全 文 ：书不同精粗饲料对泌乳中期山羊氨基酸的
代谢流向及乳蛋白含量的影响
张树坤，姜雪元，倪迎冬，沈向真，庄苏，张源淑
（南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室，江苏 南京２１００９５）
摘要：通过检测泌乳中期山羊血浆及乳中游离氨基酸含量的变化，探讨不同精粗比饲料对机体中氨基酸（ａｍｉｎｏ
ａｃｉｄｓ，ＡＡ）的代谢流向及乳蛋白的影响。选用泌乳中期山羊７只，随机分为２组，分别饲喂精粗比４∶６（低精料组）
和６∶４（高精料组）日粮，颈静脉血管瘘采血，手工挤奶取奶样。Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定乳中总蛋白质浓度，ＲＰ－ＨＰＬＣ
检测山羊血浆和乳中游离氨基酸的含量。结果表明，２组山羊血浆中均分离出１４种游离氨基酸，乳中分离出８种
游离氨基酸，不同精粗比饲料对血液或乳中游离氨基酸谱无明显影响。不同精粗比日粮情况下，除丙氨酸外，血液
中游离氨基酸的含量均高于乳中同种氨基酸的含量；且血液中生酮氨基酸（Ｌｅｕ，Ｌｙｓ）、兼性氨基酸（Ｐｈｅ，Ｉｌｅ）和支
链氨基酸（Ｌｅｕ，Ｉｌｅ和Ｖａｌ）含量显著或极显著高于乳中。高精料组除Ｇｌｙ和Ａｌａ外，其余氨基酸含量均低于低精料
组；乳中总蛋白浓度略高于低精料组，但无统计学差异。表明血液中游离氨基酸为乳蛋白的合成提供了原料和能
量保证。饲喂高精料日粮，血液中游离氨基酸含量较低，不利于乳蛋白含量和产量的提高。
关键词：不同日粮；泌乳中期山羊；血浆；乳；乳蛋白；游离氨基酸
中图分类号：Ｓ８１６．３２；Ｓ８２７．５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１２）０３０２５８０８
乳中的蛋白质统称为乳蛋白（ｍｉｌｋｐｒｏｔｅｉｎ），可以分为酪蛋白（ｃａｓｅｉｎ）和乳清蛋白（ｍｉｌｋｗｈｅｙｐｒｏｔｅｉｎｓ）两大
部分，还含有少量的乳脂肪球膜蛋白。乳蛋白含有机体几乎所有的必需氨基酸，是牛乳的主要营养成分，也是衡
量牛奶品质优劣的重要指标之一［１，２］。近年来，我国奶业发展迅速，但仍存在牛乳中乳蛋白含量低下的问题。乳
蛋白含量低下，一方面严重削弱了我国乳制品在国内外市场的核心竞争力，难以抵御进口冲击，另一方面又导致
国内奶农的生鲜乳卖不出去，经常发生乳品加工企业拒收、奶农倒奶杀牛和诱发生鲜乳中掺假等现象。牛奶营养
品质低下已经对我国的奶业造成了严重的影响，成为我国奶业健康发展面临的主要问题。
氨基酸是构成动物营养所需蛋白质的基本原料，血液中游离氨基酸是乳蛋白的前体物质和合成乳蛋白的原
料，其含量的高低是影响乳蛋白含量的重要因素［２］。已有的研究发现，合适平衡日粮的氨基酸是提高乳蛋白分泌
和产量的重要途径［３５］。另有研究认为血液氨基酸的变化能反映牛奶的产量，当血液中氨基酸流量增大，表示乳
的合成前体浓度增加，有利于乳的生成［６８］。血液中氨基酸的变化与乳蛋白的合成代谢关系的研究一直是研究热
点。血液和乳中游离氨基酸与乳蛋白之间的关系方面的研究目前尚不多见。本试验通过研究饲喂不同精粗比饲
料对泌乳中期山羊血浆及乳中游离氨基酸和乳中总蛋白的影响，探讨血浆及乳中氨基酸和乳中总蛋白之间的关
系，为提高乳蛋白含量探索更合理的日料配比。
１ 材料与方法
１．１ 试验动物
健康泌乳中期母山羊购自浙江省丽水市，为波尔山羊与丽水本地山羊杂交后的杂种羊。
１．２ 试剂
邻苯二甲醛（Ｏｐｈｔｈａｌａｌｄｅｈｙｄｅ，ＯＰＡ，国药集团化学试剂有限公司），β巯基乙醇（βＭＥ，ｓｉｇｍａ），甲醇（德国
默克，色谱级），乙腈（美国天地，色谱级），四氢呋喃（ＴＨＦ，上海凌峰化学试剂有限公司，色谱级），其余试剂均为
２５８－２６５
２０１２年６月
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
第２１卷 第３期
Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．３
收稿日期：２０１１０７１４；改回日期：２０１１１０１９
基金项目：国家重大基础研究发展计划（９７３项目 Ｎｏ．２０１１ＣＢ１００８０２）资助。
作者简介：张树坤（１９８７），男，山东潍坊人，在读硕士。Ｅｍａｉｌ：ｚｓｋ６３３０＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｙｕａｎｓｈｕ＠ｎｊａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
分析纯。
２０种氨基酸标准品纯度均大于９８％，美国 Ｈｏｌｅｙ
教授馈赠。
１．３ 动物分组与饲养
波杂山羊（犆犪狆狉犪犺犻狉犮狌狊）７只，体重１５～２０ｋｇ。
２０１０年１０月１７日将波杂山羊饲养于南京农业大学
农业部动物生理生化重点开放实验室动物房，此时已
泌乳１５～２０ｄ。羊随机分为２组，精料组和粗料组（表
１）。
试验采用２×２拉丁方设计，分２期，每期１４ｄ；前
１周为适应期，适应期后，羊只单栏饲养，精、粗料组分
开饲养，日喂料２次，日挤奶２次（７：００－８：００和
１９：００－２０：００），自由饮水。期间观察奶山羊采食规
律、行为表现和健康，试验期间统计日采食量和日产乳
量。
饲粮由羊草（犔犲狔犿狌狊犮犺犻狀犲狀狊犻狊）、苜蓿（犕犲犱犻犮犪犵狅
狊犪狋犻狏犪）和精料组成。粗粮来源：羊草８０％＋苜蓿
２０％；饲粮配方见表２。各处理组日粮总能量、总蛋白
含量相等。
１．４ 样品采集和处理
血样采集：试验前每只羊进行颈静脉插管手术，安
表１ 试验动物的拉丁方设计和分组
犜犪犫犾犲１ 犈狓狆犲狉犻犿犲狀狋犪犾犪狀犻犿犪犾狊犔犪狋犻狀狊狇狌犪狉犲
犱犲狊犻犵狀犪狀犱犵狉狅狌狆犻狀犵
阶段Ｐｈａｓｅ 试验Ⅰ组ＧｒｏｕｐⅠ 试验Ⅱ组ＧｒｏｕｐⅡ
第１期ＰｈａｓｅＩ Ｃ∶Ｆ＝４∶６ Ｃ∶Ｆ＝６∶４
第２期ＰｈａｓｅＩＩ Ｃ∶Ｆ＝６∶４ Ｃ∶Ｆ＝４∶６
注：Ｃ指精料；Ｆ指粗料。
Ｎｏｔｅ：Ｃｒｅｆｅｒｓｔｏｔｈｅｆｉｎｅｍａｔｅｒｉａｌ；Ｆｒｅｆｅｒｓｔｏｔｈｅｃｏａｒｓｅｍａｔｅｒｉａｌ．
表２ 不同精粗比饲粮配方
犜犪犫犾犲２ 犜犺犲犱犻犲狋犳狅狉犿狌犾犪狋犻狅狀狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犳狅狉犪犵犲狉犪狋犻狅％
材料
Ｍａｔｅｒｉａｌ
精粗比４∶６
Ｃｒｕｄｅｒａｔｉｏ４∶６
精粗比６∶４
Ｃｒｕｄｅｒａｔｉｏ６∶４
玉米Ｃｏｒｎ ７３．０ ３８．５
麸皮Ｂｒａｎ ０ ４７．２
豆粕Ｓｏｙｂｅａｎｍｅａｌ ２１．１ ３．３
菜粕 Ｍｅａｌ ０ ６．２
石粉Ｐｏｗｄｅｒ １．４ ２．４
磷酸氢钙ＤＣＰ ２．３ １．０
食盐Ｓａｌｔ １．０ ０．６
预混料Ｐｒｅｍｉｘ １．２ ０．８
装血管瘘。手术恢复１ｄ后，采集血样。具体方法：羊进食后４ｈ内每间隔１５ｍｉｎ由颈静脉插管采取血样。将取
得的新鲜血液注入抗凝管中，３０００ｒ／ｍｉｎ，１５ｍｉｎ，得到的上清液即为血浆。采取的血样，－２０℃保存待测。
４∶６组：第１期（２０１１年１月１３日－２７日）试验Ⅰ组和第２期（２０１１年２月２日－１７日）试验Ⅱ组，进食４ｈ
内连续采血样品（每只羊１６个采血点，共７只羊）。每只羊选取１个采血点。
６∶４组：第２期（２０１１年２月２日－１７日）试验Ⅰ组和第１期（２０１１年１月１３日－２７日）试验Ⅱ组，进食４ｈ
内连续采血样品（每只羊１６个采血点，共７只羊）。每只羊选取１个采血点。
奶羊采集：试验期间每天手工挤奶２次（７：００－８：００和１９：００－２０：００各１次），挤出的前３把奶弃掉，然后
用５ｍＬＥＰ管接满，奶样于－２０℃保存。
１．５ 乳蛋白的检测
奶样于３５００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ脱脂，考马斯亮蓝法测定脱脂乳中总蛋白质浓度。
１．６ 血样和奶样中游离氨基酸的定性和定量测定
１．６．１ 色谱工作条件 按照文献［９，１０］的条件加以
改进。采用三元流动相［流动相 Ａ为甲醇，流动相Ｂ
为乙腈，流动相Ｃ为１０ｍｍｏｌ／Ｌ的磷酸盐缓冲液（ｐＨ
＝７．２，含０．３％四氢呋喃）］。流动相均经真空泵抽滤
脱气。邻苯二甲醛柱前衍生，ＦＬＤ 检测（激发波长为
３４０ｎｍ，发射波长为４５０ｎｍ），柱温４０℃，手工进样２０
μＬ。整个分析过程流速恒定为１ｍＬ／ｍｉｎ。流动相梯
度洗脱程序如表３所示。
１．６．２ 样品的处理 标准样品处理：精确称取各标
准氨基酸。分别溶于１ｍＬ０．１ｍｏｌ／Ｌ的盐酸，使终浓
表３ 犚犘－犎犘犔犆流动相梯度洗脱程序
犜犪犫犾犲３ 犌狉犪犱犻犲狀狋犲犾狌狋犻狅狀狆狉狅犵狉犪犿狅犳犚犘－犎犘犔犆
时间
Ｔｉｍｅ
（ｍｉｎ）
流动相Ａ
Ｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ
Ａ（％）
流动相Ｂ
Ｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ
Ｂ（％）
流动相Ｃ
Ｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ
Ｃ（％）
流速
Ｆｌｏｗｒａｔｅ
（ｍＬ／ｍｉｎ）
０ ９ ６ ８５ １
１０ １２ ８ ８０ １
２５ １５ １５ ７０ １
４０ ３０ ２５ ４５ １
５０ ３０ ２５ ４５ １
９５２第２１卷第３期 草业学报２０１２年
度为１０－１ ｍｏｌ／Ｌ。酪氨酸和天冬氨酸溶解性较差，分别配成０．５×１０－１和０．１２５×１０－１ ｍｏｌ／Ｌ。
血样的处理：按乙腈去蛋白方法，取１００μＬ血浆与乙腈按１∶２充分混匀，于４℃静置３０ｍｉｎ后，１２０００
ｒ／ｍｉｎ离心去蛋白，取上清备用。
乳样的处理：乳样先于４℃温度下３５００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ除去乳脂肪，脱脂乳按照处理血浆的方法同样处
理。
１．７ 标准氨基酸及样品的ＲＰ－ＨＰＬＣ分析
１．７．１ 衍生及分析 取２０μＬ待测样品与４０μＬ衍生剂邻苯二甲醛（ＯＰＡ）充分混合，室温环境下准确反应１２０
ｓ，加入１０μＬ终止反应液（ｐＨ＝４的磷酸缓冲液），立即满刻度进样（定量进样２０μＬ）。试验结果以保留时间定
性，峰面积外标法定量分析。
１．７．２ 标准曲线的测定 选择能够分离的１６种氨基酸并配制混合标准溶液：含每种氨基酸５ｍｍｏｌ／Ｌ，用０．１
ｍｏｌ／Ｌ的ＨＣｌ溶解。然后分别配置５．２～５００．０μｍｏｌ／Ｌ浓度。
１．７．３ 精密度的测定 配制１６种氨基酸混合标准溶液，浓度为８３．３μｍｏｌ／Ｌ，于同日内连续进样３次，连续进
样３ｄ，求得日内和日间精密度。
１．８ 数据处理
采用ＳＰＳＳ１６．０软件进行单因素方差分析。结果以平均数±标准误表示，组间差异用ｔ检验，判断有无显著
性差异。
２ 结果与分析
２．１ ２０种标准氨基酸的ＲＰ－ＨＰＬＣ测定结果
经ＲＰ－ＨＰＬＣ分析，在５０ｍｉｎ内所有２０种标准氨基酸中有１６种标准氨基酸全部分离（图１）。在５．２～
５００．０μｍｏｌ／Ｌ浓度范围内，氨基酸浓度和峰面积有良好的线性关系，相关系数都为０．９９５５～０．９９９９（表４）。所
有氨基酸的日内和日间精密度均在６％以内，测定方法可靠，可以作为定量的依据。
图１ ２０种氨基酸色谱图
犉犻犵．１ 犆犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪犿狊狅犳２０犪犿犻狀狅犪犮犻犱狊狔狀狋犺犲狋犻犮犿犻狓狋狌狉犲
２．２ 血浆中氨基酸谱和氨基酸含量的变化
不同精粗饲料组山羊血浆中均可以检测出１４种游离氨基酸（图２）。包括８种必需氨基酸（Ｔｈｒ、Ａｒｇ、Ｖａｌ、
Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｔｒｐ）和６种非必需氨基酸（Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ａｌａ）。
高精料组Ｇｌｕ、Ｔｈｒ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ等氨基酸含量略高于低精料组，其余９种氨基酸的含量均低于低精料组。
其中生酮氨基酸（Ｌｅｕ、Ｌｙｓ）和支链氨基酸（ｂｒａｎｃｈｅｄｃｈａｉｎａｍｉｎｏａｃｉｄｓ，ＢＣＡＡ）（Ｉｌｅ，Ｌｅｕ和 Ｖａｌ）及 Ａｓｎ、Ｓｅｒ、
Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ａｌａ等主要的生糖氨基酸含量均低于低精料组。２组中Ｇｌｙ、Ｇｌｎ和Ｔｒｐ的含量较高，Ａｓｐ的含量均较
少。
低精料组山羊血浆中分离的１４种游离氨基酸中总必需氨基酸、总非必需氨基酸含量均高于高精料组，但无
显著差异，总游离氨基酸的含量显著高于高精料组（犘＜０．０５）（图２）。
０６２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１２） Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．３
表４ 氨基酸测定的各种参数结果
犜犪犫犾犲４ 犘犪狉犪犿犲狋犲狉狊狅犳犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犪犿犻狀狅犪犮犻犱狊
氨基酸
Ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ
保留时间
Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎｔｉｍｅ
（ｍｉｎ）
回归方程
Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｅｑｕａｔｉｏｎ
（μｍｏｌ／Ｌ）
相关系数
Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ
日内相对标准偏差
Ｉｎｔｒａｄａｙｒｅｌａｔｉｖｅｓｔａｎｄａｒｄ
ｄｅｖｉａｔｉｏｎ
日间对标准偏差
Ｉｎｔｅｒｄａｙｒｅｌａｔｉｖｅｓｔａｎｄａｒｄ
ｄｅｖｉａｔｉｏｎ
Ａｓｐ ４．１９２ 狔＝９．９５１狓＋１０３．１８０ ０．９９９ ２．０９ ４．６１
Ｇｌｕ ５．６１４ 狔＝１３．９０１狓－３６．６０４ ０．９９９ ２．８２ ４．２４
Ａｓｎ １１．７７４ 狔＝１５．４８５狓－２４．６０１ ０．９９９ ２．２４ ５．７６
Ｓｅｒ １３．７９１ 狔＝１５．４９４狓＋４２．０１４ ０．９９９ ３．５５ ５．７９
Ｇｌｎ １５．３９２ 狔＝１２．４９２狓＋５０．９０２ ０．９９９ ３．９９ ５．４９
Ｇｌｙ １９．３１７ 狔＝１８．８７６狓－４９．１５５ ０．９９９ ３．４１ ３．６５
Ｔｈｒ １９．９７１ 狔＝１７．１８３狓＋１．８４６１ ０．９９９ ４．１９ ５．８８
Ａｒｇ ２２．１３０ 狔＝１２．９１４狓－１４．４７６ ０．９９９ ５．５３ ５．５５
Ａｌａ ２４．９１７ 狔＝１８．４０１狓－１１０．２５０ ０．９９７ ２．５３ ５．１５
Ｔｙｒ ２７．４５０ 狔＝２２．６７３狓－４１．９２４ ０．９９９ ４．３５ ５．６７
Ｖａｌ ３５．２５１ 狔＝４３．３７８狓＋２２８．５１０ ０．９９６ ２．０５ ５．５７
Ｔｒｐ ３６．２６２ 狔＝１４．２１４狓＋１４７．４５０ ０．９９８ ２．９１ ４．８８
Ｐｈｅ ３７．６８９ 狔＝２１．８０５狓－４９．６３０ ０．９９９ ２．０１ ５．２７
Ｉｌｅ ３８．８４２ 狔＝２１．６６５狓＋３４．３８５ ０．９９９ ２．４０ ５．６３
Ｌｅｕ ３９．６９７ 狔＝１４．７５５狓－７６．６６２ ０．９９９ ３．６７ ５．０５
Ｌｙｓ ４５．７０６ 狔＝５．５５７狓－９９．７４５ ０．９９６ ３．３４ ５．５４
注：Ｍｅｔ和Ｖａｌ的出峰时间几乎相同，所以本试验选择了Ｖａｌ，除去了 Ｍｅｔ；Ｃｙｓ的出峰非常低，定量误差较大，故也除去；在该条件下，Ｈｉｓ出了２个
峰，无法确定准确的出峰时间，所以除去 Ｈｉｓ；Ｐｒｏ不含有伯氨，衍生剂邻苯二甲醛不能将其衍生，无法测定。
Ｎｏｔｅ：ＴｈｅｐｅａｋｔｉｍｅｏｆＭｅｔａｎｄＶａｌｗａｓａｌｍｏｓｔｔｈｅｓａｍｅ，ｓｏｔｈｉｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｅｌｅｃｔｅｄＶａｌａｎｄｒｅｍｏｖｅｄＭｅｔ．Ｔｈｅｒｅｗａｓａｌａｒｇｅｒｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｅｒｒｏｒ
ｂｅｃａｕｓｅｏｆｔｈｅｌｏｗｐｅａｋｏｆＣｙｓ，ｓｏｉｔｗａｓａｌｓｏｒｅｍｏｖｅｄ．Ｕｎｄｅｒｔｈｉｓｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，ＷｅｃｏｕｌｄｎｏｔｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｅｘａｃｔｐｅａｋｔｉｍｅｆｏｒｔｗｏｐｅａｋｓｏｆＨｉｓ，ｓｏｉｔ
ｗａｓａｌｓｏｒｅｍｏｖｅｄ．Ｐｒｏｗｈｉｃｈｄｉｄｎ＇ｔｃｏｎｔａｉｎｃａｎｐｒｉｍａｑｕｉｎｅｃｏｕｌｄｎｏｔｂｅｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｄｂｙＯＰＡ，ｓｏｉｔｃｏｕｌｄｎｏｔｂｅｍｅａｓｕｒｅｄ．
２．３ 乳中氨基酸谱的变化和含量测定
从２组山羊乳中均可检测出８种游离氨基酸（Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ），均未检测出Ｌｅｕ，Ｌｙｓ
等生酮氨基酸和Ｉｌｅ，Ｌｅｕ等支链氨基酸（图３）。２组山羊乳中丙氨酸含量远远高于其他氨基酸。高精料组山羊
乳中除Ｇｌｕ，Ｇｌｙ和Ａｌａ外，其他５种氨基酸含量均低于低精料组。其中低精料组羊乳中游离的Ｇｌｕ和Ｔｒｐ的含
量显著高于高精料组（犘＜０．０５）。２组不同日粮对羊乳中其他６种游离氨基酸含量无显著影响（犘＞０．０５）。
２．４ 低精料组乳和血浆中游离氨基酸含量比较
在低精料日粮饲喂条件下，除Ａｌａ外，血浆中游离氨基酸含量均高于乳中（图２），其中Ｇｌｙ的含量极显著高
于乳中游离Ｇｌｙ的含量（犘＜０．０１），血浆中游离Ａｌａ的含量极显著低于乳中游离Ａｌａ的含量（犘＜０．０１）。
２．５ 高精料组乳和血浆中游离氨基酸含量比较
在高精料日粮饲喂条件下，除Ａｌａ外，血浆中游离氨基酸含量均高于乳中（图３），其中Ｇｌｙ的含量极显著高
于乳中游离Ｇｌｙ的含量（犘＜０．０１），血浆中游离Ａｌａ的含量极显著低于乳中游离Ａｌａ的含量（犘＜０．０１）。这种趋
势同低精料组。
２．６ 乳产量及乳蛋白浓度
低精料日粮组日产乳量高于高精料日粮组（表５），乳蛋白浓度基本无变化。
１６２第２１卷第３期 草业学报２０１２年
图２ 低精料组乳和血浆中游离氨基酸含量比较
犉犻犵．２ 犆狅犿狆犪狉犻狊狅狀狅犳犳狉犲犲犪犿犻狀狅犪犮犻犱狊犻狀犿犻犾犽犪狀犱狆犾犪狊犿犪犻狀犾狅狑犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犲犵狉狅狌狆（狀＝７）
图３ 高精料组乳和血浆中游离氨基酸含量比较
犉犻犵．３ 犆狅犿狆犪狉犻狊狅狀狅犳犳狉犲犲犪犿犻狀狅犪犮犻犱狊犻狀犿犻犾犽犪狀犱狆犾犪狊犿犪犻狀犺犻犵犺犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犲犵狉狅狌狆（狀＝７）
３ 讨论
３．１ ＲＰ－ＨＰＬＣ对山羊血浆和乳中游离氨基酸的检
测
氨基酸的分析方法很多，使用 ＨＰＬＣ及柱前衍生
法测氨基酸含量已有大量文献报道［１１１３］。ＯＰＡ衍生
化法是使用最广泛的衍生技术，具有样品制备简单，衍
生迅速，不干扰分离和检测的优点，缺点是不能和仲氨
反应，因此不能检测脯氨酸。吴艳等［１４］用老鼠的血清
表５ 不同精粗比饲料对山羊产乳量和乳蛋白浓度的影响
犜犪犫犾犲５ 犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犮狉狌犱犲犳犲犲犱狉犪狋犻狅狅狀犱犪犻犾狔犿犻犾犽
狔犻犲犾犱犪狀犱犿犻犾犽狆狉狅狋犲犻狀犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀犻狀犵狅犪狋狊
精粗比
Ｆｏｒａｇｅｔｏｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ
ｒａｔｉｏ
日产乳量
Ｄａｉｌｙｍｉｌｋｙｉｅｌｄ
（ｍＬ）
乳蛋白浓度
Ｍｉｌｋｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ｍｇ／ｍＬ）
４∶６ ３０１．７５±３４．３３ ５５．４０±１．８０
６∶４ ２９０．９５±３０．２４ ５６．５６±１．９１
在４０ｍｉｎ内分离出１５种游离氨基酸，孔一力等［９］得出了同样的结果。本试验采用乙腈去蛋白，以ＯＰＡ为柱前
衍生剂，在５０ｍｉｎ内分离出１６种游离氨基酸，氨基酸浓度和峰面积在５．２～５００．０μｍｏｌ／Ｌ浓度范围内均有良好
的线性关系，相关系数都为０．９９５５～０．９９９９。所有氨基酸的日内和日间精密度均在６％以内。另外，本研究用
改进的ＲＰ－ＨＰＬＣ的方法首次对山羊乳中游离氨基酸进行了分析，结果分离出８种游离氨基酸，其中以Ａｌａ的
含量最高。马嵬等［１５］采用反相高效液相色谱法分析并比较了草地型藏羊与金堂黑山羊乳中游离氨基酸的含量。
结果所有乳样中均检测到１７种标准氨基酸，其中以精氨酸的含量最高。与本研究的结果有差异，这可能与品种
或处于不同的泌乳期有关。
３．２ 不同精粗比日粮对泌乳中期山羊乳中总蛋白的影响
乳中所含的氮９５％是以蛋白质的形式存在的，其余的５％是非蛋白的含氮化合物，如氨基酸、肌酸、肌酐、尿
酸和尿素等。乳中的蛋白质统称为乳蛋白。已有许多研究证明，日粮中添加金属硫蛋白或提高精饲料含量，有利
２６２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１２） Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．３
于提高产奶量和４％标准奶产量［１６，１７］。如Ａｄｅｓｏｇａｎ等［１８］研究发现，补充精料８ｋｇ／ｄ的奶牛产奶量比补充精料
４ｋｇ／ｄ的奶牛增加显著。Ｂａｒｇｏ等［１９］也有类似结论的报道。但乳蛋白率与饲粮中精料添加量关系的研究结果
不一［２０］。王吉峰和王加启［２１］的研究发现高精料组（６５∶３５）乳蛋白含量比中等精料组（５０∶５０）及低精料组
（３０∶７０）极显著增加。Ｍｕｒｐｈｙ等［２２］得出了相同的结论。然而，Ｍａｅｋａｗａ等［２３］和Ｒａｍａｎｚｉｎ等［２４］都发现乳蛋白
率并没有随日粮精料的添加有明显改变。本试验中，通过给泌乳中期山羊饲喂不同精粗比日粮，结果发现补充精
料组山羊乳中乳蛋白含量稍有升高，与低精料组无明显差异，这和 Ｍａｅｋａｗａ等［２３］的结果一致。
３．３ 不同精粗比日粮对泌乳中期山羊血和乳中游离氨基酸的影响
乳中的蛋白质有２个来源：一是由乳腺从头合成，如酪蛋白，α乳清蛋白和β乳球蛋白等，它们是由乳腺中的
游离氨基酸合成，而这些氨基酸来自血液；二是来自血液中的蛋白质，不是乳腺自身合成的，主要有免疫球蛋白和
血浆清蛋白等。血液中氨基酸是合成乳蛋白的前提，乳营养质量高低主要由其中氨基酸的种类和含量所决定。
氨基酸的构成对乳蛋白合成有很大的影响。Ｂｕｒｇｏｓ等［２５］的研究发现：氨基酸单独添加时比能量底物或激素混合
物单独添加时，乳蛋白的合成提高５０％；提示氨基酸能刺激乳蛋白的合成；Ｍｉｓｃｉａｔｔｅｌｉ等［２６］向缺乏赖氨酸和蛋
氨酸的奶牛日粮提供相应的过瘤胃氨基酸，结果提高了乳脂及乳蛋白的产量和氨基酸的利用率，认为赖氨酸和蛋
氨酸是饲喂不同日粮类型的泌乳奶牛最重要的限制性氨基酸。韩兆玉等［２７］在奶牛饲粮中添加过瘤胃蛋氨酸可
提高奶牛乳蛋白、乳脂率和酪蛋白的水平，并可显著提高血清蛋氨酸水平。
有关血液和乳中氨基酸谱和含量变化及与乳蛋白合成的关系的研究目前尚未见详细报道。本试验对其进行
了初步探讨。结果发现不同精粗比日粮下，血液中均存在１４种游离氨基酸，其中含有８种必需氨基酸和６种非
必需氨基酸；高、低精料组山羊血液总氨基酸谱无明显变化；总必需氨基酸、总非必需氨基酸的含量间均无显著
差异（犘＞０．０５）。这与张石蕊等［２８］的研究结果一致，本试验中乳蛋白无明显变化的结果也与之相一致。但本研
究中也发现高精料组山羊血液中生酮氨基酸（Ｌｅｕ、Ｌｙｓ）、支链氨基酸（Ｉｌｅ，Ｌｅｕ和Ｖａｌ）及Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ａｌａ
等主要的生糖氨基酸含量均低于低精料组，总游离氨基酸显著低于低精料组。血液中游离氨基酸是合成乳蛋白
的主要前体物，提示高精料饲喂可能不利于乳蛋白的合成。
乳腺中的游离氨基酸是乳腺组织合成乳蛋白的主要途径，而乳腺中的游离氨基酸又来自于血液，本研究发
现，在相同饲料条件下，山羊乳中氨基酸的种类和含量均低于血液中同种类氨基酸的含量（Ａｌａ除外），但均未检
测出Ｌｅｕ，Ｌｙｓ等生酮氨基酸和Ｉｌｅ，Ｌｅｕ等支链氨基酸。Ｌｅｕ，Ｌｙｓ是哺乳动物体内的生酮氨基酸，在体内转变为
酮体后，可转变为乙酰ＣｏＡ，然后再进一步转变为酯酰ＣｏＡ，再与磷酸甘油转变为脂肪。本研究在泌乳中期山羊
乳中没有检测到Ｌｅｕ，Ｌｙｓ生酮氨基酸，说明血液中Ｌｅｕ，Ｌｙｓ生酮氨基酸既参与了乳蛋白的合成，也可能参与了
乳脂肪的合成。
支链氨基酸是对Ｌｅｕ、Ｉｌｅ和Ｖａｌ３种必需氨基酸的统称。支链氨基酸主要在肝外组织进行氧化［２９］。研究表
明，支链氨基酸氧化产生三磷酸腺苷（ＡＴＰ）的效率显著高于其他氨基酸，当机体需要蛋白质作为能量来源时，其
是动物体内重要的能量来源，且ＢＣＡＡ的供能作用主要在机体处于特殊生理阶段时发挥［３０］，本研究在山羊乳中
没有检测到Ｉｌｅ，Ｌｅｕ等支链氨基酸，故而推测ＢＣＡＡ含量的下降并非只是作为合成原料参加了乳蛋白的合成，也
可能参与了乳蛋白合成的氧化供能。
至于本试验中发现乳中Ａｌａ含量极显著高于血液中，推测乳腺组织通过Ａｌａ介导的葡萄糖Ａｌａ循环旺盛，
可为乳腺组织提供大量的葡萄糖来源，为乳腺组织提供充足的能量，这也为乳蛋白合成提供了前提条件，其详细
机理有待进一步研究。
综上所述，血液中氨基酸参与了乳蛋白的合成。其中的生酮氨基酸和兼性氨基酸既参与了乳蛋白的合成，也
可能参与了乳脂肪的合成；乳中高浓度的Ａｌａ提示乳腺组织中Ａｌａ葡萄糖循环旺盛，为乳蛋白合成提供了能量。
于此同时，乳蛋白的合成增加了ＢＣＡＡ的消耗（是合成原料，也可能参与了氧化供能）使其在乳中的含量显著低
于血液中。另外，氨基酸的增加可能不仅为蛋白质的合成提供原料，氨基酸也可以作为信号分子使真核细胞起始
因子（ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｉｎｉｔｉａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓ，ｅＩＦ）磷酸化程度发生变化，从而改变那些调节ｍＲＮＡ翻译起始阶段的蛋白质
功能，２０１０年Ｂｕｒｇｏｓ等［２５］提出氨基酸在刺激乳蛋白的合成和进一步提高乳蛋白合成的同时也提高了ｍＴＯＲ底
３６２第２１卷第３期 草业学报２０１２年
物ｐ７０核糖体蛋白Ｓ６激酶的磷酸化状态，这方面的研究进展也为本试验中氨基酸含量的变化和乳蛋白合成之间
的关系提供了更多的合理解释。但其中涉及的具体机制还有待进一步深入研究。
４ 结论
通过本试验研究，我们认为血液中游离氨基酸为乳蛋白的合成提供原料和能量保证。饲喂高精料日粮，血液
中游离氨基酸含量较低，不利于乳蛋白含量和产量的提高。
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犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犮狉狌犱犲犳犲犲犱狅狀犳犾狅狑狅犳犪犿犻狀狅犪犮犻犱犿犲狋犪犫狅犾犻狊犿犪狀犱犿犻犾犽狆狉狅狋犲犻狀
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ＺＨＡＮＧＳｈｕｋｕｎ，ＪＩＡＮＧＸｕｅｙｕａｎ，ＮＩＹｉｎｇｄｏｎｇ，ＳＨＥＮＸｉａｎｇｚｈｅｎ，
ＺＨＵＡＮＧＳｕ，ＺＨＡＮＧＹｕａｎｓｈｕ
（ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｎｉｍａｌＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，
ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００９５，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｂｙｅｘａｍｉｎｉｎｇｔｈｅｃｈａｎｇｅｏｆｆｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｏｆｐｌａｓｍａａｎｄｍｉｌｋｉｎｍｉｄｌａｃｔａｔｉｏｎｇｏａｔｓ，Ｗｅｅｘｐｌｏｒｄ
ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｒｕｄｅｆｅｅｄｏｎｆｌｏｗｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄ（ＡＡ）ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｍｉｌｋｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔ．Ｓｅｖｅｎｍｉｄ
ｌａｃｔａｔｉｏｎｇｏａｔｓｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｗｏｇｒｏｕｐｓｒａｎｄｏｍｌｙａｎｄｗｅｒｅｆｅｄｃｒｕｄｅｒａｔｉｏｄｉｅｔｏｆ４∶６（ｌｏｗｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ
ｇｒｏｕｐ）ａｎｄ６∶４（ｈｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｇｒｏｕｐ）．Ｔｈｅｉｒｐｌａｓｍａｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｔｈｅｊｕｇｕｌａｒｖｅｉｎｆｉｓｔｕｌａ，ａｎｄｍｉｌｋ
ｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｃｏｌｅｃｔｅｄｂｙｈａｎｄｍｉｌｋｉｎｇ．Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｆｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｏｆｐｌａｓｍａａｎｄｍｉｌｋｆｒｏｍａｌｇｏａｔｓ
ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＲＰＨＰＬＣ．ＴｏｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｍｉｌｋｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＢｒａｄｆｏｒｄｍｅｔｈｏｄ．１４ｋｉｎｄｓ
ｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｐｌａｓｍａａｎｄ８ｋｉｎｄｓｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｆｒｏｍｍｉｌｋｉｎｔｗｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｄｉｅｔｇｒｏｕｐｓ．Ａｍｉｎｏａｃｉｄｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂｌｏｏｄｏｒｍｉｌｋｂｅｔｗｅｅｎｔｗｏｇｒｏｕｐｓｆｅｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｒｕｄｅｆｅｅｄｒａｔｉｏｗａｓ
ｎｏｏｂｖｉｏｕｓｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅＫｅｔｏｇｅｎｉｃａｍｉｎｏａｃｉｄ（Ｌｅｕ，Ｌｙｓ），ａｃｕｌｔａｔｉｖｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓ（Ｐｈｅ，Ｉｌｅ）ａｎｄｂｒａｎｃｈｅｄｃｈａｉｎａ
ｍｉｎｏａｃｉｄｓ（Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，ａｎｄＶａｌ）ｏｆｔｈｅｂｌｏｏｄｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｏｒｖｅｒｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｍｉｌｋ．
Ａｌａｗａｓｏｎｌｙａｍｉｎｏａｃｉｄｗｈｉｃｈｖｅｒｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｉｎｂｌｏｏｄｔｈａｎｉｎｍｉｌｋ．Ｉｎｈｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｇｒｏｕｐ，ｅｘｃｅｐｔ
ｆｏｒＧｌｙａｎｄＡｌａ，ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｔｈｅｒｅｓｔａｍｉｎｏａｃｉｄｓｆｒｏｍｂｌｏｏｄｗｅｒｅｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｌｏｗｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ
ｇｒｏｕｐ．ＴｏｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎＨｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｇｒｏｕｐｗａｓｓｌｉｇｈｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｌｏｗｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ
ｇｒｏｕｐ．ｂｕｔｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ．Ｉｔｗａｓｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｆｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎｂｌｏｏｄｃａｎｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅ
ｒａｗｍａｔｅｒｉａｌａｎｄａｄｅｑｕａｔｅｅｎｅｒｇｙｆｏｒｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｍｉｌｋｐｒｏｔｅｉｎ．ＷｈｅｎＭｉｄｌａｃｔａｔｉｏｎＧｏａｔｓｗｅｒｅｆｅｄｈｉｇｈ
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ｌｏｗｌｅｖｅｌｓｏｆｆｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎｔｈｅｂｌｏｏｄ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｉｅｔｓ；ｍｉｄｌａｃｔａｔｉｏｎｇｏａｔｓ；ｐｌａｓｍａ；ｍｉｌｋ；ｍｉｌｋｐｒｏｔｅｉｎ；ｆｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓ
５６２第２１卷第３期 草业学报２０１２年