全 文 ：第 1 卷 第 1 办
1 9 8 8 年 2 月
林 业 科 学 研 究
F O R E S T R E S E A R C} l
V o l
。
F e b
。
,
N o
.
1
1 9 8 8
赤松毛虫质型多角体病毒的
引 进和 利 用 研究 ’
陈昌洁 王志贤 刘革 高志和 陶程
(中国林业科 学研究院林业研 究所 )
陈建寅 王震南
(浙江省安吉县林业局 )
摘 要
从 日本引进赤松毛 虫CP V 甘我国松毛虫属 (D 翻击 ol t’m “s) 的 七种松毛虫 以 及 棉
龄 虫有较高的致死效果。 根据 R N A 电泳 图谱的研 究 , 赤松毛虫C PV 与在中国松毛
虫属上 的各复制株是不 同的 。 目前 , 我国 已发现有三种 R N A 类型 , 日 本赤松毛 虫
CPV 属 第一型 。 JA D P一CPV 、 JYD PW 一C PV 、 C Y D PW 一CPV 等属于 第二 型 ,
C G D P一CPV 离心所得的上带多角体属于第三型 。 类型 亚 、 nI 属首次报道 。 和其他
CPV 一样 , JD S一CPV 只 侵染中肠上 皮细胞 。 又寸第一代 3 龄和 5 龄 虫的 LC 。。 分 万,J为
i
.
6 x lo . CPB / m l和 3 . 3 x lo , CPB / m l, 对同代 3 龄火 的 L D 。。 为 2 . r x 一。, C PB / 虫 。
JD S一CPV 不仅时幼 虫防效好 , 而且也影响 幼 虫取食 、体重 以 及下代幼 虫存活率 。 此
病毒与 B t 混用 可 以 减 少针叶被害 72 一80 % 。 在油 乳 剂中于 4 ℃ 下保存 19 7 天 , 在
水愚液 中保存 5 年 , 付此病毒活性无明显影响 。 以 林间松毛 虫作宿 主可主生行大量增
殖 。 一头 6 一 7 龄幼 虫平均可产 多角体 2 亿个 。
关健词 细 胞质 多角休病毒 , 凝胶 电丁永图谱 , 中肠 _七皮细胞 , 细胞质 多角体病
毒包含体 ; 赤松毛虫
赤松毛虫质型多角体病毒 (D o n d r o li二 u s sp 。: ta 乡1115 CPV )是世界上第一个注步l厅使用的细
胞质多角休病毒 [’1 。 该病毒在 日本用于防治赤松毛虫 [ 2 一。l , 在苏联 用 于 防 i台欧 洲 松 毛 虫
(D
.
p in e )
、 落叶松毛虫 (D . su p e l a n s ), 在我国台湾省用于防治马尾松毛虫 (D . p u n 。ta t: s )
均获得较好效果 [ , , “1。 自19 8 0年以来 , 我们先后从 日本 K . K a ta g iri 及 R 。 K o y a m a 处得到
部分日本赤松毛虫质型多角体病毒 (以下简称 JD S一CPV ) 的悬浮液 , 并对 我 国七种松毛虫
—赤松毛虫 (D . sp e c t a右flis )、 油松毛虫(D . t a b : la o fo : 二fs ) 、 马尾松毛虫 (D . p 。: c t a tu s ) 、文山松毛虫 (D 。 p u n c t a t: s 留。。 s人a n 。: 5 15 ) 、 德 昌松毛虫 (D . p“, c ta ru : te h e h g e n s is ) 、 巴茅松
本文 于1 9 8 7 年1 0月2 0 日收到。
本试验得到 吕鸿声 、 钱纪放先 生的大力支持和帮助 。 电倪 服片承 我院 电傀室协助拍摄 , 特在此一并致谢 .
1 期 陈昌洁等 : 赤松毛虫质型多角体病毒的引进和利用研究
毛虫 (刀 . kfk二hi o 、 云南松毛虫(D . h。滋)进行了感染试验。 从感病死虫中所提取的多角体 ,
其外部形态基本上与原病毒形态相同 [。1 , 但也有其它形态的多角体(图版 工一2一4 , l 一12 、 1 3) 。
自1 9 8 3年以来 , 曾利用 JD S一CPV 分别对我国的马尾松毛虫、 赤松毛虫以及文山松毛虫进行
了较系统的研究 , 林间使用效果良好 , 且有垂直传递的优点 , 是松毛虫综合管理中一种较理
想的防治手段 。 本文就马尾松毛虫的试验结果报道于后 。
一 、 材料 和 方 法
(一) 材 料
1
.
JD S一CPV 水悬液来自日本 K . k a ta g ir i和 R 。 k o y a m a 处。 试验用材料为该水悬液
在浙江安 吉 马 尾松毛虫上的复制品 。 其它虫种的复制品分别由广东林科所 、 云南林科所和
河北微生物所提供 。
2
。 供试 B t 为美 国 D ePi l制剂 。 含量为每克 1 6 0 0 0国际单位。
3
。 供试乳化剂由钟山化工厂提供 , 由非离子 型 聚 氧 乙 烯 脂 及 聚 氧 乙烯 醚 复合 而
成 。
4
。 替换宿主棉铃虫 (H o li of 几行 aT 二fge la )的卵及人工饲料配方由中国农科院钱纪放、 吕
鸿声先生提供 。
5
。 供试马尾松毛虫及油松毛虫均采自林间自然种群。
(二 ) 方 法
1
。 质型多角体病毒多角体 (CPB ) 的提纯主要参考徐左宇 [ ’。]和 L e v A . Os ler m a n 的方
法 I‘, J。
2
.
CPV 于R N A 的提取主要参考林幸之的方法 [ ’2〕, 并加以改进 。
3
。
R N A 电泳使用 1 % 琼脂糖 , 3 %聚丙烯酞胺 , 缓冲液为 E 或 T B 缓冲液 , SV /c m 或
4 m A / 胶条电泳 4 一 6 小时 , E B 染色。
4
。 组织病理的观察采用常规石腊切片 。
5
。 用于 LC 。。及 LD 6 。测定的病毒悬液计数 , 均采用血球计数板计数方法 , 然后 稀释至
要求的浓度 。供试松树枝叶及病毒喷量均保持相对一致 。 LD S 。的定量是将定量针叶浸入一定
浓度的病毒悬液中, 让其充分浸湿 , 然后取出放入蒸馏水中 , 将附着于叶上的 CPB 洗下 , 计
数并折算单位长度针叶上的 CPB 量 。 按试验要求 , 定量添食单条供试昆虫。 对取食完定量针
叶的幼虫作系统观察 , 镜检并统计死亡率 。
6
. 病毒复制采用林间 6一7 龄幼虫 。 接种浓度为 1 x l。“CPB / m l。 分 别 采 用 挂笼、 围
栏集虫以及林间高虫口区现场复制三种方法。
7
。 棉铃虫卵经 2 %次氯酸钠表面消毒两分钟 , 清水洗净 , 置于 26 ℃ 、 R 。 H . 8 0一90 %
条件下让其孵化。 幼虫孵出24 一48 小时后接种病毒 。 单虫接种量为 5 x l护CPB , 群体接种量
为 l x 1 0 . CPB / m l。 饲育温度 2 8 士0 . 5℃ 。 光照1 6小时 , 黑暗 8 小时。
8
。
CPV 一B t 混用试验 。 先将 CPB 稀释至 1 x 10 . C PB / m l, 以此液分别加入不同数量的
B t
, 形成不同浓度的 CPV 一B t 混合液 。 接毒方法与 LC 。。测定相同 。
9
。 林间效果试验采用单枝挂笼、单株罩笼以及全面喷洒的方法 。 后者使用动力背负式喷
林 业 科 学 研 究 l 卷
雾器 , 浓度 为 l一 3 义 10 . CPB / m l或 7 0一 2 0 0亿 CPB /亩 。
1 0
. 油乳剂试验 。 将一定量提纯的多角体混入已配制好 的油乳剂 中, 分别置 于 室 温 以
及 4 ℃下保存 。 定期取样并从油乳剂中将 C PB 离心取出 , 继续在 4 ℃ 下保存 至 1 97 天 , 以
l x lo’CPB / m l浓度作活性测定。
二 、 试 验 结 果
(一 ) JD S一 CPv 的形态及理化性质
赤松毛虫质型多角体病毒 (JD S一CPV ) 属呼肠孤病毒科 (R o ov i汀dae ) 质型多角体病毒属
(c 押ov 斤盯)的一个种 。据报道 t’‘] , JD S一C PV 的多角体大型 、 中型的呈六角形 、五角形 、四角形 、
不正形 。 而小型的近球形 。 小的直径约 0 . 5“m , 大的 2一 4协m , 多数 1一2林m 。 但从 日本 引入的
JD S一CP V 原株 , 其多角体多为六角形以及近 圆形 (图版 I 一 1 ) , 但 JD S 一CP V 在D 。。d , 0 11二 u s
sP p
. 的复制株 , 则观察到六角形 、四角形 、 近圆形以及锥形多角体 (图版 工一2一5 , 1 一 12 一 16 ) 。
病毒粒子为典型的正 20 面体 , 直径约 50 n m 。 六个顶端都有刺状突起 (图版 l 一 1 7 ) 。 这与深
坂等对 B m 一 CPV 所 观察的结果是一致的 [“] 。 由 于 C PV 宿主范围较广 , 多角体外 部形态难
于 区另l] , 故对其株系 的鉴另lj存在一定困难 。 但 CPV 株系间的 R N A 电泳图谱则差异显著 [ ‘“l
在多角体 的梯度离心 中 , 发现 JD S一C PV 在河北赤松毛虫的复制株以及广东马尾松毛虫 CPV
原株出现两条离心沉降带 , 而其它株只有一条沉降带 (图版 兀 18 、 1 9 )。 形成两条带 的毒株 , 其
上带包涵体多为锥形 , 下带多角体为六角形 (图版 工一 2一 5 )。下带 CPV 一 R N A 电泳 图谱与家蚕
型近似 , 即 Pa y n e 所区划的第一型 。但第 5 和第 6 条带均为两条所组成 (图版 皿一3 3) , 故又和
第一型不同 (图版 兀一 2 1 )。 其它如安徽马尾松毛虫 、云南文山松毛虫 、广东马尾松毛 虫等复制株
均和这一型相同 (图版 亚一 2 一2 4 )。 而形成两条多角休离心沉降带的上带 CPV 一 R N A 的带 i普
则又属另一类型 (图版 l 一 32 )。 尽管松毛虫CPB六边形多角体的 R N A 与 B m 一C PV 一R N A 电
泳图谱相心 , 但毕竟不同 。 即使是 JD S一CPV 原株 , 它 的 R N A 带谱与 B m 一C PV 也是有区
别的 : ¹ JD S一CP V 一R N A 第 8 片‘段在凝胶上的电泳迁移率 比 B m 一C PV 一R N A 相同片段迁
移率略低 。º 凝胶扩散试验显示出两者间抗原性的差异 。 » R N A 在同源性上有差异 [ ‘已〕。 此外 ,
两者对松毛虫致病力的差异也极为显著 , JD S一CPV 对二龄蚕不会致病死亡 【‘’] 。
(二 ) 病症及组组病理现案
JD S一CPV 是一种经幼虫取食后 , 只在宿主中肠上皮细胞内复制并造成宿主死亡的昆 虫
病原 。 由于中肠再生细胞可以不断地分化形成筒形细胞而对感染的部位起到修复的作用 , 因
此 , C PV 使 宿主感病到死亡的时间拖得较长 。 幼虫感病初期无明显的症状 , 但很快表 现 出
食量下降 。 大约取食CPB 10 天左右 , 在光学显微镜下可查出病毒多角体 。粪便中多角体数量
也逐渐增 多 , 后期排出灰 白色粪便 。 每粒灰白粪便中 , 多角体含量近5 0 0 。万 。 因此 , 死虫体
中的多角体已留下不多 , 大部分在感病过程中不断被排出 。感病幼 虫的生 长发育明显退缓 , 身
体缩小 , 头胸部显大 。 经 JD S一CPV 处理的幼虫在体重和食量上的变化情 况 见 表 1 。 JD S -
C PV 侵染中肠上皮细胞这一特点 (图版 l 一26 )与 X er os 对28 种昆虫质型多角体形成部位的 调
查结果相一致 [ “ ] 。 本研究也发现了感病幼虫围食膜有增厚现象 , 但并未发现有病毒粒 子 的
形成 I‘“] 。
1 期 陈昌洁等 : 赤松毛虫质型多角体病毒的引进和利用研究 l7
表 1
供 试 浓 度
(CPB / m l)
对 照
JD s一c p v 处理后松毛虫在休贡和食最上的变化
供试虫数
(头 )
平 均 粪 t
(m g / 头 )
几比石介石口a,曰
52
.11
1 X 1 0
‘
1 X 1 0 5
1 x 1 0 .
1 X 1 0 7
2 75
48
36
。
3
1 6
。
6
8
.
3
⋯ 。 平 均 体 重 }」 与对照的倍差 } } 与对照的倍差
}
’ (口 g / 头 ) 1
⋯ _ 1 6 5 。 {
}
“ · 7 2
1
3 1 7
·
5
}
“·0 4
1
了 5 7
1
2 0 9
{
“· 1 1
⋯ 1 6 · 5 4 “3 · 3 { “· 9 6
1 ”3
·
1 { 7 5 }
8
·
6 6
(三 ) JD S 一c P V 对松毛虫的活性侧定
表 2 对3 . 5龄松毛虫生侧L c o o 、 L T o o 、 L n 6 0计算值
虫龄供 试 浓 度
对 数 值
4
5
6
3 龄 虫 死
亡 机 率 值
5 龄 虫 死
亡 机 率 值
3 龄虫L T s o
(天 )
5 龄虫 LT 5 o
(天 )
LC s o
L C : o
3
.
9 2
5
。
39
5
.
6 4
4
。
3 6
4
.
3 6
5
.
2 8
3 7
。
5
1 4
。
3
1 2 2
1 1 1
.
4
3 8
.
5
2 8
。
0
1
.
6 K i o
5
CPB / m l
3
.
3 x i沪CP B / m l
5
.
88 5
。
8 8
6
。
13 6
。
4 6
1 0
.
7
8
.
5
14
。
8
13
。
0
3 龄虫 LD s o
2
.
1 x i o 3 CPB / 虫
从表 2看出 , 供试浓度与死亡率以及死亡速度有密切关系 。 死亡率随浓度的提高而增加 。五
种浓度的死亡范围 , 3龄幼虫为14 . 3一87 。 3 % , 5 龄幼虫为2 6 . 0一9 3 。 3 % 。两个虫龄的LC。。值差
2
.
0 6倍 。 假若在当代将幼虫死亡从50 %提高到90 % , 则病毒使用量将分别提高41 2倍和 17 5倍。
对 3 、 5 龄幼虫生测结果所得出的LC。。, LT 。。以及 LD 。。 回归直线图及回归直线方程分
别见图 1 、 2 和表 3 。
1。‘ 20 “ !。‘ 10 下 10 弓(C尹称 / m l)
10 4 1护 10 6 1厅 10 8 (CP B 八一1 1)
翔件畏欲
90泊53
7
.。亡口4划移辞侧限
决件长欲90阳53
657翅哥招仙欲
4 5 6 7 3 浓度对敌俊
图 1 多角体感染一代三龄虫浓度与死亡率 回归直线
y 二 2 . 4 4 + o . 94 x
表 3 对3 、 s龄虫生洲所得LC 。。、
4 5 6 7 8
浓度对盆值
图 2 多角体感染一代五龄虫浓度与死亡率 回归直线
y = 1
.
8 3 + 0
.
5 7 x
L D
。。、 L T S 。的回归直线方程
一飞J 试 浓 度 {一芍-—(C PB /m l) 3 龄虫 L T 50 回归直 线方程 5 龄虫 LT 50 回归直 线方程 3 龄虫 L C50 回归直线方 程1 K 1 0 ‘I K 1 0 ,I K 1 0 .I X 1 0 7I X 1 0 . y = 0 . 1 8 2 + 3 . 05 9 xy = 0 . 5 7 + 3 . 8 3xy 二 一 2 . 1 + 6 . 5 2 xy = 一 0 . 1 8 + 5 . 0 3 xy = 0 . 1 4 1 + 5 . 2 x y = 1 . 9 5 + 1 . 4 9 xy = 0 . 7 8 + 2 . 6 6 xy = 1 . 8心+ 2 . 2 1 xy = 0 . 1 4 + 4 . 1 5 xy = 一 1 . 8 8 + 6 . 1 7二 y = 2 . 4 4 + 0 . 4 9x5 龄虫 LC”回归直 线方程了= 1 . 8 3 + e . 5 7 x3 龄虫 L D ”回归直线方程y = 1 . 7 2 + 0 . 9 8 x
林 业 科 学 研 究 1 卷
(四 ) JD S一 CP v对马甩松毛虫的练合效果
JD S
一
CPV 对 马尾松毛虫的效果不仅表现在当代感病幼虫的死亡率方面 , 也影响到感染
幼虫的取食量 、 蛹重 、羽化率 、雌性比 、 产卵量以及下代幼虫的存活率 (表 4 ) 。 这种影响随病
情的加重而变得更为显著 。 与对照相比 , 粪便量差3 倍 , 体重差8 。 6倍 。其回归方程分 别为 Y =
2
.
80 2 一 o . 6 2 5 x , r = 一 0 . 9 8 ; Y = 3 。 0 0 2 一 0 . 1 4 5 x , r = 一 0 . 8 6 2 。 从幼虫粪便 、 蛹 以及
成虫体中 , 均可查出多角体 (图版 l 一 2 7 )。 在感病成虫所产卵的卵壳上 , 也 发现粘附 有 多角
体 。 这是造成下代初孵幼 虫早期死亡的重要原因 。
表 4 JD S { PV 对马甩松毛虫的综合形晌
供 试 浓 度
(CPB / m l)
对 照
1 减 1 0 3
1 x 1 0 刁
1 x 1 0 ,
1 火 1 0 .
1 又 1 0 7
1 x 1 0 .
平均粪 便 t
(口 g / 虫 )
平 均 体 ,
(m g / 文 )
平 均 蛹 重
(m g / 虫 )
羽 化 率
(% )
雌 性 比 平均产卵 t
(较/ 虫 )
,口UO一月bn”‘兮J马2st‘60伪‘介
.人,玉1三
4 8
.
0
3 6
.
3
1 6
.
6
8
.
3
3 1 7
.
5
2 0 9
.
0
9 3
.
3
7 5
.
0
1 30 0
1 10 0
1 10 0
1 1 0 0
9 0 0
8 0 0
5 0 0
9 7
.
9
6 8
.
7
6 4
.
0
6 3
.
2
7 8
.
3
7 3
.
1
2 8
.
0
0
.
5 3
0 4 8
0
.
5 3
0 4 6
0
.
5 0
0
.
4 2
(五 ) 病毒的复制
JD S一CP V 在日本的大量复制主要是利用林间 6 一 7 龄大龄虫挂笼接种复制。 本试 验 比
较了挂笼 、 塑料围栏集 虫以及林间高 虫口林地复制病毒等几种方法 。 其中 , 以后两种方式的
复制量最大 , 且成本最低 。
对围栏复制的病毒采取了两种提取方式 , 结果见表 5 、 6 。 从中可见 , 由于林 间处理天
然活虫的感病时间 、程度以及虫体的发育状态均不一致 , 因此 , 无论用那种方式提取病毒 , 样品
间多角休数量的差异不可避免 。 整虫捣碎提取多角体的变异幅度为 3 . 24 一 9 . 92 亿 PI B / 虫 。
中肠提取的是 3 . 2一 1 0 . 6亿 PI B / 虫 , 虫体重与多角体产量无明显相关性。 两种提取方法所得多
角体的平均产 量差异不大 , 分别为 7 . n 亿和6 . 12 亿 PI B 。 减少差异的办法是提高虫子的感病
率 。 此外 , 对高虫口 区林分进行接种或把防治与病毒复制接合起来 , 这是目前JD S一CPV 复制
最经济而有效的方法 。
衰 5 林间妞制病 . 的松毛虫中肠 , t 与多角体产 t 的关系
取 样
(头 )
中 肠 总 盆 }
多 角 休 总 ,
】 ( 亿 )
平均每克多角体
(亿 )
平均每虫多角休
(亿 )
39 7
.
2
33 1
.
0
52 8
.
0
38 0
.
0
7 7
,
8 8
7 3
.
5 5
1 1 2
.
3
7 3
.
0
5
.
7 5
5
.
0 1
8
.
0
5 7 5
(g)一5.1472
O曰b一.0一七CUe
1 期 陈昌洁等 : 赤松毛虫质型多角体病毒的引进 和利用研究
虫重总整
(六) 替换宿主的选择
用人工饲料在28 ℃条件下饲养棉铃虫 ,
一个世代约需 31 一 32 天 , 幼虫期约 n 天 。 接
毒时间在幼虫孵出24 一48 小时内进行 。 接毒
后 1 一12 天即可采收 。 供试幼虫 平 均 体 重
。. 41 8 9 。增殖情况见表 7 。 从棉铃虫上复制
多角体的扫描电镜照片看出 (图版 l 一2 8 ) ,
H a 一C PV 的多角体与JD S一CPV 在外部形态
上区别不明显 。但从 R N A 电泳图谱的结 果发
现 , 在棉铃虫上复制的病毒不是JD S一CP V ,
而是 H 。 。二ige la CPV 。 但当用棉铃 虫 上
复制的病原回接松毛虫时 , 虽具有很高的感
染率 , 但复制病毒的核酸确是松 毛 虫 病 毒
(图版 皿 一2 9 、 30 )。 这一结果与钱纪放等的研
究结果相一致 * * 。从表 8 结果看出 , 复制品效
表 6 林间复制病毒松毛虫体重与多角
体产量的关系
克均每平
取样号
1 (g )
1 」 2 0
2 } 2 0
3 { 2 0
4 」 2 0
}
5 } 2 0
(亿 )
1 4
.
0
1 0
.
3 5
1 0
。
0
平 均
每 头
(亿 )
角且?
总亿
体多‘虫量、
头
幼数(
: :
心目n八D.10583一净Zt才匕JU勺口QUC‘勺目山价乙月口任弓八J4
2 0
2 0
2 O
4 0
4 0
4 0
4 0
4 0
1 2 5
8
.
5
1 2
.
4
6
。
0
1 6
.
0
3
.
0
6
。
0
1 6
.
0
8
.
4 8
6
.
9
7
.
6 9
4
.
2 8
6
.
3 4
8
。
9 2
7
。
3 9
9
.
9 2
6
.
8 5
7
。
6 1
3
.
2 4
6
。
8 5
8
。
0
nU工苦人1八甘心0吕U八nOU口n口J峡一勺月了性任自心O介乙,,自,11三一八乃.工乃山」
678910n23
果与 JD S 一CPV 无大差异 。 由于棉铃虫可以在人工饲料上大量饲养而不受季节的限制 , 这为
今后松毛 虫 JD S一CPV 的大规模工厂化生产提供了依据 。
表 7 JD S 一c P V 在棉铃虫上的复制数量
幼 虫 数
(头 )
幼 虫 总 重
( g )
中 肠 总 重
( g )
多角体总童
(亿 )
‘ ’ 卜⋯. ’下 蒙斌{ (亿 ) 平 均 CP B / 虫(亿 )
一 , 5
}
6
·“ ·3 ⋯ 2 5 · 2 7 ⋯ 1 。一 厂一而一2 2 1 ”· 3 5 1 1 · 7 5 { 8 6 · 1 6 } 4 9 · 2 3 { “· 9 1’9 { 7 · 6 一 ‘ ·7 ‘ 或。· 。9 ⋯ “3 · ‘4 { ”· 2‘“2 “· 3 通 } ‘ · 7 吕 { 6 9 · 之4 , “‘· 。0 1 “· , 4⋯30 二} .⋯ ’1黑~ . ’ ‘· 91 ~ l. 明.:l ~ 二 以 51 黔 1. . ”· 2 7
目签岭仙絮表 8 JD s 一CP v在H a上复制品 回接
松毛虫的结果 .
浓 度
(CPB / m l)
越 冬代死亡
( % )
第一代死亡
( % )
I X 1 0 ‘
1 X 1 0 6
1 X 1 0 .
7 3
。
2
7 3
。
6
8 1
.
5
:: :
* 供试虫 城龄越冬代和第一代 分别用木质 铁纱笼和
玻璃瓶饲养 。
0
一 了乙 欢7 0飞 硒二9 〔。 ” {l ” l几 ’ 1 3 二 4 1 . 5
天 ( l劣数 )
(七 ) J D S一 C PV 与 B t 的混用
图 3 混合处理二代 四龄虫 的死亡 回归直 线
处理 : ¹ CPV i o. @ B T 5 9 » V 一B 0 . 6 259 ¼ V 一 E
1
.
2弓g ½ V 一B 2 . 59 ¾ V 一B 5 . 0 9
为克服 C PV 致病死亡速度慢而对保护针叶不利的缺点 , 进行了 CPV 与 B t 混用试验 。其
结果如表 9 所示 , 各处理对 4 龄幼虫的回归方程式及回归直线图如图 3所示 。 从表 9 结果可
二 钱纪放 等 , 19 8 6年研究报告 ( 待发 ).
2 0 林 业 科 学 研 究 1 卷
衰 9 c P v 一Bt 混合处理越冬前幼虫L T 。。, 。。的计算值
L T 5 o 9 5% 工 信 界 限 9 5%
处 理 号 .
(天 ) ⋯一 下 限 L T , 。(天 ) 下 限一上一一限
,舀内J‘恤一了口八U
;⋯一b才匕J吸O口O‘q六,山电.人6
.
5 7
.
5 9 2
.
2
42
.
7
4 0
.
6
3 7
.
5
3 3
.
0
一口,目勺曰八“
17.6n:;
‘
;
17.6“
10
1 5
.
0
1 4
.
0
1 3
.
5
1 2
.
9
1 1
.
1
9
.
8
7
.
8
¹À¼½
@ 12
.
7 9
.
1 17
.
6 } 23
.
3 1 2
.
9 ‘2 . 1
关 各处理详见图 3 注 。
表 10 CP V 与B t混用对幼虫排粪盆的影晌
平处 理 号 .
处 理 后 不 同 天 数 ‘ 均 每 虫 排 粪 最 ( In g )
5 天 8 天 11天 14天 1 7天 20天 23天 26天 29天
5 0
.
0 5 2
.
5 1 5 6
.
7 1 5了. 1 s J . s } 20
.
2 19
.
8
46
.
9 屯0 . 6 27 . 5 , 21 . 8 1 3 . 0 11 . 1 12 《)
6 8 2 日 一 2 0 2 3 2 . 0 1 1 . 9 1 . 5
10
.
6 5
.
2 1 13
.
8 14
.
4 3
.
8 4
.
7 6
.
3
10
.
6 4
.
6 14
.
3 } 16
.
1 6
.
7
9
.
8 4
·
2 一 12 · 5 1 8
·
1 6
.
7
6
.
8 7
.
4
关 各处理洋 见图 3 注。
_
对月
— · 沙让补三- 一 ( 处咫一 ‘一 、‘处理
’— ‘少 处理必 处顾
”— 达 处理
产.三翻撅哥庸日斗
见 , L T 。。值最大差 4 天 , LT . 。最大差
7 天。 但是 , 与 B t 混用的重要优 点 是
取食量明显减少 。 从表10 、 图 4 看出 ,
处理 5 天后与对照相比 , 单用 C PV 的
排粪量仅减少 C . 2 % , 混 用减少幅 度为
7 8一8 6 % 。 1 7 天 时 , C PV 的排粪量减
少 6 1 。 8 3 % , iL己用的减少 8 6 . 5一 9 6 . 4 % ,
被害率减少到最低限度 。
(八 ) JD s 一CP v 在油乳剂中的保存
试验
不同 条件下保存的样品 , 以 l x l了
CPB / m l浓度对 5 龄油松毛虫做试验 ,
其结果见表n 。 结 果 表 明 , 各处 理 L
T 。。
、
LT 。。所需天数有差异 。例 如 , 在油
乳剂中保存32 天的 LT 。。与在室 温 下油
乳剂中保存1 97 天的L T 。。 比较 , 就有两
倍之差 。但低温项的这种差异明显减少 。
看米温度 是影响保存活性的重要因子 。
图 4 CP V 一Bt 混台处理 二代 通阶幼虫后 的 .虫J , ’伏变 优
( 各处理 详见图 3 江 )
1 期 陈昌洁等 : 赤松毛虫质型多角体病毒的引进和利用研究
表1 1 多年休在油乳荆中不同保存时间 、 条件对活性的影晌
保 存 条 件
保 存 时 间
(天 )
L T S 。
(天 )
L T , o
(天 )
⋯翼乳罗丫翼 ::: ;::: ::::
· ⋯艾乳罗丫翼⋯ ::: :; : ⋯ :: :
油乳保存 32· ⋯室 4飞⋯季岁氛套 ::: { :: : ⋯ :;. : ·
油乳保存屯。天 」彗飞⋯翠罗氛老! ::: ⋯ :: : ⋯ :; :
油乳保存4 8· ⋯彗飞‘ 拿君氛忿⋯ ::: { :;:: : :: :
在油乳剂中长期保存病毒 , 即使是低温条件 , 对活性也有一定的影响 。 除室温油乳剂 1 97 天
项外 , 其它项的感病死亡率为90 一 1 0 % 。 今后 , 大量使用这种剂型时 , 应在使用前临时配制 ,
那就不存在多角体在油乳剂中长期保存而失活的问题 。
在不 同条件下的样品所作的扫描电镜观察 (图版 皿 一34 一36 、 万一 37 一43 ) , 并未发现多角体
有破损以及病毒粒子脱落现象。 1 9 8 7年应用这种剂型对第一代 3 一 4 龄马尾松毛虫进行林间
防治试验 , 效果为5 2 。 6一84 . 4 % 。
(九) Jn s 一c PV 的保存试验
用保存在 4 ℃条件下不同时间的病原进行了室内活性测定 , 结果见表 12 、 13 。 表明在低
温条件下 JD S 一CPV 的活性可以保持较长时间 。 19 8 2年保存的样品至今已有 5 年多 , 但它同
保存一年的样品在毒力上几乎毫无差异 , 这可从 L T 。。所需时间、 死亡百分率 以及死亡速 率
几个方面得到证实(图 5 )。 但 1 9 82 年样品开始死亡的出现期比 1 9 8 4 年 、 1 9 8 6 年 的样品略推
表 1 2 不同保存时间的 CP V 室 内活性洲定
年 份 } 检 查 日 期
(浓度 ) 7/ 1
1 9 8 2
(1 x 1 0 ’/ . 1 )
1 9 8 4
(1 x 1 0 , / rn l)
1 9 8 6
(1 x 1 0 , / m l)
8 ,
·
i 。 ⋯ 1 1 1 3 1 4 ) 2 0 2 1
{ { 3
.
5 一 2 5 . 。 1 : 5
.
5 5 0
.
0 82
.
1 { 9 2
.
8 1 1 0 0
3
.
7 { 1 1
.
1 1 5 5 5 旦5 . 5 { 10 0 ! 1 0 0
14
·
8 { 3 3
·
3
3
。
8 3
.
8 1 6
.
0 2 8
.
0 6 4
.
0 9 6
.
0 9 6
。
0 96
.
0
34
.
6
’ 峨2 . 3 1 5 7 . 6 8 0 . 7 9 6 。 1 9 6 . 1
”: : } ;⋯’ ⋯、 ⋯⋯ ⋯} ::: 1 : :⋯1:::⋯1:::
2 2 林 业 科 学 研 究 1 卷
裹1 3
硫一 统 计 项 目
不同保存时间的 C PV 活性洲定
L T , o
~
~ ~
.
~ 回 归 直 线 方 程
(浓 度 ) 、~ ~ (天 )
L T , o
(天 )
1 9 8 2
(1 x 1 0 下/ m l)
了= 一 6 . 07 + 1 1 . l x
y = 一 了. 5 6 十 1 2 . 1 5 x
1 1
.
2 5
1 0
.
0 8
1 4
.
6 7
1 3
.
7 7
迟 。 此外 , 对 1 9 82年用活性炭吸附并保存于 4 ℃
冰箱中的样品用 6 龄松毛虫作喂食试验 , 结果也
全部感病死亡 。
(十) 林间防治效果试验
几年来 , 利用 JD S一CPV 对马尾松毛虫进行
了多次林间试验 。 现将各次试验结果摘要列入表
14
。 结果证实 , JD S 一CPV 用于防治松毛虫有较
好的效果 。 但死亡率的变异幅度较大 , 这涉及的
因子较多 , 往往在生产性防治时不可避免 , 但在
防治时 , 必须充分地考虑到 CPV 的特点 :
1
. 由于 CPV 具有致病死亡速度慢的特点 ,
处理林地的虫口密度不宜过高 , 否则对松针的保
护不利 , 而且残留虫数也较多 。
2
. 对高虫口区处理时 , 应掌握在初龄幼虫阶
段进行 , 或者与 B t混合使用 , 甚至可以加入一定量
的化学农药 。 本试验曾加入 1 / 2 0万国 产 敌 虫 菊
7
.
7 9 1 1 1 3 1 5 17 1 9 2 1
(月 、 日)
图 5 保存时间与C P V 活性
醋 , 云宝一浓度对 5一 6龄幼虫不至致死 , 但混入后使感病率提高约 1 0 % , 时问 了lJ’提前
的关系
约一周
表 14
时 间
(月 、 日 )
1 9 8 2
.
6
.
8
1 9 8 4
.
6一 7
1 9 8 4
.
6一7
1 9 84
.
10
1 98 5
.
6一 7
1 9 85
.
6
1 9 86
.
4
1 9 8 6
.
1 0
1 9 8 7
.
4
1 9 8 7
.
6
J D S一C PV 的林间防治效果
地 点
处理面积
(亩 ) 虫淤
病 毒 浓 度
(C PB / m l)
处 理 方 式
浙江龙山 林场 3一 4
4一 5
1 K 1 0 3
,
5
. 7
一 1 X 1 0 .
一 1 x 1 0 。
1 x 1 0 .
1 l x i 心。
1 2 义 20 .
1 I K I。,
1 X IC .
1
3 火 1 0 -
{ ‘U U ,山厂田
单株喷酒后 采虫套笼
全 喷后整株罩笼
单枝处理套笼
全 喷后整株翠笼
单枝处理套笼
单 伎处理套笼
全 喷后役标准株
全 喷后 设标准株
全喷后设标准株并采虫挂笼
油乳荆超低容 t 处理标准株和挂笼
效 果
一 (% )
一3 ‘· 6一 7 。. 3
} 6 2
.
0一 9 8 . 0
1 9 0一1 0 0
! 9 7
.
8
8 6一 1 0 0
安徽潜 山黄铺区
安徽潜山黄铺木孟 凸
安徽潜 山黄铺五坂林元
安徽潜 山黄铺庙冲村
2 0
5 O
1 4 0
2 0 0
:二: :: ‘ :
;二:
7 9
.
9一 9 1 . 2
1 5
.
3一 7 8 . 5
5 2
.
6一 8 ‘几. 4
1 期 陈 昌洁等 : 赤松毛虫质型多角体病毒的引进和利用研究
3
. 越冬前使用是有利时机 , 可在越冬代 2 一 3 龄幼虫期进行 。 试验结果 , 有时在 越 冬
前的死亡率即超过 90 % , 根据日本的试验结果 [ ‘7 1 , 12 0天的试验期 , 10 个多角体即可造成供
试虫50 %死亡 。
4
. 对环境温度应有所考虑 , 特别是早春气温偏低而多雨的省份 , 防治适期应抓住第一代
和第二代 (可在九月中进行 ) 。温度高 , 幼虫取食多 , 病毒增殖快 , 可 以加快致病进程 , 防效较好。
三 、 讨 论
根据本试验对松毛虫 CPV 的几个原株 , 以 及 JD S一C PV 在 我 国 松 毛 虫 (D ond lo li 二: s
sP p
.
)上的几个复制株所作 R N A 电泳 图谱表明 , JD S一CPV 对我国松毛虫的感染似乎不是复
制 , 而可能是对供试寄主 CPV 的诱发 。 Pa y n e[ ’6 1在三株细胞质多角体病毒的比较研究中 发
现 , JD S一CPV 一R N A 带谱为九个片段 , 十个基因组 , 属于他所区划的第一类型 。 本试 验 结
果与其相一致。 但本试验所有供试株的CPV 一R N A 带谱与引入病原 JD S一CPV 的带谱均不相
同 。 此种情况若确系诱发 , 必然涉及病毒潜伏感染的问题 , 需要深入研 究。 同 时 , 过 去 对
CPV 具有较广宿主域的看法 , 也值得进一步研究。
CPV 感染率高 , 致病死亡速度慢以及它具有良好的垂直传递效果等特点 , 从根本 上 波
坏了宿主种群的正常增殖趋势。 保留一定数量携带这种病毒的种群 , 对松林生态系统的稳定
性是有益的 。 实践证明 , 在CPV 试验过的林分 , 已显示出具有较长时期的持续效果 。 因此 ,
CPV 应该被认为是松毛虫综合管理中的一种较为理想的手段 。 目前 , 试验性应用 面积 已 远
到1 . 4万亩 , 取得了良好的防治效果。
参 考 文 献
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T HE PINE CAT E R P!LLAR D E N D 尸O L IM U S
S尸E C T 、理B IL IS CPV
Clle n C h a n g jie W a n g Z hix ia n L iu G e G a o Z hih e T ia o L ia n g
(T he R e s ea r ch I o stfr“re o f F
o , s e tr夕 C A F )
C h e n Jia n y in W
a n g Z h e n n a n
(F o r ‘
,
: r 刀: : : e 。: J o f A o J‘ C o 。、r, , Z ho jfa 。夕 P r o : , , ,: 。。 )
A b st r a e t
T he Pin e e a te r Pilla r D e n d , 0 11州 。5 sp e c ra乡1115 C PV (JD S一CPV ) in tro d u e e d
fro m Ja Pa n e o u ld g iv e h ig h m o rta lity b o t h t o s e v e n sPe c ie s o f th e P in e
e a te rPilla r in t h e g e n u s D e九d r o lin? o s a n d to t h e e o tt o n bo re r H elio r入15 a r 朴: ig e : a
in Chin a
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A e e o r d in g to t h e s tu d y o f g e l Pr o file s o f CPV 一R N A th e JD S一C PV
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in C h in a
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5 0 fa r w e h a v e fo u n d th r ee t yPe s o f g e l Pr o files o f n u e le ie a e id
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JD S
一
C PV
b e lo n g s to tyPe o n e
.
JA D P
一
C PV
,
JY D PW
一
CP V
,
JG D P
一
CP V
,
C Y D PW
一
C P V
e t e
.
b e lo n g to tyPe tw o
.
T h e u P b a n d o f C G D P一C P V be lo n g s to ty p e th r e e
.
T yPe t w o a n d t h re e a re r ePo r te d fo r th e firs t tim e
.
JD S
一
C PV a ffe c ts o n ly th e m id g u t e P ith e lia l e e lls a s a ll o t he r CP、产5 . T h e
LC
。。
fo r th e th ird
一
in s ta r a n d fift h
一
in sta r la r v a e o f t h e firs t g e n e ra t io n a r e
1
.
6 x 10 ‘ C PB / m l a n d 3
.
3 x l0 ‘ CPB / m l r e sPe e t iv e ly
.
T h e L D
。。
fo r t he th ir d
-
in s ta r Ia r v a e o f t h e sa m e g e n e ra tio n 15 2
.
l x 10 “ CPB / l:、r v a b y b io a ss a y
.
T h e
JD S一CP V n o t o n ly g a v e tlle b e st e o n tr o l to t li e la rv a e
,
b u t a ls o a ffee te d
fe e d in g
,
b o d y w e ig h t a n d e v e li t h e su r v ia l r a te o f la r v a e o f t h e n e x t g e n er a tio n
.
A PP ly in g t h e m ix t u re o f JD S
一
CP V a n d B t r es u lte d in 7 2一 5 0 % r e d u e tio n o f
fe e d in g
.
A fter s to r a g in g it in 0 11 e m u ls io n a t 峨℃ fo r 1 9 7 d a y s o r in liq u id
s u s p e n s io n u n d e r 4 ℃ fo r fiv e y e a rs , th e b io lo g ie a l 月e t iv ity o f JD S一C P V e o u ld
n o t b e a ffe c te d n o tie e a b ly
.
T h e h o s t u se d fo r m a ss Pr o d u e t io n o f JD S
一
C P V a r e th e Pin e e a te rPilla r
la r v a e fr o m P in e Pla n ta tio n
.
A n a v e r a g e y ie ld o b ta in e d 15 m o re t ha n 2 x 10
.
CP B Pe r la r v a o f 6 一7 t h
一
in sta r
.
K e y w o r d s : CPV ; g el p ro file s o f C PV
一
R N A : m id g u t ePit h e lia l e e lls ; CP B
D e 刀d r o li切封: S p o c ra阮115