全 文 ：书山羊草属杀配子染色体２犆特异
犛犆犃犚标记的建立
徐国辉１，郭长虹１，于洪涛１，陈静１，丛雯雯１，远藤隆２
（１．哈尔滨师范大学生命科学与技术学院 黑龙江省分子细胞遗传与遗传育种重点实验室，黑龙江 哈尔滨１５００２５；
２．日本京都大学农学部植物遗传学实验室，日本 京都６０６８５０２）
摘要：用４０条１０碱基随机引物，对普通小麦“中国春”、“中国春”－杀配子染色体２Ｃ二体附加系、柱穗山羊草进行
ＲＡＰＤ分析，筛选到１个杀配子染色体２Ｃ特异引物ＯＰＦ０３。从“中国春”－杀配子染色体２Ｃ二体附加系中克隆了
该ＤＮＡ片段。测序结果表明，该片段长１４９６ｂｐ，与大麦１个ｃＤＮＡ的同源性为９２％。根据ＯＰＦ０３１４９６的序列设
计了１对ＳＣＡＲ引物２ＣＦ５８６、２ＣＲ５８６，对普通小麦“中国春”、“中国春”－杀配子染色体２Ｃ二体附加系、柱穗山羊
草、二倍体长穗偃麦草、“中国春”－长穗偃麦草７Ｅ二体附加系等材料进行了ＳＣＡＲ分析，在“中国春”－杀配子染
色体２Ｃ二体附加系、柱穗山羊草中扩增出了５８６ｂｐ的片段，而在普通小麦“中国春”、二倍体长穗偃麦草、“中国春”
－长穗偃麦草７Ｅ二体附加系中没有该产物，初步证明此标记可以用于杀配子染色体２Ｃ的检测。进一步用该对
ＳＣＡＲ引物对“中国春”－杀配子染色体２Ｃ二体附加系与“中国春”－长穗偃麦草７Ｅ二体附加系的杂种Ｆ１ 代、Ｆ２
代进行了分析，结果在全部Ｆ１ 代以及部分Ｆ２ 代材料扩增出了目的片段，进一步证明了此ＳＣＡＲ标记可以用来检
测小麦背景下的杀配子染色体２Ｃ，为小麦背景中杀配子染色体２Ｃ的快速跟踪检测提供了新途径。
关键词：山羊草；杀配子染色体；ＲＡＰＤ；ＳＣＡＲ
中图分类号：Ｓ５４３＋．９０３．２；Ｑ９４３．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１１）０４０３０５０６
山羊草属（犃犲犵犻犾狅狆狊）植物的一些染色体，当单体附加到不同基因型普通小麦（犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿）中时，具
有完全或不完全的杀配子作用［１］。在不完全杀配子作用下，可高频诱导各种类型的染色体结构变异，变异频率
可达１０％以上，远远高于自发易位、辐射诱发、犘犺基因等其他方法的诱导效率［２］。杀配子染色体不仅可诱导普
通小麦染色体结构变异，而且对附加或代换到普通小麦中的外源染色体也具有同样的功能［３］，这就为小麦的诱变
育种开辟了一条新途径。
杀配子染色体２Ｃ在普通小麦“中国春”等遗传背景下可诱导半致死效应的染色体断裂，使后代产生易位、缺
失等染色体结构畸变［４］。利用杀配子染色体２Ｃ在构建大麦（犎狅狉犱犲狌犿狏狌犾犵犪狉犲）染色体缺失图谱［５］，诱导小麦－
冰草（犃犵狉狅狆狔狉狅狀）［６］易位等方面取得了很好的成效。在杀配子染色体２Ｃ的利用过程中，杂种后代中２Ｃ染色体
的鉴定是非常重要的环节。有很多学者利用分带的方法对后代进行鉴定，但该方法非常繁琐，而且需要结合相关
的细胞学技术。与之相比，利用ＤＮＡ分子标记进行鉴定则是十分方便快捷的途径。
随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ，ｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ）技术具有操作简单、模板ＤＮＡ用量少、
扩增产物多态性高、经济快捷等优点，已经被广泛应用于遗传多样性分析［７，８］、品种鉴定［９］、分子标记辅助育种、基
因定位及遗传图谱构建等多个研究领域。将ＲＡＰＤ标记转化为ＳＣＡＲ（ｓｅｑｕｅｎｃｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄａｍｐｌｉｆｉｅｄｒｅｇｉｏｎ）
标记后，其特异性和稳定性大幅度提高，可以更方便快捷地应用于异源染色体的检测［１０］。
为了获得杀配子染色体２Ｃ的特异分子标记，本研究利用ＲＡＰＤ技术进行了杀配子染色体２Ｃ分子标记的开
发，并将其转化为ＳＣＡＲ标记。对柱穗山羊草（犃犲犵犻犾狅狆狊犮狔犾犻狀犱狉犻犮犪）、“中国春”－杀配子染色体２Ｃ二体附加系
等材料进行了分子标记验证，以期为小麦背景中杀配子染色体的快速检测提供新途径。
第２０卷 第４期
Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．４
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
３０５－３１０
２０１１年８月
收稿日期：２０１００５１０；改回日期：２０１００７１６
基金项目：科技部国际科技合作项目（２００９ＤＦＡ３２４７０），黑龙江省科技攻关项目（ＧＡ０８Ｂ１０４），９７３前期研究专项（２０１１ＣＢ１１１５００），黑龙江省高
校科技创新团队研究计划（２０１０ＴＤ１０）和哈尔滨师范大学科技创新团队研究计划（ＫＪＴＤ２０１１２）资助。
作者简介：徐国辉（１９８０），女，黑龙江哈尔滨人，在读博士。Ｅｍａｉｌ：ｘｕｇｈ５２０＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｋａｋｕ２００８＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
１ 材料与方法
１．１ 材料
供试材料为柱穗山羊草、“中国春”－杀配子染色体２Ｃ二体附加系（２狀＝４４ＡＡＢＢＤＤ＋２ＣⅡ）和“中国春”－
长穗偃麦草（犜犺犻狀狅狆狔狉狌犿犲犾狅狀犵犪狋狌犿）７Ｅ二体附加系（２狀＝４４ＡＡＢＢＤＤ＋７ＥⅡ），来自于日本国家生物资源计划
小麦中心（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｈｉｇｅｎ．ｎｉｇ．ａｃ．ｊｐ／－ｗｈｅａｔ／ｋｏｍｕｇｉ／ｔｏｐ．ｊｓｐ），２００９年１月将材料种于哈尔滨师范大学
分子细胞遗传与遗传育种温室，２个月后提取ＤＮＡ进行分子标记筛选试验；普通小麦“中国春”，“中国春”－长穗
偃麦草７Ｅ二体附加系与“中国春”－杀配子染色体２Ｃ二体附加系杂交获得的Ｆ１、Ｆ２ 代（来自于哈尔滨师范大学
分子细胞遗传与遗传育种重点实验室）。２００９年４月将Ｆ１ 代种于哈尔滨师范大学分子细胞遗传与遗传育种重
点试验苗圃基地，３个月后获得Ｆ２ 代。
１．２ 试验方法
１．２．１ 小麦ＤＮＡ提取 用ＣＴＡＢ法（ｈｅｘａｄｅｃｙｌｔｒｉｍｅｔｈｙａｍｍｏｎｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ，十六烷基三甲基溴化铵）提取小
麦幼苗ＤＮＡ［１１］。紫外分光光度计测定ＤＮＡ的浓度和纯度，０．８％琼脂糖凝胶电泳检测ＤＮＡ质量，调整其浓度
至１００ｎｇ／μＬ，用于分子标记分析。
１．２．２ ＲＡＰＤ分析 ＲＡＰＤ扩增引物为上海生工公司合成的１０碱基核苷酸，共合成４０条引物。ＰＣＲ反应体
系为２５μＬ，其中包括：１×ＰＣＲＢｕｆｆｅｒ，２．５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２，０．１ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰｓ，４０ｎｇ引物，１ＵＴａｑ酶，４０ｎｇ
ＤＮＡ模板。反应在Ｂｉｏｍｅｔｒａ１７０４２１４型ＰＣＲ扩增仪上进行，扩增条件为：９４℃预变性３ｍｉｎ，９４℃变性１５ｓ，
３６℃复性３０ｓ，７２℃延伸４５ｓ，４６个循环结束后７２℃延伸１０ｍｉｎ。ＰＣＲ扩增产物经１．２％的琼脂糖凝胶电泳进
行检测，ＢＩＯＲＡＤ紫外仪扫描，拍照。
１．２．３ ＲＡＰＤ产物的回收、克隆 在琼脂糖凝胶中将２Ｃ基因组特异的条带部分切下，并用ＤＮＡ回收试剂盒
（ＤＶ８０５Ａ）进行回收，用ｐＧＥＭＴｅａｓｙ试剂盒（美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司）进行 ＤＮＡ片段的克隆，经菌落ＰＣＲ和
犈犮狅ＲＩ酶切鉴定，选取插入片段大小符合要求的克隆送交上海生工进行测序，将得到的核苷酸序列在ＮＣＢＩＧｅｎ
Ｂａｎｋ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）中进行比对。
１．２．４ ＳＣＡＲ分析 将ＲＡＰＤ扩增条件调整为５０ｎｇ引物、５０ｎｇＤＮＡ模板、ＭｇＣｌ２１．５ｍｍｏｌ／Ｌ、５３℃复性、３５
个循环外，其他同ＲＡＰＤ分析。
２ 结果与分析
２．１ 杀配子染色体２Ｃ特异ＲＡＰＤ标记的筛选与分析
利用４０条ＲＡＰＤ引物，对普通小麦“中国春”、普通小麦“中国春”－杀配子染色体２Ｃ二体附加系、柱穗山羊
草等材料进行扩增筛选，发现引物ＯＰＦ０３（ＣＣＴＧＡＴＣＡＣＣ）在普通小麦“中国春”－杀配子染色体２Ｃ二体附加
系、柱穗山羊草中扩增出１条１４００ｂｐ左右的片段，此产物在普通小麦“中国春”中没有出现（图１），表明这个片
段是杀配子染色体２Ｃ所特有的。
２．２ 杀配子染色体２Ｃ特异ＲＡＰＤ片断的序列分析
从普通小麦“中国春”－杀配子染色体２Ｃ二体附加系中回收了该特异片段，将其克隆并测序。结果表明（图
２），该片段全长为１４９６ｂｐ，命名为ＯＰＦ０３１４９６，在ＧｅｎｅＢａｎｋ中进行Ｂｌａｓｔ同源性搜索，结果发现它与大麦的１个
ｃＤＮＡ克隆序列同源性达９２％。
２．３ 杀配子染色体２ＣＳＣＡＲ标记的建立与验证
为了寻找２Ｃ染色体组的特异片段，在该特异片段与大麦的ｃＤＮＡ克隆片段的非同源区段进行引物设计，将
ＯＰＦ０３１４９６序列输入 ＰｒｉｍｅｒＰｒｅｍｉｅｒ５．０软件，设计了１对 ＰＣＲ 引物，其序列为２ＣＦ５８６：５′ＴＣＴＧＴＣＧＧ
ＧＡＡＡＣＴＡＡＴＴ３′；２ＣＲ５８６：５′ＡＡＧＡＴＡＧＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧ３′，这对引物的扩增片段长度为５８６ｂｐ，在普通
小麦“中国春”－杀配子染色体２Ｃ二体附加系、柱穗山羊草材料中都能扩增出此片段，而在“中国春”、二倍体长
穗偃麦草、“中国春”－长穗偃麦草７Ｅ二体附加系中没有此片段（图３）。表明该片段为杀配子染色体２Ｃ所特有。
６０３ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１１） Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．４
图１ 犚犃犘犇引物在普通小麦 “中国春”、杀配子染色体２犆二体附加系、柱穗山羊草３种材料中的扩增结果
犉犻犵．１ 犜犺犲犪犿狆犾犻犳犻犮犪狋犻狅狀狉犲狊狌犾狋狊狅犳犚犃犘犇狆狉犻犿犲狉狊犻狀犆犛，犆犛２犆犱犻狊狅犿犻犮犪犱犱犻狋犻狅狀犾犻狀犲犪狀犱犃．犮狔犾犻狀犱狉犻犮犪
ａ：普通小麦“中国春”ＣｏｍｍｏｎｗｈｅａｔＣＳ（Ｃｈｉｎｅｓｅｓｐｒｉｎｇ）；ｂ：“中国春”－杀配子染色体２Ｃ二体附加系ＣＳ２Ｃｄｉｓｏｍｉｃａｄｄｉｔｉｏｎｌｉｎｅ；ｃ：柱穗山羊草
犃．犮狔犾犻狀犱狉犻犮犪；Ｍ：ＤＬ２０００ｍａｒｋｅｒ；ＯＰＦ０３，ＬＷ７，ＬＷ８，ＬＷ９均为ＲＡＰＤ引物 ＯＰＦ０３，ＬＷ７，ＬＷ８，ＬＷ９ａｒｅａｌＲＡＰＤｐｒｉｍｅｒｓ
图２ 犗犘犉０３１４９６的核苷酸序列
犉犻犵．２ 犖狌犮犾犲狅狋犻犱犲狊犲狇狌犲狀犮犲狅犳犗犘犉０３１４９６
下划线为ＳＣＡＲ引物位置 ＵｎｄｅｒｌｉｎｅｉｎｄｉｃａｔｅｄｌｏｃａｔｉｏｎｏｆＳＣＡＲｍａｒｋｅｒ
２．４ 利用ＳＣＡＲ标记鉴定杀配子染色体２Ｃ的杂种后代
用ＳＣＡＲ引物２ＣＦ５８６、２ＣＲ５８６对“中国春”－长穗偃麦草７Ｅ二体附加系与“中国春”－杀配子染色体２Ｃ二
体附加系的杂种Ｆ１ 代、Ｆ２ 代材料进行了鉴定（图４）。结果表明，在Ｆ１ 代材料中均扩增出了５８６ｂｐ的产物，符合
理论预期。在１１５株Ｆ２ 代材料中扩增结果出现分离现象，其中有６５株Ｆ２ 材料（５６．５２％）中有扩增产物，说明在
这些材料中存在２Ｃ染色体，其余５０株材料（４３．４８％）中没有扩增产物，说明这些材料中没有２Ｃ染色体。
３ 讨论
小麦育种中，通过易位的方法转移野生近缘种属的优良基因已被实践证明是一条卓有成效的途径。获得易
位系的方法有很多种，如利用辐射诱发异源易位［１２］、通过调节犘犺基因的作用诱发部分同源染色体交换［１３，１４］、利
７０３第２０卷第４期 草业学报２０１１年
用着丝点断裂与融合诱发易位、通过组织培养诱发易
图３ 犛犆犃犚标记在柱穗山羊草、“中国春”－杀配子染色体
２犆二体附加系、二倍体长穗偃麦草、“中国春”－长穗
偃麦草７犈二体附加系中的扩增结果
犉犻犵．３ 犜犺犲犪犿狆犾犻犳犻犮犪狋犻狅狀狉犲狊狌犾狋狊狅犳犛犆犃犚狆狉犻犿犲狉狊犻狀
犃．犮狔犾犻狀犱狉犻犮犪，犆犛２犆犱犻狊狅犿犻犮犪犱犱犻狋犻狅狀犾犻狀犲，
犜犺犻狀狅狆狔狉狌犿犲犾狅狀犵犪狋狌犿 （２犡），犆犛７犈
犱犻狊狅犿犻犮犪犱犱犻狋犻狅狀犾犻狀犲
１：柱穗山羊草犃．犮狔犾犻狀犱狉犻犮犪；２：“中国春”－杀配子染色体２Ｃ二体
附加 系 ＣＳ２Ｃｄｉｓｏｍｉｃａｄｄｉｔｉｏｎｌｉｎｅ；３：“中 国 春”ＣＳ；４：Ｍａｒｋｅｒ
ＤＬ２０００；５：二倍体长穗偃麦草犜．犲犾狅狀犵犪狋狌犿（２Ｘ）；６：“中国春”－长穗
偃麦草７Ｅ二体附加系ＣＳ７Ｅｄｉｓｏｍｉｃａｄｄｉｔｉｏｎｌｉｎｅ
位［１５］、利用杀配子染色体诱导易位等，其中利用杀配
子染色体诱导易位的频率要高于其他方法。但由于缺
乏有效的检测技术，而限制了这些材料的进一步研究
利用。因此，进一步探索和发展快速、有效的检测技
术，对进一步推动远缘杂交和染色体工程育种，对小麦
种质资源的创造与鉴定，具有十分重要的理论与实践
意义。
ＲＡＰＤ技术由于经济、简单、快速、易于操作等特
点，成为基因标记与定位的重要方法之一。郭长虹
等［１６］利用ＲＡＰＤ标记对杀配子染色体进行了初步的
筛选和鉴定，获得了 ＯＰＦ１４１３００与 ＯＰＱ０９８００、ＯＰＦ
１４１１６０与ＯＰＱ０９７７０、ＯＰＦ１４１２８０等ＲＡＰＤ标记，可以用
于快速跟踪鉴定３Ｃ、Ｇｃｌ、２Ｃ杀配子染色体。但由于
ＲＡＰＤ标记对试验条件敏感，可重复性较差等原因，
限制了该标记在杀配子染色体 ２Ｃ 检测中的应
用［１７，１８］。如果将 ＲＡＰＤ 标记转化为 ＳＣＡＲ 标记，
则可以使鉴定的结果更加稳定、可靠。已有许多研究
图４ 犛犆犃犚标记在犉１、犉２ 中的扩增结果
犉犻犵．４ 犜犺犲犪犿狆犾犻犳犻犮犪狋犻狅狀狉犲狊狌犾狋狊狅犳犛犆犃犚狆狉犻犿犲狉狊犻狀犉１犪狀犱犉２狆狉狅犵犲狀犻犲狊
１：普通小麦－“中国春”ＣｏｍｍｏｎｗｈｅａｔＣＳ；２～１２：“中国春”－长穗偃麦草７Ｅ二体附加系与“中国春”－杀配子染色体２Ｃ二体附加系杂交获得
的Ｆ１代Ｆ１ｐｒｏｇｅｎｉｅｓｏｆＣＳ７ＥｄｉｓｏｍｉｃａｄｄｉｔｉｏｎｌｉｎｅｃｒｏｓｓｅｄｂｙＣＳ２Ｃｄｉｓｏｍｉｃａｄｄｉｔｉｏｎｌｉｎｅ；１３：ＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；１４～２５：Ｆ１代自交获得的Ｆ２代Ｆ２
ｐｒｏｇｅｎｉｅｓｓｅｌｆｃｒｏｓｓｅｄｂｙＦ１ｐｒｏｇｅｎｉｅｓ
者进行了这方面的研究工作。许红星等［１９］进行了小麦抗白粉病基因犘犿６的ＲＡＰＤ标记和ＳＣＡＲ标记的研究，
成功地将１个ＲＡＰＤ标记Ｓ１３８转化为稳定的ＳＣＡＲ标记ＳＣＡＲ４４３，并对含不同抗白粉病基因的品种进行了
ＳＣＡＲ分析。Ｌｉｕ等［２０］利用ＲＡＰＤ分析克隆到了１个非洲黑麦（犛犲犮犪犾犲犮犲狉犲犪犾犲）基因组特异序列ｐＳａＤ１５９４０，并
将其转化成了ＳＣＡＲ标记ＳＣＡＲ８８７。经原位杂交鉴定证明该标记分布在所有黑麦染色体上（端粒部位除外），该
标记可以用于跟踪小麦－黑麦染色体渐渗系。本研究建立了杀配子染色体２Ｃ的ＳＣＡＲ标记。用该分子标记鉴
定了“中国春”－杀配子染色体７Ｅ二体附加系与“中国春”－长穗偃麦草２Ｃ二体附加系的杂种Ｆ１、Ｆ２ 代材料。
该杂交组合Ｆ１ 代植株的染色体组构型为２１Ⅱ＋７ＥⅠ＋２ＣⅠ，所有的材料用ＳＣＡＲ标记检测均表现为阳性。附
８０３ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１１） Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．４
加１条２Ｃ杀配子染色体的Ｆ１ 代材料在产生配子时，在不带有杀配子染色体的配子中会发生一定频率的染色体
断裂，雌雄配子在减数分裂的过程中发生了很复杂的行为变化，配子之间的结合类型有很多种，Ｆ２ 代材料染色体
数从３８～４６条不等，有的含有杀配子染色体，有的不含有杀配子染色体。用ＳＣＡＲ标记进行检测，可以快速判
定杂种后代材料中是否含有杀配子染色体，如染色体数为４２的植株，如果用Ｅ组的分子标记进行鉴定为阳性，
而用２Ｃ的分子标记鉴定为阴性，就可以初步判断该株系不含有杀配子染色体，且可能为小麦－偃麦草染色体易
位系。其他染色体数的植株，也可以通过Ｅ组、Ｃ组２种分子标记初步进行染色体组构型的鉴定。
本研究建立的杀配子染色体２Ｃ的ＳＣＡＲ标记，在其他的小麦族植物中也有可能有广泛的应用价值。目前，
许多研究者已经利用来自柱穗山羊草的杀配子染色体２Ｃ创制小麦与黑麦、大麦、大赖草（犔犲狔犿狌狊狉犪犮犲犿狅狊狌狊）、冰
草属等染色体的易位系。在这些易位系后代鉴定的过程中，如果该ＳＣＡＲ标记在黑麦、大麦、大赖草、冰草等基
因组中不具有同源性或同源性极低，那么利用它就可以快速跟踪鉴定后代中杀配子染色体２Ｃ的有无，再结合细
胞学技术，就能快速鉴定后代植株的染色体组型，从而缩短整个鉴定周期，也拓宽了该ＳＣＡＲ标记的应用范围。
另外，还计划利用分带、ＦＩＳＨ等技术将该标记在２Ｃ染色体上进行定位，为构建杀配子染色体２Ｃ的物理图谱奠
定基础。
４ 结论
获得了１个山羊草杀配子染色体２Ｃ的ＲＡＰＤ标记ＯＰＦ０３１４９６，并将其转化为稳定的ＳＣＡＲ标记ＳＣＡＲ５８６。
利用该ＳＣＡＲ５８６标记，可以快速跟踪鉴定小麦与杀配子染色体２Ｃ杂交后代中的２Ｃ染色体，加快遗传育种
进程。
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９０３第２０卷第４期 草业学报２０１１年
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ｃｈｒｏｍａｔｉｎｉｎｗｈｅａｔｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ［Ｊ］．Ｅｕｐｈｙｔｉｃａ，２００８，１５９：２４９２５８．
犈狊狋犪犫犾犻狊犺犿犲狀狋狅犳犪犵犪犿犲狋狅犮犻犱犪犾犮犺狉狅犿狅狊狅犿犲２犆狊狆犲犮犻犳犻犮犛犆犃犚犿犪狉犽犲狉
ＸＵＧｕｏｈｕｉ１，ＧＵＯＣｈａｎｇｈｏｎｇ１，ＹＵＨｏｎｇｔａｏ１，ＣＨＥＮＪｉｎｇ１，ＣＯＮＧＷｅｎｗｅｎ１，ＥＮＤＯＴＲ２
（１．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄＣｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，ＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｌｏｇｙ，Ｈａｒｂｉｎ
ＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ１５００２５，Ｃｈｉｎａ；２．ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｌａｎｔＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｇｒａｄｕａｔｅ
ＳｃｈｏｏｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，ＫｙｏｔｏＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｙｏｔｏ６０６８５０２，Ｊａｐａｎ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ａｔｏｔａｌｏｆ４０ｄｅｃａｍｅｒｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｗｅｒｅｕｓｅｄａｓｐｒｉｍｅｒｓｔｏｐｅｒｆｏｒｍｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）ａｎａｌｙｓｉｓｏｎｃｏｍｍｏｎｗｈｅａｔＣＳ（Ｃｈｉｎｅｓｅｓｐｒｉｎｇ），ＣＳ２Ｃｄｉｓｏｍｉｃａｄｄｉｔｉｏｎｌｉｎｅ，犃犲犵犻犾狅狆狊犮狔犾犻狀
犱狉犻犮犪．Ｏｆｔｈｅｓｅｐｒｉｍｅｒｓ，ｏｎｅｃｏｕｌｄａｍｐｌｉｆｙａｓｐｅｃｉｆｉｃＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｉｎＣＳ２Ｃｄｉｓｏｍｉｃａｄｄｉｔｉｏｎｌｉｎｅａｎｄ犃．犮狔
犾犻狀犱狉犻犮犪．ＴｈｅｆｒａｇｍｅｎｔＯＰＦ０３１４９６ｗａｓｃｌｏｎｅｄａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｄ；ＳｅｑｕｅｎｃｅｄａｔａｓｅａｒｃｈｉｎｇｉｎＧｅｎＢａｎｋｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ
ｔｈｉｓｆｒａｇｍｅｎｔｗａｓ９２％ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｔｏａｃｌｏｎｅｄｃＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｆｒｏｍ Ｂａｒｌｅｙ．Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆ
ＯＰＦ０３１４９６，ａｐａｉｒｏｆＳＣＡＲ （ｓｅｑｕｅｎｃｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄａｍｐｌｉｆｉｅｄｒｅｇｉｏｎ）ｐｒｉｍｅｒ２ＣＦ５８６，２ＣＲ５８６ ｗａｓｄｅｓｉｇｎｅｄ．
ＳＣＡＲａｎａｌｙｓｅｓｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎＣＳ，ＣＳ２Ｃｄｉｓｏｍｉｃａｄｄｉｔｉｏｎｌｉｎｅ，犃．犮狔犾犻狀犱狉犻犮犪，ａｎｄ犜犺犻狀狅狆狔狉狌犿犲犾狅狀犵犪
狋狌犿 （２Ｘ）ＣＳ７Ｅｄｉｓｏｍｉｃａｄｄｉｔｉｏｎｌｉｎｅ．ＴｈｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＳＣＡＲｐｒｉｍｅｒｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅＳＣＡＲ５８６
ｍａｒｋｅｒａｐｐｅａｒｅｄｉｎｔｈｅＣＳ２Ｃｄｉｓｏｍｉｃａｄｄｉｔｉｏｎｌｉｎｅａｎｄ犃．犮狔犾犻狀犱狉犻犮犪ｂｕｔｎｏｔｉｎＣＳ，犜．犲犾狅狀犵犪狋狌犿 （２Ｘ）ＣＳ
７Ｅｄｉｓｏｍｉｃａｄｄｉｔｉｏｎｌｉｎｅ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ＳＣＡＲａｎａｌｙｓｅｓｗｅｒｅａｌｓｏｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎＦ１ａｎｄＦ２ｐｒｏｇｅｎｉｅｓｂｅｔｗｅｅｎ
ＣＳ２ＣａｎｄＣＳ７Ｅｄｉｓｏｍｉｃａｄｄｉｔｉｏｎｌｉｎｅｓ．ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅＳＣＡＲ５８６ｍａｒｋｅｒｗａｓｉｎａｌ
ｏｆｔｈｅＦ１ｐｒｏｇｅｎｉｅｓｂｅｔｗｅｅｎＣＳ２ＣａｎｄＣＳ７ＥａｎｄｉｎｓｏｍｅｏｆｔｈｅＦ２ｐｒｏｇｅｎｉｅｓ．ＴｈｅＳＣＡＲ５８６ｍａｒｋｅｒｃａｎｂｅｕｓｅｄ
ｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅｇａｍｅｔｏｃｉｄａｌｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ２Ｃｉｎｃｏｍｍｏｎｗｈｅａｔｂａｃｋｇｒｏｕｎｄｓ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犃犲犵犻犾狅狆狊；ｇａｍｅｔｏｃｉｄａｌｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ；ＲＡＰＤ；ＳＣＡＲ
０１３ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１１） Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．４