全 文 ：林业科学研究摇 圆园员员袁圆源渊猿冤院源员园 源员源云燥则藻泽贼 砸藻泽藻葬则糟澡
摇 摇 文章编号院员园园员鄄员源怨愿渊圆园员员冤园猿鄄园源员园鄄园缘
油桐尺蠖核型多角体病毒渊月怎泽怎晕孕灾冤生物学与检测技术研究
陈摇 川员袁 张永安员鄢袁 王玉珠员袁 曲良建员袁 林思诚圆袁 柯沛强圆
渊员援中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所袁国家林业局森林保护学重点实验室袁北京摇 员园园园怨员曰
圆援广东省茂名市林业科学研究所袁广东 茂名摇 缘圆缘园园园冤
收稿日期院 圆园员园鄄园猿鄄园员
基金项目院 林业公益行业专项基金渊圆园园苑园源园园猿冤
作者简介院 陈摇 川渊员怨愿缘要冤袁中国林业科学研究院在读硕士研究生袁主要从事害虫生物防治方面的研究援
鄢通讯作者院 研究员援 耘鄄皂葬蚤造院扎澡葬灶早赠葬遭岳 糟葬枣援 葬糟援 糟灶
关键词院月怎泽怎晕孕灾曰油桐尺蠖曰孕悦砸曰生物活性
中图分类号院杂苑员愿援 愿 文献标识码院粤
月蚤燥造燥早蚤糟葬造 粤糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 贼澡藻 月怎泽怎晕孕灾 葬灶凿 陨贼泽 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 栽藻糟澡灶燥造燥早赠
悦匀耘晕 悦澡怎葬灶员袁 在匀粤晕郧 再燥灶早鄄葬灶员袁 宰粤晕郧 再怎鄄扎澡怎员袁 匝哉 蕴蚤葬灶早鄄躁蚤葬灶员袁 蕴陨晕 杂蚤鄄糟澡藻灶早圆袁 运耘 孕藻蚤鄄择蚤葬灶早圆
渊员援 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼糟 燥枣 云燥则藻泽贼 耘糟燥造燥早赠袁 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼 葬灶凿 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠曰 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 杂贼葬贼藻
云燥则藻泽贼赠 粤凿皂蚤灶蚤泽贼则葬贼蚤燥灶袁月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园园怨员袁悦澡蚤灶葬曰 圆援 酝葬燥皂蚤灶早 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 云燥则藻泽贼则赠 杂糟蚤藻灶糟藻袁酝葬燥皂蚤灶早摇 缘圆缘园园园袁郧怎葬灶早凿燥灶早袁悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 孕则蚤皂藻则泽 憎藻则藻 凿藻泽蚤早灶藻凿 葬糟糟燥则凿蚤灶早 贼燥 泽藻择怎藻灶糟藻 燥枣 责燥造赠澡藻凿则燥灶 藻灶增藻造燥责藻 责则燥贼藻蚤灶 早藻灶藻渊 责藻责冤 燥枣 月怎泽怎晕孕灾袁
贼澡藻灶 贼澡藻 责燥造赠皂藻则葬泽藻 糟澡葬蚤灶 则藻葬糟贼蚤燥灶渊孕悦砸冤 贼藻糟澡灶燥造燥早赠 憎葬泽 怎泽藻凿 贼燥 凿藻贼藻糟贼 月怎扎怎则葬 泽怎责责则藻泽泽葬则蚤葬 灶怎糟造藻燥责燥造赠澡藻凿则燥增蚤则怎泽
阅晕粤 泽藻择怎藻灶糟藻泽 枣则燥皂 增蚤则葬造 责燥造赠澡藻凿则葬造 蚤灶糟造怎泽蚤燥灶 遭燥凿蚤藻泽渊孕陨月冤袁 葬灶凿 贼澡藻 阅晕粤 泽藻择怎藻灶糟藻泽 憎葬泽 凿藻贼藻糟贼藻凿 枣则燥皂 贼澡藻 藻早早
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增蚤则怎泽 渊杂晕孕灾冤援 粤灶 蚤灶枣藻糟贼蚤增蚤贼赠 贼藻泽贼 燥枣 月怎泽怎晕孕灾 葬早葬蚤灶泽贼 贼澡藻 泽藻糟燥灶凿 蚤灶泽贼葬则 造葬则增葬藻 燥枣 月怎扎怎则葬 泽怎责责则藻泽泽葬则蚤葬 憎葬泽 糟葬则则蚤藻凿 燥怎贼
蚤灶 燥怎贼 造葬遭燥则葬贼燥则赠袁葬灶凿 蕴悦缘园 燥枣 月怎泽怎晕孕灾 憎葬泽 凿藻贼藻则皂蚤灶藻凿 葬泽 远郾 远缘 伊员园源 孕陨月窑皂蕴 原员袁 葬灶凿 蕴栽缘园 燥枣 月怎泽怎晕孕灾 憎葬泽 缘郾 远怨 凿援
运藻赠 憎燥则凿泽院 月怎泽怎晕孕灾曰 月怎扎怎则葬 泽怎责责则藻泽泽葬则蚤葬曰 孕悦砸曰 遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 葬糟贼蚤增蚤贼赠
油桐尺蠖渊月怎扎怎则葬 泽怎责责则藻泽泽葬则贼蚤葬 郧怎藻灶藻藻冤又称油
桐尺蛾尧大尺蠖袁是一种暴食性害虫袁主要危害茶尧油
桐尧柑桔尧杨梅尧桉树等多种植物袁常造成巨大的经济
损失遥 国内主要分布在湖北尧湖南尧广东尧广西等地
区袁国外在孟加拉西部以及印度地区有分布遥 目前
对其采取的治理方法主要为化学农药防治袁虽能起
到一定的防效袁却带来了污染环境袁伤害天敌袁生态
环境平衡失调袁降低茶叶尧柑橘尧杨梅等质量的严重
后果遥
员怨苑愿 年 远 月袁在湖北省羊楼洞茶场首次发现油
桐尺蠖自然感病幼虫袁倒挂而死袁经采集分离及鉴
定袁致死原因为一种核型多角体病毒咱员暂 遥 油桐尺蠖
核型多角体病毒 渊月怎扎怎则葬 泽怎责责则藻泽泽葬则蚤葬 灶怎糟造藻燥责燥造赠澡藻鄄
凿则燥增蚤则怎泽袁月怎杂怎晕孕灾冤感染油桐尺蠖后能引起很高的
死亡率袁使用 员 伊 员园远孕陨月窑皂蕴 原员多角体悬液感染 圆
缘 龄幼虫袁死亡率可达 怨园豫以上咱圆 原 猿暂 遥 研究人员对
月怎泽怎晕孕灾的血清学尧理化特性尧安全性试验尧剂型及
大田应用等已进行了广泛的研究咱源暂 遥 有学者还对
月怎泽怎晕孕灾的全基因序列进行了限制性內切酶分
析咱缘 原 怨暂 袁并对 月怎泽怎晕孕灾 的蛋白性质咱员园 原 员员暂以及细胞
培养法增值 月怎泽怎晕孕灾 进行了研究咱员圆 原 员苑暂 袁 但对
月怎泽怎晕孕灾的检测技术研究却少有报道遥 鉴于此袁本
文对 月怎泽怎晕孕灾 的分子检测技术进行研究和应用袁以
期为深入研究 月怎泽怎晕孕灾 在昆虫体内动态变化及林
间流行规律奠定基础遥 此外袁本文还对研究室保存
的 月怎泽怎晕孕灾毒株的形态及生物活性进行了研究遥
第 猿 期 陈摇 川等院油桐尺蠖核型多角体病毒渊月怎泽怎晕孕灾冤生物学与检测技术研究
员摇 材料与方法
员援 员摇 供试毒株与试虫
月怎泽怎晕孕灾 由本实验室保存袁油桐尺蠖采自广东
省茂名市袁并在本实验室室內传代饲养遥
员援 圆摇 试剂
蛋白酶 运渊责则燥贼藻蚤灶葬泽藻 运冤购自 酝藻则糟噪 公司院栽则蚤泽
酚尧溴酚蓝等购自北京鼎国生物公司曰核酸染料
杂再月砸郧 砸耘耘晕玉尧阅晕粤 皂葬则噪藻则 购自北京百泰克生物
公司曰圆 伊 栽葬择 孕悦砸 酝葬泽贼藻则酝蚤曾 及其他 孕悦砸 相关试剂
购自天根生化曰其他试剂均为国内分析纯袁购自北京
化学试剂公司遥
员援 猿摇 病毒的增殖和多角体纯化
取 源 益冰箱保存的 月怎泽怎晕孕灾袁以 员郾 园 伊 员园苑 孕陨月
窑皂蕴 原员的浓度感染 猿 龄末油桐尺蠖幼虫遥 源 凿 后开
始收集具有典型病毒症状的虫尸袁研磨匀浆袁加水稀
释后 猿 层纱布过滤遥 经差速离心和蔗糖密度梯度离
心得纯净的 月怎泽怎晕孕灾悬液遥
员援 源摇 电镜观察
员援 源援 员摇 扫描电镜样品的置备摇 将纯化的病毒多角
体悬液用 圆郾 缘豫戊二醛预固定袁过夜曰酒精梯度脱
水袁放入叔丁醇袁喷金 员愿园 泽袁杂鄄猿源园园晕 扫描电镜观察
多角体外部形态特征遥
员援 源援 圆摇 透射电镜样品的制备 摇 将纯化的 月怎泽怎晕孕灾
悬液沉淀袁用 圆郾 缘豫戊二醛预固定 圆 澡袁园郾 员 皂燥造 磷酸
缓冲液漂洗 源 次袁员园 皂蚤灶窑次 原 员曰员豫的锇酸固定 圆 澡袁
园郾 员 皂燥造磷酸缓冲液漂洗 猿 次袁员园 皂蚤灶窑次 原 员曰经梯度
丙酮脱水袁各 圆园 皂蚤灶曰环氧树脂 杂孕哉砸砸包埋袁聚合 苑园
愿园 澡袁 蕴耘陨悦粤哉悦远陨 切片机切片袁醋酸双氧铀 猿园
皂蚤灶袁柠檬酸铅双染色 员园 皂蚤灶袁允耘酝鄄员圆猿园 透射电镜下
观察多角体面内包埋病毒粒子特征遥
员援 缘摇 月怎泽怎晕孕灾的生物活性测定
将病毒稀释为 员郾 园 伊 员园苑尧员郾 园 伊 员园远尧员郾 园 伊 员园缘尧
员郾 园 伊 员园源 孕陨月窑皂蕴 原员 源 个浓度袁每个处理设 猿 个重
复袁每重复实验虫 圆园 头袁设置空白为对照遥 在无菌
环境下袁每个养虫杯饲料上接入 猿园园 滋蕴 的病毒液袁
阴干后放入 圆 龄幼虫 圆园 头袁苑圆 澡后更换无病毒新鲜
人工饲料遥 逐日记录幼虫死亡数袁用 杂孕杂杂统计软件
计算出半数致死浓度渊蕴悦缘园冤及半数致死时间渊蕴栽缘园冤
等相关数据遥
员援 远摇 带毒幼虫的卵和蛹的获取
以 蕴悦缘园的浓度感染油桐尺蠖 圆 龄幼虫袁具体方
法同 月怎泽怎晕孕灾 的生物活性测定遥 单独收集蛹使其
羽化尧产卵袁卵不进行消毒处理袁随机取 缘园 粒置于
原 圆园 益冰箱中保存袁其它卵置于 圆远 益环境下孵化袁
孵化后幼虫单头饲养直至化蛹袁随机取 圆园 头蛹用于
孕悦砸检测遥
员援 苑摇 病毒 阅晕粤的提取和纯化
应用碱裂解法提取病毒 阅晕粤遥 具体方法为院取
纯化的多角体病毒悬液袁沉淀后溶于适量 栽耘渊责匀 值
愿郾 园冤中袁加入等体积碱解液渊责匀 值 员园郾 愿冤袁猿苑 益碱
解 源 澡曰员园豫冰醋酸 匀粤糟调 责匀值至 苑 愿曰加十二烷
基硫酸钠 杂阅杂和蛋白酶 运至终浓度分别为 园郾 缘豫和
员园园 滋早窑皂蕴 原员袁猿苑 益水浴 猿 源 澡曰等体积酚颐氯仿颐
异戊醇渊圆缘颐 圆源颐 员冤和等体积氯仿颐 异戊醇渊圆源颐 员冤抽
提溶液曰加 员 辕 员园 体积的 猿 皂燥造窑蕴 原员醋酸钠溶液袁加
圆郾 缘 倍体积的冰乙醇沉淀 阅晕粤袁 原 圆园 益沉淀 圆 澡渊或
过夜冤曰预冷的 苑缘豫乙醇漂洗 圆 次袁风干后的基因组
阅晕粤溶于 栽耘袁 原圆园 益贮存备用遥
员援 愿摇 总 阅晕粤的制备
取待检测的油桐尺蠖幼虫尧卵尧蛹加入适量液氮
研碎袁然后加入匀浆缓沖液渊园郾 员 皂燥造窑蕴 原员 晕葬悦造袁
园郾 园猿 皂燥造窑蕴 原员 栽则蚤泽鄄匀悦造袁园郾 园员 皂燥造窑蕴 原员 耘阅栽粤袁园郾 园员
皂燥造窑蕴 原员 茁鄄巯基乙醇袁园郾 缘豫曲拉通冤后离心袁将离
心沉淀物在细胞裂解液中裂解袁最后用平衡酚
抽提咱员愿 原 员怨暂 遥
员援 怨摇 病毒的 孕悦砸检测
员援 怨援 员摇 引物设计和 孕悦砸扩增摇 根据 月怎泽怎晕孕灾的多
角体囊膜蛋白基因渊责藻责冤设计了一对引物袁上游引物
月孕云鄄云 为 缘爷鄄粤悦悦栽栽粤悦栽栽悦悦粤郧悦郧栽郧粤悦悦鄄猿爷袁下游
引物 月孕云鄄砸 为 缘爷鄄悦郧郧栽栽栽郧粤栽郧栽郧粤栽栽郧粤栽郧悦鄄猿爷袁
预扩增片段长为 源缘园 遭责遥 孕悦砸 反应体系总体积为
圆园 滋蕴袁反应条件为院怨源 益 猿 皂蚤灶曰怨源 益 猿园 泽尧缘愿 益
渊源愿 益冤猿园 泽尧苑圆 益员 皂蚤灶袁猿缘 个循环曰苑圆 益 苑 皂蚤灶遥
孕悦砸反应结束后袁取 缘 滋蕴 产物经 员郾 园豫琼脂糖凝胶
电泳检测遥 孕悦砸 产物送天根生物化学有限公司
测序遥
员援 怨援 圆摇 孕悦砸 检测的应用摇 分别以带毒的油桐尺蠖
幼虫尧卵尧蛹的总 阅晕粤 为模板袁各取 圆 滋蕴 进行 孕悦砸
扩增袁同时以健康虫的总 阅晕粤和双蒸水渊凿凿匀圆韵冤为
对照袁扩增条件同上遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 月怎泽怎晕孕灾的形态特征研究
从扫描电镜图像观察到 月怎泽怎晕孕灾 形态呈不规
则形状袁边角钝圆袁表面有的光滑袁有的呈现层状袁个
员员源
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆源 卷
别有杆状凹窝袁其大小为 园郾 愿缘 员郾 缘园 滋皂渊图 员冤遥
图 员摇 油桐尺蠖多角体病毒扫描电镜图
透射电镜图像表明院月怎泽怎晕孕灾 的病毒粒子呈杆
状袁在多角体中零散分布袁排列方式无规律袁为单核
衣壳多角体类型渊杂晕孕灾冤袁未发现病毒束袁大小约 远园
灶皂 伊圆圆园 灶皂渊图 圆冤遥
图 圆摇 油桐尺蠖多角体病毒透射电镜图
圆援 圆摇 月怎泽怎晕孕灾生物活性研究
研究结果渊表 员冤表明院油桐尺蠖 圆 龄幼虫对
月怎泽怎晕孕灾的敏感性很高袁其半数致死浓度渊蕴悦缘园 冤为
远郾 远缘 伊 员园源 孕陨月窑皂蕴 原员曰当 月怎泽怎晕孕灾浓度为 员郾 园 伊 员园苑
孕陨月窑皂蕴 原员时袁油桐尺蠖 圆 龄幼虫的半数致死时间
渊蕴栽缘园冤为 缘郾 远怨 凿袁而浓度为 员郾 园 伊 员园源 孕陨月窑皂蕴 原员时袁
蕴栽缘园为 员缘郾 源缘 凿遥 由此可见院油桐尺蠖 圆 龄幼虫的死
亡时间与感染浓度呈正相关袁感染浓度越大袁幼虫死
亡速度越快渊表 圆冤遥
表 员摇 月怎泽怎晕孕灾感染油桐尺蠖 圆 龄幼虫的 蕴悦缘园测定结果
虫龄 蕴悦缘园 辕渊孕造月窑皂蕴 原员 冤
怨缘豫置信限 辕
渊孕陨月窑皂蕴 原员 冤 回归方程
圆 龄 远援 远缘 伊 员园源 猿援 愿源 伊 员园源 员援 园愿 伊 员园缘 再 越 原 猿援 苑苑远 垣 园援 苑愿缘曾
表 圆摇 月怎泽怎晕孕灾感染油桐尺蠖 圆 龄幼虫的 蕴栽缘园测定结果
月怎泽怎晕孕灾浓度
辕 渊孕陨月窑皂蕴 原 员冤 蕴栽缘园 辕 凿 怨缘豫置信限 辕 凿 回归方程
员援 园 伊 员园苑 缘援 远怨 缘援 源猿 缘援 怨源 赠 越 原 缘援 愿远 垣 苑援 苑远曾
员援 园 伊 员园远 苑援 圆缘 远援 怨源 苑援 缘远 赠 越 原 远援 圆员 垣 苑援 圆员曾
员援 园 伊 员园缘 怨援 愿缘 怨援 圆缘 员园援 远怨 赠 越 原 缘援 圆怨 垣 缘援 猿圆曾
员援 园 伊 员园源 员缘援 源缘 员圆援 怨缘 圆员援 圆愿 再 越 原 源援 圆怨 垣 猿援 远员曾
圆援 猿摇 月怎泽怎晕孕灾基因组的 孕悦砸扩增和引物特异性
以 月怎泽怎晕孕灾 基因组 阅晕粤 为模板袁并以美国白
蛾病毒渊匀赠糟怎晕孕灾冤尧茶尺蠖病毒渊耘燥杂晕孕灾冤尧春尺蠖
病毒渊粤糟蚤晕孕灾冤尧舞毒蛾病毒渊 蕴凿酝晕孕灾冤的基因组
阅晕粤为模板进行 孕悦砸扩增为对照袁检测引物 月孕云的
扩增专一性遥 由图 猿 可见院只有以 月怎泽怎晕孕灾 基因组
阅晕粤为模板对引物 月孕云 的扩增得到了与目的片段
大小相符的扩增产物袁测序结果与预期结果相似度
为 怨愿郾 圆苑豫 袁几乎一致遥
酝院酝葬则噪藻则曰员院月怎泽怎晕孕灾曰圆院匀赠糟怎晕孕灾曰猿院耘燥杂晕孕灾曰
源院粤糟蚤晕孕灾曰缘院蕴凿酝晕孕灾曰远院凿凿匀圆韵
图 猿摇 不同病毒基因组 阅晕粤的 孕悦砸扩增结果
圆援 源摇 孕悦砸检测 月怎泽怎晕孕灾基因组 阅晕粤的敏感性
将纯化的 月怎泽怎晕孕灾基因组的 阅晕粤 浓度调整为
员 滋早窑皂蕴 原员袁进一步稀释为 员 灶早窑皂蕴 原员尧员 责早窑
皂蕴 原员尧员园园 枣早窑皂蕴 原员尧员园 枣早窑皂蕴 原员尧员 枣早窑皂蕴 原员袁扩增
结果渊图 源冤表明院当模板 阅晕粤 浓度为 员 枣早窑皂蕴 原员
时袁仍可见到清晰条带袁表明检测水平可达到 阅晕粤
浓度 员 枣早窑皂蕴 原员袁灵敏度较高遥
酝院酝葬则噪藻则曰员 远院基因组 阅晕粤浓度分别为 员 滋早窑皂蕴 原员 尧
员 灶早窑皂蕴 原员 尧员 责早窑皂蕴 原员 尧员园园 枣早窑皂蕴 原员 尧
员园 枣早窑皂蕴 原员 尧员 枣早窑皂蕴 原员 曰苑院匀圆韵
图 源摇 孕悦砸检测 月怎泽怎晕孕灾基因组 阅晕粤敏感性
圆员源
第 猿 期 陈摇 川等院油桐尺蠖核型多角体病毒渊月怎泽怎晕孕灾冤生物学与检测技术研究
圆援 缘 摇 油桐尺蠖核型多角体病毒 孕悦砸 检测技术的
应用
分别以带毒的油桐尺蠖幼虫尧卵尧蛹的总 阅晕粤
为模板进行 孕悦砸 扩增袁扩增产物经 员郾 园豫琼脂糖凝
胶电泳后结果渊图 缘冤表明院在 圆缘园 缘园园 遭责 之间有
一清晰尧特异条带袁健康虫和双蒸水对照的总 阅晕粤
均没有扩增出任何条带袁这说明该方法是合理可行
的袁可以应用到 月怎泽怎晕孕灾的实际检测中遥
酝院酝葬则噪藻则曰员院幼虫曰圆院卵曰猿院蛹曰源院阴性对照曰
缘院阳性对照曰远院凿凿匀圆韵
图 缘摇 带毒油桐尺蠖幼虫尧卵尧蛹的 孕悦砸扩增结果
酝院阅晕粤皂葬则噪藻则曰员院阳性对照曰圆 怨院病毒多角体的浓度分别为
员援 园 伊 员园愿 尧员援 园 伊 员园苑 尧员援 园 伊 员园远 尧员援 园 伊 员园缘 尧员援 园 伊 员园源 尧员援 园 伊 员园猿 尧
员援 园 伊 员园圆 尧员援 园 伊 员园员 孕陨月窑皂蕴 原 员曰员园院凿凿匀圆韵
图 远摇 以不同浓度的多角体悬液为模板进行的 孕悦砸检测
圆援 远摇 孕悦砸检测技术模板的多样性
将提取后纯化的 月怎泽怎晕孕灾 多角体悬液进行计
数袁得到原液袁将浓度调整为 员郾 园 伊 员园怨 孕陨月窑皂蕴 原员袁
等比稀释为 员郾 园 伊 员园愿尧员郾 园 伊 员园苑尧员郾 园 伊 员园远尧员郾 园 伊
员园缘尧员郾 园 伊 员园源尧员郾 园 伊 员园猿尧员郾 园 伊 员园圆尧员郾 园 伊 员园员 孕陨月窑
皂蕴 原员袁分别作为模板进行 孕悦砸 扩增袁模板加入量为
员 滋蕴袁退火温度 源愿 益遥 扩增结果渊图 远冤表明院当多
角体悬液浓度为 员郾 园 伊 员园苑尧员郾 园 伊 员园远尧员郾 园 伊 员园缘尧员郾 园
伊 员园源 孕陨月窑皂蕴 原员时袁可检测到 月怎泽怎晕孕灾遥 这说明多
角体悬液中含有裸露的 阅晕粤袁当多角体悬液达到一
定浓度时袁可以直接用做模板检测 月怎泽怎晕孕灾曰但当多
角体悬液达到 员郾 园 伊 员园愿 孕陨月窑皂蕴 原员时袁却检测不到
月怎泽怎晕孕灾的存在遥 一方面可能是受 孕悦砸 实验条件
的限制袁引物和模板必须按照一定比例加入曰另一方
面大量的多角体存在也可能会影响 晕阅粤 的配对及
扩增袁还有待于进一步研究遥
猿摇 讨论
油桐尺蠖在南方各省危害严重袁采用生物防治
的方法不仅可以保护环境袁而且可以减少防治害虫
的成本遥 月怎泽怎晕孕灾对油桐尺蠖各龄幼虫均有防治效
果袁特别对 圆 龄幼虫防治效果最佳遥 单独使用病毒
防治害虫袁见效较慢袁但持续作用好遥 可尝试使用微
生物制剂袁如 月贼尧植物源农药等与 月怎泽怎晕孕灾混配袁以
降低油桐尺蠖危害造成的经济损失遥
多角体囊膜蛋白是病毒的结构蛋白袁在连续传
代中极少发生缺失遥 有研究表明袁在弱碱环境中袁多
角体囊膜蛋白缺失的多角体昆虫病毒感染性比野生
型多角体高咱圆园 原 圆员暂 袁原因可能是缺少了囊膜的多角体
在碱性环境中更容易释放病毒粒子遥 这说明多角体
囊膜的作用是保护多角体抵御外界环境咱圆圆暂 遥 因此袁
本文选择多角体囊膜蛋白基因为目的片段袁进行
孕悦砸研究袁结果与预期一致袁多种 晕孕灾 病毒做对照
时袁只有 月怎泽怎晕孕灾 的基因组能扩增出目的条带遥
孕悦砸产物测序结果与已知的 月怎泽怎晕孕灾 的囊膜蛋白
基因有很小的差异袁这可能是由于病毒在野外不良
环境下袁碱基对发生少量替换或缺失等袁但 怨愿郾 圆苑豫
的相似度足以说明扩增出的条带是囊膜蛋白基因遥
应用多角体悬液直接作为模板进行 孕悦砸 检测袁
可以检测到 月怎泽怎晕孕灾 的存在遥 这不仅简化了实验
步骤袁而且可以证明在病毒多角体悬液里存在裸露
的 阅晕粤遥 电泳图片的拖带现象是由于多角体悬液
含有大量非 阅晕粤物质袁但不影响检测结果遥
大多数检测 晕孕灾 的手段是通过光学显微镜观
察袁该方法准确性较差遥 也有学者用间接酶联免疫
吸附分析法渊耘蕴陨杂粤冤在蛋白水平对病毒进行检测袁
该方法花费的时间相对较长咱圆猿暂 遥 本文建立的
月怎泽怎晕孕灾的 孕悦砸检测技术袁不仅能短时间内成功的
从卵和蛹内检测到 月怎泽怎晕孕灾袁而且其灵敏度可达到
员 枣早窑皂蕴 原员 阅晕粤遥 由于该方法操作简单尧用时短尧灵
敏度高尧特异性好尧重复性好袁可用来研究病毒在虫
体内的增殖规律及检测林间油桐尺蠖的带毒情况袁
进而为病毒流行病学的深入研究提供技术支持遥
参考文献院
咱员暂 梁布锋袁刘明富袁梁摇 军援油桐尺蠖核型多角体病毒渊羊楼洞株冤
基因组特性咱允暂 援微生物学杂志袁员怨怨苑袁员苑渊员冤院远 原 怨
猿员源
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆源 卷
咱圆暂 齐义鹏袁叶林柏袁尹宜农袁等遥 油桐尺蠖核型多角体病毒毒力的
生物测定咱 允暂 援 武汉大学学报院自然科学版袁员怨怨猿袁员缘 渊圆冤院员圆员
原 员圆缘
咱猿暂 韩明波援 员园园园园园园园孕陨月 辕毫升油桐尺蠖核多角体病毒援 源 园园园陨哉 辕微
升苏水悬浮剂防治茶叶油桐尺蠖药效试验咱 允暂 援 现代农业科技袁
圆园园缘渊员冤院圆猿
咱源暂 油桐尺蠖核型多角体病毒杀虫剂的研制及应用咱悦暂援武汉院中国
科学院武汉病毒研究所袁员怨愿缘
咱缘暂 刘明富袁胡志红袁金摇 峰袁等援油桐尺蠖核多角体病毒多蛋白基因
定位与克隆咱允暂 援中国病毒学袁员怨怨圆袁苑渊员冤院愿园 原 愿源
咱远暂 陈海雷袁刘年翠援油桐尺蠖核型多角体病毒及其基因组某些理化
性质研究咱允暂 援武汉大学学报院自然科学版袁员怨愿怨袁员员渊猿冤院怨员 原 怨远
咱苑暂 匀怎 在 匀袁粤则蚤枣 月 酝袁杂怎灶 允 杂援 郧藻灶藻贼蚤糟 燥则早葬灶蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 匀蚤灶凿陨陨陨鄄陨 则藻鄄
早蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 泽蚤灶早造藻鄄灶怎糟造藻燥糟葬责泽蚤凿 灶怎糟造藻燥责燥造赠澡藻凿则燥增蚤则怎泽 燥枣 月怎扎怎则葬 泽怎责鄄
责则藻泽泽葬则蚤葬咱允暂 援 灾蚤则怎泽 砸藻泽藻葬则糟澡袁员怨怨愿袁缘缘院苑员 原 愿圆
咱愿暂 匀怎 在 匀袁月则燥藻则 砸袁宰藻泽贼藻则造葬噪藻灶 允援 悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 藻糟凿赠泽贼藻则燥蚤凿
哉阅孕鄄早造怎糟燥泽赠造贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻 早藻灶藻 燥枣 葬 泽蚤灶早造藻 灶怎糟造藻燥糟葬责泽蚤凿 灶怎糟造藻燥责燥造赠澡藻鄄
凿则燥增蚤则怎泽 燥枣 月怎扎怎则葬 泽怎责责则藻泽泽葬则蚤葬 咱 允暂 援 灾蚤则怎泽 砸藻泽藻葬则糟澡袁员怨怨苑袁源苑院怨员
原 怨苑
咱怨暂 龚摇 岷袁刘贛东袁梁布锋遥 油桐尺蠖核型多角体病毒 阅晕粤 聚合
酶基因的克隆和序列分析咱允暂 援中国病毒学袁圆园园园袁员缘渊员冤院缘怨 原 远缘
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