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作 者 ：刘永军 景建洲 贾敬芬 李振勇

期 刊 ：西北植物学报 2004年 1期

关键词：草木樨状黄芪变异系；甲硫氨酸代谢；克隆；表达；

Keywords:Astragalus melilotoides Pall. variant line, methionine-metaboly, clone, expression,

摘 要 ：利用mRNA差异显示技术(differential display)从草木樨状黄芪耐甲硫氨酸变异系中分离到一差异cDNA片段，命名为tm03(360bp)。mRNA杂交结果显示，该片段只在变异苗中表达，初步确定其与甲硫氨酸代谢相关。测序后在Genebank搜寻，未发现有同源序列。进一步分析表明，该cDNA克隆可编码完整的蛋白。在该基因片段两端分别合成含HindⅡ和BamH Ⅰ酶切位点的引物，用PCR扩增后亚克隆到pRSET A表达载体，转化宿主菌JMl09(DE3)，经IPTG诱导表达了N′端含6个组氨酸的蛋白质，分子量约为14kD，为进一步研究该蛋白的结构和生物学功能奠定基础。

Abstract:Differential cDNA fragment which was named tm03 (360 bp) was isolated from Astragalus melilotoides Pall. methionine-tolerant variant line by mRNA differential display analysis.After detected by mRNA dot hybridization,tm03 expressed only in the variant lin

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