全 文 ：书犇犗犐：１０．１１６８６／犮狔狓犫２０１４４５０ 犺狋狋狆：／／犮狔狓犫．犾狕狌．犲犱狌．犮狀
冯中红，王玉琴，杨成德，薛莉，陈秀蓉．番茄细菌性叶斑病菌的拮抗菌筛选、鉴定及其拮抗性能评价．草业学报，２０１５，２４（８）：１６６１７３．
ＦｅｎｇＺＨ，ＷａｎｇＹＱ，ＹａｎｇＣＤ，ＸｕｅＬ，ＣｈｅｎＸＲ．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｔｏｔｏｍａｔｏｂａｃｔｅｒｉａｌ
ｓｐｏｔ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１５，２４（８）：１６６１７３．
番茄细菌性叶斑病菌的拮抗菌筛选、
鉴定及其拮抗性能评价
冯中红，王玉琴，杨成德，薛莉，陈秀蓉
（甘肃农业大学草业学院，草业生态系统教育部重点实验室，甘肃省草业工程实验室，
中－美草地畜牧业可持续发展研究中心，甘肃 兰州７３００７０）
摘要：采用含菌平板抑菌圈测定法，从１２０株高寒草地牧草内生细菌中分离筛选到一株对番茄细菌性叶斑病拮抗
能力较强的菌株２６４ＺＹ７，其抑菌圈直径为１．２２ｃｍ。２６４ＺＹ７菌体短杆状，大小为１．５３４μｍ×０．５７１μｍ～３．２１０
μｍ×０．７８１μｍ，革兰氏阳性菌，根据形态特征，并结合１６ＳｒＤＮＡ和ｇｙｒＢ基因序列相似性分析，将菌株２６４ＺＹ７鉴
定为解淀粉芽孢杆菌犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪犮犻犲狀狊。通过室内盆栽防效试验，结果表明该菌株对番茄细菌性叶斑病
的防效达６９％，此外，该菌株对８种病原真菌具有抑菌能力，说明抑菌谱较宽，且抑菌率均大于３０％，对番瓜根腐病
菌（犉狌狊犪狉犻狌犿ｓｐ．）效果最明显，抑菌率为５２．８４％。该研究结果为高寒草地紫花针茅内生细菌２６４ＺＹ４７的进一步
开发利用提供了依据。
关键词：番茄叶斑病菌；拮抗内生细菌；筛选；鉴定；防效　　
犛犮狉犲犲狀犻狀犵，犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犪狊狊犲狊狊犿犲狀狋狅犳犲狀犱狅狆犺狔狋犻犮犫犪犮狋犲狉犻犪犪狀狋犪犵狅狀犻狊狋犻犮狋狅狋狅犿犪狋狅
犫犪犮狋犲狉犻犪犾狊狆狅狋
ＦＥＮＧＺｈｏｎｇＨｏｎｇ，ＷＡＮＧＹｕＱｉｎ，ＹＡＮＧＣｈｅｎｇＤｅ，ＸＵＥＬｉ，ＣＨＥＮＸｉｕＲｏｎｇ
犆狅犾犾犲犵犲狅犳犌狉犪狊狊犾犪狀犱，犌犪狀狊狌犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犓犲狔犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犌狉犪狊狊犾犪狀犱犈犮狅狊狔狊狋犲犿犌犪狀狊狌犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，
犕犻狀犻狊狋狉狔狅犳犈犱狌犮犪狋犻狅狀，犘狉犪狋犪犮狌犾狋狌狉犪犾犈狀犵犻狀犲犲狉犻狀犵犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犌犪狀狊狌犘狉狅狏犻狀犮犲，犛犻狀狅犝．犛．犆犲狀狋犲狉犳狅狉犌狉犪狕犻狀犵犔犪狀犱犈犮狅狊狔狊狋犲犿
犛狌狊狋犪犻狀犪犫犻犾犻狋狔，犔犪狀狕犺狅狌７３００７０，犆犺犻狀犪
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ａｆｔｅｒｓｃｒｅｅｎｉｎｇｂｙａｓｓｅｓｓｉｎｇｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｚｏｎｅｓｏｎｎｕｔｒｉｅｎｔｍｅｄｉａａｎａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａ，
ｓｔｒａｉｎ２６４ＺＹ７，ｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓｈａｖｉｎｇｓｔｒｏｎｇａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃａｂｉｌｉｔｙａｇａｉｎｓｔ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狊狔狉犻狀犵犲ｐｖ．狋狅犿犪狋狅
ｗｈｉｃｈｃａｕｓｅｓｂａｃｔｅｒｉａｌｓｐｏｔｏｎｔｏｍａｔｏｅｓ．Ｔｈｉｓｓｔｒａｉｎｗａｓｓｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍ１２０ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄ
ｆｒｏｍａｌｐｉｎｅｍｅａｄｏｗｐａｓｔｕｒｅ．Ｓｔｒａｉｎ２６４ＺＹ７ｐｒｏｄｕｃｅｄａ１．２２ｃｍｄｉａｍｅｔｅｒｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｚｏｎｅ．Ｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｉｓｒｏｄ
ｓｈａｐｅｄｗｉｔｈａｓｐｏｒｅｓｉｚｅｏｆ１．５３４μｍ×０．５７１μｍ－３．２１０μｍ×０．７８１μｍ，ｇｒａｍｐｏｓｉｔｉｖｅａｎｄｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓ
犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪犮犻犲狀狊ｂａｓｅｄｏｎｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｈｏｍｏｌｏｇｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅ１６ＳｒＤＮＡａｎｄｇｙｒＢｇｅｎｅｓｅ
ｑｕｅｎｃｅ．Ｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｓｔｒａｉｎ２６４ＺＹ７ｏｎｂａｃｔｅｒｉａｌｓｐｏｔｏｎｔｏｍａｔｏｅｓｇｒｏｗｎｉｎｐｏｔｓｒａｎｇｅｄｕｐｔｏ６９％．Ｉｔ
ｗａｓａｌｓｏａｂｌｅｔｏｃｏｎｔｒｏｌｆｕｎｇａｌｐａｔｈｏｇｅｎｓ，ｉｎｐａｒｔｉｃｕｌａｒ犉狌狊犪狉犻狌犿ｓｐ．（５２．８４％ｅｆｆｉｃａｃｙ）．Ｔｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇ
ｇｅｓｔｔｈａｔｆｕｒｔｈｅｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｉｓｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｓｔｒａｉｎ（２６４ＺＹ７）ｓｈｏｕｌｄｂｅｕｎｄｅｒｔａｋｅｎ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狊狔狉犻狀犵犲；ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａ；ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｃｏｎｔｒｏｌｅｆｆｅｃｔ
第２４卷　第８期
Ｖｏｌ．２４，Ｎｏ．８
草　业　学　报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
２０１５年８月
Ａｕｇ，２０１５
收稿日期：２０１４１１０３；改回日期：２０１４１２１０
基金项目：甘肃省蔬菜攻关项目（Ｎｏ．ＧＪ２０１３０７）资助。
作者简介：冯中红（１９９１），女，甘肃临夏人，在读硕士。Ｅｍａｉｌ：１１４２５９５８１３＠ｑｑ．ｃｏｍ
通讯作者Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．Ｅｍａｉｌ：ｙａｎｇｃｄ＠ｇｓａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
番茄细菌性叶斑病（番茄细菌性斑点病）（犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狊狔狉犻狀犵犪ｐｖ．狋狅犿犪狋狅）主要发生在番茄（犔狔犮狅狆犲狉狊犻犮狅狀
犲狊犮狌犾犲狀狋狌犿）、辣椒（犆犪狆狊犻犮狌犿犪狀狀狌狌犿）和茄子（犛狅犾犪狀狌犿犿犲犾狅狀犵犲狀犪）等植物，其自１９３３年首次报道以来，在美
国、英国、前苏联、加拿大、法国、南非和澳大利亚等２６个国家和中国的台湾省都有发生［１］。Ｙｕｎｉｓ和Ｃｒａｌ［２］报
道，该病可造成番茄５％～７５％的产量损失，Ｂｏｎｎ和 Ｍａｒｔｉｎ［３］报道了美国部分州番茄受害情况，番茄细菌性叶斑
病我国最初只在台湾有记载［２］，后赵廷昌等［４］报道在吉林省、辽宁省、黑龙江省、河北省、甘肃省、新疆维吾尔自治
区和天津市也有发生。近年来，该病迅速蔓延，在高温高湿条件下易流行，一般发病率在４０％以上，严重时可达
１００％［５］，且严重度呈增长趋势。目前，番茄细菌性叶斑病主要利用化学农药防治，尽管有一定效果，但化学防治
会引起植物病原抗药性和农药残留等问题，造成环境污染和生态破坏［６］，而生物防治既可取得良好的防治效果，
又能克服以上缺点，已成为目前研究热点。植物病害生防菌主要从土壤或植物根际土壤微生物中分离筛选得
到［７］。研究发现，所有健康植物体内几乎都存在内生细菌［８］，且部分内生细菌具有良好的抑菌功能，其开发为微
生物农药后具有可能在植物体内长期定殖，环境影响小和持效期长等优点。因此，从植物内生细菌中筛选拮抗细
菌进行生物防治被认为是最具发展潜力的防治方法之一［９］。本研究通过从东祁连山高寒草地牧草的根、茎、叶、
花等部位分离的内生细菌中筛选了一株对番茄细菌性叶斑病菌具有较强拮抗作用的内生细菌，对其拮抗能力和
室内盆栽防治效果等进行了研究，并进行了鉴定，以期为进一步开发利用提供理论依据。
１　材料与方法
１．１　供试菌株
供试病原细菌：番茄细菌性叶斑病菌。
供试拮抗菌：采用常规分离法，分离自东祁连山高寒草地紫花针茅（犛狋犻狆犪犮犪狆犻犾犾犪狋犪）、线叶嵩草（犓狅犫狉犲狊犻犪
犮犪狆犻犾犾犻犳狅犾犻犪）和矮生嵩草（犓狅犫狉犲狊犻犪犺狌犿犻犾犻狊）健康根、茎、叶、花部位的１２０株内生细菌。
供试病原真菌：马铃薯炭疽病菌（犆狅犾犾犲狋狅狋狉犻犮犺狌犿犮狅犮犮狅犱犲狊）、马铃薯枯萎病菌（犉狌狊犪狉犻狌犿犪狏犲狀犪犮犲狌犿）、小麦根
腐病菌（犅犻狆狅犾犪狉犻狊狊狅狉狅犽犻狀犻犪狀犪）、孜然根腐病菌（犉狌狊犪狉犻狌犿狊狅犾犪狀犻）、黄瓜枯萎病菌（犉狌狊犪狉犻狌犿狅狓狔狊狆狅狉狌犿）、番瓜
根腐病菌（犉狌狊犪狉犻狌犿ｓｐ．）、番茄灰霉病菌（犅狅狋狉狔狋犻狊犮犻狀犲狉犲犪）和马铃薯褐腐病菌（犛狋狔狊犪狀狌狊狊狋犲犿狅狀犻狋犻狊）。
以上均由甘肃农业大学草业学院植物病理学实验室提供。
１．２　培养基
肉汁胨培养基（ＮＡ）、ＰＤＡ培养基，方法见参考文献［１０１１］。
１．３　拮抗菌的筛选
采用含菌平板抑菌圈测定法［１２］，在１００ｍＬ熔解后冷却至４５℃左右的ＮＡ培养基中加入１ｍＬ病原菌菌液
（含菌量ｃｆｕ／１０８ｍＬ），混匀后制成含菌平板，然后在每个平板上分别均匀的接种１２０株拮抗菌株，３次重复，２８℃
恒温培养，４８ｈ后测量其抑菌透明圈大小并记录数据。
１．４　拮抗菌株的鉴定
１．４．１　形态观察　　将筛选得到的拮抗菌株接种于ＮＡ培养基上，置于２８℃培养箱中培养３ｄ后，观察菌落的
形态特征并描述；将活化１２ｈ后的拮抗菌株进行革兰氏染色［８］，观察菌体着色和测量菌体大小（３０个），并拍照。
１．４．２　分子生物学鉴定　　１）１６ＳｒＤＮＡ序列鉴定。拮抗菌株ＤＮＡ采用Ｅｚｕｐ柱式基因组ＤＮＡ抽提试剂盒
（上海生工生物有限公司）提取。１６ＳｒＤＮＡ的扩增利用通用引物２７Ｆ和１４９２Ｒ［１３］。ＰＣＲ扩增条件为９５℃预变
性５ｍｉｎ，９４℃变性１ｍｉｎ，４８℃退火３０ｓ，７２℃延伸１ｍｉｎ，循环３０次；再在７２℃下延伸８ｍｉｎ后终止反应。扩增
反应体系总体积为５０μＬ，其中１０×ｂｕｆｆｅｒ５μＬ，ＭｇＣｌ２（２５ｍｏｌ／Ｌ）３μＬ，ｄＮＴＰ（５ｍｍｏｌ／Ｌ）１μＬ，Ｔａｑ聚合酶
（５Ｕ／μＬ）０．５μＬ，２７Ｆ（１０μｍｏｌ／Ｌ）１μＬ，１４９２Ｒ（１０μｍｏｌ／Ｌ）１μＬ，ＴａｒｇｅｔＤＮＡ１μＬ，ｄｄＨ２Ｏ４７．５μＬ。经凝胶
电泳检测后有特异性条带的扩增产物送生工生物（上海）有限公司进行测序。将测定的序列与在ＧｅｎＢａｎｋ中已
知的序列进行Ｂｌａｓｔ同源性比对分析，并用ＣＬＵＳＴＡＬＸ１．８进行多重序列比较，最后用Ｍｅｇａ４．０软件邻接法构
建系统发育树，明确该拮抗菌株的系统发育学地位。
２）ｇｙｒＢ基因序列鉴定。由于细菌１６ＳｒＤＮＡ具有高度保守性［１４］，在比较一些相似性比较高的近缘种时，
７６１第８期 冯中红　等：番茄细菌性叶斑病菌的拮抗菌筛选、鉴定及其拮抗性能评价
ｇｙｒＢ基因更能准确的鉴定到种。拮抗菌株 ＤＮＡ 的提取方法同１．４。以细菌ｇｙｒＢ基因扩增引物 ＵＰ１（５′
ＧＡＡＧＴＣＡＴＣＡＴＧＡＣＣＧＴＴＣＴＧＣＡＴＧＣＣＧＧＴＧＧＡＡＡＧＴＴＣＧＡ３′）和引 物 ＵＰ２（５′ＡＧＣＡＧＧＧＴＡＣＧ
ＧＡＴＧＴＧＣＧＡＧＣＣＡＴＣＴＡＣＧＴＣＡＧＣＧＴＣＡＧＴＣＡＴ３′）进行扩增［１５］。扩增体系为１０×ＰＣＲｂｕｆｆｅｒ２．５μＬ，
ＭｇＣｌ２（２５ｍｏｌ／Ｌ）２μＬ，ｄＮＴＰ（５ｍｍｏｌ／Ｌ）１μＬ，Ｔａｑ酶（５Ｕ／μＬ）１μＬ，ＵＰ１１μＬ，ＵＰ２１μＬ，模板ＤＮＡ１μＬ，
ｄｄＨ２Ｏ：１５．５μＬ，总体系为２５μＬ。扩增条件：９５℃预变性５ｍｉｎ；９４℃变性１ｍｉｎ，５５℃退火１ｍｉｎ，７２℃延伸２
ｍｉｎ，３０个循环；最后在７２℃延伸１０ｍｉｎ。
１．５　抑菌谱测定
采用平板对峙法［１３］测定抑菌效果。将直径５ｍｍ供试病原真菌，包括马铃薯炭疽病菌、马铃薯枯萎病菌、小
麦根腐病菌、孜然根腐病菌、黄瓜枯萎病菌、番瓜根腐病菌、番茄灰霉病菌和马铃薯褐腐病菌菌饼置于ＰＤＡ 平板
中央，与其四周２．５ｃｍ处点接拮抗菌株２６４ＺＹ７，每处理重复３次，于２８℃培养箱中培养，待对照指示菌满皿后
测量菌落直径，计算抑菌率。
抑菌率（％）＝（对照的菌落直径－处理的菌落直径）／对照的菌落直径×１００
１．６　室内盆栽防效测定
将拮抗菌和番茄细菌性叶斑病菌（病原菌）分别经摇瓶液体培养２４ｈ后，先将病原菌通过伤口接种法接种于
健康的番茄植株叶片上，２４ｈ后再接种拮抗菌悬液，保湿２４ｈ后在室内条件下待其发病，１０ｄ后观察发病情况，
计算发病率、病情指数及拮抗菌对番茄叶斑病的相对防治效果。叶斑病病情指数分级标准为，０级：叶片无病斑；
１级：０＜病斑面积占总叶片面积≤１０％；２级：１０％＜病斑面积占总叶片面积≤２５％；３级：２５％＜病斑面积占总
叶片面积≤５０％；４级：５０％＜病斑面积占总叶片面积≤７５％；５级：７５％＜病斑面积占总叶片面积≤１００％。计算
方法［５］如下：
发病率＝发病叶片数／调查总叶片数×１００％
病情指数＝∑（各级发病数×各级代表值）／（调查总叶数×最高代表值）×１００％
防病效果＝（病原菌对照的病情指数－拮抗菌处理的病情指数）／病原菌对照的病情指数×１００％
２　结果与分析
２．１　拮抗菌筛选
从１２０株供试内生细菌中筛选出１４株对番茄细菌性叶斑病菌有明显抑菌带或抑菌圈的拮抗细菌，其抑菌圈
直径介于０．７５～１．２２ｃｍ，抑菌带宽介于０．２０～０．６５ｃｍ，其中菌株２６４ＺＹ７对病原菌的拮抗效果强且稳定，抑菌
带宽达到０．６５ｃｍ（图１），说明该菌株具有开发为防治番茄细菌性叶斑病的生物农药的潜力。
２．２　拮抗菌株２６４ＺＹ７的鉴定
２．２．１　形态学鉴定　　在ＮＡ平板培养基２８℃培养３ｄ后，２６４ＺＹ７菌落呈圆形，边缘锯齿状，表面光滑，有光
泽，中央有突起，米白色，不透明，菌落大小约为２ｍｍ（图２）。菌体呈短杆状，革兰氏染色阳性，大小为１．５３４μｍ
×０．５７１μｍ～３．２１０μｍ×０．７８１μｍ（图３）。
２．２．２　分子生物学鉴定　　１）１６ＳｒＤＮＡ序列鉴定。经测序得到菌株２６４ＺＹ７的１６ＳｒＤＮＡ基因有１４６０个碱
基，其基因序列在ＧｅｎＢａｎｋ中与已知序列进行Ｂｌａｓｔ同源性比对，结果表明，２６４ＺＹ７（ＫＦ８３１３７２）与已报道的解
淀粉芽孢杆菌（犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪犮犻犲狀狊）（ＨＱ８４０６４５），甲基营养型芽孢杆菌（犅犪犮犻犾犾狌狊犿犲狋犺狔犾狅狋狉狅狆犺犻犮狌狊）
（ＨＱ６６２５９４），死谷芽孢杆菌（犅犪犮犻犾犾狌狊狏犪犾犾犻狊犿狅狉狋犻狊）（ＪＦ４９６４７３）和枯草芽孢杆菌（犅犪犮犻犾犾狌狊狊狌犫狋犻犾犻狊）（ＪＮ３８２４７１）
相似性均达９９％，经建立的系统发育树（图４），拮抗菌株２６４ＺＹ７与解淀粉芽孢杆菌（犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪
犮犻犲狀狊）（ＨＱ８４０６４５）同源性较近，初步将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪犮犻犲狀狊。
２）ｇｙｒＢ基因序列鉴定。经测序得到菌株２６４ＺＹ７的ｇｙｒＢ基因有５９５个碱基，其基因序列在ＧｅｎＢａｎｋ中与
已知序列进行Ｂｌａｓｔ同源性比对，结果表明，２６４ＺＹ７（ＫＦ８３１３７２）与已报道的解淀粉芽孢杆菌（ＨＱ８４０６４５）相似性
达９９％，经建立的系统发育树（图５）可看出拮抗菌株２６４ＺＹ７与解淀粉芽孢杆菌（ＡＢ８２９６０４）聚在一起，再结合
８６１ 草　业　学　报 第２４卷
形态学特征和１６ＳｒＤＮＡ序列分析结果，将其鉴定为
图１　２６４犣犢７对番茄细菌性叶斑病的拮抗作用
犉犻犵．１　犃狀狋犪犵狅狀犻狊狋犻犮犳狌狀犮狋犻狅狀狅犳犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狊狔狉犻狀犵犪犲
犳狉狅犿狊狋狉犪犻狀２６４犣犢７
解淀粉芽孢杆菌犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪犮犻犲狀狊。
２．３　抑菌谱测定
菌株２６４ＺＹ７对番瓜根腐病菌、马铃薯枯萎病菌、
黄瓜枯萎病菌的抑菌效果较明显，抑制率分别为
５２．８４％，４９．６０％，４４．９７％，对番茄灰霉病菌、孜然根
腐病菌、马铃薯炭疽病菌和小麦根腐病菌抑菌率均在
３０％以上，对马铃薯褐腐病菌也有一定的拮抗作用（表
１，图６）。
图２　２６４犣犢７的菌落形态
犉犻犵．２　犜犺犲犮狅犾狅狀狔狅犳狊狋狉犪犻狀２６４犣犢７
　
图３　２６４犣犢７革兰氏染色
犉犻犵．３　犛狋狉犪犻狀２６４犣犢７犌狉犪犿
　
图４　菌株２６４犣犢７的１６犛狉犇犖犃系统发育树
犉犻犵．４　１６犛狉犇犖犃狆犺狔犾狅犵犲狀犲狋犻犮狋狉犲犲狅犳狊狋狉犪犻狀２６４犣犢７
　
图５　菌株２６４犣犢７的犵狔狉犅系统发育树
犉犻犵．５　犵狔狉犅狆犺狔犾狅犵犲狀犲狋犻犮狋狉犲犲狅犳狊狋狉犪犻狀２６４犣犢７
９６１第８期 冯中红　等：番茄细菌性叶斑病菌的拮抗菌筛选、鉴定及其拮抗性能评价
表１　菌株２６４犣犢７的抑菌谱测定
犜犪犫犾犲１　犜犺犲犻狀犺犻犫犻狋犻狅狀狉犪狋犲狅犳２６４犣犢７犪犵犪犻狀狊狋狆犪狋犺狅犵犲狀犻犮犳狌狀犵犻
病原菌
Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ
对照
ＣＫ（ｃｍ）
菌株Ｓｔｒａｉｎ２６４ＺＹ７
菌落直径 Ｄｉａｍｅｔｅｒｏｆｃｏｌｏｎｙ（ｃｍ） 抑制率Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅ（％）
马铃薯枯萎病菌犉．犪狏犲狀犪犮犲狌犿 ６．２２±０．１０ ３．１３±０．０７ ４９．６０
孜然根腐病菌犉．狊狅犾犪狀犻 ８．５３±０．０２ ５．２３±０．０４ ３８．６７
小麦根腐病菌犅．狊狅狉狅犽犻狀犻犪狀犪 ７．６８±０．１８ ５．１２±０．０４ ３３．４１
马铃薯褐腐病菌犛．狊狋犲犿狅狀犻狋犻狊 ６．９３±０．１９ ６．３３±０．０４ ８．６５
马铃薯炭疽病菌犆．犮狅犮犮狅犱犲狊 ５．６３±０．１２ ３．４８±０．０６ ３８．１７
黄瓜枯萎病菌犉．狅狓狔狊狆狅狉狌犿 ５．９７±０．１１ ３．２８±０．０７ ４４．９７
番茄灰霉病菌犅．犮犻狀犲狉犲犪 ６．５７±０．１５ ３．９８±０．１０ ３９．３４
番瓜根腐病菌犉狌狊犪狉犻狌犿ｓｐ． ５．８７±０．１０ ２．７７±０．０５ ５２．８４
　数值后“±”表示标准误。Ｄａｔａｆｏｌｏｗｅｄｂｙ“±”ｉｎｄｉｃａｔｅｍｅａｎｅｒｒｏｒ．
图６　２６４犣犢７与８种病原真菌的对峙照片
犉犻犵．６　２６４犣犢７犮狅狀犳狉狅狀狋犲犻犵犺狋犽犻狀犱狊狅犳狆犪狋犺狅犵犲狀犻犮犳狌狀犵犻狆犺狅狋狅狊
　１：马铃薯枯萎病菌犉．犪狏犲狀犪犮犲狌犿；２：孜然根腐病菌犉．狊狅犾犪狀犻；３：小麦根腐病菌犅．狊狅狉狅犽犻狀犻犪狀犪；４：马铃薯褐腐病菌犛．狊狋犲犿狅狀犻狋犻狊；５：马铃薯炭疽
病菌犆．犮狅犮犮狅犱犲狊；６：黄瓜枯萎病菌犉．狅狓狔狊狆狅狉狌犿；７：番茄灰霉病菌犅．犮犻狀犲狉犲犪；８：番瓜根腐病菌犉狌狊犪狉犻狌犿ｓｐ．
２．４　室内盆栽防效测定
经盆栽试验，拮抗菌株２６４ＺＹ７接种１０ｄ后，对照的发病率和病情指数分别为９４．３８％，５５．０６％，拮抗菌处
理后的发病率和病情指数分别为５４．６７％，１７．０７％，拮抗菌株２６４ＺＹ７对番茄细菌性叶斑病的防效达６９％，说明
此拮抗菌对番茄叶斑病有较好的防治效果。
３　结论与讨论
应用拮抗微生物防治细菌性病害在国内外已有大量报道，如何红等［１６］从健康的辣椒植株体内分离筛选出多
０７１ 草　业　学　报 第２４卷
株对炭疽病、枯萎病等具有较强拮抗和防病作用的内生细菌；黎起秦等［１７］从番茄中分离到对番茄青枯病具有防
病效果的内生芽孢杆菌Ｂ４７（抑菌圈直径０．３ｃｍ）；黄明媛等［１８］从番茄根系土壤中分离筛选出４株对番茄青枯病
抑菌活性较强的拮抗菌株（抑菌圈０．０９７～０．３３０ｃｍ）；李伟杰和姜瑞波［１９］也分离筛选出一株对番茄青枯病拮抗
作用较强的内生细菌Ｘ１０（抑菌圈０．１０４ｃｍ）。内生细菌在植物体内具有稳定的生存空间，不易受环境条件的影
响，可以在植物体内独立的分裂繁殖和传递，筛选有益的内生细菌成为生物防治中有潜力的微生物农药、增产菌
或作为潜在的生防载体菌而加以利用［２０］，本研究从东祁连山高寒草地牧草内分离筛选的内生细菌２６４ＺＹ７对番
茄细菌性叶斑病的抑菌圈直径达到１．２２ｃｍ，抑菌带宽度０．６５ｃｍ，比黎起秦等［１７］、黄明媛等［１８］、李伟杰和姜瑞
波［１９］报道的抑菌能力更强。
国内报道了大量有关解淀粉芽孢杆菌防治植物病害的研究，且多为防治植物病原真菌病害，如张静等［２１］报
道了解淀粉芽孢杆菌对山茶灰斑病菌有较好的拮抗作用；陈士云等［２２］研究了一株防治油菜核盘菌（犛犮犾犲狉狅狋犻狀犻犪
狊犮犾犲狉狅狋犻狅狉狌犿）形成的解淀粉芽孢杆菌；权春善等［２３］报道了从堆肥中分离到一株对植物病原菌尖镰刀菌（犉狌狊犪狉犻
狌犿狅狓狔狊狆狅狉狌犿）有强烈抑菌活性的解淀粉芽孢杆菌Ｑ１２；赵辉等［２４］报道了从芝麻连作田里分离到一株解淀粉芽
孢杆菌，对菜豆壳球孢（犕犪犮狉狅狆犺狅犿犻狀犪狆犺犪狊犲狅犾犻狀犪）、尖孢镰孢菌（犉狌狊犪狉犻狌犿狅狓狔狊狆狅狉狌犿）、多主棒孢霉（犆狅狉狔狀犲狊
狆狅狉犪犮犪狊狊犻犻犮狅犾犪）和芝麻长蠕孢（犎犲犾犿犻狀狋犺狅狊狆狅狉犻狌犿狊犲狊犪犿犻）有抑菌活性；赵晓燕等［２５］报道了一株对烟草青枯病
菌有一定拮抗作用的解淀粉芽孢杆菌。本研究对菌株２６４ＺＹ７经形态观察，并结合分子生物学１６ＳｒＤＮＡ和
ｇｙｒＢ基因序列相似性分析，鉴定其为解淀粉芽孢杆菌犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪犮犻犲狀狊，此外，该菌株对本实验室内保
存的番瓜根腐病菌（抑菌率：５２．８４％）、马铃薯枯萎病菌（抑菌率：４９．６０％）和黄瓜枯萎病菌（抑菌率：４４．９７％）等
病原真菌均有良好的拮抗作用，这与以上报道的解淀粉芽孢杆菌对多种植物病原真菌有较好的拮抗作用结果一
致，本试验中该菌株对细菌性病菌有较好拮抗作用的结果与赵晓燕等［２５］报道的结果相符，且解淀粉芽孢杆菌防
治番茄细菌性叶斑病菌在国内首次报道，但其详细的抑菌机制还有待于进一步探索研究。
赵健等［１２］对番茄青枯病的内生拮抗细菌进行室内盆栽防效的测定，结果表明菌株ＺＢ６对番茄青枯病的防
病效果可达６３％～６５％，范晓静等［２６］在室内盆栽条件下，得出内生细菌Ｆｑ７对番茄细菌性叶斑病的防病效果达
６２．７１％，本试验中菌株２６４ＺＹ７对番茄细菌性叶斑病的盆栽防效达到６９％，说明该菌株对番茄细菌性叶斑病菌
有较好的抑制作用，在微生物农药的开发利用中潜力巨大。但是该生防菌株的作用机理、发酵条件等尚不明确，
还需进一步研究。
犚犲犳犲狉犲狀犮犲狊：
［１］　ＺｈａｏＴＣ，ＹｕＬ，ＳｕｎＦＺ，犲狋犪犾．Ｔｏｍａｔｏｂａｃｔｅｒｉａｌｓｐｅｃｋｄｉｓｅａｓｅａｎｄｉｔｓｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ．ＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，１９９９，２５（４）：５６．
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ｔｉｎ，２０１０，（１）：２４２８．
［１０］　ＦａｎｇＺＤ．ＲｅｓｅａｒｃｈＭｅｔｈｏｄｏｆＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ（ＴｈｉｒｄＥｄｉｔｉｏｎ）［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＣｈｉｎｅｓｅＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＰｒｅｓｓ，１９９８：１１０，１８２
１７１第８期 冯中红　等：番茄细菌性叶斑病菌的拮抗菌筛选、鉴定及其拮抗性能评价
１８３．
［１１］　ＧａｏＸＸ，ＭａｎＢＹ，ＣｈｅｎＸＲ，犲狋犪犾．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆ犓狅犫狉犲狊犻犪犮犪狆犻犾犾犻犳狅犾犻犪
ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａＸ４ｉｎｔｈｅＥａｓｔＱｉｌｉａｎＭｏｕｎｔａｉｎＡｌｐｉｎｅｇｒａｓｓｌａｎｄｓ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１３，２２（４）：１３７１４６．
［１２］　ＺｈａｏＪ，ＬａｎＣＺ，ＣｈｅｎＱＨ，犲狋犪犾．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｆｒｏｍｔｏｍａｔｏａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｔｏｔｏ
ｍａｔｏｂａｃｔｅｒｉａｌｗｉｌｔｄｉｓｅａｓｅ．ＷｕｙｉＳｃｉｅｎｃｅＪｏｕｒｎａｌ，２００６，２２（１）：４９５４．
［１３］　ＬｉＺＤ，ＣｈｅｎＸＲ，ＹａｎｇＣＤ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ犘狅犾狔犵狅狀狌犿狏犻狏犻狆犪狉狌犿ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａＺ１７ａｎｄｉｔｓｃａｐａｃｉｔｙｔｏａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ
ｔｏｗａｒｄｓｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇｉ．ＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ，２０１１，２８（１２）：２０９６２１０１．
［１４］　ＷａｎｇＬ，ＬｅｅＦ，ＴａｉＣ，犲狋犪犾．ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｇｙｒＢｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓａｎｄＤＮＡＤＮＡｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｉｎ
ｔｈｅ犅犪犮犻犾犾狌狊狊狌犫狋犻犾犻狊ｇｒｏｕｐ．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃａｎｄＥｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００７，５７：１８４６１８５０．
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ｔｉｏｎｔｏｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｔａｘｏｎｏｍｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆ犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊ｐｕｔｉｄａｓｔｒａｉｎｓ．ＡｐｐｌｉｅｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９５，６１：
１１０４１１０９．
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ｌｏｇｉｃａＳｉｎｉｃａ，２００３，３３（４）：３６４３６７．
［１８］　ＨｕａｎｇＭ Ｙ，ＧｕＷＪ，ＺｈａｎｇＦＢ，犲狋犪犾．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｂａｃｔｅｒｉｕｍａｇａｉｎｓｔ犚犪犾狊狋狅狀犻犪狊狅
犾犪狀犪犮犲犪狉狌犿．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１１，３８（２）：２１４２２０．
［１９］　ＬｉＷＪ，ＪｉａｎｇＲＢ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆｔｏｍａｔｏａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓａｇａｉｎｓｔ犚犪犾狊狋狅狀犻犪狊狅犾犪狀犪犮犲犪狉狌犿．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００７，２７（１）：
５８．
［２０］　ＹａｎｇＭＬ，ＳｕｎＸＬ．Ｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９８，２５（４）：２２４２２７．
［２１］　ＺｈａｎｇＪ，ＲａｎＸＸ，ＺｈｕＴＨ，犲狋犪犾．犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪犮犻犲狀狊ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｅｆｆｅｃｔｏｎ犘犲狊狋犪犾狅狋犻狅狆狊犻狊犵狌犲狆犻狀犻（Ｄｅｓｍ．）Ｓｔｅｙ．
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１４，（７）：１２２１２５．
［２２］　ＣｈｅｎＳＹ，ＹａｎｇＢＹ，ＧａｏＭＹ，犲狋犪犾．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｓｃｌｅｒｏｔｉａｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍｂｙ犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪
犮犻犲狀狊．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｐｐｌｉｅｄ＆ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙ，２００５，１１（３）：３７３３７６．
［２３］　ＱｕａｎＣＳ，ＷａｎｇＪＨ，ＸｕＨＴ，犲狋犪犾．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａ犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪犮犻犲狀狊ｗｉｔｈｈｉｇｈａｎｔｉｆｕｎｇａｌ
ａｃｔｉｖｉｔｙ．ＡｃｔａＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａＳｉｎｉｃａ，２００６，４６（１）：７１２．
［２４］　ＺｈａｏＨ，ＬｕＣＴ，ＬｉｕＨＹ，犲狋犪犾．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａ犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪犮犻犲狀狊ｓｔｒａｉｎａｎｄｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｉｔｓａｎｔｉ
ｆｕｎｇａｌａｃｔｉｖｉｔｙ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０１４，４３（４）：７５７９．
［２５］　ＺｈａｏＸＹ，ＹａｎｇＨ，ＣｈｅｎＪＧ，犲狋犪犾．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｂａｃｉｌｕｓａｇａｉｎｓｔｔｏｂａｃｃｏｂａｃｔｅｒｉ
ａｌｗｉｌｔ．ＨｕｂｅｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０１４，（８）：１８１０１８１４．
［２６］　ＦａｎＸＪ，ＹａｎｇＣＱ，ＱｉｕＳＸ，犲狋犪犾．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌｂａｃｔｅｒｉａｌｓｔｒａｉｎａｎｄｉｔｓａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｔｏｔｏｍａｔｏｂａｃｔｅｒｉａｌ
ｓｐｅｃｋａｎｄｃｏｌｏｎｉｚｉｎｇａｂｉｌｉｔｙｉｎｔｏｍａｔｏ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｕｊｉａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ），
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３７１第８期 冯中红　等：番茄细菌性叶斑病菌的拮抗菌筛选、鉴定及其拮抗性能评价