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作 者 ：吴菁华  吕柳新

期 刊 ：西北植物学报 2006年 2期

关键词：水仙；微分离；单染色体；微克隆；

Keywords:narcissus, micro-dissect, monosome, microcloning,

摘 要 ：采用玻璃针分离法,通过显微操作系统成功地分离到一个多花水仙(N arcissus tazetta L.,2n=22)品种的中着丝粒单染色体,将分离到的单染色体放入0.2 mL Eppendorf管中,经去蛋白、S au3A酶切,并在染色体DNA片段两端加上S au3A人工接头后,进行两轮PCR扩增,得到0.3~3.0 kb之间的DNA片段.用水仙基因组DNA标记作探针,与扩增产物进行Sou thern杂交,从而证明单染色体DNA确实已被成功地扩增.将第二轮PCR产物构建质粒文库,随机挑取90个重组子进行分析,发现插入片段主要在600~2 500 bp之间.

Abstract:Narcissus monosomes with middle centromeres were isolated with glass needles with the help of micromanipulator and then put into 0. 2 mL Eppendorf tubes;next ,the monosomes were deproteinised and digested with Sau3A;afterwards,the DNA fragments of the mon

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