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Effects of different energy levels and corn processing diets on ruminal fermentation parameters in vitro

不同能量水平及玉米加工饲粮对瘤胃体外发酵参数的影响



全 文 :书犇犗犐:10.11686/犮狔狓犫2015060 犺狋狋狆://犮狔狓犫.犾狕狌.犲犱狌.犮狀
张婷,张彬,张佩华,周小乔,田瑶,朱丹,赵勐,刘士杰,张开展,陈宇光,卜登攀,WiliamP.Weiss.不同能量水平及玉米加工饲粮对瘤胃体外
发酵参数的影响.草业学报,2015,24(12):102111.
ZHANGTing,ZHANGBin,ZHANGPeiHua,ZHOUXiaoQiao,TIANYao,ZHUDan,ZHAOMeng,LIUShiJie,ZHANGKaiZhan,CHEN
YuGuang,BUDengPan,WiliamP.Weiss.Effectsofdifferentenergylevelsandcornprocessingdietsonruminalfermentationparameters犻狀狏犻狋狉狅.
ActaPrataculturaeSinica,2015,24(12):102111.
不同能量水平及玉米加工饲粮对
瘤胃体外发酵参数的影响
张婷1,2,张彬1,张佩华1,周小乔2,田瑶1,朱丹1,赵勐2,刘士杰5,张开展6,
陈宇光1,卜登攀2,3,4,WiliamP.Weiss7
(1.湖南农业大学动物科学技术学院,湖南 长沙410128;2.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养国家重点实验室,北京100193;
3.东北农业大学,食品安全与营养协同创新中心,黑龙江 哈尔滨150030;4.CAASICRAF农用林业与可持续畜牧业联合实验室,
北京100193;5.中国饲料工业协会,北京100125;6.北京中地种畜有限公司,北京100028;7.俄亥俄州
农业研究与发展中心动物科学系,俄亥俄州立大学,伍斯特44691)
摘要:利用体外产气法研究不同能量水平与不同加工方式玉米对瘤胃体外发酵参数的影响。试验以玉米秸秆为主
要粗饲料来源设计精粗比为65∶35的等氮饲粮,选用玉米青贮与过瘤胃脂肪调整低、高能量水平,普通玉米与蒸
汽压片玉米作为不同加工方式,采用2×2因子试验设计。结果表明,高能水平饲粮的理论最大产气量、48h总产
气量、干物质降解率均显著高于低能(犘<0.05),普通玉米高能组的乙酸、丙酸含量显著高于低能组(犘<0.05)。同
一能量水平下,蒸汽压片处理组的48h总产气量均显著高于普通玉米组(犘<0.05);而低能条件下蒸汽压片组的
总挥发酸、丙酸含量显著高于普通玉米组(犘<0.05)。不同饲粮营养水平与体外产气参数相关性分析表明48h总
产气量与中性洗涤纤维(NDF)呈显著负相关(犘<0.05),与中性洗涤可溶物(NDS)、非纤维性碳水化合物(NFC)和
NDS/CP呈显著正相关(犘<0.05)。因此,使用蒸汽压片方式处理玉米以及提高饲粮能量水平均可以显著增加体
外发酵48h总产气量;低能水平下,蒸汽压片玉米对改善瘤胃的发酵特性更为明显。
关键词:蒸汽压片玉米;能量水平;发酵参数;总产气量   
犈犳犳犲犮狋狊狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犲狀犲狉犵狔犾犲狏犲犾狊犪狀犱犮狅狉狀狆狉狅犮犲狊狊犻狀犵犱犻犲狋狊狅狀狉狌犿犻狀犪犾犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀
狆犪狉犪犿犲狋犲狉狊犻狀狏犻狋狉狅
ZHANGTing1,2,ZHANGBin1,ZHANGPeiHua1,ZHOUXiaoQiao2,TIANYao1,ZHUDan1,ZHAOMeng2,
LIUShiJie5,ZHANGKaiZhan6,CHENYuGuang1,BUDengPan2,3,4,WiliamP.Weiss7
1.犆狅犾犾犲犵犲狅犳犃狀犻犿犪犾犛犮犻犲狀犮犲犪狀犱犜犲犮犺狀狅犾狅犵狔,犎狌狀犪狀犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔,犆犺犪狀犵狊犺犪410128,犆犺犻狀犪;2.犛狋犪狋犲犓犲狔犔犪犫狅狉犪狋狅
狉狔狅犳犃狀犻犿犪犾犖狌狋狉犻狋犻狅狀,犐狀狊狋犻狋狌狋犲狅犳犃狀犻犿犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊,犆犺犻狀犲狊犲犃犮犪犱犲犿狔狅犳犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊,犅犲犻犼犻狀犵100193,犆犺犻狀犪;3.
犛狔狀犲狉犵犲狋犻犮犐狀狀狅狏犪狋犻狅狀犆犲狀狋犲狉狅犳犉狅狅犱犛犪犳犲狋狔犪狀犱犖狌狋狉犻狋犻狅狀,犎犪狉犫犻狀150030,犆犺犻狀犪;4.犠狅狉犱犃犵狉狅犳狅狉犲狊狋狉狔犆犲狀狋狉犲,犈犪狊狋犪狀犱犆犲狀
狋狉犪犾犃狊犻犪,犅犲犻犼犻狀犵100193,犆犺犻狀犪;5.犆犺犻狀犪犳犲犲犱犻狀犱狌狊狋狉狔犪狊狊狅犮犻犪狋犻狅狀,犅犲犻犼犻狀犵100125,犆犺犻狀犪;6.犅犲犻犼犻狀犵犛犻狀狅犉犪狉犿,犅犲犻犼犻狀犵
100028,犆犺犻狀犪;7.犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犃狀犻犿犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊,犗犺犻狅犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犚犲狊犲犪狉犮犺犪狀犱犇犲狏犲犾狅狆犿犲狀狋犆犲狀狋犲狉,犜犺犲犗犺犻狅犛狋犪狋犲犝狀犻狏犲狉
狊犻狋狔,犠狅狅狊狋犲狉44691,犃犿犲狉犻犮犪
第24卷 第12期
Vol.24,No.12
草 业 学 报
ACTAPRATACULTURAESINICA
2015年12月
Dec,2015
收稿日期:20150127;改回日期:20150409
基金项目:“十二五”科技支撑计划(2012BAD12B025),动物营养与饲料基础数据的整合与应用(2013ywfzd3)和湖南省“海外名师”项目计划
(湘教通[2014]309号)资助。
作者简介:张婷(1987),女,湖南浏阳人,在读硕士。Email:zting729@163.com
通信作者Correspondingauthor.Email:ayu800@126.com,budengpan@126.com
犃犫狊狋狉犪犮狋:犐狀狏犻狋狉狅batchculturesweregrowntoinvestigatetheeffectofdifferentenergylevelsandcornpro
cessingdietsonruminalfermentationparametersina2×2factorialexperiment.Isonitrogenousdietswerecon
structedwithaconcentratetoforageratioof65∶35usingcornstrawasthemainforage,andcornsilageand
rumenprotectedfatwereaddedtoadjustthediets’energylevels.Inaddition,steamflakedcornandground
cornweretestedasdifferentcornprocessingproducts.Theresultsshowedthatthetheoreticalmaximumgas
production,48htotalgasproductionanddrymatterdegradabilityofthehighenergydietsweresignificantly
higherthanforthelowenergydiets(犘<0.05).Theacetateandpropionateofhighenergydietsweresignifi
cantlyhigherthanlowenergydietswithgroundcorn(犘<0.05).Atthesameenergylevel,the48htotalgas
productionofdietswithsteamflakedcornwashigherthanforgroundcorn(犘<0.05).Furthermore,atthe
lowenergylevelthetotalvolatilefattyacidandpropionateofdietswithsteamflakedcornwerehigherthanfor
groundcorn(犘<0.05).Correlationanalysisbetweenthedifferentfeednutritionlevelsandfermentationpa
rameters犻狀狏犻狋狉狅showedthat48htotalgasproductionwassignificantlynegativelyrelatedtoneutraldetergent
fiber(犘<0.05),whileithadasignificantlypositivecorrelationwithneutraldetergentsoluble(NDS)andnon
fibercarbohydratesandwithNDS/crudeprotein(犘<0.05).Inconclusion,bothsteamflakedcornandhigh
energyleveldietscanincrease48htotalgasproduction犻狀狏犻狋狉狅,andsteamflakedcorncanimproveruminal
fermentationunderlowenergyleveldiets.
犓犲狔狑狅狉犱狊:steamflakedcorn;energylevel;fermentationparameters;totalgasproduction
近年来,我国奶牛养殖业发展较快,优质粗饲料缺口日益增大,为此,我国不得不长期从国外大量进口苜蓿
(犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪)等优质粗饲料。2010年,我国从国外进口接近2.3亿t苜蓿,而本国生产的苜蓿仅有1亿
t[1]。粗饲料是反刍动物饲粮中不可或缺的组成部分,粗饲料品质直接影响奶牛采食量与能量的吸收。中国每年
产生有接近2亿t玉米(犣犲犪犿犪狔狊)秸秆及类似稻草的秸秆型粗饲料[2],由于科技和观念等方面的限制,我国丰富
的秸秆资源未能在生产中得到合理有效的利用而遭到大量浪费。秸秆中纤维含量较高,粗蛋白和能量水平较低,
且适口性差,如单纯将其作为粗饲料来源,则不能满足高产奶牛营养需要,影响其生产性能及机体健康。Wang
等[3]用玉米秸秆代替苜蓿干草,降低了奶牛乳产量及乳蛋白合成,其分析原因可能是秸秆影响了营养物质的代谢
及利用,导致能量供应不足。已有研究表明,饲粮能量水平与乳产量呈线性关系[4]。Zhu等[5]的研究表明,与玉
米秸秆组相比,苜蓿组增加了瘤胃有效能的利用,有利于乳蛋白的合成。因此,饲粮能量供应不足可能是影响奶
牛生产性能的主要因素。此外,不同加工的玉米对奶牛泌乳性能造成一定的影响,因淀粉是玉米的主要组成部
分,是重要的能量来源物质,当玉米受蒸汽压片处理后,淀粉的结构发生改变,淀粉的利用率将得到提高[6],从而
影响奶牛泌乳性能。Sauvant和 Milgen[7]用快速释放淀粉类代替慢速释放淀粉时,能提高十二指肠微生物蛋白
(microbialprotein,MCP)的流量。早期Theurer[8]研究发现,相比干扁玉米,蒸汽压片玉米能提高奶牛的泌乳性
能,可以分别提高6%,8%,2%的产奶量、乳蛋白产量和乳蛋白率。Zhong等[9]研究报道,与普通玉米相比,蒸汽
压片玉米能显著提高干物质采食量、乳产量、乳蛋白产量和乳脂产量。因此是否可以通过提高能量水平和利用蒸
汽压片玉米结合我国现有秸秆资源,弥补秸秆型的弊端,满足奶牛养殖业对粗饲料的需求,减少对进口苜蓿的依
赖。目前,以玉米秸秆为粗饲料来源,通过改变饲粮能量水平和玉米不同加工方式对泌乳性能影响的报道很少。
本试验采用体外产气方法,研究不同能量水平及玉米加工饲粮对瘤胃发酵参数的影响,旨在为生产实践和接下来
的现场试验提供数据参考。
1 材料与方法
1.1 饲料样品的制备及成分分析
参照奶牛营养需要NRC(2001)饲养标准配制4种不同饲粮:秸秆和普通玉米组成的低能玉米组(loweren
ergygroundcorn,LEGC),秸秆和蒸汽压片玉米组成的低能蒸汽压片玉米组(lowerenergysteamflakedcorn,
LESFC),秸秆、普通玉米、玉米青贮和过瘤胃脂肪组成的高能玉米组(higherenergygroundcorn,HEGC)以及
301第12期 张婷 等:不同能量水平及玉米加工饲粮对瘤胃体外发酵参数的影响
秸秆、蒸汽压片玉米、玉米秸秆青贮和能乳发组成
的高能蒸汽压片玉米组(higherenergysteam
flakedcorn,HESFC),饲粮配方见表1。将配制
好的饲粮,65℃烘干,粉碎过0.42mm 筛备用。
干物质(drymatter,DM)参照GB/T643586,粗
蛋白质(crudeprotein,CP)参照 GB/T643294
(全自动凯氏定氮仪VELP.UDKl59),粗脂肪(e
therextract,EE)按照 GB/T643394,粗灰分
(Ash)参照 GB/T643892的方法进行测定[10]。
中性洗涤纤维(neutraldetergentfiber,NDF)、酸
性洗涤纤维(aciddetergentfiber,ADF)的测定
参照VanSoest等[11]的方法进行,其中 NDF样
品分析时加入热稳定淀粉酶,计算包含灰分;淀粉
(starch)按照蒽酮比色法[12]进行测定。
1.2 试验动物管理
试验根据奶牛年龄、体重、胎次、泌乳量相近
或相同的原则,选取3头体况良好,泌乳日龄100~
150d,装有永久性瘤胃瘘管的荷斯坦奶牛为试验
动物。采用 RIC(roughageintakecontrol)自动
饲喂系统(InsentecB.V公司,荷兰),用全混合饲
粮(totalmixration,TMR)饲喂牛群,饲粮配方
见表2(来自北京中地种畜科技有限公司),每天
饲喂3次(7:00,13:00,19:00),自由采食、自由饮
水,每天挤奶3次(6:30,14:00,20:30)。
1.3 试验方法
1.3.1 缓冲液配制  采用 Menke和Stein
gass[14]的方法配制缓冲液,配方如下:400mL
H2O、0.1mL微量元素溶液 A(每100mL溶液
A含CaCl2·2H2O13.2g、MnCl2·4H2O10g、
CoCl·6H2O1g和FeCl3·6H2O8g)、200mL
碳酸盐、缓冲溶液B(每L溶液B含NH4HCO34
g和NaHCO335g)、200mL磷酸盐、缓冲溶液C
(每L溶液C含Na2HPO45.7g、KH2PO46.2g
和 MgSO4·7H2O0.6g)、1mL1.0g/L刃天青
溶液、40mL还原剂溶液(每100mL还原剂溶液
含NaOH160mg、Na2S·9H2O625mg)。接种
前需向瓶中充入CO2。
1.3.2 瘤胃液采集与处理  2014年7月在北
京市中地种畜有限公司牛场于晨饲前2h采集3
头装有瘤胃瘘管的荷斯坦奶牛的内容物3L,混
合后装于保温瓶迅速带回实验室,然后在39℃水
表1 饲粮原料组成及营养水平
犜犪犫犾犲1 犐狀犵狉犲犱犻犲狀狋狊犪狀犱狀狌狋狉犻犲狀狋犾犲狏犲犾狊狅犳犲狓狆犲狉犻犿犲狀狋犪犾犱犻犲狋狊
风干基础 Airdrybasis
项目Item LEGC1)LESFC HEGCHESFC
玉米秸秆青贮Cornstrawsilage(%) 0 0 22 22
玉米秸秆Cornstraw(%) 35.75 35.75 13.00 13.00
豆粕Soybeanmeal(%) 11.29 11.29 11.29 11.29
菜粕 Rapeseedmeal(%) 6.32 6.32 6.32 6.32
膨化大豆Extrudedsoybeans(%) 2.06 2.06 2.06 2.06
甜菜渣Beetpulp(%) 4.16 4.16 4.16 4.16
全棉籽Cottonseedfuzzy(%) 10.44 10.44 10.44 10.44
普通玉米 Groundcorn(%) 25.56 0 25.56 0
压片玉米Steamflakedcorn(%) 0 25.56 0 25.56
能乳发酵物EB100(%) 1.14 1.14 1.89 1.89
酵母发酵物 XP(%) 0.33 0.33 0.33 0.33
石粉Limestone(%) 0.74 0.74 0.74 0.74
食盐 NaCl(%) 0.46 0.46 0.46 0.46
预混料Premix2)(%) 0.53 0.53 0.53 0.53
小苏打 NaHCO3(%) 0.92 0.92 0.92 0.92
氧化镁 MgO(%) 0.30 0.30 0.30 0.30
合计Total 100.00100.00 100.00100.00
精粗比Concentrate∶Forage 65∶3565∶3565∶3565∶35
干物质 Drymatter(%) 42.06 42.80 44.85 44.90
有机物 Organicmatter(%) 92.93 92.95 93.51 93.84
粗蛋白质Crudeprotein(%) 16.52 16.54 16.77 16.05
粗脂肪Etherextract(%) 2.58 2.78 3.92 3.95
中性洗涤纤维 Neutraldetergentfiber(%)43.81 42.96 36.23 36.67
酸性洗涤纤维 Aciddetergentfiber(%) 35.39 36.85 31.43 31.32
非纤维性碳水化合物 Nonfibercarbo
hydrate3)(%)
30.07 31.18 36.60 37.11
淀粉Starch(%) 22.30 22.80 24.43 24.86
泌乳净能 NEL(MJ/kg)4) 1.52 1.53 1.71 1.72
 1)LEGC:秸秆和普通玉米组成的低能玉米组TMR(totalmixration)con
tainingcornstoverasthemainforageandcontentinggroundcorn;LESFC:秸
秆和压片玉米组成的低能压片玉米组 TMRcontainingcornstoverasthe
mainforageandcontentingsteamflakedcorn;HEGC:秸秆、普通玉米、青贮
玉米秸秆和能乳发组成的高能玉米组Containingcornstoverandcornsilage
asthemainforageandcontentinggroundcorn;HESFC:秸秆、压片玉米、青贮
玉米秸秆和能乳发组成的高能压片玉米组Containingcornstoverandcornsi
lageasthemainforageandcontentingsteamflakedcorn.
 2)每kg预混料(DM)含有Onekilogramofpremix(DM)containedthefol
lowing:Fe5500mg,Cu4080mg,Mn4989mg,Zn17500mg,I180mg,Se
110mg,Co8805mg;VA2000000IU,VD600000IU,VE10800mg。
 3)非纤维性碳水化合物=100-(%中性洗涤纤维+%粗蛋白+%粗脂肪
+%粗灰分)。NFC=100-(%NDF+%CP+%EE+%Ash)[13].
 4)NEL为计算值,其他为实测值。NELwasameasuredvalue,andtheoth
erswerecalculatedvalues[13].下同 Thesamebelow.
401 草 业 学 报 第24卷
表2 试验牛饲粮的组成及营养水平(干物质基础)
犜犪犫犾犲2 犐狀犵狉犲犱犻犲狀狋犮狅犿狆狅狊犻狋犻狅狀犪狀犱狀狌狋狉犻犲狀狋犾犲狏犲犾狊狅犳犱犻犲狋狊(犇犕犫犪狊犻狊)
项目Item 配比 Ratio(%) 营养水平 Nutrientlevels 配比 Ratio
羊草Chinesewildrye 3.7 干物质 DM (%) 55.78
苜蓿干草 Alfalfahay 28.4 粗蛋白质CP(%) 16.67
全株玉米青贮 Wholecornsilage 26.7 粗脂肪EE(%) 2.24
玉米Corn 22.6 中性洗涤纤维 NDF(%) 44.18
豆粕Soybeanmeal 11.8 酸性洗涤纤维 ADF(%) 26.06
全棉籽Cottonseedfuzzy 5.1 粗灰分 Ash(%) 7.74
磷酸氢钙CaHPO4 0.6 钙Ca(%) 0.82
食盐 NaCl 0.5 磷P(%) 0.31
预混料Premix 0.6 泌乳净能 NEL(MJ/kg) 0.97
合计 Total 100.0
浴环境中用4层纱布过滤,同时持续通入CO2 边搅拌边加入厌氧发酵瓶,该操作尽可能在短时间内完成。
1.3.3 体外接种处理  称取0.5g饲料样品置于150mL厌氧发酵罐中,每个处理设5个重复。接种时边搅
拌边加入已39℃预热的缓冲液50mL和新鲜瘤胃液25mL于每个瓶中,并向瓶中持续通入CO25s后,立即加
上瓶塞,操作应在尽量短的时间内完成。将每个发酵瓶与产气装置(中国农业大学研制的“AGRSIII型64通路
微生物发酵微量产气全自动记录装置与软件系统”[15]AutomatedTraceGasRecordingSystemforMicrobial
Fermentation,AGRS)的每个传感器相连接,于39℃下培养48h,试验重复2次。
1.3.4 样本采集及分析  在培养发酵48h后结束发酵程序,从发酵瓶中采集发酵液,立即测定pH值,并用
40~50μm孔径,5cm×10cm的尼龙袋过滤发酵液装于4个10mL离心管中,按与发酵液3∶1添加25%的偏
磷酸溶液固氮,混匀后于-20℃冷冻保存,用于微生物蛋白、挥发性脂肪酸(volatilefattyacids,VFA)和氨态氮
(ammonianitrogen,NH3N)指标的测定。将尼龙袋过滤的滤渣连同尼龙袋在水龙头下冲洗至水澄清,在65℃
烘箱内烘至恒重。样品体外干物质降解率(犻狀狏犻狋狉狅drymatterdegradability,IVDMD)计算公式如下:
体外干物质降解率(%)=[(样品DM重-残渣DM重)/样品DM重]×100。
MCP采用 Makkar和Becker[16]根据Zinn和Owens[17]改进过的嘌呤法测定:将-20°冻存的瘤胃液解冻,取
8mL样品13200r/min离心20min,留沉淀加入2.104mL0.6mol/LHClO4,90~95℃水浴1h,冷却加入6
mL28.5mol/LNH4H2PO4,水浴15min冷却,5130r/min离心10min,1.6mL上清液加入6mL0.2mol/L
NH4H2PO4,用85%磷酸调整溶液pH值为2~3,取3.8mL加入0.2mL0.4mol/LAgNO3,5℃避光过夜。
5130r/min离心10min,留沉淀,加4.5mLpH=2的蒸馏水冲洗,于5130r/min离心10min,留沉淀,加入5
mL0.5mol/LHCl水浴30min,5130r/min离心10min,取上清液在波长为260nm下比色,以0.5mol/LHCl
作参比,以酵母RNA作标准曲线,根据光密度值和标准曲线求出样品中的RNA测定值。计算公式为:微生物蛋
白氮(mg/mL)=RNA测定值(mg/mL)×RNA含氮量(17.83%)/细菌氮中RNA含氮量(10%)×稀释倍数。
VFA(Volatilefattyacids)采用气相色谱(Agilent6890NGCsystem,Agilent,America)以外标法测定[18],
色谱条件如下:以氮气作为载气,色谱柱为 4mm(外)×2.6m 玻璃柱(15%PEGS,ChromsorbW80/0.147
mm);柱温160℃,气化室温度为200℃,检测器温度为250℃;柱前压力:氮气0.30MPa,氢气0.07MPa,空气
0.40MPa;氮气(载气)流速30mL/min;样品进样量0.4μL。
氨氮采用靛酚蓝比色法测定[19],瘤胃液中的氨与次氯酸钠及苯酚试剂在亚硝基铁氰化钠催化下反应生成蓝
色靛酚,通过测定蓝色靛酚的吸光度可以得到样品中氨的浓度。
1.4 发酵气体指标的产气动力学模型分析
通过AGRSIII型64通路微生物发酵微量产气全自动记录装置与软件系统,实时记录产气量。
501第12期 张婷 等:不同能量水平及玉米加工饲粮对瘤胃体外发酵参数的影响
参照指数模型对不同饲粮累积产气量数据进行非线性拟合:
犌犘t(mL/gDM)=犃/[1+(犆/狋)犅][20]
式中,犌犘t为狋时间点记录到的累积产气量;犃为发酵时间无限延长时的理论最大产气量;犅为所形成的产气曲
线的平滑度;犆为达到理论产气量最大值犃 一半时所需要的时间。
犜犚max犛=犆×(犅-1)(1/犅)
犚max犌=(犃×犆犅×犅×犜犚max犛(-犅-1))/(1+犆犅×犜犚max犛(-犅))2
犜犚max犌=犆×[(犅-1)/(犅-1)](1/犅)
犜犚max犛为达到底物最大降解率时所需要的时间(h);犚max犌为最大产气速率(mL/h);犜犚max犌为达到最大产气速
率所需要的时间(h)。
1.5 数据分析
原始数据经由Excel2013初步处理,再采用SAS9.2软件进行双因子方差分析,以最小二乘均数形式表示
统计结果,犘<0.05为差异显著,犘<0.01为差异极显著。
2 结果与分析
2.1 不同能量水平及玉米加工饲粮对体外产气的影响
从表3可知,在相同能量水平下,蒸汽压片玉米与普通玉米之间干物质降解率差异不显著(犘>0.05)。在相
同玉米加工方式下,高能水平的干物质降解率极显著高于低能(犘<0.01),无显著互作效应(犘>0.05);48h总
产气量HESFC组最高,LEGC组最低,蒸汽压片玉米总产气量极显著高于普通玉米(犘<0.01)。高能的总产气
量极显著大于低能(犘<0.01),无显著互作效应(犘>0.05)。从图1可知,各组间发酵10h前产气量快速上升,
10h后进入缓慢上升阶段。理论最大产气量(犃)LEGC组显著低于其他3组饲粮。LEGC和LESFC组的产气
曲线的平滑度(犅)和达到理论产气量最大值犃一半时所需要的时间(犆)差异显著。处理组间犚max犌与犜犚max犌
差异不显著(犘>0.05),但处理组间犚max犌从大到小的趋势为 HESFC>HEGC>LESFC>LEGC;犜犚max犌为
HESFC> HEGC>LEGC>LESFC。
表3 不同饲粮对体外产气参数的影响
犜犪犫犾犲3 犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犱犻犲狋狊狅狀犵犪狊狆狉狅犱狌犮狋犻狅狀犻狀狏犻狋狉狅
项目Item
饲粮Diets
LEGC LESFC HEGC HESFC
标准误
SEM
犘值犘value
E C E×C
体外干物质降解率犐狀狏犻狋狉狅drymatterdegrada
tion(IVDMD,%)
79.98b 78.64b 87.85a 87.51a 1.04 <0.01 0.59 0.37
总产气量Totalgasproduction(GP48,mL/g) 223.44c 271.96b 267.50b 299.09a 7.15 <0.01 <0.01 0.35
犃 236.69b 313.73a 291.44a 323.95a 9.72 0.04 <0.01 0.14
犅 1.23a 1.09b 1.19a 1.20a 0.02 0.32 0.10 0.04
犆 4.21 7.79 5.19 5.62 0.53 0.54 0.06 0.12
犚max犌 25.32 26.50 40.25 41.08 2.90 0.06 0.53 0.62
犜犚max犌 0.59 0.35 0.67 0.74 0.07 0.64 0.25 0.13
 注:同行不同小写字母表示差异显著(犘<0.05)。GP48:体外发酵48h的累积产气量(mL/gDM)。SEM:平均标准误差。E:不同能量处理。C:不
同玉米处理。犃:发酵时间无限延长时的理论最大产气量(mL/gDM);犅:形成的产气曲线的平滑度;犆:达到理论产气量最大值犃一半时所需要的时
间(h);犚max犌:最大产气速率(mL/h);犜犚max犌:达到最大产气速率所需要的时间(h);下同。
 Note:Inthesamerow,valueswithdifferentsmallettersmeansignificantdifferences(犘<0.05).GP48:Cumulativegasproductionat48h.
SEM:Standarderrorofthemean.E:Differentenergytreatment.C:Differentmaizetreatment.A:Theasymptoticgasproduction;B:Asharpness
parameterdeterminingtheshapeofthecurve;C:Thetime(h)atwhichhalfof犃isreached;犚max犌:Themaximumgasproductionrate(mL/h);
犜犚max犌:Thetimeatwhich犚max犌isreached(h);thesamebelow.
601 草 业 学 报 第24卷
2.2 不同能量水平及玉米加工饲粮对体外培养瘤
图1 不同饲粮对体外产气量的影响
犉犻犵.1 犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犱犻犲狋狊狅狀犵犪狊狆狉狅犱狌犮狋犻狅狀犻狀狏犻狋狉狅
胃发酵参数影响
如表4可知,各组间pH值、微生物蛋白浓度、
氨氮浓度差异不显著(犘>0.05),且均无显著互作
效应(犘>0.05);普通玉米高能组总挥发酸(total
volatilefattyacids,TVFA)、乙酸、丙酸与异丁酸含
量显著高于普通玉米低能组(犘<0.05),而与蒸汽
压片玉米无显著差异(犘>0.05)。低能水平下,蒸
汽压片玉米的丙酸含量显著高于普通玉米(犘<
0.05),无显著互作效应(犘>0.05)。
2.3 不同能量水平及玉米加工饲粮与体外产气参数相关性分析
总产气量与淀粉、NDS/CP呈极显著正相关(犘<0.01);与NDS、NFC呈显著正相关(犘<0.05);与NDF呈
显著负相关(犘<0.05)。理论最大产气量与淀粉、NDS/CP和NFC呈显著正相关(犘<0.05)。
表4 不同饲粮对瘤胃发酵参数的影响
犜犪犫犾犲4 犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犱犻犲狋狊狅狀狉狌犿犲狀犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀狆犪狉犪犿犲狋犲狉狊犻狀狏犻狋狉狅
项目Item
饲粮 Diets
LEGC LESFC HEGC HESFC
标准误
SEM
犘值犘value
E C EC
pH 6.85 6.90 6.86 6.83 0.01 0.20 0.09 0.55
氨氮 NH3N(mg/dL) 36.38 33.60 33.76 29.62 0.94 0.07 0.69 0.06
微生物蛋白 MCP(mg/mL) 1.19 1.30 1.18 1.27 0.04 0.65 0.34 0.89
总挥发性脂肪酸 TVFA(mmol/L) 62.07b 86.78ab 93.37a 107.11a 5.45 0.02 0.05 0.60
乙酸 Acetate(mmol/L) 36.88b 51.87ab 55.66a 63.52a 3.22 0.02 0.07 0.63
丙酸Propionate(mmol/L) 15.85b 22.73a 23.15a 27.40a 1.45 0.02 0.03 0.58
异丁酸Isobutyrate(mmol/L) 0.75c 0.95bc 1.41a 1.29ab 0.08 <0.01 0.73 0.22
丁酸Butyrate(mmol/L) 6.94b 9.31ab 9.28ab 10.78a 0.53 0.09 0.04 0.57
异戊酸Isovalerate(mmol/L) 1.53b 1.73ab 2.55a 2.54a 0.18 0.01 0.65 0.62
戊酸 Valerate(mmol/L) 1.07 1.20 1.32 1.58 0.10 0.14 0.24 0.86
乙丙比 Acetate/propionate 2.39 2.33 2.46 2.33 0.04 0.58 0.11 0.95
表5 不同饲粮营养水平与体外发酵参数的相关关系
犜犪犫犾犲5 犆狅犲犳犳犻犮犻犲狀狋狊犫犲狋狑犲犲狀犱犻犳犳犲狉犲狀狋犱犻犲狋狊犮犺犲犿犻犮犪犾犮狅犿狆狅狊犻狋犻狅狀狊犪狀犱犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀狆犪狉犪犿犲狋犲狉狊犻狀狏犻狋狉狅
项目
Item
中性洗涤纤维
Neutraldetergent
fiber,NDF
酸性洗涤纤维
Aciddetergent
fiber,ADF
淀粉
Starch
中性洗涤可溶物
Neutraldetergent
soluble,NDS
中性洗涤可溶物/粗蛋白
Neutraldetergentsoluble/
crudeprotein,NDS/CP
非纤维性碳水化合物
Nonfibercarbohydrate,
NFC
总产气量 Totalgas
production(GP48,mL/g)
-0.78 -0.64 0.84 0.78 0.86 0.83
犃 -0.65 -0.46 0.71 0.65 0.72 0.71
犅 -0.03 -0.25 0.40 0.02 0.14 0.04
犆 0.19 0.42 -0.11 -0.19 -0.14 -0.13
犚max犌 -0.55 -0.68 0.36 0.55 0.46 0.49
犜犚max犌 -0.12 -0.20 0.25 0.12 0.30 0.18
  为显著相关(犘<0.05), 为极显著相关(犘<0.01)。meansignificantcorrelation(犘<0.05),meangreatersignificantcorrelation
(犘<0.01).
701第12期 张婷 等:不同能量水平及玉米加工饲粮对瘤胃体外发酵参数的影响
3 讨论
3.1 不同能量水平及玉米加工饲粮对干物质消化率与体外产气参数的影响
饲料在反刍动物瘤胃中微生物分泌的多种酶作用下,分解饲料产生大量挥发性脂肪酸和氨气(ammonia,
NH3)、甲烷(methane,CH4)、二氧化碳(carbondioxide,CO2)等气体。Menke等[21]研究发现,饲料体外发酵的
总产气量与反刍动物体内发酵参数具有高度的相关性。总产气量综合反映了饲料本身的降解特性和微生物生长
的情况。总产气量越大说明饲料可发酵营养水平越多,微生物活性越强;反之,饲料可发酵有机物越少,微生物活
性越弱,产气量越小[22]。
从图1、表3可知,与低能水平相比,高能可以提高总产气量与干物质消化率,这可能由于低能水平的粗饲料
来源为单一的玉米秸秆,纤维含量高,可发酵碳水化合物低,没有足够的可溶物,微生物生长繁殖较慢,故消化率
低,总产气量低[23]。崔彦召等[24]研究表明,蒸汽压片玉米累积产气量显著高于玉米颗粒,与本试验蒸汽压片玉
米组总产气量显著高于普通玉米一致。说明蒸汽压片玉米比普通玉米更有利于瘤胃微生物的降解。玉米经过蒸
汽压片处理后表皮被破碎,使淀粉发生凝胶糊化反应生成α淀粉,淀粉内部支链淀粉向直链淀粉转变增加,从而
更容易被微生物及酶利用[25]。Galyean等[26]研究报道,玉米凝胶糊化程度与体外产气量有很大相关性,糊化程
度越大,产气量越高,且理论最大产气量也接近48h的实测产气量。虽然各组间犚max犌、犜犚max犌不受能量与不同
加工玉米的影响,但在相同能量水平下,蒸汽压片玉米最大产气速率(犚max犌)均有大于普通玉米的趋势,与辛杭书
等[27]研究一致。
3.2 不同能量水平及玉米加工饲粮对瘤胃降解参数的影响
瘤胃微生物对pH值的变化十分敏感,如瘤胃pH值长期低于6.4,瘤胃微生物生长、繁殖,以及发酵底物的
降解和利用将会受到影响[28]。因此,瘤胃pH值对瘤胃发酵起决定性作用。瘤胃pH值主要受饲粮组成和营养
水平的影响,与淀粉消化的相关性很高[29]。谷物经过加工后会增加4~8h时间段内体外培养淀粉的消化率[30],
此时,由于淀粉发酵产酸的缘故,pH值随淀粉消化率的增加而降低。Hales等[31]研究表明,体外培养6h时蒸汽
压片玉米的pH最低,而在培养18和24h时各组间pH值差异不显著。王桂瑛等[32]研究表明,体内试验中粉碎
蒸汽压片玉米与粉碎玉米的瘤胃pH值无显著差异,均在正常范围内,与本研究一致。
氨氮浓度的变化体现了发酵底物蛋白质的降解及瘤胃微生物对N的利用效率,而体外发酵降解的氨氮一部
分会溶解在发酵瓶中,另一部分用来维持微生物生命活动及微生物蛋白的合成。但氨氮浓度过高或过低都不利
于微生物的生长与繁殖。Murphy和Kennely[33]研究表明,微生物发酵的最适氨氮浓度为6.3~27.5mg/dL。
本试验氨氮浓度范围为29.62~36.38mg/dL,各组饲粮氨氮浓度由高到低的顺序为LEGC>LESFC>HEGC>
HESFC。说明各组含氮底物的降解率远大于微生物利用率,发酵瓶内蛋白充足,能量水平与压片玉米组合有利
于微生物对N利用的趋势。李袁飞等[34]研究表明,各组合间氨氮浓度与微生物蛋白在24h时差异显著,在48h
时各组合间微生物蛋白差异不显著,以此来说明48hMCP浓度已经达到了一个动态平衡,与本试验研究一致。
各组间 MCP差异水平可能在4~8h,因为谷物加工的淀粉高消化在4~8h时间段内[30],此时能氮释放同步性
能促使微生物大量繁殖和微生物蛋白合成,由此需做4~8h时间点NH3N、MCP含量来进一步验证。
反刍动物瘤胃发酵所产生的挥发性脂肪酸包括乙酸、丙酸和丁酸、异丁酸、异戊酸、戊酸,其均是能量代谢的
主要能量来源,而乙酸、丙酸和丁酸含量占主要能源物质的80%[35]。乙酸是乳脂合成的主要前体物质,丙酸则是
糖异生的主要前体物质,而肝脏糖异生作用为体内代谢提供葡萄糖。普通玉米高能组总挥发酸、乙酸、丙酸和丁
酸含量均高于低能水平的玉米组,与Corona等[36],Zinn等[37],Plascencia等[38]报道蒸汽压片玉米乙酸含量低于
普通玉米,丁酸含量高于普通玉米的结果不一致。而本试验仅在低能水平下,蒸汽压片玉米组丙酸含量高于普通
玉米组,这与Lee等[39]利用体外法研究蒸汽压片玉米丙酸含量高于普通玉米一致,可能是因为丙酸含量受饲粮
可发酵碳水化合物含量的影响,低能水平下微生物发酵受限,而蒸汽压片玉米技术提高了玉米中淀粉的糊化程
度,更有利于微生物的利用,使能量物质丙酸增加,从而间接提高了能量水平,增强了微生物对营养物质的降解,
导致乙酸产量增加。
801 草 业 学 报 第24卷
3.3 不同能量水平及玉米加工饲粮的营养水平与体外产气参数相关性分析
Meyer和 Wolin[40]研究发现体外发酵的主要气体来源于碳水化合物的发酵,其次是蛋白,而脂肪可以忽略不
计。本试验中48h实测总产气量与NDS和NDS/CP呈正相关性,与崔占鸿等[41]研究一致。NDS中主要成分是
非纤维性碳水化合物、粗蛋白、粗脂肪和矿物质元素等。非纤维性碳水化合物又包括:淀粉、糖、果胶和有机酸等。
矿物质在体外发酵时不产生气体,脂肪产气量可忽略不计,而各处理组间CP含量一致,所以淀粉在饲粮含量中
占很大比重。本试验中48h总产气量与淀粉呈正相关关系,所以48h总产气量主要受饲粮中NDS的影响,其中
又属淀粉贡献最大。即当 NDS含量高,饲粮 NDS/CP值越大,则体外发酵越强,产气量越多。杨红建和冯仰
廉[42]研究表明,在氮供应稳定的情况下,适宜的结构性碳水化合物(structuralcarbohydrates,SC)与非结构性碳
水化合物(nonstructuralcarbohydrates,NSC)比例才能保证瘤胃微生物对淀粉和纤维的最大降解率,因此体外
总产气量受非结构性碳水化合物的影响较大。汤少勋等[43]和Nsahlai等[44]对不同牧草体外发酵研究表明,理论
最大产气量与NDF、ADF呈负相关关系,与本研究48h总产气量与NDF呈显著的负相关关系一致,由于本试验
主要粗饲料来源为玉米秸秆和玉米青贮,可降解碳水化合物少,所以如果含量越多,则产气量随之减少。
4 结论
在以玉米秸秆为主要粗饲料来源饲粮中,通过提高饲粮能量水平可以提高48h总产气量与干物质降解率;
蒸汽压片玉米可以增加48h总产气量;尤其在低能水平下,蒸汽压片玉米对瘤胃发酵的促进作用更为显著。
犚犲犳犲狉犲狀犮犲狊:
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