
在光照强度为 ０(黑暗)与有光照时ꎬＨＡ 对山
核桃干腐病菌抑制率差异性显著ꎮ 而有光照但不
同的光照强度下ꎬ抑制率差异性不显著(表 ３)ꎮ 说
明有无光照对 ＨＡ抑菌效果影响明显ꎬ而实验范围
内光照强度的强弱对竹红菌甲素抑菌效果影响不
明显ꎮ
Ｔａｂｌｅ ３　 Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ＨＡ ｔｏ Ｂ. ｄｏｔｈｉｄｅａ
ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｕｍｉｎｏｕｓ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ
Ｌｕｍｉｎｏｕｓ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ(Ｌｘ) Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ(％)
０ －１３.１９ ａ
２ ４００ ４６.４５ ｂ
６ ０００ ４５.７１ ｂ
９ ６００ ５２.６０ ｂ
１２ ０００ ４８.１１ ｂ
Ｎｏｔｅ:Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｍａｌｌ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｃｏｌｕｍｎｓ ｍｅａｎ ｓｉｇｎｉｆｉ￣
ｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｌ ａｔ (Ｐ<０.０５) .
２.４　 黑暗条件下 ＨＡ抑菌活性
在黑暗条件下ꎬ５０ ｍｇ􀅰Ｌ－１ ＨＡ￣ＤＭＳＯ水溶液
对 ４种供试植物病原菌抑制效果普遍较差ꎬ对大麦
赤霉病菌的抑制效果相对最好ꎬ抑制率也仅达
２５􀆰 ７４％ꎬ对苹果腐烂病菌和松针褐斑病菌的抑制
率分别为 ７.０９％与 ３.４４％ꎬ而对山核桃干腐病菌的
抑制率为负值ꎬ未表现出抑制作用ꎮ
３　 结论与讨论
光活化农药(Ｐｈｏｔｏａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ)是近年
来发展起来的一种新型、高效、低毒农药ꎬ寻找合适
的光敏剂在光活化农药研究过程中显得尤为重要ꎮ
本研究发现ꎬ在光照条件下ꎬＨＡ 对植物病原
菌的抑制作用具有普遍性ꎬ并且对部分植物病原菌
的抑制效果较强ꎮ 例如ꎬＨＡ 对山核桃干腐病菌的
ＥＣ５０为 ０.６０ ｍｇ􀅰Ｌ
－１ꎬ低于甲基硫菌灵、百菌清、腐
霉利、戊唑醇、啶酰菌胺和醚菌酯ꎬ略高于苯醚甲环
唑对山核桃干腐病菌的 ＥＣ５０ ０.４９ ｍｇ􀅰Ｌ
－１ [４]ꎮ 因
此ꎬ针对目前山核桃产区干腐病普遍发生且日益严
重ꎬ影响甚至威胁山核桃产业的现状ꎬ开发 ＨＡ 光
活化农药对其进行防治具有较大的潜力ꎮ
本研究结果表明 ＨＡ 在黑暗条件下对供试植
物病原菌抑制效果较差甚至无抑制效果ꎮ 光照对
ＨＡ抑菌的重要作用给其开发成生物农药带来了
局限ꎮ 据报道[５]ꎬ在存在半胱氨酸等还原剂的情
况下ꎬＨＡ存在暗反应ꎬ即在黑暗条件下ꎬ有合适的
还原剂存在时ꎬＨＡ 也能表现较强的抑菌作用ꎬ这
将是 ＨＡ开发成绿色高效的光活化生物农药的一
个重要研究内容ꎮ
参考文献
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ｃｉｄｅｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｂａｓｅｌｉｎｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ｄｉｆｅｎｏｃｏｎａｚｏｌｅ ( ｉｎ
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ｂｅｔｗｅｅｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ ｏｆ Ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｔｉｏｎ ａｎｄ ｄａｒｋ ｒｅａｃ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｐｅｒｉｃｉｎ ａｎｄ ｈｙｐｏｃｒｅｌｌｉｎ Ａ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] .
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ(辐
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责任编辑:张宗英
９０１