全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４６(１): １１９￣１２３(２０１６)
收稿日期: ２０１５￣０３￣０７ꎻ 修回日期: ２０１５￣０６￣０１
基金项目: 广西八桂学者专项经费资助项目([２０１３]３号)ꎻ广西自然科学基金项目(２０１５ＧＸＮＳＦＤＡ１３９０１４ꎬ２０１３ＧＸＮＳＦＢＢ０５３００３)ꎻ广西农
科院科技发展基金重点项目(２０１５ＪＺ０７)
通讯作者: 卢 江ꎬ博士ꎬ教授ꎬ主要从事作物分子遗传育种研究工作ꎻＥ￣ｍａｉｌ: ｊｉａｎｇ.ｌｕ.ｃａｕ＠ｇｍａｉｌ.ｃｏｍ
第一作者: 孙嘉曼ꎬ博士ꎬ助理研究员ꎬ主要从事果树抗病育种研究工作ꎻＥ￣ｍａｉｌ: ｊｉａｍａｎｓｕｎ＠ｇｘａａｓ.ｎｅｔꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１６.０１.０１４
一种新的香蕉黑斑病病原菌鉴定及生物学特性研究
孙嘉曼１ꎬ张进忠１ꎬ ２ꎬ韦 弟１ꎬ ２ꎬ蓝 霞１ꎬ郭文锋１ꎬ卢 江１ꎬ ３*
( １广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室ꎬ南宁 ５３０００７ꎻ２广西农业科学院生物技术研究所ꎬ南宁 ５３０００７ꎻ
３中国农业大学 食品与营养工程学院ꎬ北京 １０００８３)
摘要:在广西香蕉种植区发现一种引起香蕉黑斑病的新病原ꎮ 通过对病原菌分离培养、致病性测定、形态学观察、分子生物
学鉴定及对该病原菌生物学特性进行初步研究ꎬ表明引起该病害的病原菌为芒果球座菌(Ｇｕｉｇｎａｒｄｉａ ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ Ａ. Ｊ.
Ｒｏｙ)ꎮ 该病原菌菌落为深橄榄色ꎬ产生棒状子囊、梭形子囊孢子及倒梨形分生孢子ꎻ其最适生长温度为 ２８℃ꎬ最适 ｐＨ 值为
６ꎻ病原菌生长较好的碳源为果糖和阿拉伯糖ꎬ氮源为蛋白胨和酵母膏ꎻ在全光条件下ꎬ病原菌菌丝扩展速度最快ꎻ菌丝的致
死温度为 ５４℃ꎮ 由 Ｇ. ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ引起的香蕉黑斑病ꎬ在国内外为首次报道ꎮ
关键词:香蕉黑斑病ꎻＧｕｉｇｎａｒｄｉａ ｍａｎｇｉｆｅｒａｅꎻ病原鉴定ꎻ生物学特性
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｃａｕｓｉｎｇ ａ ｎｅｗ ｂｌａｃｋ
ｓｐｏｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｎ Ｍｕｓａ ｓｐｐ. 　 ＳＵＮ Ｊｉａ￣ｍａｎ１ꎬ ＺＨＡＮＧ Ｊｉｎ￣ｚｈｏｎｇ１ꎬ２ꎬ ＷＥＩ Ｄｉ１ꎬ２ꎬ ＬＡＮ Ｘｉａ１ꎬ ＧＵＯ
Ｗｅｎ￣ｆｅｎｇ１ꎬＬＵ Ｊｉａｎｇ１ꎬ ３ 　 ( １Ｇｕａｎｇｘｉ Ｃｒｏｐ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｋｅｙ Ｌａｂꎬ Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００７ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ
２ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｇｕａｎｇｘｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００７ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ３Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ
ａｎｄ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇꎬ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８３ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ａ ｎｅｗ ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｂａｎａｎａ ｃｕｌｔｉｖａｒ ¢Ｗｉｌｌｉａｍｓ¢(ＡＡＡꎬ Ｃａｖｅｎｄｉｓｈ) ｉｎ
Ｇｕａｎｇｘｉ ｐｒｏｖｉｎｃｅꎬ Ｃｈｉｎａ. Ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｂａｎａｎａ ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅｄ. Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ
ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｉｔｓ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙꎬ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓꎬ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ａｎｄ ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅꎬ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉ￣
ｆｉｅｄ ａｓ Ｇｕｉｇｎａｒｄｉａ ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ Ａ. Ｊ. Ｒｏｙ. Ｃｏｌｏｎｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｏｎ ＰＤＡ ｗｅｒｅ ｄａｒｋ ｏｌｉｖｅꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ａｓｃｕｓ ｗａｓ
ｃｌａｖａｔｅ ｗｉｔｈ ｓｔｉｐｅꎬ ａｓｃｏｓｐｏｒｅｓ ｗｅｒｅ ｆｕｓｉｆｏｒｍ ａｎｄ ｃｏｎｉｄｉａ ｗｅｒｅ ｏｂｐｙｒｉｆｏｒｍ. Ｇ. ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ ｃｏｕｌｄ ｇｒｏｗ ｗｉｔｈ ａｎ ｏｐ￣
ｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ａｔ ２８℃ꎬｐＨ ６. Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃａｒｂｏｎ ｓｏｕｒｃｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｇｒｏｗｔｈ ｗｅｒｅ ｆｒｕｃｔｏｓｅ ａｎｄ ａｒａｂｉｎｏｓｅꎬ ａｎｄ
ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｏｕｒｃｅｓ ｗｅｒｅ ｐｅｐｔｏｎｅ ａｎｄ ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ. Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｕｌｔｕｒａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｆｏｒ ｍｙｃｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｗａｓ
２４ ｈ ｕｎｄｅｒ ｌｉｇｈｔ. Ｔｈｅ ｌｅｔｈａｌ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ５４℃ ｆｏｒ ｈｙｐｈａ ｏｆ Ｇ. ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ. Ｔｏ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｏｆ ｏｕｒ ｋｎｏｗｌｅｄｇｅꎬ
ｔｈｉｓ ｉｓ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔ ｏｎ ｂａｎａｎａ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｇ. ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ ｉｎ ｔｈｅ ｗｏｒｌｄ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔ ｏｎ ｂａｎａｎａꎻ Ｇｕｉｇｎａｒｄｉａ ｍａｎｇｉｆｅｒａｅꎻ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎꎻ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ￣
ｔｉｏｎ
中图分类号: ４３６.６８１　 　 　 　 　 文献标识码: Ａ　 　 　 　 　 文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１６)０１￣０１１９￣０５
　 　 香蕉(Ｍｕｓａ ｓｐｐ.)是著名的亚热带水果ꎬ也是
继稻谷、小麦、玉米之后的第四大粮食作物[１]ꎮ 广
西是我国重要的香蕉产区、优质香蕉产地和出口
区ꎬ占全国总种植面积的 ２９％ꎬ占广西水果总产量
的 １ / ３ꎬ香蕉生产已成为桂西南的支柱农业产业ꎮ
香蕉黑斑病ꎬ又称香蕉黑星病、雀斑病等ꎬ已报道的

　
植物病理学报 ４６卷
引起香蕉黑斑病的主要病原是香蕉球座菌(Ｇｕｉｇ￣
ｎａｒｄｉａ ｍｕｓａｅ Ｒａｃｉｂ.)ꎬ无性态为香蕉叶点霉(Ｐｈｙｌ￣
ｌｏｓｔｉｃｔａ ｍｕｓａｒｕｍ (Ｃｏｏｋｅ) Ｖａｎ ｄｅｒ Ａａ) [２ꎬ３]ꎮ Ｗｕ￣
ｌａｎｄａｒｉ 等[４]详细描述了香蕉上 Ｐｈｙｌｌｏｓｔｉｃｔａ / Ｇｕｉｇ￣
ｎａｒｄｉａ的种类ꎬ并认为病原菌 Ｇ. ｍｕｓｉｃｏｌａ 是引起
泰国香蕉黑斑病的一个新种ꎮ ２０１３~２０１４年ꎬ笔者
在调查广西蕉园香蕉病害时发现一种不同于常见
香蕉黑斑病症状的病害ꎮ 通过采集样品、组织分离
培养、致病性测定、形态学观察及分子生物学鉴定ꎬ
明确了引起该病害的病原菌为 Ｇｕｉｇｎａｒｄｉａ ｍａｎｇｉ￣
ｆｅｒａｅ Ａ. Ｊ. Ｒｏｙꎬ并对该病原菌的生物学特性进行
了初步研究ꎮ 以期为该病害发生规律的探究和综
合防治措施的制定提供理论依据ꎮ
１　 材料与方法
１.１　 病害调查及症状观察
　 　 ２０１３年 １１月~２０１４ 年 ４ 月ꎬ在广西南宁武鸣
香蕉种植区多次发现一种香蕉黑斑病ꎬ采集具有典
型特征的香蕉叶片ꎬ观察并记录病害症状ꎮ
１.２　 病原菌分离、培养及纯化
　 　 采用常规组织分离法[５]对采集的标样进行病
原菌分离ꎬ于 ＰＤＡ培养基上 ２８℃条件下进行黑暗
培养ꎮ 将长出的菌落进行单孢分离获得纯化菌株ꎮ
纯化的菌株在 ＰＤＡ 斜面培养基上培养ꎬ然后保存
备用ꎮ
１.３　 致病性测定
　 　 根据Ｋｏｃｈｅ法则对供试单孢菌株的致病性进行
测定ꎮ 选择健康的香蕉叶片进行接种ꎮ 叶片用 ７５％
酒精表面消毒ꎬ针刺后将在 ＰＤＡ培养基上 ２８℃培养
７ ｄ的单孢菌株的菌饼(直径 ０.５ ｃｍ)接种于香蕉叶
片上ꎬ以接种同样大小的纯 ＰＤＡ 培养基块作为对
照ꎮ ２８℃保湿培养ꎬ每隔 １ ｄ 观察接种部位症状ꎮ
每处理 ６个重复ꎮ 叶片发病后ꎬ从病斑再次分离病
原菌进行鉴定ꎬ并与最初的接种菌进行比较ꎮ
１.４　 病原菌形态学鉴定
　 　 将上述单孢纯化的菌株接种于 ＰＤＡ 培养基
上ꎬ于 ２５℃恒温培养箱中培养 ７~ １０ ｄ 后观察和描
述菌落形态及培养性状ꎮ 产孢后在生物显微镜下
观察分生孢子、子囊和子囊孢子的形态ꎬ并测量其
大小ꎮ 参考文献[６]ꎬ并根据纯化菌株的上述特征
进行形态学鉴定ꎮ
１.５　 病原菌分子生物学鉴定
　 　 将分离纯化的病原菌接种到 １００ ｍＬ ＰＤ 液
体培养基中ꎬ２５℃条件下 １５０ ｒ􀅰ｍｉｎ￣１震荡培养
７ ｄꎬ过滤收集菌丝体ꎬ冷冻干燥后ꎬ￣２０℃下保存
备用ꎮ 采用 ＣＴＡＢ 法提取和纯化基因组 ＤＮＡꎮ
采用真菌 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ[７]通用引物 ＩＴＳ４ 和 ＩＴＳ５ 进
行 ＰＣＲ扩增ꎬ引物由上海生工生物工程技术服务
有限公司合成ꎮ ＰＣＲ 的反应条件为:９４℃预变性
３ ｍｉｎꎻ９５℃变性 ３０ ｓꎬ５５℃退火 ３０ ｓꎬ７２℃延伸
１ ｍｉｎꎬ共 ３５ 个循环ꎻ７２℃延伸 １０ ｍｉｎꎮ ＰＣＲ 产
物用 １％琼脂糖凝胶电泳进行检测后ꎬ送往上海
生工生物工程技术服务有限公司测序ꎮ 测序结
果与 ＧｅｎＢａｎｋ 核酸序列库中的序列进行同源性
比较ꎬ用 ＭＥＧＡ ５.０ 的 ＮＪ (Ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣Ｊｏｉｎｉｎｇ)法
构建系统发育树ꎮ
１.６　 病原菌生物学特性研究
１.６. １ 　 病原菌对碳、氮源的利用 　 试验以查氏
(Ｃｚａｐｅｋ)培养基为基础ꎮ 将直径为 ５ ｍｍ的供试
菌株菌饼ꎬ分别转接于以葡萄糖、蔗糖、乳糖、果
糖、麦芽糖、甘露醇和可溶性淀粉为不同碳源的
固体培养基上ꎬ以及以 ＤＬ￣天门冬酰胺、牛肉膏、
酵母膏、硝酸钾、硫酸铵、蛋白胨、尿素为不同氮
源的固体培养基上ꎬ置于 ２８℃恒温培养ꎬ每处理
重复 ３ 次ꎮ ３ ｄ后采用十字交叉法测量菌落生长
直径[５] ꎮ
１.６.２　 温度、光照及 ｐＨ对病原菌菌丝生长的影响　
取直径为 ５ ｍｍ 的菌饼移至 ＰＤＡ 培养基平板上ꎬ
在以下几个条件下进行培养:１)分别置于 ５℃、
１０℃、１５℃、２０℃、２３℃、２５℃、２８℃、３０℃、３５℃和
４０℃共 １０个温度梯度培养箱中黑暗培养ꎬ每处理
３次重复ꎻ２)分别置于连续光照、连续黑暗、１２ ｈ 光
暗交替处理 ３种条件下培养ꎬ每处理重复 ３ 次ꎻ３)
ＰＤＡ培养基灭菌后分别用 １ ｍｏｌ􀅰Ｌ￣１的 ＨＣＬ、
ＮａＯＨ溶液调节至 ｐＨ 为 ２.５、３、４、５、６、７、８、９、１０
和 １１ꎬ并制成 ＰＤＡ平板ꎬ将菌饼移至其上培养ꎬ每
处理重复 ３次ꎮ 参照上述统计方法测量菌落直径ꎮ
１.６.３　 病原菌菌丝致死温度的测定　 取未形成子
实体的菌丝以及用无菌水配制的孢子悬浮液ꎬ分别
分装于离心管中并置于 ４５℃、５０℃、５５℃、６０℃和
６５℃恒温水浴锅中水浴 １０ ｍｉｎꎬ再移至 ＰＤＡ 平板
０２１

　
　 １期 孙嘉曼ꎬ等:一种新的香蕉黑斑病病原菌鉴定及生物学特性研究
培养基上ꎬ２８℃培养箱中黑暗培养ꎬ每处理 ３ 次重
复ꎮ 进一步按 １℃ 梯度设计 ５０℃、 ５１℃、 ５２℃、
５３℃、５４℃和 ５５℃共 ６ 个浓度梯度ꎬ进行相同处
理ꎬ确定菌丝的致死温度ꎮ
２　 结果与分析
２.１　 症状特征
　 　 该种黑斑病主要为害香蕉叶片ꎮ 发病初期ꎬ叶
片上呈现褐色小斑点ꎬ不断扩展成椭圆形、近圆形
或不规则形病斑ꎮ 病斑中央灰白色ꎬ边缘深褐色至
黑褐色ꎬ有时出现不规则同心轮纹ꎬ病斑外围伴有
黄色晕圈ꎮ 发病后期病斑汇合成片ꎬ上着生小黑点
(图 １￣Ａ)ꎮ
２.２　 病原菌致病性测定
　 　 用分离的病原菌针刺接种香蕉叶片 ４ ｄ 后ꎬ
接种的叶片开始出现典型的褐色坏死小斑点ꎬ病
斑不断扩展ꎬ周围形成黄色晕圈ꎬ发病症状与田
间自然发病的香蕉植株相同ꎮ 针刺而未接种病
原菌的对照叶片则表现为健康状态(图 １￣Ｂ)ꎮ 取
发病叶片的病健交界处进行组织分离培养ꎬ获得
与最初分离的病原菌形态特征一致的病菌ꎮ 根
据柯赫氏法则ꎬ说明分离的病菌即为香蕉黑斑病
的致病菌ꎮ
２.３　 病原菌分离结果与形态特征观察
　 　 分离的病原菌 (菌株编号:ＧＸＢＬＳ００１)在
ＰＤＡ平板上生长较为缓慢ꎬ菌落颜色呈橄榄色或
深绿色ꎬ表面呈现颗粒状ꎬ菌落边缘灰白色ꎬ生长 ９
~１０ ｄ后长满培养皿(直径 ９ ｃｍ)ꎮ 随着培养时间
增加ꎬ菌落颜色不断变深ꎬ最后呈黑橄榄色(图 １￣
Ｃ)ꎮ 在生物显微镜下观察ꎬ子囊棒状或圆柱形ꎬ大
小为(３５.６ ~ ４３.６) μｍ×(８.５ ~ １０.６) μｍꎮ 子囊内
含 ８个子囊孢子ꎬ子囊孢子为梭形ꎬ大小为(８.７ ~
１２.８) μｍ×(３.６ ~ ５.６) μｍ(图 １￣Ｅ)ꎮ 分生孢子梨
形或近椭圆形ꎬ大小为(７.２ ~ １１.８)μｍ×(４.０ ~ ６.３)
μｍ(图 １￣Ｄ)ꎮ 根据病原菌的形态特征初步鉴定为
芒果球座菌(Ｇ. ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ Ａ. Ｊ. Ｒｏｙ)ꎮ
Ｆｉｇ. １　 Ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｂａｎａｎａ ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅ ＧＸＢＬＳ００１
Ａꎬ Ｂ:Ｎａｔｕｒａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎꎻ Ｃ: Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎꎻ Ｄ: Ｃｏｌｏｎｙ ｏｆ ＧＸＢＬＳ００１ ｏｎ ＰＤＡꎻ Ｅ:Ｃｏｎｉｄｉａꎻ Ｆ: Ａｓｃｕｓ ａｎｄ ａｓｃｏｓｐｏｒｅｓ.
１２１

　
植物病理学报 ４６卷
Ｆｉｇ. ２　 Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ＧＸＢＬＳ００１ (ＬＭ９９４８２３) ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
２.４　 病原菌的分子鉴定
　 　 对病原菌的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 区域进行 ＰＣＲ 扩增ꎬ
获得了 １ 条 ６２９ ｂｐ 左右的清晰条带ꎬ将测序得到
的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 序列提交至 ＧｅｎＢａｎｋ (登录号:
ＬＭ９９４８２３)ꎮ 利用 ＢＬＡＳＴ 进行同源性比较ꎬ结果
显示其与多个 Ｇ. ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ 菌株的相似度高达
９９％ꎮ 构建系统发育树显示(图 ２)ꎬ该菌株与 Ｇ.
ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ(ＪＮ７９１６０５、ＫＦ９２０７０７)在自举值 ９９％水
平相聚一簇ꎮ 结合病原菌的形态特征及分子鉴定ꎬ
确定引起香蕉黑斑病的病原为 Ｇ. ｍａｎｇｉｆｅｒａｅꎮ
２.５　 病原菌生物学特性
２.５.１ 　 病原菌对碳、氮源的利用 　 Ｇ. ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ
能够利用多种碳、氮源ꎮ 在供试碳源中ꎬ使病原菌
生长较好的碳源为果糖和阿拉伯糖ꎬ其次是葡萄
糖、麦芽糖ꎬ生长较差的碳源为木糖ꎮ 在 ２５℃条件
下培养 ７ ｄꎬ以果糖和阿拉伯糖为碳源的病原菌平
均菌落直径分别达到 ５１.９ ｍｍ和 ４７.３ ｍｍꎬ以木糖
为碳源的菌落直径仅为 ９.３ ｍｍꎮ 最小平均菌落直
径与最大平均菌落直径差异高达 ４２.６ ｍｍꎮ 生长
较好的氮源为蛋白胨和酵母膏ꎬ平均菌落直径分别
达到 ５７.８ ｍｍ和 ５２.３ ｍｍꎬ生长最差的氮源为尿素
和草酸铵ꎬ病原菌在以尿素为氮源的培养基上几乎
停止生长ꎮ 最小平均菌落直径与最大平均菌落直
径差异高达 ５２.８ ｍｍꎮ
２.５.２　 温度、光照及 ｐＨ对病原菌生长的影响　 Ｇ.
ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ对温度的适应范围较广ꎬ菌丝在 １５℃ ~
３５℃内均可生长ꎬ平均菌落直径为 ８.２ ~ ３４.７ ｍｍꎻ
病原菌的最适生长温度为 ２８℃ꎬ平均菌落直径为
７７.１ ｍｍꎻ在全光照条件下ꎬ病原菌菌落生长速度
最快ꎬ平均菌落直径为 ７５.３ ｍｍꎮ 光暗交替和全暗
条件下次之ꎬ平均菌落直径分别为 ７２.６ ｍｍ和６５.８
ｍｍꎻ病原菌对酸碱度的适应范围广泛ꎬ在 ｐＨ ＝
２.５~１１.０范围内均可生长ꎬｐＨ ＝ ６ 时最适病原菌生
长ꎬ平均菌落直径为 ６１.８ ｍｍꎮ
２.５.３　 病原菌菌丝及孢子致死温度　 Ｇ. ｍａｎｇｉｆｅ￣
ｒａｅ菌丝在 ４５℃ ~ ５０℃水浴处理 １０ ｍｉｎ 后能够在
培养基上继续生长ꎬ但在大于 ５５℃条件下处理 １０
ｍｉｎ后均不能生长ꎮ 在 ５０℃ ~５５℃范围内按 １℃梯
度设计 ６ 个温度梯度ꎬ处理后发现 ５０℃、５１℃、
５２℃和 ５３℃水浴处理的菌丝能够继续生长ꎬ而
５４℃、５５℃水浴处理的菌丝不能生长ꎮ 因此确定病
原菌菌丝的致死温度是 ５４℃ꎮ
３　 结论与讨论
芒果球座菌(Ｇ. ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ)属于葡萄座腔菌
科(Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａｃｅａｅ)、球座菌属 (Ｇｕｉｇｎａｒｄｉａ)ꎬ
通常被认为是一种腐生菌或寄主范围广泛的植物
内生真菌ꎬ 许多亲缘关系不同的植物中均有芒果
球座菌的分布[８ꎬ９]ꎮ 然而ꎬ在少数情况下芒果球座
菌也可引起植物病害ꎬ近年来报道芒果球座菌导致
的植物病害有番石榴黑斑病[１０]、樟树褐斑病[１１]、
柠檬斑点病[１２]等ꎮ
此前曾报道 Ｇ. ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ 的无性态为 Ｐｈｙｌ￣
ｌｏｓｔｉｃｔａ ｃａｐｉｔａｌｅｎｓｉｓ Ｈｅｎｎ.ꎬＰ. ｃａｐｉｔａｌｅｎｓｉｓ 曾在兰科
植物巨唇兰上引起植物病害ꎬ但在粉蕉 (Ｍｕｓａ
２２１

　
　 １期 孙嘉曼ꎬ等:一种新的香蕉黑斑病病原菌鉴定及生物学特性研究
ｐａｒａｄｉｓｉａｃａ)上分离到的 Ｐ. ｃａｐｉｔａｌｅｎｓｉｓ 并不引起
香蕉病害[４]ꎮ 目前关于 Ｇ. ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ 与 Ｐ. ｃａｐｉ￣
ｔａｌｅｎｓｉｓ的关系存在一些争议[１３]ꎬ二者的真正区别
还有待从分子水平入手发现更有力的支撑证据ꎮ
本研究在明确已报道的香蕉黑斑病病原和症
状的前提下ꎬ针对田间调查和采集到的与以往香蕉
黑斑病症状表现不同的病样ꎬ通过 Ｋｏｃｈｅ 法则进
行致病性测定ꎬ并利用形态学观察和分子生物学鉴
定ꎬ明确了此种香蕉黑斑病的病原菌为芒果球座菌
(Ｇ. ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ)ꎮ 并对 Ｇ. ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ 的生物学特
性进行了初步研究ꎬ以期为深入研究该病害的发生
发展规律、流行动态及综合防治提供理论参考ꎮ
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ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｓ. / / Ｉｎｎｉｓ Ｍꎬ Ｇｅｌｆａｎｄ Ｄ Ｈꎬ Ｓｎｉｎｓｋｙ Ｊ Ｊꎬ
ｅｔ ａｌ. ＰＣＲ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ: Ａ ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａ￣
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ｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｆｒｏｍ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｃｅｎｔｅｌｌａ ａｓｉａｔｉｃａ: Ｏｃｃｕｒ￣
ｒｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈｉｎ ｌｅａｖｅｓ [ Ｊ] .Ａｎ￣
ｔｏｎｉｅ ｖａｎ Ｌｅｅｕｗｅｎｈｏｅｋꎬ ２００８ꎬ ９３: ２７￣３６.
[９] 　 Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ Ｋ ＦꎬＳｉｅｂｅｉＩ Ｔ ＮꎬＧｒｕｎｉｇ Ｃ Ｒꎬ ｅｔ ａｌ. Ｃｈａ￣
ｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｕｉｇｎａｒｄｉａ ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ
ｔｒｏｐｉ￣ｃａｌ ｐｌａｎｔｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙꎬ ＩＳＳＲ￣ＰＣＲ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ＩＴＳ１￣５. ８Ｓ￣ＩＴＳ２ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ [ Ｊ ] .
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[１０] Ｚｈａｎｇ Ｈ Ｌꎬ Ｘｕ Ｙꎬ Ｄｕａｎ Ｗ Ｊꎬｅｔ ａｌ. Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉ￣
ｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｎ Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖａ
( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｈｕｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉ￣
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[１１] Ｗａｎｇ Ｍ Ｓꎬ Ｗｕ Ｘ Ｑꎬ Ｄｉｎｇ Ｘ Ｌꎬｅｔ ａｌ. Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ
ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｒｏｗｎ ｓｐｏｔ ｏｆ Ｃｉｎｎａｍｏ￣
ｍｕｍ ｃａｍｐｈｏｒａ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ｃｈｉｎａ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｓｃｉ￣
ｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ (林业科技开发)ꎬ ２０１１ꎬ ２５
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[１２] Ｆｏｇｌｉａｔａ Ｇ Ｍꎬ Ｃａｎｔｏｎ Ｎ Ｖꎬ Ｍｕｎｏｚꎬ Ｍ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ.
Ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｍｏｔｔｌｉｎｇ ｉｎ ｆｒｕｉｔｓ ａｎｄ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ｌｅｍｏｎ ｉｎ
Ｔｕｃｕｍａｎ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｇｕｉｇｎａｒｄｉａ ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ [ Ｊ ] .
Ａｖａｎｃｅ Ａｇｒｏｉｎｄｕｓｔｒｉａｌꎬ ２００４ꎬ ２５ (３): ２１￣２６.
[１３] Ｇｌｉｅｎｋｅ Ｃꎬ Ｐｅｒｅｉｒａ Ｏ Ｌꎬ Ｓｔｒｉｎｇａｒｉ Ｄꎬ ｅｔ ａｌ. Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ
ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｐｈｙｌｌｏｓｔｉｃｔａ ｓｐｅｃｉｅｓꎬ ｗｉｔｈ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｔｏ
ｔｈｏｓｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｉｔｒｕｓ ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔ [Ｊ] . Ｐｅｒｓｏｏｎｉａꎬ
２０１１ꎬ ２６: ４７￣５６.
责任编辑:李晖
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