全 文 ：书犇犗犐：１０．１１６８６／犮狔狓犫２０１５０２１８ 犺狋狋狆：／／犮狔狓犫．犾狕狌．犲犱狌．犮狀
张树武，徐秉良，程玲娟，薛应钰．深绿木霉对白三叶草促生作用及生理生化特性的影响．草业学报，２０１５，２４（２）：１６１１６７．
ＺｈａｎｇＳＷ，ＸｕＢＬ，ＣｈｅｎｇＬＪ，ＸｕｅＹＹ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆ犜狉犻犮犺狅犱犲狉犿犪犪狌狉犲狅狏犻狉犻犱犲ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆ犜狉犻犳狅
犾犻狌犿狉犲狆犲狀狊．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１５，２４（２）：１６１１６７．
深绿木霉对白三叶草促生作用及
生理生化特性的影响
张树武，徐秉良，程玲娟，薛应钰
（甘肃农业大学草业学院，草业生态系统教育部重点实验室，甘肃省草业工程实验室，
中－美草地畜牧业可持续发展研究中心，甘肃 兰州７３００７０）
摘要：通过室内种子萌发和温室幼苗盆栽试验研究了不同稀释倍数深绿木霉发酵液对白三叶草促生作用及生理生
化特性的影响。结果表明，在室内试验条件下不同稀释倍数深绿木霉发酵液能够显著提高白三叶草种子的发芽
率、发芽指数和活力指数，尤其１００倍稀释液对种子发芽率、发芽指数和活力指数的影响较为明显，分别为
９４．４２％，１３．４２和９．５２。在温室条件下不同稀释倍数深绿木霉发酵液对白三叶草幼苗的生长具有明显的影响，并
能够增加幼苗叶绿素、可溶性蛋白质含量和生理生化酶的活性，其中１００倍发酵液处理后幼苗的根长、株高、植株
鲜重、干重和根冠比的相对增长率分别为３７．０９％，１３．１８％，５７．７３％，５４．３５％，２０．８９％；叶绿素和可溶性蛋白质含
量的相对增长率分别为１４．０２％和７６．２１％；多酚氧化酶、过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶活性均显著高于对照，其
中多酚氧化酶活性在处理后第３天达到最大值，过氧化物酶活性在处理后第１和４天达到最大值，苯丙氨酸解氨
酶活性在处理后第３～４天达到最大值。因此，深绿木霉发酵液对白三叶草的生长具有较强的促进作用。
关键词：深绿木霉；促生作用；白三叶草；生理生化特性
犈犳犳犲犮狋狊狅犳犜狉犻犮犺狅犱犲狉犿犪犪狌狉犲狅狏犻狉犻犱犲犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀狅狀狋犺犲犵狉狅狑狋犺犪狀犱狆犺狔狊犻狅犾狅犵犻犮犪犾
犮犺犪狉犪犮狋犲狉犻狊狋犻犮狊狅犳犜狉犻犳狅犾犻狌犿狉犲狆犲狀狊
ＺＨＡＮＧＳｈｕｗｕ，ＸＵＢｉｎｇｌｉａｎｇ，ＣＨＥＮＧＬｉｎｇｊｕａｎ，ＸＵＥＹｉｎｇｙｕ
犆狅犾犾犲犵犲狅犳犌狉犪狊狊犾犪狀犱犛犮犻犲狀犮犲，犌犪狀狊狌犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔；犓犲狔犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犌狉犪狊狊犾犪狀犱犈犮狅狊狔狊狋犲犿，犕犻狀犻狊狋狉狔狅犳犈犱狌犮犪狋犻狅狀；
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７３００７０，犆犺犻狀犪
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆ犜狉犻犮犺狅犱犲狉犿犪犪狌狉犲狅狏犻狉犻犱犲ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
ｏｆ犜狉犻犳狅犾犻狌犿狉犲狆犲狀狊ｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｂｙｐｏｔｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｉｎａｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ．犜．
犪狌狉犲狅狏犻狉犻犱犲ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｗａｓａｐｐｌｉｅｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｉｌｕｔｉｏｎｒａｔｅｓａｎｄａｌｄｉｌｕｔｉｏｎｒａｔｅｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ
ｔｈｅｒａｔｅｓｏｆｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，ｔｈｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｉｎｄｅｘａｎｄｔｈｅｖｉｇｏｒｉｎｄｅｘ．Ｔｈｅ１００ｔｉｍｅｓｄｉｌｕｔｉｏｎｈａｄｔｈｅｍｏｓｔ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｅｆｆｅｃｔｓｏｎｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅｓ，ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｉｎｄｅｘａｎｄｖｉｇｏｒｉｎｄｅｘ（９４．４２％，１３．４２ａｎｄ９．５２ｒｅ
ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）．Ｉｎｔｈｅｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ，ｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆ犜．犪狌狉犲狅狏犻狉犻犱犲ｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｉｌｕｔｉｏｎｒａｔｅｓ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｐｒｏｍｏｔｅｄｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆ犜．狉犲狆犲狀狊ｓｅｅｄｌｉｎｇｓａｎｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌａｎｄｓｏｌｕｂｌｅ
第２４卷 第２期
Ｖｏｌ．２４，Ｎｏ．２
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
２０１５年２月
Ｆｅｂ，２０１５
收稿日期：２０１４０１１５；改回日期：２０１４０３１４
基金项目：草业生态系统教育部省部共建重点实验室项目（ＣＹＧＧ２００６０１３），甘肃省农牧厅生物技术专项（ＧＮＳＷ２００９０４）和甘肃省教育厅项
目（０４２０３）资助。
作者简介：张树武（１９８６），男，甘肃庆阳人，在读博士。Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｓｗ７０４＠１２６．ｃｏｍ
通讯作者Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．Ｅｍａｉｌ：ｘｕｂｌ＠ｇｓａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
ｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔ，ａｓｗｅｌａｓｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｅｎｚｙｍｅｓ．Ｔｈｅ１００ｔｉｍｅｓｄｉｌｕｔｉｏｎｉｎｃｒｅａｓｅｄ犜．狉犲狆犲狀狊
ｒｏｏｔｌｅｎｇｔｈ，ｐｌａｎｔｈｅｉｇｈｔ，ｆｒｅｓｈｗｅｉｇｈｔ，ｄｒｙｗｅｉｇｈｔａｎｄｒｏｏｔｓｈｏｏｔｒａｔｉｏｂｙ３７．０９％，１３．１８％，５７．７３％，
５４．３５％ａｎｄ２０．８９％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｉｔｉｎｃｒｅａｓｅｄｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌａｎｄｓｏｌｕｂｌｅｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔｓｂｙ１４．０２％ａｎｄ７６．２１％
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅ （ＰＰＯ），ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ （ＰＯＤ）ａｎｄｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ
（ＰＡＬ）ｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．ＴｈｅｍａｘｉｍｕｍａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＰＰＯ，ＰＯＤａｎｄＰＡＬｐｒｅｓｅｎｔｅｄａｔ３ｄａｙｓａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ，１
ａｎｄ４ｄａｙｓａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄ３ａｎｄ４ｄａｙｓａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｔｈａｔｔｈｅｆｅｒ
ｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆ犜．犪狌狉犲狅狏犻狉犻犱犲ｈａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｇｒｏｗｔｈｐｒｏｍｏｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｓｏｎ犜．狉犲狆犲狀狊．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犜狉犻犮犺狅犱犲狉犿犪犪狌狉犲狅狏犻狉犻犱犲；ｇｒｏｗｔｈｐｒｏｍｏｔｉｎｇ；犜狉犻犳狅犾犻狌犿狉犲狆犲狀狊；ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
三叶草（犜狉犻犳狅犾犻狌犿）为豆科（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ）三叶草属（犜狉犻犳狅犾犻狌犿）多年生草本植物，原产于小亚细亚南部和欧
洲东南部，是一种分布范围广的优质豆科牧草和地被（草坪）植物［１］。近年来由于三叶草具有适应性广、侵占性
强、再生力强、观赏期长、根系发达、茎叶茂密和花色鲜艳等优点，目前已被广泛应用于广场、公园、道路和庭院等
地绿化，以及作为半干旱地区重要的草坪草［２］。同时由于三叶草富含多种营养成分，是家禽和家畜的优质饲草，
也是一种理想的果园间作绿肥［３］。但是，在我国北方地区土壤盐碱化和干旱等问题较为严重，导致大量种子萌发
率低和幼苗生长势较差［４５］，以及导致幼苗生理生化代谢过程受阻和体内活性氧积累，发生严重时能够导致植株
体内大量细胞死亡［６８］，使植株的生长受到严重的抑制，给牧草产业的发展带来了巨大的经济损失［９］。另外，由于
各种因素的影响，三叶草病害（锈病、病毒病、白绢病、褐斑病和白粉病等）的发生愈来愈严重，致使三叶草的生长
和观赏价值受到严重的影响，对畜牧业和绿化业的发展造成了严重的危害［１０］。因此，提高三叶草种子的出苗率，
促进幼苗健壮生长，提高其观赏价值、产量和质量是当前面临的重要问题。
近年来，主要采用一些传统的农业和土壤改良等措施提高三叶草种子的萌发率和幼苗的生长势，但这些措施
在实际的生产中存在见效慢，并且需要较长的周期才能获得一定效果等缺点［１１１２］。同时，在三叶草病害的防治过
程中通常采用化学防治措施，但是化学农药的使用容易造成环境污染和导致病原菌产生一定的抗药性，阻碍了绿
色农业和牧业的发展［１３］。因此，开发和利用生物制剂提高三叶草种子的萌发率和促进三叶草幼苗生长，以及提
高三叶草体内相关的防御酶活性是目前研究的新思路和新方法。
木霉菌（犜狉犻犮犺狅犱犲狉犿犪）是一类在自然界中分布广泛的生防真菌，是土壤微生物的重要群落之一，常见于土
壤、植物残体、植物根围和叶围等环境中［１４１５］。近年来已有相关报道表明，哈茨木霉（犜．犺犪狋狕犻犪狀狌犿）和康宁木霉
（犜．犽狅狀犻狀犵犻犻）能够显著提高马铃薯（犛狅犾犪狀狌犿狋狌犫犲狉狅狊狌犿）、烟草（犖犻犮狅狋犻犪狀犪狋犪犫犪犮狌犿）和红萝卜（犇犪狌犮狌狊犮犪狉狅狋犪）
的发芽率、出苗率及干重［１６］，以及长枝木霉Ｔ６ 菌株（犜．犾狅狀犵犻犫狉犪犮犺犻犪狋狌犿）分生孢子悬浮液能够显著提高３种禾
本科和３种豆科牧草幼苗的生长和相关生理效应酶的活性［１７］，但目前研究较多的为木霉菌对一些常见作物的促
生作用，尤其是一些经济作物，而关于深绿木霉菌发酵液对白三叶草生长影响等方面的研究尚未见报道。因此，
本试验通过深绿木霉发酵液对白三叶草种子活性和幼苗促生作用的影响，以及相关生理生化指标的测定，旨在初
步明确其对白三叶草促生作用机理，对提高白三叶草产量和观赏价值具有重要的意义。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
１．１．１ 供试菌株 供试菌株为深绿木霉（犜狉犻犮犺狅犱犲狉犿犪犪狌狉犲狅狏犻狉犻犱犲），保存于甘肃农业大学草业学院植物病
理学实验室。
１．１．２ 三叶草品种 三叶草品种为白三叶草（犜狉犻犳狅犾犻狌犿狉犲狆犲狀狊），由甘肃省农业科学院种子有限责任公司提
供。
１．２ 试验方法
１．２．１ 深绿木霉菌培养 试验于２０１２年７月实施。将４℃低温保存的深绿木霉菌活化后接种于马铃薯葡萄
糖琼脂（ｐｏｔａｔｏｄｅｘｔｒｏｓｅａｇａｒ，ＰＤＡ）培养基，并置于２５℃培养箱中光暗交替（１６／８ｈ）培养６ｄ。然后在其培养基
２６１ 草 业 学 报 第２４卷
中加入１滴Ｔｗｅｅｎ８０和５ｍＬ无菌水配制为分生孢子悬浮液，并通过利用血球计数板计数其浓度，最终使其浓
度为１×１０８ｃｆｕ／ｍＬ。液体发酵培养通过加入配制好的１ｍＬ分生孢子悬浮液于６０ｍＬ马铃薯葡萄糖液体（ｐｏ
ｔａｔｏｄｅｘｔｒｏｓｅｂｒｏｔｈ，ＰＤＢ）培养基，对照液体发酵培养则加入１ｍＬ无菌水和１滴Ｔｗｅｅｎ８０，处理和对照均为３
个重复，置于摇床中培养８ｄ，温度为２５℃、转速为１５０ｒ／ｍｉｎ。连续培养８ｄ后将培养液通过双层滤膜过滤，过滤
后获得的滤液分别稀释为５０，１００和２００倍液。
１．２．２ 深绿木霉对白三叶草种子的影响 将供试的种子经５％ ＮａＣｌＯ溶液进行消毒处理５ｍｉｎ，消毒后将其
通过无菌水充分冲洗５次，然后将其置于直径为９ｃｍ的培养皿内进行种子处理。处理的过程中培养皿中含有一
层纱布和两层滤纸进行保湿处理，各处理和对照均为１００粒种子，重复６次。然后将配制好的深绿木霉发酵液
（原液、５０、１００和２００倍液）分别加入１５ｍＬ于每个处理中，对照则加入等量的ＰＤＢ滤液，置于温度为２５℃和光
照为１６／８ｈ的培养箱中进行培养。处理后待种子的胚根长度超过种子长度一半时开始统计种子的发芽率、发芽
指数和活力指数［３］。
发芽率（％）＝（发芽种子总数／供试种子总数）×１００
发芽指数＝∑犌狋／犇狋
式中，犌狋为狋时间内的发芽数，犇狋为相应的发芽天数。
活力指数＝发芽指数×单株平均干重
１．２．３ 温室试验 将经过５％ ＮａＣｌＯ消毒（５ｍｉｎ）处理的白三叶草种子，经无菌水充分冲洗后种植于装入灭
菌土壤的塑料钵中（１００粒／钵）。种植后待幼苗生长到两叶一心期时，分别将配制的深绿木霉发酵液（２０ｍＬ）浇
灌于植株根系周围的土壤中，对照则浇灌等量的ＰＤＢ滤液。试验在温度为２５℃，光照为１６／８ｈ的温室中进行，
且各处理和对照均重复６次。待深绿木霉处理后第３０天，从每个处理和对照中分别随机抽取６０株幼苗，测定白
三叶草幼苗形态指标、叶绿素和可溶性蛋白质含量、多酚氧化酶（ＰＰＯ）、幼苗过氧化物酶（ＰＯＤ）和苯丙氨酸解氨
酶（ＰＡＬ）的活性。
１．２．４ 幼苗形态指标测定 根长和株高采用刻度尺进行测量，整株鲜重采用电子天平称量，并根据根系鲜重
与地上部鲜重的比值计算根冠比。同时将新鲜的植株通过干燥箱进行杀青处理，处理温度为１０５℃，时间为３０
ｍｉｎ，然后调节温度为８０℃烘干，并称量干重［１８］。
１．２．５ 幼苗叶绿素和可溶性蛋白质含量测定 三叶草幼苗叶绿素含量测定采用“分光光度法”［１９］；采用“考马
斯亮蓝Ｇ２５０法”测定幼苗可溶性蛋白质含量［２０２１］，每个处理重复６次。
１．２．６ 生理生化酶活性测定 ＰＯＤ活性采用“愈创木酚法”测定，ＰＡＬ活性采用“分光光度法”测定，ＰＰＯ活
性采用“邻苯二酚法”测定［２２２３］，且每天测定１次，连续测定６ｄ，每个处理重复６次。
１．３ 数据处理
数据利用ＳＰＳＳ（ＳＰＳＳＶ１６．０，ＳＰＳＳＩｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，ＵＳＡ）软件处理和方差分析，各个处理的多重比较
采用Ｄｕｎｃａｎ新复极差法。
２ 结果与分析
２．１ 深绿木霉发酵液对白三叶草种子的影响
深绿木霉发酵液对种子的活性具有显著的影响，并且与对照相比不同稀释倍数发酵液对种子活性的影响均
存在显著的差异，尤其是１００和５０倍发酵液能够显著提高种子的发芽率（９４．４２％和９２．５０％）、发芽指数（１３．４２
和１１．２３）和活力指数（９．５２和５．９６）（表１）。
２．２ 深绿木霉发酵液对白三叶草幼苗生长的影响
深绿木霉发酵液对白三叶草幼苗生长具有明显的促生作用，且与对照相比不同稀释倍数发酵液对幼苗生长
的影响存在显著的差异，１００倍稀释液处理的幼苗根系长度、株高、鲜重、干重和根冠比分别为２５．４３ｍｍ，５．８４
ｍｍ，１．５３ｍｇ，０．７１ｍｇ和４．３４，显著高于对照（表２）。
３６１第２期 张树武 等：深绿木霉对白三叶草促生作用及生理生化特性的影响
２．３ 深绿木霉发酵液对白三叶草幼苗叶绿素和可
溶性蛋白质含量的影响
深绿木霉发酵液对白三叶草幼苗叶绿素和可溶
性蛋白质含量的影响测定结果表明，不同稀释倍数
发酵液能够显著提高幼苗叶绿素和可溶性蛋白质含
量，其中１００和５０倍稀释液对幼苗叶绿素和可溶性
蛋白质含量具有显著的影响，且与对照相比，１００和
５０倍稀释液处理的幼苗叶绿素和可溶性蛋白质含
量相对增长率分别为１４．０２％和７６．２１％（表３）。
２．４ 深绿木霉发酵液对白三叶草幼苗多酚氧化酶
（ＰＰＯ）活性的影响
不同稀释倍数深绿木霉发酵液对白三叶草幼苗
ＰＰＯ活性的影响随着处理时间的增加而逐渐增大，
尤其是在处理后第３天达到最大值，但是随着处理
时间的增加，在处理后第４天 ＰＰＯ活性又逐渐减
小，并且不同稀释倍数发酵液对幼苗ＰＰＯ活性的影
响均存在显著的影响，其中１００和５０倍稀释液对其
ＰＰＯ活性的影响较为明显（图１）。
表１ 深绿木霉发酵液对白三叶草种子活性的影响
犜犪犫犾犲１ 犈犳犳犲犮狋狊狅犳狋犺犲犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀犿犲犱犻狌犿狅犳犜．犪狌狉犲狅狏犻狉犻犱犲
狅狀狋犺犲狊犲犲犱犪犮狋犻狏犻狋狔狅犳犜．狉犲狆犲狀狊
浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
发芽率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｅｓ（％）
发芽指数
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｉｎｄｅｘ
活力指数
Ｖｉｇｏｒｉｎｄｅｘ
２００× ９１．３６±０．５６ｃ １０．００±０．１８ｃ ５．０１±０．１４ｃ
１００× ９４．４２±０．５２ａ １３．４２±０．１４ａ ９．５２±０．１２ａ
５０× ９２．５０±０．５０ｂ １１．２３±０．２３ｂ ５．９６±０．１２ｂ
原液Ｓｔｏｃｋｓｏｌｕｔｉｏｎ９１．８９±０．５２ｂｃ１０．８２±０．２０ｂｃ ５．８３±０．０７ｂｃ
对照Ｃｏｎｔｒｏｌ ９０．７８±０．７０ｄ ９．２０±０．１５ｄ ４．２３±０．２２ｄ
注：表中的数据为第８天时发芽率、发芽指数和活力指数。同列数据后
不同小写字母表示经Ｄｕｎｃａｎ氏新复极差法检验在犘＜０．０５水平差异显
著。下同。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅｓ，ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｉｎｄｅｘａｎｄｖｉｇｏｒｉｎｄｅｘｗｅｒｅ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄａｔｔｈｅ８ｔｈｄａｙｉｎＴａｂｌｅ１．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｅｔｔｅｒｓｉｎｔｈｅｃｏｌｕｍｎ
ｓｈｏｗｅｄ０．０５ｌｅｖｅｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙａｍｏｎｇｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ
ｂｙＤｕｎｃａｎ’ｓｎｅｗｍｕｌｔｉｐｌｅｒａｎｇｅｔｅｓｔ．Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
表２ 深绿木霉发酵液对白三叶草幼苗生长的影响
犜犪犫犾犲２ 犈犳犳犲犮狋狊狅犳狋犺犲犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀犿犲犱犻狌犿狅犳犜．犪狌狉犲狅狏犻狉犻犱犲狅狀狋犺犲犪犮狋犻狏犻狋狔狅犳犜．狉犲狆犲狀狊狊犲犲犱犾犻狀犵狊
浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
根长
Ｒｏｏｔｌｅｎｇｔｈ（ｍｍ）
株高
Ｐｌａｎｔｈｅｉｇｈｔ（ｍｍ）
鲜重
Ｆｒｅｓｈｗｅｉｇｈｔｓ（ｍｇ）
干重
Ｄｒｙｗｅｉｇｈｔｓ（ｍｇ）
根冠比
Ｒｏｏｔｓｈｏｏｔｒａｔｉｏ
２００× ２３．５０±０．４６ｂ ５．６５±０．１０ａｂ １．１６±０．０７ｂ ０．５３±０．０２ｂ ４．１９±０．１５ｂ
１００× ２５．４３±０．５８ａ ５．８４±０．１４ａ １．５３±０．１０ａ ０．７１±０．０７ａ ４．３４±０．１９ａ
５０× ２１．５０±０．８１ｃ ５．５１±０．１３ｂ １．１３±０．０７ｂｃ ０．５２±０．０７ｂｃ ４．１５±０．０８ｂｃ
原液Ｓｔｏｃｋｓｏｌｕｔｉｏｎ ２１．１１±０．１７ｃ ５．３３±０．１３ｃ １．０９±０．０８ｃ ０．５２±０．０２ｂｃ ４．１０±０．０８ｃ
对照Ｃｏｎｔｒｏｌ １８．５５±０．３４ｄ ５．１６±０．０５ｄ ０．９７±０．０９ｄ ０．４６±０．０３ｃ ３．５９±０．２７ｄ
２．５ 深绿木霉发酵液对白三叶草幼苗过氧化物酶
（ＰＯＤ）活性的影响
深绿木霉发酵液对白三叶草幼苗ＰＯＤ活性的
影响测定结果表明，与对照相比不同稀释倍数发酵
液对幼苗ＰＯＤ活性的影响存在显著的差异，其中
１００和５０倍稀释液对幼苗ＰＯＤ活性的影响较为明
显，并且不同稀释倍数发酵液对幼苗ＰＯＤ活性的
影响在处理后前３ｄ随着处理时间的增加而逐渐减
小，但在处理后第４天 ＰＯＤ活性达到最大值，第５
天后ＰＯＤ活性呈逐渐下降的趋势（图２）。
２．６ 深绿木霉发酵液对白三叶草幼苗苯丙氨酸解
氨酶（ＰＡＬ）活性的影响
与对照相比，不同稀释倍数深绿木霉发酵液对
表３ 深绿木霉发酵液对白三叶草幼苗叶绿素和
可溶性蛋白质含量的影响
犜犪犫犾犲３ 犈犳犳犲犮狋狊狅犳狋犺犲犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀犿犲犱犻狌犿狅犳犜．犪狌狉犲狅狏犻狉犻犱犲
狅狀狋犺犲犮狅狀狋犲狀狋狅犳犮犺犾狅狉狅狆犺狔犾犪狀犱狊狅犾狌犫犾犲
狆狉狅狋犲犻狀狅犳犜．狉犲狆犲狀狊狊犲犲犱犾犻狀犵狊
浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
叶绿素含量
Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｃｏｎｔｅｎｔ
（ｍｇ／ｇ）
可溶性蛋白含量
Ｓｏｌｕｂｌｅｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔ
（μｇ／ｇ）
２００× ２．８３±０．１２ｂ １３７４．７４±８．５４ｃ
１００× ３．０９±０．１１ａ １５４５．６７±１２．５０ａ
５０× ２．８６±０．０９ｂ １４８９．２６±２．２９ｂ
原液Ｓｔｏｃｋｓｏｌｕｔｉｏｎ ２．７７±０．０８ｃ １２７２．１１±３．７３ｄ
对照Ｃｏｎｔｒｏｌ ２．７１±０．０５ｃ ８７７．１８±１２．６１ｅ
４６１ 草 业 学 报 第２４卷
白三叶草幼苗ＰＡＬ活性的影响存在显著的差异，其中１００和５０倍稀释液对ＰＡＬ活性的影响较为明显。同时自
处理后第１天开始幼苗ＰＡＬ活性呈逐渐下降的趋势，但在处理后第３天逐渐升高，并且在处理后第３和４天达
到最大值，而第５天后ＰＡＬ活性呈逐渐下降的趋势（图３）。
图１ 深绿木霉发酵液对白三叶草幼苗多酚氧化酶活性的影响
犉犻犵．１ 犈犳犳犲犮狋狊狅犳狋犺犲犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀犿犲犱犻狌犿狅犳犜．犪狌狉犲狅狏犻狉犻犱犲
狅狀狋犺犲犪犮狋犻狏犻狋狔狅犳狆狅犾狔狆犺犲狀狅犾狅狓犻犱犪狊犲（犘犘犗）狅犳
犜．狉犲狆犲狀狊狊犲犲犱犾犻狀犵狊
图２ 深绿木霉发酵液对白三叶草幼苗过氧化物酶活性的影响
犉犻犵．２ 犈犳犳犲犮狋狊狅犳狋犺犲犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀犿犲犱犻狌犿狅犳犜．犪狌狉犲狅狏犻狉犻犱犲
狅狀狋犺犲犪犮狋犻狏犻狋狔狅犳狆犲狉狅狓犻犱犪狊犲（犘犗犇）
狅犳犜．狉犲狆犲狀狊狊犲犲犱犾犻狀犵狊
数据均为平均数±标准误，且不同小写字母表示经Ｄｕｎｃａｎ氏新复极差法检验在犘＜０．０５水平差异显著。下同。Ｔｈｅｄａｔａａｒｅｍｅａｎ±ｓｔａｎｄｅｒｒｏｒ．
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｅｔｔｅｒｓｓｈｏｗｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ犘＜０．０５ｌｅｖｅｌａｍｏｎｇｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｂｙＤｕｎｃａｎ’ｓｎｅｗｍｕｌｔｉｐｌｅｒａｎｇｅｔｅｓｔ．Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
３ 讨论与结论
图３ 深绿木霉发酵液对白三叶草幼苗
苯丙氨酸解氨酶活性的影响
犉犻犵．３ 犈犳犳犲犮狋狊狅犳狋犺犲犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀犿犲犱犻狌犿狅犳犜．犪狌狉犲狅狏犻狉犻犱犲
狅狀狋犺犲犪犮狋犻狏犻狋狔狅犳狆犺犲狀狔犾犪犾犪狀犻狀犲犪犿犿狅狀犻犪
犾狔犪狊犲（犘犃犔）狅犳犜．狉犲狆犲狀狊狊犲犲犱犾犻狀犵狊
据相关文献报道，木霉菌作为一种重要的根际
促生菌，对多种植物辣椒（犆犪狆狊犻犮狌犿犳狉狌狋犲狊犮犲狀狊）、马
铃薯、莴苣（犔犪犮狋狌犮犪狊犪狋犻狏犪）、黄瓜（犆狌犮狌犿犻狊狊犪狋犻
狏狌狊）、白菜（犅狉犪狊狊犻犮犪狉犪狆犪）、豌豆（犘犻狊狌犿狊犪狋犻狏狌犿）、
花生（犃狉犪犮犺犻狊犺狔狆狅犵犪犲犪）、长春花（犆犪狋犺犪狉犪狀狋犺狌狊
狉狅狊犲狌狊）和菊花（犇犲狀犱狉犪狀狋犺犲犿犪犿狅狉犻犳狅犾犻狌犿）等的生
长具有显著的促生效应，具体表现为提高植物种子
活力、幼苗根系活性、株高及幼苗叶绿素和可溶性蛋
白质含量等［２４２５］。本试验通过深绿木霉发酵液对白
三叶草幼苗的促生作用和生理生化特性的测定，表
明深绿木霉发酵液不仅能够显著提高种子的活性和
幼苗的生长势，而且能够提高幼苗叶绿素含量、可溶
性蛋白质含量和相关酶的活性。
前期研究表明，哈茨木霉Ｔ２１６菌株发酵产物
能够显著提高水稻（犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪）种子的活性［２６］。
同时，相关研究表明木霉发酵液处理的番茄（犔狔犮狅
狆犲狉狊犻犮狅狀犲狊犮狌犾犲狀狋狌犿）种子，１００倍稀释液能够显著提高番茄种子的发芽率，且明显高于其他稀释液［２７］。本试验结
果表明深绿木霉对白三叶草种子的活性具有显著的促生作用，与前期的研究结果基本一致。同时通过不同浓度
发酵液促生效果的测定，筛选出了浓度为１００倍的发酵液具有较好的促生效果，可作为最适的促生浓度应用于实
际的农业生产中。
５６１第２期 张树武 等：深绿木霉对白三叶草促生作用及生理生化特性的影响
刘连妹等［２８］利用经过离子辐射诱变处理的哈茨木霉孢子悬浮液处理二叶期番茄幼苗，结果表明，哈茨木霉
孢子悬浮液能够显著促进番茄幼苗地上和地下部分的生长，并提高植株叶片中叶绿素含量、ＰＯＤ、ＰＰＯ和ＳＯＤ
活性，尤其５０倍的孢子悬浮液对番茄生长的促进效果最为显著。陈伯清等［２９］在番茄幼苗根际施用木霉菌孢子
悬浮液后发现，番茄幼苗叶片中的叶绿素含量明显高于对照，且对番茄幼苗生长具有明显的促进作用，该促进作
用可能是通过提高幼苗叶片的叶绿素含量，增强光合作用来达到的。本试验结果表明１００倍深绿木霉发酵液对
白三叶草幼苗的生长具有较强的促生作用。另外，不同稀释倍数深绿木霉发酵液对幼苗叶绿素和可溶性蛋白质
含量，以及ＰＡＬ、ＰＰＯ和ＰＯＤ这３种重要的植物防御酶活性变化具有显著的影响，且不同浓度之间存在显著的
差异，尤其是浓度为１００和５０倍的发酵液对白三叶草幼苗叶绿素、可溶性蛋白质含量和与抗性相关酶的活性影
响较为明显。同时研究过程中发现ＰＯＤ活性在处理后第１和４天达到最大值，而ＰＡＬ和ＰＰＯ活性均在处理后
第３或４天达到最大值，且处理和对照中３种酶活性变化趋势都是一致的，其原因可能是由于植物在生长发育的
不同时间段３种酶活性是不同的，即可能与植物本身不同发育时间段酶活性的变化有关，具体原因还有待进一步
深入研究。
因此，深绿木霉发酵液对白三叶草种子和幼苗的生长具有较强的促生作用，并且能够显著的提高白三叶幼苗
叶绿素含量、可溶性蛋白质含量和生理生化酶的活性，但目前对于深绿木霉的研究还只处于初级阶段，诸如对其
他种类植物的促生作用及机理等还有待进一步深入的研究。
犚犲犳犲狉犲狀犮犲：
［１］ ＦａｎＪＣ，ＬｉｕＹＸ，ＺｈｕＦＨ．Ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎａｎｄｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎｏｆ犜狉犻犳狅犾犻狌犿犳狉犪犵犻犳犲狉狌犿．ＳｐｅｃｉａｌＥｃｏｎｏｍｉｃＡｎｉｍａｌａｎｄＰｌａｎｔ，２００３，６（３）：２９．
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６６１ 草 业 学 报 第２４卷
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７６１第２期 张树武 等：深绿木霉对白三叶草促生作用及生理生化特性的影响