全 文 ：书梅山与长白母猪粪样微生物体外发酵
八种纤维底物的特性比较
艾丽霞，苏勇，朱伟云
（南京农业大学动物科技学院消化道微生物研究室，江苏 南京２１００９５）
摘要：本研究旨在比较不同品种母猪（梅山猪与长白猪）粪样中微生物对不同纤维底物的体外降解能力，同时分析
粪样中的主要纤维降解菌数量。采集梅山（狀＝５）和长白（狀＝５）母猪新鲜粪样作为发酵接种物，以果胶、纤维素、菊
粉、麦壳、麸皮、木聚糖、玉米芯渣及苜蓿作为纤维底物进行体外发酵，测定产气量和发酵液挥发性脂肪酸（ｖｏｌａｔｉｌｅ
ｆａｔｔｙａｃｉｄ，ＶＦＡ）浓度。粪样同时用于提取细菌总核酸，变性梯度凝胶电泳（ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，
ＤＧＧＥ）和ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ对菌群区系进行分析。体外发酵结果表明，从发酵后９ｈ至９６ｈ结束，长白猪接种物各组
的累积产气量、有机物校正产气量分别显著（犘＜０．０５）和极显著（犘＜０．０１）高于梅山猪，长白猪Ｔ１／２和犜ｍａｘ显著低
于梅山猪（犘＜０．０５），且发酵终产物中乙酸和总ＶＦＡ浓度显著高于梅山猪接种物（犘＜０．０５），整个发酵过程中不
同底物间累积产气量差异显著（犘＜０．０５），累积产气量从高到低的组别依次为：菊粉＞麸皮＞果胶＞苜蓿＞麦壳＞
玉米芯渣＞木聚糖＞纤维素。ＤＧＧＥ分析表明，梅山与长白母猪粪样菌群图谱中存在许多共同条带。Ｒｅａｌｔｉｍｅ
ＰＣＲ定量分析表明，梅山母猪粪样中的总细菌的１６ＳｒＲＮＡ基因拷贝数显著高于长白母猪（犘＜０．０５），而拟杆菌、
产琥珀酸丝状杆菌、黄化瘤胃球菌和白化瘤胃球菌等纤维降解菌数量及其占总菌比例差异均不显著（犘＞０．０５）。
结果显示，尽管２个品种母猪粪样中纤维降解菌数量无显著差异，但是长白母猪粪样微生物体外发酵纤维底物的
能力高于梅山母猪。
关键词：梅山母猪；长白母猪；纤维降解菌；１６ＳｒＲＮＡ基因
中图分类号：Ｓ８２８　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００４５７５９（２０１３）０３００９９０９
犇犗犐：１０．１１６８６／ｃｙｘｂ２０１３０３１３　　
　　日粮纤维在母猪上有很多作用，不仅可以提供能量［１］，还能提高机体健康和繁殖性能，改善动物福利［２，３］。
猪自身不能分泌消化纤维素的酶，纤维素的降解主要依赖于后肠中的数量庞大的微生物，其中细菌数量达到每ｇ
内容物１０１０～１０１１个。
梅山猪是中国太湖猪的一个类群，具有早熟、产仔多、母性好和肉质鲜美等优点。长白猪产于丹麦，是世界著
名瘦肉型猪种，具有生长快、饲料利用率和瘦肉率高等特点。研究表明，相对于生长速度较快的西方外来品种（如
大白猪、长白猪），梅山猪对纤维有较高的消化能力［４］，因此，普遍认为梅山猪较外来品种猪更能够耐受粗饲。但
也有研究发现，梅山猪纤维消化能力并没有优于杜洛克×大白二元杂交猪［５］。体外厌氧发酵技术已被广泛用于
反刍动物对不同饲草的纤维品质的评价，目前，该技术也被成功用于模拟猪后肠微生物降解纤维物质［６］、评定活
性物质对猪肠道微生态系统的影响［７］等方面研究，因此，利用该技术可能对梅山猪和长白猪肠道微生物降解纤维
底物的能力作出客观评价。
近１０多年来，基于１６ＳｒＲＮＡ基因的分子技术已经广泛用于动物肠道微生物研究［８］。目前，在不同基因型
猪肠道菌群差异比较方面，特别是用分子技术分析主要纤维降解菌方面还未见报道。本研究在体外模拟比较梅
山与长白母猪利用不同纤维底物基础上，利用变性梯度凝胶电泳（ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，
ＤＧＧＥ）指纹图谱和ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ技术进一步分析２种母猪粪样菌群区系及主要纤维降解菌的数量差异。
第２２卷　第３期
Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．３
草　业　学　报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ 　　
９９－１０７
２０１３年６月
收稿日期：２０１２０７０２；改回日期：２０１２０９１４
基金项目：国家“９７３”重点基础研究发展计划项目（２０１２ＣＢ１２４７０５），国家自然科学基金青年科学基金项目（３０９０１０３６）和中央高校基本科研业务
费专项基金项目（ＫＹＺ２０１１５３）资助。
作者简介：艾丽霞（１９８７），女，江西东乡人，硕士。Ｅｍａｉｌ：ａｉ．ｌｉｘｉａ＠ｙａｈｏｏ．ｃｎ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｙｏｎｇ．ｓｕ＠ｎｊａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
１　材料与方法
１．１　材料
１．１．１　实验动物与粪样采集　随机选取南京某猪场胎次相近、生理状态相似、采食相同饲粮的梅山和长白母猪
各５头。于２０１１年５月采用直肠采样法收集母猪粪样，置于充有ＣＯ２ 的冰盒中立即带回实验室用作体外发酵
接种物，同时一份样品于－２０℃冷冻保存，用于提取细菌总核酸。
１．１．２　纤维底物　试验共采用８种纤维类底物，分别是：果胶（Ｓｉｇｍａ，美国），微晶纤维素（ＭＦＣ，美国），菊粉
（Ｒｕｉｂｉｏ，德国），木聚糖（Ｓｉｇｍａ，美国），麸皮，麦壳，苜蓿和玉米芯渣。各底物在实验前烘干，粉碎过１ｍｍ 筛。
１．２　方法
１．２．１　体外发酵实验设计　体外发酵实验分为试验组（基础培养基＋接种物＋底物）和对照组（基础培养基＋接
种物），每个发酵组设３个重复，于３７℃恒温培养箱中发酵９６ｈ。接种物分别为梅山母猪和长白母猪粪样，底物
添加量为１％（Ｗ／Ｖ）。
１．２．２　基础培养基成分及配制　体外发酵实验所用基础培养基参照 Ｍｅｎｋｅ等［９］配方配制，每１０００ｍＬ培养基
含：蛋白胨０．２ｇ、ＮＨ４ＨＣＯ３０．４ｇ、ＮａＨＣＯ３３５ｇ、Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ９．４５ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４６．２ｇ、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ
０．６ｇ、ＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ１３．２ｍｇ、ＭｎＣｌ２·４Ｈ２Ｏ１０ｍｇ、ＣｏＣｌ２·６Ｈ２Ｏ１ｍｇ、ＦｅＣｌ３·６Ｈ２Ｏ８ｍｇ、半胱氨酸盐酸盐
１ｇ，加０．１％刃天青１ｍＬ指示培养基厌氧状况。
１．２．３　接种物的稀释和接种　厌氧环境下以无菌０．９％生理盐水对所采集粪样进行５倍稀释，过４层纱布过
滤，然后按每瓶１０ｍＬ接种于含上述培养基的、已高压灭菌的培养瓶中。接种完毕后迅速将发酵瓶置于３７℃恒
温培养箱中，发酵９６ｈ。
１．２．４　底物常规养分测定　参照张丽英［１０］的方法对本研究中使用的４种纤维底物苜蓿、麸皮、麦壳及玉米渣进
行饲料常规养分分析。
１．２．５　产气量的测定　总产气量的测定参照Ｔｈｅｏｄｏｒｏｕ等［１１］和崔占鸿等［１２］的方法，用气压转换仪（ＩＧＥＲ，
ＵＫ）测定瓶中产气量，发酵后１２ｈ内每３ｈ测定１次，而后每６ｈ测定１次。本实验中累积产气量要与各底物的
有机物含量进行校正，累积产气量单位为：ｍＬ／ｇ有机物。根据Ｇｒｏｏｔ等［１３］的方法建立发酵产气动力模型，犌＝
犃／［１＋（犆／狋）犅］。其中，犌为总产气量（ｍＬ／ｇ有机物），犃为渐进产气量，犅为曲线的转换特性，犆为达到总产气
量一半的时间（Ｔ１／２），狋为发酵时间（ｈ），最大产气速率 （犚ｍａｘ）与达最大产气速率的时间（犜ｍａｘ）根据以下公式即
可求得：
犚ｍａｘ＝｛犃×（犆犅）×犅×［犜ｍａｘ（－犅－１）］｝／｛１＋（犆犅）×［犜ｍａｘ（－犅）］｝２
犜ｍａｘ＝犆×｛［（犅－１）／（犅＋１）］（１／犅）｝
１．２．６　挥发性脂肪酸的测定　发酵结束时，每瓶抽取发酵液３ｍＬ，取其中１ｍＬ进行预处理，即取１ｍＬ发酵液
至２ｍＬ离心管中，随后加入０．２ｍＬ的２５％（ｗ／ｖ）偏磷酸巴豆酸混合溶液（巴豆酸做为内标），－２０℃保存过夜，
１２０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取上清液测定。利用毛细管气相色谱（ＧＣ１４Ｂ型岛津气相色谱仪，日本岛津）检
测［１４］，色谱条件为：色谱柱采用毛细吸管柱，柱温１１０℃，汽化温度１８０℃，采用氢离子火焰检测器，检测温度
１８０℃，载气为氮气，压力为０．０６ＭＰａ，氢气压力为０．０５ＭＰａ，氧气压力为０．０５ＭＰａ，灵敏度（档）为１０－１，衰减
３．０。
１．２．７　总细菌ＤＮＡ提取和１６ＳｒＲＮＡ基因片段扩增　称取约０．１ｇ解冻后的粪样至灭菌后的Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管
中，加入１．５ｍＬ的磷酸盐缓冲液（ｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒｓｏｌｕｔｉｏｎ，ＰＢＳ）溶液（ｐＨ＝７．０），涡旋混合，１３０００ｒ／ｍｉｎ离
心５ｍｉｎ，除去上清，参照Ｚｏｅｔｅｎｄａｌ等［１５］的方法，先用珠磨法机械破碎样品，而后用酚和氯仿／异戊醇提取其总
ＤＮＡ。以粪样中总细菌ＤＮＡ作为模板，对细菌的１６ＳｒＲＮＡ基因序列的Ｖ６～Ｖ８区片段进行ＰＣＲ反应，ＰＣＲ
引物为带有ＧＣ夹子的 Ｕ９６８ＧＣ和Ｌ１４０１［１６］。ＰＣＲ产物经１．２％（ｗ／ｖ）琼脂糖凝胶电泳检测。
１．２．８　变性梯度凝胶电泳技术（ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＤＧＧＥ）及图谱分析　参照Ｓｕ等［８］的方
法，对ＰＣＲ扩增产物进行ＤＧＧＥ分析。ＤＧＧＥ采用８％聚丙烯酰胺凝胶（含丙酰胺、二丙酰胺、尿素、甲酰胺和甘
油），尿素浓度梯度为３８％～５２％。电泳采用ＤｃｏｄｅＤＧＧＥ系统（ＢｉｏＲａｄ）：首先在２００Ｖ电压下电泳１０ｍｉｎ，随
００１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．３
后在８５Ｖ的固定电压下电泳１２ｈ。电泳结束后，聚丙烯酰胺凝胶进行硝酸银染色，凝胶显色定影后采用ＧＳ８００
灰度扫描仪（ＢｉｏＲａｄ）扫描。ＤＧＧＥ图谱用ＧｅｌＣｏｍｐａｒⅡ软件进行相似性分析。通过计算条带间的相似性指数
（ｄｉｃｅｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｏｆｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ，ＳＤ）得到图谱相似性［犛犇＝２狀ＡＢ／（狀Ａ＋狀Ｂ），狀Ａ代表泳道Ａ的条带数，狀Ｂ代表泳
道Ｂ的条带数，狀ＡＢ代表泳道Ａ和Ｂ共有的条带数］［１７］。
１．２．９　ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ定量分析　使用ＡＢＩ７５００ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ仪（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｒｍ）对粪样中总细菌、拟
杆菌门（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、琥珀酸丝状杆菌（犉犻犫狉狅犫犪犮狋犲狉狊狌犮犮犻狀狅犵犲狀）、黄化瘤胃球菌（犚狌犿犻狀狅犮狅犮犮狌狊犳犾犪狏犲犳犪犮犻犲狀狊）、
白化瘤胃球菌（犚狌犿犻狀狅犮狅犮犮狌狊犪犾犫狌狊）和溶纤维丁酸弧菌（犅狌狋狔狉犻狏犻犫狉犻狅犳犻犫狉犻狊狅犾狏犲狀）进行定量分析。分别以大肠杆
菌（犈狊犮犺犲狉犻犮犺犻犪犮狅犾犻）、化脓拟杆菌（犅犪犮狋犲狉狅犻犱犲狊狆狔狅犵犲狀狌狊）、琥珀酸丝状杆菌、黄化瘤胃球菌、白化瘤胃球菌和溶
纤维丁酸弧菌的１６ＳｒＲＮＡ基因作为模板制作相应细菌定量的标准曲线。ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ反应体系为２０μＬ：
１０．４μＬＳＹＢＲＧｒｅｅｎＳｕｐｅｒｍｉｘ（ＴＯＹＯＢＯ），１０μｍｏｌ／Ｌ的上、下游引物各０．４μＬ，２μＬ样品ＤＮＡ以及６．８μＬ
无菌水。本实验定量ＰＣＲ分析所用引物及反应程序见表１，引物Ｂａｃｔ１３６９／Ｐｒｏｋ１４９２［１８］用于测定猪粪样中大肠
杆菌１６ＳｒＲＮＡ基因的拷贝数，ＰＣＲ反应程序为：９５℃１０ｍｉｎ，而后９５℃３０ｓ，５６℃１ｍｉｎ，４０个循环。引物
Ｂａｃｔ９３４Ｆ／Ｂａｃｔ１０６０Ｒ［１９］、ＲｆｌａＦ／ＲｆｌａＲ［２０］、ＲａｌｂＦ／ＲｆｌａＲ［２１］、ＦｓｕｃＦ／ＦｓｕｃＲ［２１］和ＢｆｉｂＦ／ＢｆｉｂＲ［２０］分别用于定量猪
粪样中拟杆菌门、产琥珀酸丝状杆菌、黄化瘤胃球菌、白化瘤胃球菌和溶纤维丁酸弧菌，ＰＣＲ反应程序为：９５℃１０
ｍｉｎ，而后９５℃３０ｓ，６０℃下退火及延伸１ｍｉｎ，４０个循环。
表１　本研究所用引物序列
犜犪犫犾犲１　犔犻狊狋狅犳狆狉犻犿犲狉狊狌狊犲犱犻狀狋犺犻狊狊狋狌犱狔
目标菌Ｔａｒｇｅｔｇｒｏｕｐｓ 引物Ｐｒｉｍｅｒｓ 序列５′３′Ｓｅｑｕｅｎｃｅ５′３′ 参考文献Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ
总细菌
Ｔｏｔａｌｂａｃｔｅｒｉａ
Ｕ９６８ＧＣ ＣＧＣＣＣＧＧＧＧＣＧＣＧＣＣＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧ
ＧＧＣＡＣＧＧＧＧＧＧＡＡＣＧＣＧＡＡＧＡＡＣＣＴＴＡＣ
［１６］
Ｌ１４０１ ＣＧＧＴＧＴＧＴＡＣＡＡＧＡＣＣＣ ［１６］
Ｂａｃｔ１３６９ ＣＧＧＴＧＡＡＴＡＣＧＴＴＣＹＣＧＧ ［１８］
Ｐｒｏｋ１４９２ ＧＧＷＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ ［１８］
拟杆菌门
Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ
Ｂａｃｔ９３４Ｆ ＧＧＡＲＣＡＴＧＴＧＧＴＴＴＡＡＴＴＣＧＡＴＧＡＴ ［１９］
Ｂａｃｔ１０６０Ｒ ＡＧＣＴＧＡＣＧＡＣＡＡＣＣＡＴＧＣＡＧ ［１９］
黄化瘤胃球菌
犚．犳犻犪狏犲犳犪犮犻犲狀狊
ＲｆｌａＦ ＣＧＡＡＣＧＧＡＧＡＴＡＡＴＴＴＧＡＧＴＴＴＡＣＴＴＡ ［２０］
ＲｆｌａＲ ＣＧＧＴＣＴＣＴＧＴＡＴＧＴＴＡＴＧＡＧＧＴＡＴＴＡＣＣ ［２０］
白化瘤胃球菌
犚．犪犾犫狌狊
ＲａｌｂＦ ＣＡＡＧＴＣＧＡＡＣＧＡＧＣＧＡＡＡＧＡＧ ［２１］
ＲａｌｂＲ ＣＣＣＧＴＣＣＧＣＣＡＣＴＡＧＣＴＡ ［２１］
琥珀酸丝状杆菌
犉．狊狌犮犮犻狀狅犵犲狀
ＦｓｕｃＦ ＧＴＴＣＧＧＡＡＴＴＡＣＴＧＧＧＣＧＴＡＡＡ ［２０］
ＦｓｕｃＲ ＣＧＣＣＴＧＣＣＣＣＴＧＡＡＣＴＡＴＣ ［２０］
溶纤维丁酸弧菌
犅．犳犻犫狉犻狊狅犾狏犲狀
ＢｆｉｂＦ ＴＡＡＣＡＴＧＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣ ［２１］
ＢｆｉｂＲ ＣＧＴＴＡＣＴＣＡＣＣＣＧＴＣＣＧＣ ［２１］
１．３　数据分析
试验取得的数据经Ｅｘｃｅｌ２００３初步统计处理后，采用ＳＰＳＳ１７．０统计软件对梅山和长白母猪粪样中纤维降
解菌数量进行独立样品狋检验，对体外发酵试验样品进行二因素（接种物来源和底物种类）方差分析。数据以平
均数±标准差（ｍｅａｎｓ±ＳＥＭ）表示，犘＜０．０５表示差异显著。
２　结果与分析
２．１　梅山母猪与长白母猪粪样微生物体外发酵８种底物体外产气模式
发酵９６ｈ有机物校正产气量（ｏｒｇａｎｉｃｍａｔｔｅｒｃｕｍｕｌａｔｉｖｅｖｏｌｕｍｅ，ＯＭＣＶ）、发酵产气量达最大产气量一半的
１０１第２２卷第３期 草业学报２０１３年
时间（Ｔ１／２）、最大发酵速率（犚ｍａｘ）和达到最大发酵速率的时间（犜ｍａｘ）均极显著受底物来源影响（犘＜０．０１），各底
物间除木聚糖与玉米芯渣差异不显著（犘＞０．０５），其余各组间ＯＭＣＶ均差异显著（犘＜０．０５）（表２）。ＯＭＣＶ和
犜ｍａｘ受接种物母猪品种极显著影响（犘＜０．０１），Ｔ１／２受母猪品种影响差异显著（犘＜０．０５），而犚ｍａｘ在两品种间无显
著差异（犘＞０．０５），Ｔ１／２和犜ｍａｘ存在极显著的品种与底物互作效应 （犘＜０．０１）。以同一纤维底物比较梅山和长白
母猪接种物发现，长白母猪粪样微生物发酵麸皮、木聚糖和苜蓿的ＯＭＣＶ显著高于梅山猪。
表２　梅山母猪与长白母猪粪样微生物体外发酵８种底物体外产气模式
犜犪犫犾犲２　犐狀狏犻狋狉狅犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀犵犪狊狆狉狅犱狌犮狋犻狅狀犽犻狀犲狋犻犮狊狅犳犲犻犵犺狋犱犻犳犳犲狉犲狀狋犳犻犫犲狉狊狌犫狊狋狉犪狋犲狊
犫狔犳犲犮犪犾犻狀狅犮狌犾犪犳狅狉犿犕犲犻狊犺犪狀犪狀犱犔犪狀犱狉犪犮犲狊狅狑狊
底物Ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ 品种Ｐｉｇｂｒｅｅｄｓ ＯＭＣＶ（ｍＬ／ｇ） Ｔ１／２（ｈ） 犜ｍａｘ（ｈ） 犚ｍａｘ（ｍＬ／ｈ）
麸皮 Ｗｈｅａｔｂｒａｎ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ ２０２．６５８ａ ２１．７６４ａ ９．４１１Ａ ６．２５６ａ
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ １７７．５７６ｂ ２３．５２４ｂ １６．０４７Ｂ ５．５８２ａ
果胶Ｐｅｃｔｉｎ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ １８２．３１４ａ ４７．１４１Ａ １３．７４４ａ ２．９９３Ａ
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ １６０．３３８ａ ６４．７３２Ｂ ２１．６４３ｂ ２．５０５Ｂ
菊粉Ｉｎｉｌｉｎ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ ２４８．０１５ａ ４６．９９１ａ ３１．９９６Ａ ３．９９３ａ
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ ２２７．６４７ａ ４８．４８３ａ ３５．９９４Ｂ ４．４９６ａ
麦壳 Ｗｈｅａｔｈｕｌ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ ９３．４４０ａ ３６．９９３ａ ２．１２９ａ ２．７３９ａ
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ ７６．８０６ａ ２２．０２５ａ ５．９５１ａ ２．５５４ａ
木聚糖Ｘｙｌａｎ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ ５９．４４１ａ ７７．６２５ａ １．１７７ａ １．２０７ａ
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ ４７．６０６ｂ ８８．９８２ａ ２．４０３ａ ０．９６２ｂ
苜蓿Ａｌｆａｌｆａ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ １１５．７５５ａ ３１．８０２Ａ ６．０２７ａ ３．０１６ａ
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ ９１．７３２ｂ ２８．３２９Ｂ １１．５６０ｂ ２．３２２ａ
纤维素Ｃｅｌｕｌｏｓｅ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ ３０．９９０ａ ４０．１３６ａ ０．６５６Ａ ０．９１２Ａ
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ ２４．８３９ａ ３５．１０４ａ ３．４７６Ｂ ０．７５３Ｂ
玉米芯渣 Ｍａｉｚｅｐｕｌｐ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ ６１．１１７ｂ ３４．２７０ａ ８．８５１ａ ２．７７４ａ
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ ５８．０２０ｂ ６２．２３４ｂ ６．６２５ａ １．０８６ａ
平均值标准误ＳＥＭ １０．３９５ ２．９６１ １．５２１ ０．２５２
犘值犘ｖａｌｕｅ 品种Ｂｒｅｅｄ ０．０００ ０．０４４ ０．０００ ０．０５７
底物Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ０．０００ ０．０００ ０．０００ ０．０００
互作Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ０．５４８ ０．００１ ０．００３ ０．４９７
　ＯＭＣＶ：有机物校正产气量 Ｏｒｇａｎｉｃｍａｔｔｅｒｃｕｍｕｌａｔｉｖｅｖｏｌｕｍｅ；Ｔ１／２：产气量达到总产气量一半的时间 Ｈａｌｆｔｉｍｅｏｆａｓｙｍｐｔｏｔｉｃｇａｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ；
犚ｍａｘ：最大产气速率 Ｍａｘｉｍａｌｒａｔｅｏｆｇａｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ；犜ｍａｘ：达到最大产气速率的时间Ｔｉｍｅｏｆｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅｏｆ犚ｍａｘ。同一底物不同品种数据含不同小写
字母表示差异显著（犘＜０．０５）；含不同大写字母表示差异极显著（犘＜０．０１）。Ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｅｔｔｅｒｓｍｅａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ犘＜０．０５，ｔｈｅ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃａｐｉｔａｌｌｅｔｔｅｒｓｍｅａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ犘＜０．０１．下同。Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
２．２　发酵９６ｈ终末产物中挥发性脂肪酸（ＶＦＡ）浓度
纤维底物类型极显著影响体外发酵９６ｈ终末产物中乙酸、丙酸、丁酸和总ＶＦＡ浓度（犘＜０．０１）（表３）。乙
酸和总ＶＦＡ极显著受接种物母猪品种影响（犘＜０．０１），而丙酸和丁酸无显著差异（犘＞０．０５）。乙酸和总ＶＦＡ
存在品种与底物互作效应（犘＜０．０５）。以同一纤维底物比较梅山和长白母猪接种物发现，长白母猪粪样微生物
发酵麸皮、果胶、麦壳和苜蓿所产乙酸和总ＶＦＡ均显著高于梅山猪。
２．３　梅山和长白母猪粪样细菌ＤＧＧＥ分析
利用ＤＧＧＥ技术对梅山与长白母猪粪样细菌区系进行分析，２个品种母猪粪样的图谱中有很多共有条带，
未发现图谱中存在品种特有的条带（图１Ａ）。进一步对ＤＧＧＥ图谱进行相似性分析，梅山母猪粪样菌群和长白
母猪的相似性较高，超过６５％，聚类分析未将两品种猪样品归于不同簇（图１Ｂ）。
２０１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．３
表３　梅山猪与长白猪母猪粪样微生物体外发酵８种底物的９６犺终末犞犉犃浓度
犜犪犫犾犲３　犞犉犃犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀狊犻狀犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀犲狀犱狆狉狅犱狌犮狋狊狅犳犲犻犵犺狋犱犻犳犳犲狉犲狀狋狊狌犫狊狋狉犪狋犲狊
犫狔犳犲犮犪犾犻狀狅犮狌犾犪犳狉狅犿犕犲犻狊犺犪狀犪狀犱犔犪狀犱狉犪犮犲狊狅狑狊
底物
Ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ
品种
Ｐｉｇｂｒｅｅｄｓ
乙酸
Ａｃｅｔａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ）
丙酸
Ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ）
丁酸
Ｂｕｔｙｒａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ）
总ＶＦＡ
ＴｏｔａｌＶＦＡ（ｍｍｏｌ／Ｌ）
麸皮 Ｗｈｅａｔｂｒａｎ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ ３０．８１１Ａ ３．８２２ａ ９．６６３ａ ４４．２９６Ａ
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ ２０．７７９Ｂ ３．６２１ａ １０．１２８ａ ３４．５２７Ｂ
果胶Ｐｅｃｔｉｎ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ ６９．０３９ａ ５．３３４ａ ５．４０８ａ ７９．７８２ａ
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ ５１．１９７ｂ ５．５３３ａ ４．１７４ａ ６０．８９４ｂ
菊粉Ｉｎｉｌｉｎ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ ６０．８３１ａ １０．３８１ａ １２．６６５ａ ８３．８７８ａ
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ ５５．６２９ａ ６．００５ａ ９．９７５ａ ７１．６０９ａ
麦壳 Ｗｈｅａｔｈｕｌ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ ２４．６０７ａ ２．７９９ａ ３．４７９ａ ３０．８８６ａ
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ １８．２２８ａ ２．８３６ａ ３．４６８ａ ２４．５１８ｂ
木聚糖Ｘｙｌａｎ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ ２４．２０６ａ ２．０９７ａ １．８５９ａ ２８．１６２ａ
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ １９．０５８ａ ３．０７７ａ ２．１２７ａ ２４．２６２ａ
苜蓿Ａｌｆａｌｆａ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ ３３．４３７ａ ４．５４４ａ ２．９０５ａ ４０．８８５ａ
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ ２５．５４６ｂ ５．５９６ａ ３．２６８ａ ３４．４４１ｂ
纤维素Ｃｅｌｕｌｏｓｅ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ １３．１５９ａ １．２７９ａ ０．７６９ａ １５．２０７ａ
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ ８．３２４ａ １．０１８ａ ０．５４４ａ ９．８８２ａ
玉米芯渣 Ｍａｉｚｅｐｕｌｐ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ １４．４６７ａ １．７９３ａ １．７９２ａ １８．０５０ａ
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ １０．２８６ａ １．７０８ａ １．２４１ａ １３．２３６ａ
平均值标准误ＳＥＭ １．８３３ １．０８１ ０．８２５ ０．２４２
犘值犘ｖａｌｕｅ 品种Ｂｒｅｅｄ ０．０００ ０．５４３ ０．２８０ ０．０００
底物Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ０．０００ ０．０００ ０．０００ ０．０００
互作Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ０．０１４ ０．３０５ ０．５７２ ０．０３５
图１　梅山与长白母猪粪样细菌菌群犇犌犌犈图谱（犃）和相似性聚类图（犅）
犉犻犵．１　犇犌犌犈狆狉狅犳犻犾犲狊（犃）犳狉狅犿犫犪犮狋犲狉犻犪犻狀犳犲犮犲狊狅犳犕犲犻狊犺犪狀犪狀犱犔犪狀犱狉犪犮犲狊狅狑狊犪狀犱狊犻犿犻犾犪狉犻狋狔犪狀犪犾狔狊犻狊（犅）
Ｍ：标准ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；Ｍ１～Ｍ５：梅山母猪 Ｍｅｉｓｈａｎｓｏｗｓ；Ｌ１～Ｌ５：长白母猪Ｌａｎｄｒａｃｅｓｏｗｓ．
３０１第２２卷第３期 草业学报２０１３年
２．４　ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ定量分析粪样中各细菌数
梅山母猪粪样中的总细菌数量显著高于长白母猪（犘＝０．０４５），梅山母猪粪样中溶纤维丁酸弧菌的拷贝数有
高于长白母猪的趋势（犘＝０．０９１）（表４）。而２个品种母猪间拟杆菌门、产琥珀酸丝状杆菌、黄化瘤胃球菌和白化
瘤胃球菌拷贝数差异均不显著（犘＞０．０５）。对各菌群在总菌比例进行分析显示，除梅山母猪粪样中溶纤维丁酸
弧菌占总菌比例有高于长白母猪的趋势（犘＝０．０９１），其他所测菌群占总菌比例在２个品种母猪间差异均不显著
（犘＞０．０５）。
表４　梅山与长白母猪粪样中总细菌和主要纤维降解菌１６犛狉犚犖犃基因拷贝数及占总细菌比例
犜犪犫犾犲４　犙狌犪狀狋犻狋犪狋犻狏犲狉犲犪犾狋犻犿犲犘犆犚犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳１６犛狉犚犖犃犵犲狀犲犮狅狆犻犲狊狅犳狋狅狋犪犾犫犪犮狋犲狉犻犪犪狀犱犿犪犻狀犳犻犫犲狉犱犲犵狉犪犱犻狀犵犫犪犮狋犲狉犻犪
犻狀狋犺犲犳犲犮犪犾狊犪犿狆犾犲狊狅犳犕犲犻狊犺犪狀犪狀犱犔犪狀犱狉犪犮犲狊狅狑狊犪狀犱狋犺犲犻狉狆狉狅狆狅狉狋犻狅狀狊犻狀狋狅狋犪犾犫犪犮狋犲狉犻犪
菌群Ｂａｃｔｅｒｉａｌｇｒｏｕｐｓ
１６Ｓ核糖体ＲＮＡ基因拷贝数
１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅ（Ｌｏｇ１０ｃｏｐｉｅｓ／ｇ）
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ
犘 值
犘ｖａｌｕｅ
占总菌比例
Ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｉｎｔｏｔａｌｂａｃｔｅｒｉａ（％）
梅山 Ｍｅｉｓｈａｎ 长白Ｌａｎｄｒａｃｅ
犘 值
犘ｖａｌｕｅ
总细菌Ｔｏｔａｌｂａｃｔｅｒｉａ １１．１２±０．１７ １０．８３±０．１５ ０．０４５ － － －
拟杆菌门Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ １０．１６±０．３７ ９．９２±０．３３ ０．３５０ １２．１７０±５．３１４ １３．３５０±６．２１９ ０．７８３
琥珀酸丝状杆菌犉．狊狌犮犮犻狀狅犵犲狀犲狊 ９．２２±０．４２ ８．４３±０．９７ ０．２５３ １．５８７±１．２５８ ２．０６５±３．５３９ ０．８３５
黄化瘤胃球菌犚．犳犾犪狏犲犳犪犮犻犲狀狊 ８．６１±０．５４ ９．０１±１．２４ ０．５７６ ０．５１６±０．３５０ ４．３６４±３．７８６ ０．７８３
白化瘤胃球菌犚．犪犾犫狌狊 ６．４９±０．３７ ６．２０±０．０９ ０．１７６ ０．００３±０．００２ ０．００３±０．００１ ０．８１８
溶纤维丁酸弧菌犅．犳犻犫狉犻狊狅犾狏犲狀 ９．９６±０．２８ ９．５６±０．２９ ０．０９１ ８．６７８±５．６７０ ７．５１３±７．８９５ ０．０９１
３　讨论
利用体外发酵产气量方法研究的基础是微生物降解利用纤维底物会产生气体，这个气体可能包括微生物直
接利用降解纤维产生的气体和生成ＶＦＡ时伴随的ＣＯ２ 气体的释放［２２］，所以产气量的数值与纤维被降解的数量
及生成ＶＦＡ的摩尔比例有关，但是这两者很难区分开。基于这２种气体释放都是直接与纤维降解利用有关，一
般仍把某个时间的累积产气量当作微生物活性的指标［１２］。本试验研究发现，至９６ｈ体外发酵结束，长白猪粪样
微生物发酵大多数纤维底物的累积产气量均显著高于梅山猪，且发酵产生乙酸和总ＶＦＡ浓度也显著高于梅山
猪，这些结果提示，长白母猪肠道微生物降解利用纤维的能力不一定低于梅山母猪，这和Ｙｅｎ等［５］研究发现的梅
山猪对粗纤维的降解也未比杜洛克×大白猪高结果相似。
本研究所用底物中麦壳、苜蓿、麸皮、玉米芯渣为常见的纤维饲料原料，由各组不同纤维类型组成。产气量从
高到低依次为麸皮＞苜蓿＞麦壳＞玉米芯渣，通过分析底物的营养成分发现（表５），麸皮的粗纤维含量在４种底
物中最低，而无氮浸出物最高，因此，麸皮组的ＯＭＣＶ最高，产气速度最快。尽管苜蓿中也有较高的粗纤维素含
量，但粗蛋白和无氮浸出物含量明显高于麦壳和玉米芯渣，所以微生物利用发酵产气也较麦壳和玉米芯渣高。玉
米芯渣的中性洗涤纤维含量最高，粗蛋白和无氮浸出物等易发酵有机物含量低，因此，微生物利用发酵产气量最
低。本研究发现，２个品种母猪粪样微生物发酵麸皮和苜蓿产生气体量、产气速度以及产生乙酸和总挥发性脂肪
酸存在显著差异，然而发酵麦壳和玉米芯渣时差异则较小，这可能是因为２个品种母猪微生物在利用易发酵有机
物上存在差异，而非利用纤维物质上，这也与本研究发现的２个品种母猪粪样中主要纤维降解菌无显著差异相吻
合。在４种纯底物中，产气量从高到低依次为菊粉＞果胶＞木聚糖＞纤维素，符合可溶性纤维＞半纤维素＞纤维
素的规律，这与Ｓｕｎｖｏｌｄ等［２３］和Ａｗａｔｉ等［２４］报道结果一致。
微生物利用不同底物发酵产生的ＶＦＡ主要包括乙酸、丙酸和丁酸。本研究中，８种底物发酵产生的ＶＦＡ中
均以乙酸产生量最大，这与Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ等［２５］报道的结果一致，纤维类有机物更趋向于乙酸发酵，并且，对于不同底
物的发酵产生ＶＦＡ，２个品种母猪间差异也主要表现在乙酸方面。
４０１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．３
表５　纤维底物的成分
犜犪犫犾犲５　犖狌狋狉犻犲狀狋犮狅犿狆狅狊犻狋犻狅狀狊狅犳狋犺犲犱犻犳犳犲狉犲狀狋犳犻犫犲狉狊狌犫狊狋狉犪狋犲狊 ％
纤维底物Ｆｉｂｅｒｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ 粗蛋白ＣＰ 乙醚浸提物ＥＥ 粗灰分Ａｓｈ 粗纤维ＣＦ 中性洗涤纤维ＮＤＦ 酸性洗涤纤维ＡＤＦ
麦壳 Ｗｈｅａｔｈｕｌ ４．５４ ０．６７ １１．７３ ３３．１５ ５５．０７ ２７．１２
苜蓿Ａｌｆａｌｆａ １８．０７ １．６０ ７．５４ ２６．３８ ３５．７５ ２５．３１
麸皮 Ｗｈｅａｔｂｒａｎ １５．４８ ２．５４ ７．５３ １３．０２ ２９．３９ ９．０７
玉米芯渣 Ｍａｉｚｅｐｕｌｐ ２．３２ ０．４４ ２．９２ ３０．９８ ７５．３５ ３６．４２
　ＣＰ：Ｃｒｕｄｅｐｒｏｔｅｉｎ；ＥＥ：Ｅｔｈｅｒｅｘｔｒａｃｔ；ＣＦ：Ｃｒｕｄｅｆｉｂｅｒ；ＮＤＦ：Ｎｅｕｔｒａｌｄｅｔｅｒｇｅｎｔｆｉｂｅｒ；ＡＤＦ：Ａｃｉｄｄｅｔｅｒｇｅｎｔｆｉｂｅｒ．
本研究利用ＤＧＧＥ技术比较梅山母猪和长白母猪粪样菌群图谱发现，２种基因型母猪间并没有显著差异，
同时ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ分析也表明梅山母猪和长白母猪粪样中拟杆菌门数量没有显著差异，这与在小鼠、猪和人方
面的研究报道的肥胖型宿主肠道内拟杆菌门数量和占总菌比例均低于普通宿主不一致［１９］。其可能原因是２种
猪生长在相同的环境中，饲喂同样的日粮，而很多研究已表明，日粮和环境是决定菌群结构差异的最重要因
素［２６］。另一可能原因是ＤＧＧＥ技术只能对样品中的优势菌群进行分析，占总菌比例低于１％的菌群通常被忽
略［１４］。本研究发现，梅山和长白母猪粪样中的拟杆菌、产琥珀酸丝状杆菌、黄化瘤胃球菌、白化瘤胃球菌和溶纤
维丁酸弧菌等主要纤维降解菌差异均不显著。Ｙｅｎ等［５］利用最大可能计数法分析也发现，梅山猪粪样中纤维降
解菌与杜洛克×大白猪差异不显著，其数量为每ｇ粪样１０６，而本研究利用定量ＰＣＲ检测的数量显著高于这一结
果，这表明，利用传统培养手段会低估纤维降解菌的数量。
本研究结果说明，我国的地方猪种较外来品种猪耐受粗饲的原因并不是有更多的纤维降解菌从而具备更高
的纤维降解能力。当前，纤维在单胃动物肠道健康方面的作用已经受到重视，猪肠道纤维降解菌群研究近年来也
逐渐受到关注。尽管本研究发现梅山母猪和长白母猪粪样中主要纤维降解菌数量并没有显著差异，但在不同品
种猪肠道微生物降解纤维产物对宿主代谢作用的深层机制还有待进一步探索。
参考文献：
［１］　ＬｅｅＰ，ＣｌｏｓｅＷ Ｈ．Ｂｕｌｋｙｆｅｅｄｓｆｏｒｐｉｇｓ：Ａｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｏｆｓｏｍｅｎｏｎｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌａｓｐｅｃｔｓ［Ｊ］．ＬｉｖｅｓｔｏｃｋＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎＳｃｉｅｎｃｅ，
１９８７，１６：３９５４０５．
［２］　ＭａｔｔｅＪＪ，ＲｏｂｅｒｔＳ，ＧｉｒａｒｄＣＬ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｂｕｌｋｙｄｉｅｔｓｂａｓｅｄｏｎｗｈｅａｔｂｒａｎｏｒｏａｔｈｕｌｓｏｎｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆ
ｓｏｗｓｄｕｒｉｎｇｔｈｅｉｒｆｉｒｓｔｔｗｏｐａｒｉｔｉｅｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，１９９４，７２：１７５４１７６０．
［３］　ＳｈｉｍＳＢ，ＶｅｒｄｏｎｋＪＭＡＪ，ＰｅｌｉｋａａｎＷＦ，犲狋犪犾．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｆａｅｃｅｓｆｒｏｍｗｅａｎｅｄａｎｄｕｎｗｅａｎｅｄｐｉｇｓ
ｉｎｒｅｌａｔｉｏｎｔｏ犻狀狏犻狋狉狅ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｏｕｒｃｅｓｏｆｉｎｕｌｉｎｔｙｐｅｏｌｉｇｏｆｒｕｃｔｏｓｅａｎｄｐｉｇｆｅｅｄｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ［Ｊ］．ＡｓｉａｎＡｕｓｔｒａｌ
ｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，２００７，２０：１４４４１４５２．
［４］　ＫｅｍｐＢ，ｄｅｎＨａｒｔｏｇＬＡ，ＫｌｏｋＪＪ，犲狋犪犾．Ｔｈｅｄｉｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｙｏｆｎｕｔｒｉｅｎｔｓ，ｅｎｅｒｇｙａｎｄｎｉｔｒｏｇｅｎｉｎｔｈｅＭｅｉｓｈａｎａｎｄＤｕｔｃｈＬａｎｄ
ｒａｃｅｐｉｇ［Ｊ］．ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＮｕｔｒｉｔｉｏｎ，１９９０，６５：２６３２６６．
［５］　ＹｅｎＪＴ，ＶａｒｅｌＶＨ，ＮｉｅｎａｂｅｒＪＡ．ＭｅｔａｂｏｌｉｃａｎｄｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎｗｅｓｔｅｒｎｃｒｏｓｓｂｒｅｄａｎｄＭｅｉｓｈａｎｇｒｏｗｉｎｇｐｉｇｓｆｅｄａ
ｈｉｇｈｆｉｂｅｒｄｉｅｔ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，２００４，８２：１７４０１７５５．
［６］　ＩｖｅｓＣＳ，ＳｅｒｇｉｏＬＳ，ＣａｂｒａｌＦｉｌｈｏ，犲狋犪犾．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｉｎｏｃｕｌｕｍｓｏｕｒｃｅｉｎａｇａｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄＳｃｉｅｎｃｅ
ａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００５，１２３１２４：９５１０５．
［７］　于卓腾．大豆黄酮对仔猪肠道微生物的影响和雌马酚产生菌的分离及其特性的研究［Ｄ］．南京：南京农业大学，２００７．
［８］　ＳｕＹ，ＹａｏＷ，ＰｅｒｅｚＯ，犲狋犪犾．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆ犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊ｓｐｐ．ａｎｄ犛狋狉犲狆狋狅犮狅犮犮狌狊狊狌犻狊ｉｎｓｔｏｍａｃｈ，ｊｅｊｕｎｕｍａｎｄｉｌｅ
ｕｍｏｆｐｉｇｌｅｔｓａｆｔｅｒｗｅａｎｉｎｇ［Ｊ］．ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＥｃｏｌｏｇｙ，２００８，６６：５４６５５５．
［９］　ＭｅｎｋｅＫ Ｈ，ＲａｂｂＬ，ＳａｌｅｗｓｋｉＡ，犲狋犪犾．Ｔｈｅｅｓｔｉｍａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｄｉｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｙａｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｓａｂｌｅｅｎｅｒｇｙｃｏｎｔｅｎｔｏｆｒｕｍｉｎａｎｔ
ｆｅｅｄｓｔｕｆｆｓｆｒｏｍｔｈｅｇａｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｗｈｅｎｔｈｅｙａｒｅｉｎｃｕｂａｔｅｄｗｉｔｈｒｕｍｅｎｌｉｑｕｏｒ犻狀狏犻狋狉狅［Ｊ］．ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ
（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ），１９７９，９３：２１７２２２．
５０１第２２卷第３期 草业学报２０１３年
［１０］　张丽英．饲料分析及饲料质量检测技术（第２版）［Ｍ］．北京：中国农业大学出版社，２００３．
［１１］　ＴｈｅｏｄｏｒｏｕＭＫ，ＷｉｌｉａｍｓＢＡ，ＤｈａｎｏａＭＳ，犲狋犪犾．Ａｓｉｍｐｌｅｇａｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｕｓｉｎｇａｐｒｅｓｓｕｒｅｔｒａｎｓｄｕｃｅｒｔｏｄｅｔｅｒ
ｍｉｎｅｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｋｉｎｅｔｉｃｓｏｆｒｕｍｉｎａｎｔｆｅｅｄｓ［Ｊ］．ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９４，４８：１８５１９７．
［１２］　崔占鸿，郝力壮，刘书杰，等．体外产气法评价青海高原燕麦青干草与天然牧草组合效应［Ｊ］．草业学报，２０１２，２１（３）：
２５０２５７．
［１３］　ＧｒｏｏｔＪＣ，ＣｏｎｅＪＷ，ＷｉｌｉａｍｓＢＡ，犲狋犪犾．Ｍｕｌｔｉｐｈａｓｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆｇａｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｋｉｎｅｔｉｃｓｆｏｒ犻狀狏犻狋狉狅ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｒｕｍｉ
ｎａｎｔｆｅｅｄｓ［Ｊ］．ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９６，６４：７７８９．
［１４］　王新峰，毛胜勇，朱伟云．绞股蓝皂甙对体外瘤胃微生物甲烷产量及发酵特性的影响［Ｊ］．草业学报，２０１１，２０（２）：５２５９．
［１５］　ＺｏｅｔｅｎｄａｌＥＧ，ＡｋｋｅｒｍａｎｓＡＤＬ，ｄｅＶｏｓＷ Ｍ．Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｎａｌｙｓｉｓｆｒｏｍｈｕｍａｎｆｅｃａｌｓａｍ
ｐｌｅｓｒｅｖｅａｌｓｓｔａｂｌｅａｎｄｈｏｓｔｓｐｅｃｉｆｉｃｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓｏｆａｃｔｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９８，６４：３８５４
３８５９．
［１６］　ＮüｂｅｌＵ，ＥｎｇｅｌｅｎＢ，ＦｅｌｓｋｅＡ，犲狋犪犾．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｉｅｓｏｆｇｅｎｅｓｅｎｃｏｄｉｎｇ１６ＳｒＲＮＡｓｉｎ犘犪犲狀犻犫犪犮犻犾犾狌狊狆狅犾狔犿狔狓犪ｄｅ
ｔｅｃｔｅｄｂｙｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１９９６，１７８：５６３６５６４３．
［１７］　ＫｏｎｓｔａｎｔｉｎｏｖＳＲ，ＺｈｕＷＹ，ＷｉｌｉａｍｓＢＡ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｆｅｒｍｅｎｔａｂｌｅｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓｏｎｐｉｇｌｅｔｆａｃｉａｌｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ
ａｓｒｅｖｅａｌｅｄｂｙｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆ１６ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌＤＮＡ［Ｊ］．ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＥｃｏｌｏｇｙ，
２００３，４３：２２５２３５．
［１８］　ＳｕｚｕｋｉＭＴ，ＢｅｊａＯ，ＴａｙｌｏｒＬＴ，犲狋犪犾．ＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｍａｌｓｕｂｕｎｉｔｒＲＮＡｇｅｎｅｓｉｎｍｉｘｅｄｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
ｖｉａ５′ｎｕｃｌｅａｓｅａｓｓａｙｓ［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０００，６６：４６０５４６１４．
［１９］　ＧｕｏＸ，ＸｉａＸ，ＴａｎｇＲ，犲狋犪犾．ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲｍｅｔｈｏｄｆｏｒＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓａｎｄＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓｉｎｆａｅｃｅｓａｎｄｉｔｓａｐ
ｐｌｉｃａｔｉｏｎｔｏｑｕａｎｔｉｆｙｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｏｆｏｂｅｓｅａｎｄｌｅａｎｐｉｇｓ［Ｊ］．ＬｅｔｔｅｒｓｉｎＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００８，４７：３６７３７３．
［２０］　ＤｅｎｍａｎＳＥ，ＭｃＳｗｅｅｎｅｙＣＳ．ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲａｓｓａｙｆｏｒｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇａｎａｅｒｏｂｉｃｆｕｎｇａｌａｎｄｃｅｌｕｌｏｌｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｌ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｗｉｔｈｉｎｔｈｅｒｕｍｅｎ［Ｊ］．ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＥｃｏｌｏｇｙ，２００６，５８：５６２５７２．
［２１］　赵玉华．瘤胃微生物ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ定量方法的建立及其应用［Ｍ］．北京：中国农业科学院，２００５．
［２２］　ＶａｎＳｏｅｓｔＰＪ．ＮｕｔｒｉｔｉｏｎａｌＥｃｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅＲｕｍｉｎａｎｔ（２ｎｄｅｄ．）［Ｍ］．Ｉｔｈａｃａ，ＮＹ：ＣｏｒｎｅｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ，１９９４．
［２３］　ＳｕｎｖｏｌｄＧＤ，ＨｕｓｓｅｉｎＨＳ，ＦａｈｅｙＧＣ，犲狋犪犾．犐狀狏犻狋狉狅ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｕｌｏｓｅ，ｂｅｅｔｐｕｌｐ，ｃｉｔｒｕｓｐｕｌｐａｎｄｃｉｔｒｕｓｐｅｃｔｉｎｕ
ｓｉｎｇｆｅｃａｌｉｎｏｃｕｌｕｍｆｒｏｍｃａｔｓ，ｄｏｇｓ，ｈｏｒｓｅｓ，ｈｕｍａｎｓ，ａｎｄｐｉｇｓａｎｄｒｕｍｉｎａｌｆｌｕｉｄｆｒｏｍｃａｔｔｌｅ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，
１９９５，７３：３６３９３６４８．
［２４］　ＡｗａｔｉＡ，ＷｉｌｉａｍｓＢＡ，ＢｏｓｃｈＭ Ｗ，犲狋犪犾．Ｕｓｅｏｆｔｈｅ犻狀狏犻狋狉狅ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅｇａｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｐｉｇｓ：Ａｎｅｘａｍｉｎａ
ｔｉｏｎｏｆａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓｉｎｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｓａｎｄｓｕｂｓｔｒａｔｅｌｏｓｓｅｓａｔｖａｒｉｏｕｓｔｉｍｅｐｏｉｎｔｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，２００６，
８４：１１１０１１１８．
［２５］　ＳｃｈｎｅｉｄｅｒＳＭ，ＦｅｒｎａｎｄＧＰ，ＲｏｄｏｌｐｈｅＡ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｏｔａｌｅｎｔｅｒａｌｎｕｔｒｉｔｉｏｎｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄｗｉｔｈａｍｕｌｔｉｆｉｂｒｅｍｉｘｏｎ
ｆａｅｃａｌｓｈｏｒｔｃｈａｉｎｆａｔｔｙａｃｉｄｓａｎｄｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ［Ｊ］．ＣｌｉｎｉｃＮｕｔｒｉｔｉｏｎ，２００６，２５：８２９０．
［２６］　ＴｉｍｓＳ，ＺｏｅｔｅｎｄａｌＥＪ，ｄｅＶｏｓＷ Ｍ，犲狋犪犾．Ｈｏｓｔｇｅｎｏｔｙｐｅａｎｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｎｍｉｃｒｏｂｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ［Ａ］Ｉｎ：ＮｅｌｓｏｎＫＥ．
ＭｅｔａｇｅｎｏｍｉｃｓｏｆｔｈｅＨｕｍａｎＢｏｄｙ［Ｍ］．ＮｅｗＹｏｒｋ：ＳｐｒｉｎｇｅｒＳｃｉｅｎｃｅ＆ＢｕｓｉｎｅｓｓＭｅｄｉａ，２０１１：１５４１．
６０１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．３
犃犮狅犿狆犪狉犻狊狅狀狅犳犻狀狏犻狋狉狅犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀犮犺犪狉犪犮狋犲狉犻狊狋犻犮狊狅犳犲犻犵犺狋犳犻犫犲狉狊狌犫狊狋狉犪狋犲狊
犫狔犳犪犲犮犪犾犿犻犮狉狅犫犻狅狋犪犳狉狅犿犕犲犻狊犺犪狀犪狀犱犔犪狀犱狉犪犮犲狊狅狑狊
ＡＩＬｉｘｉａ，ＳＵＹｏｎｇ，ＺＨＵ Ｗｅｉｙｕｎ
（ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＧａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００９５，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：犐狀狏犻狋狉狅ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｉｂｅｒｓｕｂｓｔｒａｔｅｓｂｙｆａｅｃａｌｍｉｃｒｏｂｉｏｔａａｎｄｆｉｂｅｒｄｅ
ｇｒａｄｉｎｇｂａｃｅｒｉａｉｎｆａｅｃｅｓｆｒｏｍ ＭｅｉｓｈａｎａｎｄＬａｎｄｒａｃｅｓｏｗｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｆｒｅｓｈｆａｅｃｅｓｆｒｏｍ Ｍｅｉｓｈａｎａｎｄ
Ｌａｎｄｒａｃｅｓｏｗｓｗｅｒｅｃｏｌｅｃｔｅｄａｎｄｕｓｅｄａｓｉｎｏｃｕｌｕｍｉｎａｎ犻狀狏犻狋狉狅ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔｅｓｔ．Ｅｉｇｈｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ，
（ｐｅｃｔｉｎ，ｃｅｌｕｌｏｓｅ，ｘｙｌａｎ，ｉｎｉｌｉｎ，ｗｈｅａｔｈｕｌ，ｗｈｅａｔｂｒａｎ，ｍａｉｚｅｐｕｌｐ，ａｎｄａｌｆａｌｆａ）ｗｅｒｅｕｓｅｄｉｎｔｈｅｔｅｓｔ．Ａｆｔｅｒ
９６ｈｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ｇａｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｗａｓｒｅｃｏｒｄｅｄ，ａｎｄｇａｓｓａｍｐｌｅｓｃｏｌｅｃｔｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅＶＦＡｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ．
ＴｏｔａｌｂａｃｔｅｒｉａｌＤＮＡｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄａｎｄｕｓｅｄｆｏｒＤＧＧＥａｎｄｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲｔｏａｎａｌｙｓｅｍｉｃｒｏｂｉｏｔａｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ
ａｎｄｔｈｅｍａｉｎｆｉｂｅｒｄｅｇｒａｄｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａ．Ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅｇａｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆａｃｅｔａｔｅａｎｄｏｆｔｏｔａｌＶＦＡｓ
ｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒ（犘＜０．０５）ｗｈｅｎｔｈｅｆａｅｃｅｓｆｒｏｍＬａｎｄｒａｃｅｓｏｗｓｗｅｒｅｕｓｅｄａｓｉｎｏｃｕｌｕｍａｓｃｏｍｐａｒｅｄ
ｗｉｔｈｔｈｏｓｅｆｒｏｍＭｅｉｓｈａｎｓｏｗｓ．Ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（犘＞０．０５）ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｐｒｏｐｉｏ
ｎａｔｅａｎｄｂｕｔｙｒａｔｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｂｒｅｅｄｓ．Ｔ１／２ａｎｄＴｍａｘｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒ（犘＜０．０５）ｉｎＬａｎｄｒａｃｅｓｏｗｓ
ｔｈａｎｉｎＭｅｉｓｈａｎｓｏｗｓ．Ｔｈｅｏｒｄｅｒｏｆｄｅｇｒａｄａｂｉｌｉｔｙｏｆａｌｓｕｂｓｔｒａｔｅｓｗａｓ：ｉｎｕｌｉｎ＞ｗｈｅａｔｂｒａｎ＞ｐｅｃｔｉｎ＞ａｌｆａｆａ＞
ｗｈｅａｔｈｕｌ＞ｍａｉｚｅｐｕｌｐ＞ｘｙｌａｎ＞ｃｅｌｕｌｏｓｅ．ＤＧＧＥａｎｌｙｓｉｓｏｆｔｏｔａｌｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅ
ｗｅｒｅｎｏｐｉｇｂｒｅｅｄｓｐｅｃｉｆｉｃｂａｎｄｓｉｎｔｈｅｐｒｏｆｉｌｅｓｆｒｏｍｔｈｅｆａｅｃｅｓｏｆｔｈｅｔｗｏｂｒｅｅｄｓ．ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲａｎａｌｙｓｉｓ
ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｃｏｐｉｅｓｏｆｔｏｔａｌｂａｃｔｅｒｉａｉｎｆａｅｃｅｓｏｆＭｅｉｓｈａｎｓｏｗｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（犘＜０．０５）
ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎＬａｎｄｒａｃｅｓｏｗｓ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（犘＞０．０５）ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅ
ｃｏｐｉｅｓｏｆＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ，犉犻犫狉狅犫犪犮狋犲狉狊狌犮犮犻狀狅犵犲狀犲狊，犚狌犿犻狀狅犮狅犮犮狌狊犳犾犪狏犲犳犪犮犻犲狀狊ａｎｄ犚狌犿犻狀狅犮狅犮犮狌狊犪犾犫狌狊ａｎｄｔｈｅｉｒ
ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｓｗｉｔｈｉｎｔｈｅｔｏｔａｌｂａｃｔｅｒｉａｌｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ａｌｔｈｏｕｇｈｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅｎｕｍｂｅｒｓ
ｏｆｍａｉｎｆｉｂｅｒｄｅｇｒａｄｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａｂｅｔｗｅｅｎＭｅｉｓｈａｎａｎｄＬａｎｄｒａｃｅｓｏｗｓ，ｔｈｅＬａｎｄｒａｃｅｓｏｗｓｍａｙｈａｖｅａｓｔｒｏｎｇｅｒ
ａｂｉｌｉｔｙｔｏｄｅｇｒａｄｅｆｉｂｅｒａｓｃｏｍｐａｒｅｄｔｏＭｅｉｓｈａｎｓｏｗｓ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：Ｍｅｉｓｈａｎｓｏｗ；Ｌａｎｄｒａｃｅｓｏｗ；ｆｉｂｅｒｄｅｇｒａｄｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａ；１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅ
７０１第２２卷第３期 草业学报２０１３年