全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４５(３): ２３９￣２４７(２０１５)
收稿日期: ２０１４￣０３￣２９ꎻ 修回日期: ２０１５￣０１￣１１
基金项目: 新疆维吾尔自治区科技成果转化专项资金项目(２０１１５４１０６)ꎻ新疆农业大学产学研联合培养研究生项目(ｘｊａｕｃｘｙ￣ｙｊｓ￣２０１３１０２５)
通讯作者: 罗明ꎬ教授ꎬ主要从事植物病害病原及检测研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ:ｌｕｏｍｉｎｇｘｊａｕ＠ｓｉｎａ.ｃｏｍ
张春竹ꎬ研究员ꎬ主要从事农作物病虫害防治研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ:ｚｃｚｎｋｓ＠１６３.ｃｏｍ
第一作者: 管晶晶ꎬ在读硕士研究生ꎬ主要从事植物细菌病害研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ:９２３３１５２１１＠ｑｑ.ｃｏｍꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１５.０３.００３
新疆加工型辣椒细菌性斑点病的发生和病原鉴定
管晶晶１ꎬ２ꎬ 李克梅１ꎬ２ꎬ 罗 明１ꎬ２∗ꎬ 张春竹３∗ꎬ 何 媛１ꎬ 盛 强１ꎬ２ꎬ 楚金平３ꎬ 张祥林４
( １新疆农业大学农学院ꎬ乌鲁木齐 ８３００５２ꎻ ２新疆自治区高校农林有害生物监测与安全防控重点实验室ꎬ乌鲁木齐 ８３００５２ꎻ
３新疆巴州农业科学研究所ꎬ库尔勒 ８４１０００ꎻ ４新疆出入境检验检疫局ꎬ乌鲁木齐 ８３００６３)
摘要:新疆加工型辣椒主要产区巴音郭楞蒙古自治州发生了一种严重危害辣椒的细菌性病害ꎮ 从发病辣椒叶片中分离细菌ꎬ
通过烟草过敏性反应、马铃薯软腐试验和接种辣椒等致病性测定ꎬ确定了 １３个致病菌株ꎬ各菌株之间致病力无明显差异ꎮ 通
过菌体形态、培养性状观察、生理生化反应、寄主范围测定ꎬ结合 １６Ｓ ｒＤＮＡ和 ｒｐｏＤ基因扩增、序列测定和系统发育分析ꎬ将病
原菌鉴定为丁香假单胞菌丁香致病变种(Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ)ꎮ 病原菌人工接种还能侵染番茄、茄子、马铃薯及
黄瓜、四季豆、白菜、萝卜、芹菜等植物ꎮ Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ引起加工型辣椒细菌性斑点病在国内属首次报道ꎮ
关键词:辣椒叶斑病ꎻ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅꎻ 生理生化特性ꎻ 分子鉴定
Ｔｈｅ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｌｅａｆ ｓｐｏｔ ｏｆ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｐｅｐ￣
ｐｅｒ ｉｎ Ｘｉｎｊｉａｎｇ 　 ＧＵＡＮ Ｊｉｎｇ￣ｊｉｎｇ１ꎬ２ꎬ ＬＩ Ｋｅ￣ｍｅｉ１ꎬ２ꎬ ＬＵＯ Ｍｉｎｇ１ꎬ２ꎬ ＺＨＡＮＧ Ｃｈｕｎ￣ｚｈｕ３ꎬ ＨＥ Ｙｕａｎ１ꎬ
ＳＨＥＮＧ Ｑｉａｎｇ１ꎬ２ꎬ ＣＨＵ Ｊｉｎ￣ｐｉｎｇ３ꎬ ＺＨＡＮＧ Ｘｉａｎｇ￣ｌｉｎ４ 　 ( １Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｇｒｏｎｏｍｙꎬ Ｕｒｕｍｑｉ
８３００５２ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｆｏｒ Ｐｅｓｔ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ａｎｄ Ｓｅｃｕｒｉｔｙ ｏｆ Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ ｉｎ Ｘｉｎ￣
ｊｉａｎｇꎬ Ｕｒｕｍｑｉ ８３００５２ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ３ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｂａｙｉｎｇｕｏｌｅｎｇ Ｍｏｎｇｏｌ Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ Ｐｒｅｆｅｃｔｕｒｅ ｉｎ Ｘｉｎｊｉａｎｇꎬ
Ｋｏｒｌａ ８４１０００ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ４Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｅｎｔｒｙ￣ｅｘｉｔ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｂｕｒｅａｕꎬ Ｕｒｕｍｑｉ ８３００５２ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ａ ｓｅｒｉｏｕｓ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｌｅａｆ ｓｐｏｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｗａｓ ｃｏｍｍｏｎｌｙ ｆｏｕｎｄ ｏｎ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｐｅｐｐｅｒ ｉｎ Ｂａｙｉｎ￣
ｇｕｏｌｅｎｇ Ｍｏｎｇｏｌ Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ Ｐｒｅｆｅｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ. Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｃａｕｓａｌ ａｇｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅꎬ ｂａｃｔｅｒｉ￣
ａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅｄ ｌｅａｖｅｓꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗａｓ ｔｈｅｎ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｂｙ
ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｎ ｐｅｐｐｅｒ ｓｅｅｄｌｉｎｇꎬ ｐｏｔａｔｏ ｓｏｆｔ ｒｏｔ ｔｅｓｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｏｎ ｔｏｂａｃｃｏ.
Ｔｈｉｒｔｅｅｎ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ. Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌꎬ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓꎬ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔꎬ １６Ｓ ｒＤＮＡ ａｎｄ ｒｐｏＤ ｇｅｎｅ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓꎬ ｔｈｅ ｃａｕｓａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗａｓ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ. Ｂｙ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎꎬ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｃｏｕｌｄ ａｌｓｏ ａｆｆｅｃｔ ｍａｎｙ
ｏｔｈｅｒ ｐｌａｎｔｓꎬ ｓｕｃｈ ａｓ ｔｏｍａｔｏꎬ ｅｇｇｐｌａｎｔꎬ ｐｏｔａｔｏꎬ ｃｕｃｕｍｂｅｒꎬ ｇｒｅｅｎ ｂｅａｎꎬ ｃａｂｂａｇｅꎬ ｃａｒｒｏｔꎬ ｃｅｌｅｒｉｅｓꎬ ｅｔｃ.. Ｔｈｉｓ ｉｓ
ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｃａｕｓｉｎｇ ｌｅａｆ ｓｐｏｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｐｅｐｐｅｒ ｉｎ Ｃｈｉｎａ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｐｅｐｐｅｒ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｌｅａｆ ｓｐｏｔꎻ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅꎻ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓꎻ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
中图分类号: Ｓ４３６.４１８　 　 　 　 　 文献标识码: Ａ　 　 　 　 　 文章编号: ０２３９￣０２４７(２０１５)０３￣０２３９￣０９
　 　 近年来以生产制干椒、酱制和提取辣椒碱、辣
椒红素等加工专用品种的辣椒产业在新疆异军突
起ꎬ发展迅速ꎬ成为特色经济的新兴产业ꎬ在促进农
业产业结构调整和农民增收中的作用日益显著ꎮ
　
植物病理学报 ４５卷
新疆加工型辣椒主要产区分布在南疆巴州及北疆
昌吉州、伊犁州和塔城地区ꎬ种植面积现已达
１０３.５４万亩ꎬ总产量突破 １３９.０ 万吨ꎮ 随着加工型
辣椒种植规模的扩大ꎬ病害发生逐年加重ꎬ尤其是
细菌病害成为生产中的重要问题ꎮ 已报道的辣椒
重要细菌病害有细菌性疮痂病[１]、细菌性斑点
病[２]、溃疡病[３]、青枯病[３]、软腐病等ꎬ均引起辣椒
严重的产量损失和品质下降ꎮ
　 　 迄今ꎬ新疆加工型辣椒细菌性病害发生危害的
状况、病原种类的调查鉴定及防治技术等研究都鲜
见报道ꎮ ２０１１ ~ ２０１２ 年ꎬ在巴音郭楞蒙古自治州
(简称巴州)种植的铁皮椒、板椒叶片上发现一种
细菌性病害ꎬ其症状特征与细菌性斑点病相似ꎮ 该
病害在辣椒苗期到成株叶片均可发生ꎬ初期叶片上
产生黄绿色、水渍状小斑点ꎬ后逐渐发展为褐色至
锈红色病斑并可扩展至茎杆和椒果ꎬ严重时引起叶
片大量脱落、落花、落果ꎬ对生产造成很大损失ꎬ且
有蔓延和加重的趋势ꎮ 为了明确病原ꎬ我们对该病
害进行了病原分离、致病性测定、生理生化反应和
分子生物学鉴定ꎬ以期为病害的诊断、防治和抗病
育种提供科学依据ꎮ
１　 材料和方法
１. １　 病害标本的采集及病原菌分离
　 　 ２０１１ ~ ２０１２ 年ꎬ在巴州和静县、和硕县等加工
辣椒主要生产基地采集辣椒新鲜病样ꎬ并通过显微
镜检查细菌溢ꎮ 有细菌溢产生的病样ꎬ将病健交界
组织剪成 ５ ｍｍ × ５ ｍｍ 的小块置于小烧杯中ꎬ经
表面灭菌后在 ＮＡ培养基上用稀释分离法分离ꎬ平
板划线、单菌落反复纯化后ꎬ获得菌株接种于斜面
培养基ꎬ４℃低温保存备用ꎮ
１. ２　 致病性测定
１.２.１　 接种液制备　 将分离获得的细菌菌株在营
养琼脂培养基(ＮＡ)上活化培养 ４８ ｈꎬ用无菌水配
制成浓度为 １×１０８　 ＣＦＵ􀅰ｍＬ￣１细菌悬液ꎮ
１.２.２　 烟草过敏性反应　 将普通烟草种子播种于
营养钵灭菌土壤中育苗ꎬ待幼苗生长至 ６ ~ ７ 片叶
龄时用于过敏性反应测定ꎮ 采用注射法将细菌接
种液注射到烟草叶片下表皮叶肉细胞间ꎬ以无菌水
接种作为阴性对照ꎬ２５℃ ~２８℃下 ２４ ｈ后观察过敏
性反应ꎮ 在 ２４~４８ ｈ 叶片上产生过敏性枯死斑的
为阳性反应ꎮ
１.２.３　 马铃薯软腐试验　 取新鲜健康的马铃薯块
茎ꎬ用肥皂水洗净ꎬ置于 １％的次氯酸钠溶液中ꎬ取
出后用灭菌水冲洗干净ꎬ切约 ８ ｍｍ 厚的片ꎬ酒精
灯火焰消毒后置于灭菌培养皿内ꎮ 在马铃薯片中
央用灭菌解剖刀刻一条长约 １０ ｍｍꎬ宽和深各约 ３
ｍｍ的槽ꎬ立即将新鲜培养物接种在槽内ꎬ使槽内
充满菌液ꎬ观察马铃薯薯块腐败情况ꎮ 同时在薯块
上用灭菌水接种作为对照ꎮ
１.２.４　 辣椒致病性测定 　 采用针刺法、剪叶法和
喷雾接种法将细菌悬液接种于 ４~ ５ 片真叶的盆栽
健康辣椒(韩国甜椒王铁皮椒)苗叶片上ꎬ每个菌
株接种 ３０个叶片ꎬ以无菌水接种作阴性对照ꎮ 接
种后套保鲜袋保湿ꎬ置于人工气候箱内ꎬ在 ２５℃ ~
２８℃ꎬ１２ ｈ光照下培养 ２ ~ ７ ｄ 后观察、记载植株发
病情况ꎮ 发病后再取病斑重新分离菌株ꎮ
１.２.５　 对不同寄主植物的致病性测定　 供试寄主
植物包括茄科(番茄、茄子、马铃薯)、葫芦科(黄瓜、
西瓜、甜瓜、冬瓜、葫芦瓜)、豆科(四季豆、豇豆、豌
豆)、十字花科(小白菜、萝卜、大白菜)、伞形花科
(芹菜)等ꎮ 接种方法同 １.２.４ꎬ接种 ５ ｄ 后开始观察
症状ꎬ统计接种叶片数和发病叶片数ꎬ计算发病率ꎮ
发病率＝发病叶片数
接种叶片数
×１００％
１.３　 形态特征、革兰氏反应、培养性状观察
　 　 将细菌接种于营养琼脂培养基(ＮＡ)上ꎬ２８℃
培养 ２ ｄꎬ观察菌落形状、大小、颜色、表面、边缘隆
起、透明度等特征ꎻ将细菌接种于金氏 Ｂ 培养基
(ＫＢＡ)上ꎬ２８℃培养 ２ ｄꎬ在波长 ２５４ ｎｍ的紫外灯
下检查荧光色素的产生ꎻ对细菌进行革兰氏染色和
芽孢染色ꎬ观察革兰氏染色结果、菌体形状ꎬ有无芽
孢等ꎻ磷钨酸负染、透射电镜观察细菌鞭毛着生位
置、数目及测量菌体大小等ꎮ
１.４　 生理生化特性测定
　 　 生理生化特征测定项目主要包括:荧光色素的
产生ꎬ甲基红测定ꎬ产 Ｈ２Ｓꎬ氧化酶反应ꎬ接触酶反
应ꎬ淀粉水解试验ꎬ明胶液化ꎬ吲哚试验ꎬ石蕊牛乳
反应ꎬＴＴＣ培养基生长ꎬ硝酸盐还原ꎬＶＰ 试验ꎬ耐
盐性ꎬ氨的产生ꎬ果聚糖产生ꎬ多聚物颗粒测定ꎬ冰
核活性测定ꎬ精氨酸双水解酶产生ꎬ４１℃下生长ꎬ碳
源利用等指标ꎮ 以丁香假单胞菌丁香致病变种
０４２
　
　 ３期 管晶晶ꎬ等:新疆加工型辣椒细菌性斑点病的发生和病原鉴定
(Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ) 标准菌株
ＡＴＣＣ１９３１０作为对照菌株(由新疆出入境检验检
疫局技术中心提供)ꎮ
１.５　 病原菌 １６Ｓ ｒＤＮＡ 的扩增和序列测定
１.５.１　 供试菌株基因组 ＤＮＡ 的提取 　 将活化的
菌株接种于 ＮＡ液体培养基中ꎬ２８℃、１５０ ｒ􀅰ｍｉｎ－１
培养至对数生长期ꎬ取 １.５ ｍＬ 菌液于 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ
管中ꎬ１３ ０００ ｒｐｍ 离心 ４ ｍｉｎꎬ倾去上清ꎬ用 １×ＴＥ
缓冲液洗涤菌体 ２次ꎬ加入 ５００ μＬ ＧＵＴＣ缓冲液ꎬ
之后参照 Ｇａｏ等方法[４]提取总 ＤＮＡꎮ
１.５. ２ 　 １６Ｓ ｒＤＮＡ ＰＣＲ 扩增 　 以提取菌株的总
ＤＮＡ为模板ꎬ采用细菌 １６Ｓ ｒＤＮＡ 通用引物 Ｐ１ 和
Ｐ６ 进行 ＰＣＲ 扩增[５]ꎮ 引物 Ｐ１: ５′￣ＣＧＧＧＡＴＣ￣
ＣＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧＡＡＣＧＡＡＣＧＣＴ￣
３′ꎻＰ６:５′￣ＣＧＧＧＡＴＣＣＴＡＣＧＧＣＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧ￣
ＡＣＴＴＣＡＣＣＣＣ￣３′ꎬ由上海生工生物技术公司合
成ꎮ ＰＣＲ 反应体系(５０. ０ μＬ)为:ＤＮＡ 模板 ２. ５
μＬꎬ引物 (１０ μｍｏｌ􀅰Ｌ￣１ )各 １. ０ μＬꎬ ｄＮＴＰ ( ２. ５
ｍｍｏｌ􀅰Ｌ￣１)８.０ μＬꎬ１０×ｂｕｆｆｅｒ ５.０ μＬꎬＭｇＣｌ２(２.５
ｍｍｏｌ􀅰Ｌ￣１)３.０ μＬꎬＴａｑ ＤＮＡ聚合酶(５ Ｕ􀅰μＬ￣１)
０.５ μＬꎬｄｄＨ２Ｏ ２９.０ μＬꎮ 扩增条件:９５℃预变性 ５
ｍｉｎꎻ９４℃变性 １ ｍｉｎꎬ５６℃退火 １ ｍｉｎꎬ７２℃延伸 ２
ｍｉｎꎬ共 ３２ 个循环ꎻ７２℃延伸 ６ ｍｉｎꎮ 扩增产物用
１％琼脂糖凝胶电泳检测ꎮ
１.５.３　 ＲＮＡ 聚合酶s亚基基因 ｒｐｏＤ 扩增 　 以提
取菌株的总 ＤＮＡ 为模板ꎬ对 ｒｐｏＤ 基因进行 ＰＣＲ
扩增ꎮ 扩增引物[６] ７０Ｆ: ５′￣ＡＣＧＡＣＴＧＡＣＣＣＧＧ￣
ＴＡＣＧＣＡＴＧＴＡＹＡＴＧＭＧＮＧＡＲＡＴＧＧＧＮＡＣＮＧＴ￣
３′ꎻ ７０Ｒ: ５′￣ＡＴＡＧＡＡＡＴＡＡＣＣＡＧＡＣＧＴＡＡＧＴＴ￣
ＮＧＣＹＴＣＮＡＣＣＡＴＹＴＣＹＴＴＹＴＴ￣３′ꎻ 测 序 引 物
７０Ｆｓ: ５′￣ＡＣＧＡＣＴＧＡＣＣＣＧＧＴＡＣＧＣＡＴＧＴＡ￣３′ꎻ
７０Ｒｓ: ５′￣ＡＴＡＧＡＡＡＴＡＡＣＣＡＧＡＣＧＴＡＡＧＴＴ￣３′ꎬ
由上海生工生物技术公司合成ꎮ ＰＣＲ 反应体系
(５０.０ μＬ)为:ＤＮＡ模板 ２.５ μＬꎬ引物(１０ μｍｏｌ􀅰
Ｌ￣１)各 １.０ μＬꎬｄＮＴＰ(２.５ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ￣１)４.０ μＬꎬ１０×
ｂｕｆｆｅｒ ５.０ μＬꎬＭｇＣｌ２(２.５ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ￣１)３.０ μＬꎬＴａｑ
ＤＮＡ聚合酶(５ Ｕ􀅰μＬ￣１)０.５ μＬꎬｄｄＨ２Ｏ ３３.０ μＬꎮ
扩增条件:９５℃预变性 ５ ｍｉｎꎻ９４℃变性 ４５ ｓꎬ５６℃
退火 ４５ ｓꎬ７２℃延伸 １ ｍｉｎꎬ３５个循环ꎻ７２℃延伸 １０
ｍｉｎꎮ 扩增产物用 １％琼脂糖凝胶电泳检测ꎮ
１.５.４　 ＰＣＲ扩增产物的序列测定和分析　 将 １６Ｓ
ｒＤＮＡ 和 ｒｐｏＤ 基因的 ＰＣＲ 扩增产物中的特异性
条带切胶ꎬ用普通琼脂糖凝胶 ＤＮＡ 回收试剂盒
(ＴＩＡＮｇｅｌ Ｍｉｄｉ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｋｉｔ)回收、纯化后ꎬ寄送
上海生工生物工程技术服务有限公司完成测序ꎮ
将序列测定结果通过 ＢＬＡＳＴ 比对ꎬ从 ＧｅｎＢａｎｋ 数
据库中搜索相似序列ꎬ用 ＭＥＧＡ４. ０ 软件分析ꎬ
Ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣Ｊｏｉｎｉｎｇ法构建系统发育树ꎮ
２　 结果与分析
２.１　 辣椒细菌性斑点病的症状
　 　 根据田间调查ꎬ辣椒细菌性斑点病在巴州加工
型辣椒主要产区和静、和硕县均有发生ꎮ 该病害从
温室营养盘育苗期至移栽大田后的整个生育期均
可发病ꎬ危害辣椒的叶片、叶柄、茎和果实ꎬ以叶片
发生最普遍ꎮ 叶片常见症状有两种:一种是先从叶
缘附近出现黄绿色近圆形油浸状、黄绿色的小斑
点ꎬ扩大后变为大小不等的褐色至锈红色病斑ꎬ病
健交界明显ꎬ边缘不隆起ꎬ干燥时多呈褐色ꎬ周围有
黄色晕圈ꎮ 另一种多从叶缘开始出现水浸状黄化ꎬ
最后扩展至整个叶片ꎬ有的叶片叶脉间出现白纸状
病斑ꎬ常引起大量落叶ꎮ 叶柄和茎部症状和叶部相
似ꎬ产生黑色斑点ꎬ但病斑周围无黄色晕圈ꎮ 病斑
易连成片ꎬ严重时可使一段茎部变黑ꎬ但植株一般
不会死亡ꎮ 果肉上病斑附近略凹陷ꎬ病斑周围黑
色ꎬ中间色浅并有轻微凹陷ꎮ 据 ２０１１ 年在和静县
调查ꎬ苗期发病率 １５％左右ꎬ椒果期田间发病率为
１１％~５３％ꎬ个别重病田发病率高达 ９２％ꎬ病情指
数为 １０.０~６２.１ꎬ至少造成 ２０％~３０％减产损失ꎮ
２.２　 病原菌的分离和致病性测定
　 　 从各地采集的病样中分离获得 ２５ 个细菌菌
株ꎬ分离纯化后用于致病性测定ꎮ 经烟草过敏性测
定出现过敏性枯斑反应的菌株ꎬ再用剪叶法、针刺
法和喷雾法接种辣椒作进一步致病性测定ꎬ有 １３
个菌株(ＬＸ￣２￣１、ＬＸ￣２￣２、ＬＸ￣３￣１、ＬＸ￣３￣２、ＬＸ￣３￣３、
ＬＸ￣３￣４、ＬＸ￣３￣７、ＬＸ￣３￣８、ＬＸ￣４￣２、ＬＸ￣５￣２、ＬＸ￣８￣１、
ＬＸ￣８￣２、ＬＸ￣８￣３)可使辣椒发病ꎮ 针刺接种后第４ ｄ
开始在叶片上产生不规则的水渍状透明小斑ꎬ逐渐
扩展为深褐色至黑色形状不规则的斑点ꎬ周围有黄
色晕圈ꎬ发病后期病斑相连成大的枯死斑ꎮ 在叶柄
和茎杆上也产生黑褐色病斑ꎬ但周围无黄色晕圈ꎬ
与田间症状相似ꎮ 剪叶法接种后第 ２ ｄ 伤口边缘
１４２
　
植物病理学报 ４５卷
呈水渍状ꎬ变褐色后沿着叶脉和叶边缘往里延伸ꎮ
喷雾法接种后第 ６ ｄ叶片上开始出现褪绿、黄褐色
病斑ꎮ 对接种后发病叶片再次分离ꎬ所得菌与初次
分离所得菌落形态等均相同ꎮ 因此ꎬ将这 １３ 个菌
株确定为辣椒细菌性斑点病病原ꎬ各菌株致病性差
异不大ꎮ
２.３　 对不同寄主植物的致病性测定
　 　 对不同寄主植物致病性测定结果见表 １ꎮ 可
以看出:ＬＸ￣４￣２ 菌株在人工接种条件下具有很广
的寄主范围ꎬ可侵染茄科(番茄、茄子、马铃薯)、葫
芦科(黄瓜、西瓜、甜瓜、冬瓜、葫芦瓜)、豆科(四季
豆、豇豆、豌豆、大豆)、十字花科(小白菜、萝卜、大
白菜)、伞形花科(芹菜)等多种植物ꎮ
２.４　 病原菌形态和培养性状
　 　 在 ＮＡ培养基上菌落乳白色(图 １)ꎬ圆形或近
圆形ꎬ平坦ꎬ表面光滑ꎬ半透明ꎬ有光泽ꎬ边缘整齐ꎬ
Ｔａｂｌｅ １　 Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ＬＸ￣４￣２ ｓｔｒａｉｎ ｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈｏｓｔ ｐｌａｎｔｓ
Ｈｏｓｔ ｐｌａｎｔ Ｖａｒｉｅｔｙ Ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ / ％
Ｔｏｍａｔｏ Ｂａｉｇｕｏｑｉａｎｇｆｅｎｇ ９２.８６±４.１３
Ｅｇｇｐｌａｎｔ Ｐｕｒｐｌｅ ａｎｇｅｌ ９４.１９±２.９１
Ｐｏｔａｔｏ Ｆａｖｏｒｉｔａ ８２.６４±２.０５
Ｃｕｃｕｍｂｅｒ Ｎｅｗ ｃｈａｎｇｃｈｕｎ ｍｉｃｉ ８２.７８±１.４７
Ｗａｔｅｒ ｍｅｌｏｎ Ｓｕｐｅｒ ｎｅｗ ｏｐｔｉｍａｌ ｓｅｃｏｎｄ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ９５.０６±２.４８
Ｍｅｌｏｎ Ｈｙｂｒｉｄ ｊｉａｓｈｉ ｍｅｌｏｎ ８５.８６±２.５３
Ｍｅｌｏｎ Ｌａｒｇｅ ｆｅｎｐｉ ｍｅｌｏｎ １００.００±０.００
Ｇｏｕｒｄｓ Ｓｉｌｖｅｒ ｇｒｅｅｎ ｇｏｕｒｄｓ ８０.０４±２.３４
Ｇｒｅｅｎ ｂｅａｎ Ｉｎｖｉｎｃｉｂｌｅ ｂｅａｎｓ ６６.８７±２.５８
Ｃｏｗｐｅａ Ｎｏ ｆｒａｍｅ ｃｏｗｐｅａ １００.００±０.００
Ｐｅａ ６０４ ｖｅｇｅｔａｂｌｅ ｐｅａ １８.７６±０.２９
Ｓｏｙ Ｚｈｏｎｇｈｕａｎｇ３０５ ４５.０５±１.０１
Ｃａｂｂａｇｅ Ｓｈａｎｇｈａｉ ｇｒｅｅｎ ９４.８３±０.０９
Ｒａｄｉｓｈ Ｘｉａｏｗｕ ｃｈｅｒｒｙ ｒａｄｉｓｈ ８６.６７±１.６７
Ｃａｂｂａｇｅ Ｗｅｓｔ ｗｈｉｔｅ ＩＶ ５７.００±１.７８
Ｃｅｌｅｒｙ Ｗｅｎｔｕｌａ ｃｅｌｅｒｙ ４８.８９±２.２２
　
Ｆｉｇ. １　 Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ
Ａ.Ｃｏｌｏｎｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｎ ＮＡ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍꎻ Ｂ: Ｇｒａｍ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｒｅａｃｔｉｏｎꎻ
Ｃ: Ｃｅｌｌ ｓｈａｐｅ ａｎｄ ｆｌａｇｅｌｌａ ｕｎｄｅｒ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ (Ｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｂａｒ＝ ５００ ｎｍ) .
２４２
　
　 ３期 管晶晶ꎬ等:新疆加工型辣椒细菌性斑点病的发生和病原鉴定
质地较软ꎬ生长较快ꎮ 在 ＫＢＡ培养基上菌落有荧光
产生ꎮ 对菌株进行革兰氏染色、菌体形态和培养性状
观察ꎬ菌体革兰氏染色阴性ꎬ直或稍弯曲的短杆状ꎬ无
荚膜ꎬ不产芽孢ꎮ 电镜下测量菌体大小为 ０. ５０ ~
１.１５ μｍ×１.５１~３.８０ μｍꎬ观察到有 １~４根极生鞭毛ꎮ
２.５　 生理生化性状测定
　 　 对供试菌株 ＬＸ￣２￣２、ＬＸ￣３￣７、ＬＸ￣３￣８、ＬＸ￣４￣２、
ＬＸ￣８￣３进行生理生化性状测定ꎬ各菌株的生理生
化反应基本一致ꎬ测定结果如表 ２所示ꎮ 菌株的氧
化酶反应阴性ꎬ多聚物颗粒阴性ꎬ甲基红反应为阴
性ꎬ不水解淀粉ꎬ不产生 Ｈ２Ｓꎬ不产生吲哚ꎬ精氨酸
双水解酶阴性ꎮ 接触酶反应阳性ꎬ３６℃可生长ꎬ
４１℃不可生长ꎬ３％ ＫＯＨ 试验阳性ꎬ明胶液化ꎬ石
蕊牛乳反应阳性ꎬＴＴＣ 培养基上生长ꎬＶＰ 试验阳
性ꎬ氨的产生阳性ꎬＫＢＡ 培养基上产生荧光色素ꎬ
可利用碳源葡萄糖、果糖ꎬＤ￣木糖、Ｌ￣丝氨酸作碳
源ꎬ不可利用碳源为蔗糖、甘氨酸、麦芽糖、乳糖等
特性符合«常见细菌鉴定手册»中的假单胞菌属
(Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ)丁香假单胞菌 (Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ)的描
述ꎮ 其中具有冰核活性ꎬ水解明胶ꎬ可产生果聚糖ꎬ
可利用山梨醇、甘露醇、肌醇、赤藓糖和 Ｌ￣乳酸盐
作为碳源与丁香假单胞菌丁香致病变种(Ｐ. ｓｙｒｉｎ￣
ｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ )的特征相吻合ꎬ与 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ.
ｓｙｒｉｎｇａｅ标准菌株 ＡＴＣＣ１９３１０的反应结果一致ꎮ
２.６　 病原菌 １６Ｓ ｒＤＮＡ 的扩增和序列测定结果
　 　 对供试菌株 ＬＸ￣２￣２、ＬＸ￣３￣７、ＬＸ￣３￣８、ＬＸ￣４￣２、
ＬＸ￣８￣３的基因组总 ＤＮＡ作为模板进行 １６Ｓ ｒＤＮＡ
ＰＣＲ扩增ꎬ均获得 １ ５００ ｂｐ 左右的特异性条带ꎬ与
预期目标片段大小相符ꎮ 将扩增产物进行回收、纯
化和测序ꎬ分别获得 １ ４５０、１ ４５１、１ ４４９、１ ４５１ 和
１ ４４８ ｂｐ 的核苷酸片段ꎬ提交到 ＧｅｎＢａｎｋ 中ꎬ获得
序列号分别为 ＫＣ８１６６２６、ＫＣ８１６６２７、ＫＣ８１６６２８、
ＫＣ８１６６２９和 ＫＣ８１６６３０ꎮ 通过 ＢＬＡＳＴ 序列同源
性比对检索(表 ３)ꎬ选定其中同源性较高的相关菌
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ
Ｓｔｒａｉｎ
ＡＴＣＣ１９３１０ ＬＸ２￣２ ＬＸ４￣２
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ
Ｓｔｒａｉｎ
ＡＴＣＣ１９３１０ ＬＸ２￣２ ＬＸ４￣２
Ｏｘｉｄａｓｅ — — — Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｒｕｃｔａｎ ＋ ＋ ＋
Ｃａｔａｌａｓｅ ＋ ＋ ＋ Ｉｃｅ ｎｕｃｌｅａｔｉｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ＋ ＋ ＋
Ｐｒｏｄｕｃｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｉｇｍｅｎｔｕｍ ＋ ＋ ＋ Ｕｎｄｅｒ ３６℃ ｇｒｏｗｔｈ ＋ ＋ ＋
Ｌｉｔｍｕｓ ｍｉｌｋ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ＋ ＋ ＋ Ｕｎｄｅｒ ４１℃ ｇｒｏｗｔｈ — — —
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｔｈｙｌ ｒｅｄ — — — Ｆｒｕｃｔｏｓｅ ＋ ＋ ＋
Ｌｉｑｕｅｆａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｌａｔｉｎ ＋ ＋ ＋ Ｌ￣ｓｅｒｉｎｅ ＋ ＋ ＋
Ｓｔａｒｃｈ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ — — — Ｇｌｙｃｉｎｅ — — —
Ｈ２Ｓ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ — — — Ｍａｎｎｉｔｏｌ ＋ ＋ ＋
Ｉｎｄｏｌｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ — — — Ｉｎｏｓｉｔｏｌ ＋ ＋ ＋
ＴＴＣ ｍｅｄｉｕｍ ＋ ＋ ＋ Ｍａｌｔｏｓｅ — — —
Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｉｔｒａｔｅ — — — Ｌａｃｔｏｓｅ — — —
ＶＰ ｔｅｓｔ ＋ ＋ ＋ Ｓｕｃｒｏｓｅ — — —
Ｓａｌｔ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａ ５％ ５％ ５％ Ｇｌｕｃｏｓｅ ＋ ＋ ＋
Ａｍｍｏｎｉａ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ＋ ＋ ＋ Ｄ￣ｘｙｌｏｓｅ ＋ ＋ ＋
Ｐｏｌｙｍｅｒ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ — — — Ｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌ ＋ ＋ ＋
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｏｆ ３％ＫＯＨ ＋ ＋ ＋ Ｌ￣ｌａｃｔａｔｅ ＋ ＋ ＋
Ａｒｇｉｎｉｎｅ ｄｏｕｂｌｅ ｈｙｄｒｏｌａｓｅ — — — Ｓｏｒｂｉｔｏｌ ＋ ＋ ＋
３４２
　
植物病理学报 ４５卷
　 Ｔａｂｌｅ ３　 Ｈｏｍｏｌｏｇｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ １６Ｓ ｒＤＮＡ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ
Ｉｓｏｌａｔｅ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ. Ｈｏｍｏｌｏｇｙ / ％
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ(ＫＦＢ ８２) ＪＱ０７１９３５ ９９.７￣９９.９
Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ (ＮＣＰＰＢ ３８６９) ＡＭ３９９０３６ ９９.１￣９９.４
Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ (ＸＪＫＥＬ￣１) ＪＸ４７４７５２ ９８.９￣９９.３
Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｔｏｍａｔｏ(ＨＸ￣７１６) ＪＱ９４５２２４ ９８.７￣９９.０
Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｌａｃｈｒｙｍａｎｓ(ｎｊｌ１８) ＫＣ８６００４７ ９８.３￣９８.６
Ｐ. ｓｐ. (ＹＣ１) ＨＱ７１８４１３ ９６.６￣９６.９
Ｐ. ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ (ＦＰＨ００５０５) ＡＢ４７８３８３ ９６.３￣９６.６
Ｐ. ｓｐ.(ＨＯＴ９) ＡＹ７３８６４５ ９４.４￣９４.８
　
Ｆｉｇ. ２　 Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ １６Ｓ ｒＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
株构建系统发育树ꎮ 结果表明ꎬ新疆加工型辣椒细
菌性斑点病病原分离物与 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ 菌株 １６Ｓ
ｒＤＮＡ序列同源性达 ９８％以上ꎬ与 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ.
ｓｙｒｉｎｇａｅ的同源性达 ９９.１％以上ꎬ其中与 Ｐ. ｓｙｒｉｎ￣
ｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ塞尔维亚分离物 ＪＱ０７１９３５同源性
最高ꎬ达到了 ９９.７％~９９.９％ꎮ 系统发育树显示(图
２ )ꎬ 供 试 菌 株 与 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ
(ＪＱ０７１９３５)形成了一个小分支ꎬ其亲缘关系最近ꎬ
而丁香假单胞菌番茄致病变种 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｔｏ￣
ｍａｔｏ (ＨＸ￣７１６) 则处于另一个分支上ꎬ与 Ｘａｎ￣
ｔｈｏｍｏｎａｓ遗传距离较远ꎮ
　 　 对供试菌株 ＬＸ￣２￣２、ＬＸ￣３￣７、ＬＸ￣３￣８、ＬＸ￣４￣２、
ＬＸ￣８￣３进行 ｒｐｏＤ基因扩增ꎬ均获得 ８００ ｂｐ左右的
特异性目标条带ꎮ 分别测序获得 ８０８、８０４、８０９、
７７６和 ７７６ ｂｐ 的核苷酸片段ꎬ将序列提交到 Ｇｅｎ￣
Ｂａｎｋ中ꎬ获得序列号分别为 ＫＪ７７２５１６、ＫＪ７７２５１７、
ＫＪ７７２５１８、ＫＪ７７２５１９ 和 ＫＪ７７２５２０ꎮ 通过 ＢＬＡＳＴ
对序列同源性比对分析ꎬ结果表明ꎬ供试菌株与
ＧｅｎＢａｎｋ 中公布的 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ 菌株
ｒｐｏＤ基因序列同源性达 ９８.８％以上(表 ４)ꎮ 系统
发育分析显示(图 ３)ꎬ供试菌株与 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ.
ｓｙｒｉｎｇａｅ聚在同一个类群里ꎬ且与 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ.
ｓｙｒｉｎｇａｅ ＪＸ８６７７８８的同源性最高ꎬ聚成一个分支ꎮ
４４２
　
　 ３期 管晶晶ꎬ等:新疆加工型辣椒细菌性斑点病的发生和病原鉴定
Ｆｉｇ. ３　 Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ
ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｒｐｏＤ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
Ｔａｂｌｅ ４　 Ｈｏｍｏｌｏｇｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒｐｏＤ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ
Ｉｓｏｌａｔｅ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ. Ｈｏｍｏｌｏｇｙ / ％
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ (ＵＭＡＦ６０２４) ＪＸ８６７７８８ ９９.４￣９９.８
Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ (ＣＥＣＴ４４２９) ＪＸ８６７７９０ ９９.３￣９９.７
Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ (ＣＥＣＴ１２７) ＪＸ８６７７８９ ９９.３￣９９.７
Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ (２０￣３) ＫＣ８５２１１２ ９９.３￣９９.６
Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ (１４４４￣５) ＪＸ８６７８３７ ９９.３￣９９.６
Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ (ＵＰＮ３３１) ＫＣ８５２１２２ ９８.８￣９９.１
Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ (ＵＰＮ３４０) ＫＣ８５２１２３ ９８.８￣９９.１
　
３　 结论与讨论
　 　 Ｌｏｎｇ 等[７]和 Ｇａｏ 等先后报道了引起贵州和
内蒙辣椒细菌性斑点病的病原为丁香假单胞菌甜
菜致病变种(Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ａｐｔａｔａ)ꎮ 欧洲、北美
洲、澳大利亚、非洲、亚洲[８ꎬ９]以及我国部分省份和
地区[１０~１２]都有丁香假单胞菌番茄致病变种(Ｐ. ｓｙ￣
ｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｔｏｍａｔｏ)引起的番茄细菌性斑点病严重
发生的报道ꎬ该病菌除侵染番茄外ꎬ人工接种也可
侵染辣椒、龙葵、等茄科植物ꎬ但鲜见从田间辣椒病
株中分离出该病原菌的研究报道ꎮ 本研究对新疆
巴州加工型辣椒产地的辣椒细菌性叶斑病病原菌
进行了分离和致病性测定ꎬ采用形态学、生理生化
特性与分子生物学手段相结合的方法ꎬ将病原鉴定
为丁香假单胞菌丁香致病变种(Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙ￣
ｒｉｎｇａｅ)ꎬ研究结果与前人的报道有所不同ꎮ
　 　 丁香假单胞菌在分类上较为复杂ꎬ多年来一直
存在不少争议ꎬ现将其分为 １ 个亚种和 ４１ 个致病
变种[１３]ꎮ 丁香假单胞菌番茄致病变种、甜菜致病
变种和丁香致病变种的危害症状相似ꎬ但在几种碳
源类物质的利用、冰核活性、生长温度等特性上有
区别ꎮ 本研究中分离的辣椒叶斑病原菌体为 Ｇ－ꎬ
有 １~４根极生鞭毛ꎬ在 ＮＡ 培养基上菌落为乳白
色ꎬ在 ＫＢＡ培养基上能产生荧光色素ꎮ 生理生化
测定菌株氧化酶反应阴性ꎬ接触酶反应阳性ꎬ精氨
酸双水解酶阴性等性状与丁香假单胞杆菌(Ｐ. ｓｙ￣
ｒｉｎｇａｅ)性状一致ꎮ 其具有冰核活性ꎬ水解明胶ꎬ可
产生果聚糖ꎬ可利用山梨醇、甘露醇、肌醇、赤藓糖
５４２
　
植物病理学报 ４５卷
醇、Ｌ￣乳酸盐作为碳源ꎬ３６℃下生长ꎬ４１℃不生长等
符合丁香致病变种的特性ꎮ １６Ｓ ｒＤＮＡ 序列分析
是目前主要的细菌系统发育分类方法ꎬ但该序列的
高度保守性使其无法解决近缘种的问题ꎮ 研究表
明ꎬ持家基因 ｒｐｏＤ 基因序列的碱基替换频率较
高ꎬ以该基因为靶标对假单胞菌属下近缘种的分类
和鉴定中显示出突出的优越性ꎮ 本研究在形态学、
生理生化特性鉴定的基础上ꎬ利用 １６Ｓ ｒＤＮＡ结合
ｒｐｏＤ基因序列分析辅助验证了新疆加工型辣椒细
菌性斑点的病原为 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅꎬ提高
了鉴定结果的可靠性和准确性ꎮ
　 　 丁香致病变种能引起许多重要的病害ꎮ 国内
目前报道的有小麦细菌性叶枯病、水稻细菌褐斑
病、丁香疫病和果树溃疡病等ꎬ在茄科植物上ꎬ仅有
危害番茄的报道[１２]ꎮ 本研究分离的 Ｐ. ｓｙｒｉｎｇａｅ
ｐｖ. ｓｙｒｉｎｇａｅ除危害辣椒外ꎬ人工接种还能侵染茄
科的番茄、茄子、马铃薯以及葫芦科、豆科、十字花
科、伞形花科等多种植物ꎮ 该病原菌与国内外已报
道菌株是否存在遗传、致病力上的分化ꎬ以及形成
不同株系尚有待进一步深入研究ꎮ
　 　 辣椒细菌性疮痂病在症状上与细菌性斑点病
极为相似ꎮ 对北京、内蒙古、云南[１４]、粤西、湖南、
陕西[１５]、新疆和山西[１６]等地发生的辣椒叶部细菌
性病害的病原鉴定结果均为野油菜黄单胞菌辣椒
斑点病致病变种(Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｖｅｓｉ￣
ｃａｔｏｒｉａ)ꎮ 该病害在国外也有不少报道[１７ꎬ１８]ꎬ是辣
椒产区普遍发生危害严重的细菌病害ꎮ 但本研究
中未从加工型辣椒病样中分离到辣椒疮痂病病原
菌ꎮ
　 　 新疆是近 １０ 年来中国辣椒产业、尤其是加工
型辣椒发展最活跃的地区ꎬ辣椒产量居全国第一ꎮ
随着加工型辣椒生产规模迅速扩大ꎬ其生产模式也
发生了明显变化ꎬ由以往的露地栽培逐渐转变成设
施育苗移栽、地膜滴灌种植为主ꎬ由小片、零星种植
转化为大规模、基地化种植ꎬ对此生产环境下的辣
椒病害的研究还鲜见报道ꎮ 本研究首次报道了细
菌性斑点病在新疆加工型辣椒上发生危害ꎬ为病害
的识别诊断、防控病害的传播蔓延和抗病育种研究
提供了科学依据ꎮ
参考文献
[１] 　 Ｃｈｅｎ Ｘꎬ Ｌｉｕ Ｑ Ｂꎬ Ｚｈａｏ Ｔ Ｃ. Ｒｅｃｅｎｔ ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｂａｃ￣
ｔｅｒｉａ ｓｐｏｔ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｖｅｓｉ￣
ｃａｔｏｒｉａ ｏｆ ｐｅｐｐｅｒ ａｎｄ ｔｏｍａｔｏ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ (植物保护)ꎬ２０１１ꎬ３７(１):１１－１８.
[２] 　 Ｍａ Ｈ Ｇꎬ Ｌｉ Ｒ Ｍꎬ Ｈｕ Ｓ Ｘ. Ａ ｎｅｗ ｒｅｃｏｒｄ ｏｆ ｃａｙｅｎｎｅ
ｐｅｐｐｅｒ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｉｎ Ｊｉａｎｇｘｉ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ａｃｔａ Ａｇ￣
ｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｊｉａｎｇｘｉ(江西农业学报)ꎬ１９９７ꎬ９ ( ３):３１ －
３４３.
[３] 　 Ｗａｎｇ Ｘ Ｈ. Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓ
ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｔｏｍａｔｏ ｉｎ Ｘｉｎｊｉａｎｇ ( ｉｎ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ) [Ｄ] . Ｓｈｉｈｅｚｉ: Ｓｈｉｈｅｚｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ (石河子:石
河子大学)ꎬ２００６.
[４] 　 Ｇａｏ Ｊ Ｌꎬ Ｃｈｅｎ Ｗ Ｘꎬ Ｔｅｒｅｆｅｗｏｒｋ Ｚꎬ ｅｔ ａｌ. Ｓｔｕｄｙ ｏｎ
ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｒｈｉｚｏｂｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ
Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ａｄｓｕｒｇｅｎｓ ｂｙ ＡＦＬＰ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ ( ｉｎ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎ
ｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ (应用与环境生物学报)ꎬ１９９９ꎬ５(４):
３８７－３９５.
[５] 　 Ｃｕｉ Ｇ Ｌꎬ Ｘｉｅ Ｒ Ｍꎬ Ｙｕｅ Ｊ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ. Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ
ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ ｏｆ ｒｈｉｚｏｂｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｋｕｍｍｅｒｏｗｉａ ｉｎ
Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ ｏｆ Ｃｈｉｎａ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ (农业生物技术学报)ꎬ
２０１０ꎬ１８(５):８６７－８７５.
[６] 　 Ｓａｔｏｓｈｉ Ｙꎬ Ｈｉｒｏａｋｉ Ｋꎬ Ｄａｗｎｌ Ａꎬ ｅｔ ａｌ. Ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ ｏｆ
ｔｈｅ ｇｅｎｕｓ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ: ｉｎｔｒａｇｅｎｅｒｉｃ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｒｅｃｏｎ￣
ｓｔｒｕｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｇｙｒＢ ａｎｄ
ｒｐｏＤ ｇｅｎｅｓ [Ｊ] . Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２０００ꎬ １４６ (１０):２３８５
－２３９４.
[７] 　 Ｌｏｎｇ Ｌꎬ Ｌｉｕ Ｈ Ｍꎬ Ｘｉａ Ｚ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ. Ｐｅｓｔ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎｖｅｓ￣
ｔｉｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｒｅｇｕｌａｒｉｔｙ ｏｆ ｍａｉｎ ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ
ｉｎｓｅｃｔ ｐｅｓｔｓ ｏｎ ｈｏｔ ｐｅｐｐｅｒ ｉｎ Ｂｉｊｉｅ ｐｒｅｆｅｃｔｕｒｅ ( ｉｎ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ｇｕｉｚｈｏｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ (贵州农业
科学)ꎬ ２００９ꎬ３７(２):７３－７４.
[８] 　 Ｓｈｅｎｇｅ Ｋ Ｃꎬ Ｓｔｅｐｈａｎ Ｄꎬ Ｍａｂａｇａｌａ Ｒ Ｂꎬ ｅｔ ａｌ.
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｐｓｉｃｕｍ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｌｅａｆ
ｓｐｏｔ ｄｉｓｅａｓｅ. Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｔｏｍａｔｏ ｉｓｏｌａｔｅｓ
ｆｒｏｍ Ｔａｎｚａｎｉａ [Ｊ] . Ｐｈｙｔｏｐａｒａｓｉｔｉｃａꎬ ２００８ꎬ３６(４):３３８
－３５１.
[９] 　 Ｓｈｅｎｇｅ Ｋ Ｃꎬ Ｍａｂａｇａｌａ Ｒ Ｂꎬ Ｍｏｒｔｅｎｓｅｎ Ｃ Ｎ. Ｅｖａｌｕａ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｃａｌｌｙ ａｖａｉｌａｂｌｅ ｔｏｍａｔｏ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ａｎｄ ｉｎｔｒｏｄｕｃ￣
ｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｐｅｃｋ ａｎｄ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｐｏｔ
ｄｉｓｅａｓｅｓ ｉｎ Ｔａｎｚａｎｉａ [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ
Ｒｅｓｅａｒｃｈꎬ２００７ꎬ４７(２):１０３－１１１.
６４２
　
　 ３期 管晶晶ꎬ等:新疆加工型辣椒细菌性斑点病的发生和病原鉴定
[１０] Ｃｕｉ Ｙꎬ Ｙａｎｇ Ｈꎬ Ｓｕｎ Ｘ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ. Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｂａｃｔｅｒｉａｌ
ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｔｏｍａｔｏ ｉｎ Ｘｉｎｊｉａｎｇ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] .Ｘｉｎ￣
ｊｉａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ(新疆农业科学)ꎬ ２００４ꎬ４２
(４):２２９－２３１.
[１１] Ｍｉａｏ Ｚ Ｙꎬ Ｌｉ Ｙꎬ Ｚｈａｏ Ｙ. Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｐｅｃｋ ｏｆ ｔｏｍａｔｏ ｉｎ Ｌｉａｏｎｉｎｇ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ)
[Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ (微生物学通报 )ꎬ
２０１３ꎬ４０(４):６０３－６０８.
[１２] Ｄｅｎｇ Ｇꎬ Ｑｕ Ｘꎬ Ｃｈｅｎ Ｘ Ｒ. Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｌｅａｆ ｓｐｅｃｋ ｏｆ ｔｏｍａｔｏ ｂａｓｅｄ ｏｎ １６Ｓ ｒＤＮＡꎬ
ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｉｎ Ｇａｎｓｕ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ( ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ (植物保护)ꎬ２００８ꎬ３４
(５): ４７－５１.
[１３] Ｇｕｏ Ｙ Ｈꎬ Ｇｕｏ Ｊ Ｈꎬ Ｌｉ Ｂ. Ａｄｖａｎｃｅ ｏｆ ｔａｘｏｎｏｍｙ ｏｆ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ １６Ｓ ｒＲＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ [Ｊ] . Ｊｏｕｒ￣
ｎａｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ (微生物学杂志)ꎬ２００４ꎬ２４(２)ꎬ
３８－４１.
[１４] Ｓｕｎ Ｆ Ｚꎬ Ｄｕ Ｚ Ｑꎬ Ｊｉａｏ Ｚ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ. Ｐａｔｈｏｇｅｎ ａｎｄ ｒａｃｅ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｐｏｔ ｏｆ ｐｅｐｐｅｒ ａｎｄ ｔｏｍａｔｏ ( ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ａｃｔａ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ (植物病
理学报)ꎬ１９９９ꎬ２９(３):２６５－２６９.
[１５] Ｃｈｅｎ Ｘ. Ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒａｃｅｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｐｏｔ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｏｎ ｔｏｍａｔｏ ａｎｄ ｐｅｐｐｅｒ ｉｎ Ｃｈｉ￣
ｎａ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｄ] . Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌ￣
ｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ (中国农业科学院)ꎬ２０１０.
[１６] Ｃｈｅｎｇ Ｂ Ｙꎬ Ｚｈａｏ Ｔ Ｃꎬ Ｓｕｎ Ｆ Ｚꎬ ｅｔ ａｌ. Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｐｏｔ ｏｆ ｐｅｐｐｅｒ ａｎｄ
ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎ Ｓｈａｎｘｉ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] .
Ａｃｔａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｂｏｒｅａｌｉ￣Ｓｉｎｉｃａ (华北农学报 )ꎬ
２００２ꎬ１７(３):１２９－１３４.
[１７] Ｓｈｕｋｌａ Ａꎬ Ｇｕｐｔａ Ｓ Ｋ. Ｒｏｌｅ ｏｆ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆａｃｔｏｒｓ
ｏｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｐｏｔ ( Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ.ｖｅｓｉｃａｔｏｒｉａ) ｏｆ ｔｏｍａｔｏ[ Ｊ] . Ｉｎｄｉａｎ Ｐｈｙ￣
ｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ２０１２ꎬ５８(３):３１９－３２２.
[１８] Ｈａｍｚａ Ａ Ａꎬ Ｒｏｂｅｎｅ Ｓ Ｉꎬ Ｊｏｕｅｎ Ｅꎬ ｅｔ ａｌ. Ｍｕｌｔｉｌｏｃｕｓ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｂａｓｅｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｄｓ
ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｐｏｔ ｏｆ ｔｏｍａｔｏ ａｎｄ ｐｅｐｐｅｒ ａｎｄ
ｔｈｅｉｒ ｒｅｌａｔｅｄｎｅｓｓ ｔｏ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｓｐｅｃｉｅｓ [ Ｊ ] .
Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２０１２ꎬ ３５ (３):
１８３－１９０.
责任编辑:李晖
７４２