全 文 ：第 wu卷 第 tt期
u s s y年 tt 月
林 业 科 学
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‘²√ qou s s y
树木溃疡病菌主要类群系统地位及
茶 子葡萄座腔菌的种内一致性 3
张星耀 赵嘉平 梁 军 吕 全
k中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所 国家林业局森林保护学重点实验室 北京 tsss|tl
摘 要 } 报道利用微卫星引物≈kŠ×l± !k≤Š„l± !k≤≤„l± !kŠ„„l± !k≤„„l± !kŠ„l± 和小卫星引物 tv进行的葡萄
座腔菌属 !盾壳霉属和疡壳孢属真菌的随机扩增微卫星多态性 °≤• k• „¶p°≤• l遗传多样性结果 }wu个参试菌株被
分为 w个 • „¶分类群 ~其中 uu个葡萄座腔菌属菌株和 y个小穴壳菌属菌株分布于这 w个类群中 ~• „¶分类群 ´ o
µ oŒ∂ 仅仅由葡萄座腔菌属和小穴壳菌属菌株构成 o部分茶 子葡萄座腔菌 ow个贝伦格葡萄座腔菌和所有的盾壳
霉属和疡壳孢属菌株构成了 • „¶分类群 ¶ ∀研究结果显示通过形态学确定的茶 子葡萄座腔菌种内具有遗传不
一致性 o形态学上一致的 u{个茶 子葡萄座腔菌菌株识别为 w个不同的表观群 ~造成苹果轮纹病菌和苹果干腐病
菌的贝伦格葡萄座腔菌菌株与部分茶 子葡萄座腔菌在分子水平上非常相似 ~研究结果亦显示盾壳霉属与疡壳孢
属真菌有着较近的系统关系 ∀
关键词 } 葡萄座腔菌属 ~盾壳霉属 ~疡壳孢属 ~茶 子葡萄座腔菌 ~随机扩增微卫星多态性 °≤• ~树木溃疡病
中图分类号 }≥zt{1{t ~ ±|v|1x 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kussyltt p ssyv p sy
收稿日期 }ussx p sw p s{ ∀
基金项目 }国家自然基金项目/树木溃疡病病原真菌类群遗传多样性与分子系统研究0kvsuzts{wl ∀
Μολεχυλαρ Ρελατιονσηιπ οφ γενυσ Βοτρψοσπηαεριαoγενυσ Χονιοτηψριυµ oγενυσ ∆οτηιχηιζα
ανδ τηε Χονσιστενχψ οφ Βοτρψοσπηαερια δοτηιδεα
«¤±ª÷¬±ª¼¤² «¤²¬¤³¬±ª ¬¤±ª∏± | ±∏¤±
k Ρεσεαρχη Ινστιτυτε οφ Φορεστ Εχολογψo Ενϖιρονµενταλανδ Προτεχτιον o ΧΑΦ Κεψ Οπεν Λαβορατορψοφ Φορεστ Προτεχτιον οφ Στατε Φορεστρψ Αδµινιστρατιον Βειϕινγ tsss|tl
Αβστραχτ } ׫¨ ©∏±ª¬²©ª¨ ±∏¶Βοτρψοσπηαεριαoª¨ ±∏¶Χονιοτηψριυµ ¤±§ª¨±∏¶ ∆οτηιχηιζᦤ±¦¤∏¶¨ «∏ª¨ §¬¶¤¶·¨µ¬±©²µ¨¶·µ¼¤±§
°¤±p°¤§¨ ³²³¯¤µ©²µ¨¶·µ¼¬± ≤«¬±¤q≥¬¬ °¬¦µ²p¶¤·¨¯ ¬¯·¨¶³µ¬°¨ µ¶≈kŠ×l±ok≤Š„l±ok≤≤„l±okŠ„„l±ok≤„„l±okŠ„l± 
¤±§²±¨ °¬±¬p¶¤·¨¯ ¬¯·¨¶³µ¬°¨ µtv ∏¶¨§·²¬§¨±·¬©¬¦¤·¬²±·«¨ °²¯ ¦¨∏¯¤µµ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³²©·«²¶¨ ·«µ¨¨ª¨±∏¶q „¯¯wu ·¨¶·¨§¬¶²¯¤·¨§
¬¶²¯¤·¨¶¤µ¨ ¦¯∏¶·¨µ¨§¬±·²w ªµ²∏³¶ouu Βοτρψοσπηαεριᬶ²¯¤·¨¶¤±§y ∆οτηιορελλᬶ²¯¤·¨¶¤µ¨ §¬¶³¨µ¶¨ ¬±·«¬¶w ªµ²∏³¶o¥∏·ªµ²∏³
Œo µ ¤±§Œ∂ ©²µ°¨ §²±¯¼ ¥¼·«¨ Βοτρψοσπηαεριᤱ§ ∆οτηιορελλᬶ²¯¤·¨¶q‹²º¨ √¨ µo·«¨ ²·«¨µy Βοτρψοσπηαερια δοτηιδεᬶ²¯¤·¨¶
¤±§w Βοτρψοσπηαερια βερενγεριανᬶ²¯¤·¨¶©²µ°¨ §·«¨ ¶∏¥ªµ²∏³²©ªµ²∏³ ¶ oy Χονιοτηψριυµ ¬¶²¯¤·¨¶¤±§u ∆οτηιχηιζᬶ²¯¤·¨¶
²±¯¼ ²¦¦∏µµ¨§¬±·«¨ ¶∏¥ªµ²∏³²©ªµ²∏³ ¶ q׫¨ µ¨¶∏¯·¶²© • „¶p°≤• ¶«²º¨ §·«¤··«¨ Βοτρψοσπηαερια δοτηιδεα ²µ ∆οτηιορελλα
¬¶²¯¤·¨¶º«¬¦«¬§¨±·¬©¬¦¤·¬²±¥¼¤±¤°²µ³«¦«¤µ¤¦·¨µ¶º¨ µ¨ ±²·¤°²±²³«¼¯ ·¨¬¦ªµ²∏³q׫¨ ³∏·¤·¬√¨ ³¤·«²ª¨±¬¦©∏±ª∏¶²©¤³³¯¨¶·¨°
µ²·¤±§µ¬±ª¶³²·o Βqβερενγεριανα ¤±§¬·¶³«¼¶¬²¯²ª¬¦¤¯ ©²µ° ¦²∏¯§ ±²·©²µ°¨ §¤ ¦¯¨ ¤µ¦¯∏¶·¨µ¥µ¤±¦« ¶¨³¤µ¤·¨¯¼ ¤±§ º«¬¦«
°¨ µª¬±ªº¬·«¶²°¨ Βqδοτηιδεα ¬¶²¯¤·¨¶¬± ¤¦²°³¯ ¬¨ ªµ²∏³q ׫¬¶µ¨¶∏¯·¬¯¯∏¶·µ¤·¨§·«¤·Βοτρψοσπηαερια βερενγεριανα ¬¶√¨ µ¼
¶¬°¬¯¤µ¯¼ º¬·« ¶²°¨ Βqδοτηιδεα ¬¶²¯¤·¨¶q ׫¨ µ¨¶∏¯·¤¯¶² ¬¯¯∏¶·µ¤·¨§ ¤ ¦¯²¶¨ µ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³ ¥¨·º¨ ±¨ ª¨ ±∏¶ Χονιοτηψριυµ ¤±§
∆οτηιχηιζαq
Κεψ ωορδσ} Βοτρψοσπηαερια~ Χονιοτηψριυµ ~ ∆οτηιχηιζα~ Βοτρψοσπηαερια δοτηιδεα~• „¶p°≤• ~·µ¨¨¦¤±®¨µ
树木溃疡病病原真菌类群泛指一些能引起多种树木发生溃疡 !烂皮以及枯枝等症状病害的真菌 ∀这些
真菌的性质与分类地位十分相近 o据国内外报道有几十种之多 o其中对树木生长造成严重影响的主要是葡萄
座腔菌属k Βοτρψοσπηαεριαl o盾壳霉属k Χονιοτηψριυµl o疡壳孢属k ∆οτηιχηιζαl以及腐皮壳菌属k ςαλσαl真菌 o这些
真菌对我国人工林 o特别是对杨树人工林造成的损失和危害已有非常多的报道 o被认为是我国现阶段森林重
大有害生物之一k张星耀等 oussvl ∀
关于树木溃疡病病原真菌类群及其所致病害 o国内外众多学者从病原学 !病理学 !流行学 !防治学以及森
林生态学等多方面对其进行了大量的研究k≥«¨¤µ ετ αλqot|ux ~≥°¬·«ot|vw ~李传道 ot|z| ~向玉英等 ot|z| ~
t|{z ~赵仕光 ot||v ~t||zl o也对关于葡萄座腔菌属的致病机理和遗传分化进行了 • ƒ° !• „°⁄!Œ≥≥• 以及 Œ×≥
序列研究k¤¦²¥¶ ετ αλqot||{ ~张星耀等 ot||| ~usss ~≥°¬·« ετ αλqousst¥~«²∏ ετ αλqousst¤~usst¥l o澄清了此类
真菌在系统学方面的一些问题 ∀本研究运用 • „¶p°≤• kµ¤±§²° ¤°³¯¬©¬¦¤·¬²± °¬¦µ²¶¤·¨¯ ¬¯·¨¶p°≤• lk‹¤±·∏¯¤ ετ
αλqot||yl技术对葡萄座腔菌属与疡壳孢属 !盾壳霉属真菌的分类关系 o茶 子葡萄座腔菌k Βοτρψοσπηαερια
δοτηιδεαl的种内遗传一致性 o苹果干腐病病原菌 Βοτρψοσπηαερια βερενγεριανα 与苹果轮纹病病原真菌
Βοτρψοσπηαερια βερενγεριανα §¨ ‘²·q©q¶³qπιριχολα的相互关系 oΒ qβερενγεριανα与茶 子葡萄座腔菌的相互关系进
行了比较研究 o期望会对溃疡病病原真菌类群的基础生物学研究及树木溃疡病防治提供理论基础 ∀
t 材料与方法
111 供试菌株
供试菌株包括 uu个 Β qδοτηιδεα菌株k简记为 …§o下同l oy个 ∆οτηιορελλα菌株k⁄l oy个 Β qβερενγεριανα菌
株k…¥l oy个 Χονιοτηψριυµ 菌株k≤²l ou个 ∆οτηιχηιζα菌株k⁄³l o其寄主和采集地见表 t ∀
表 1 供试菌株及来源
Ταβ .1 Σουρχε ανδ ισολατεσ υσεδ ιν τηισστυδψ
菌株 Œ¶²¯¤·¨¶ 菌株种类 ≥³¨¦¬¨¶ 寄主 ‹²¶· 采集地 ²¦¤¯¬·¼
„ 北京杨 Ποπυλυσ≅ βειϕινγενσισ 陕西杨凌 ≠¤±ª¯¬±ªo≥«¤¤±¬¬
… 箭杆杨 Πqνιγρα √¤µq τηεϖεστινα 陕西杨凌 ≠¤±ª¯¬±ªo≥«¤¤±¬¬
≤ 小美旱 Πqσιµονιι ≅ k Πqπψραµιδαλισn Σαλιξ µατσυδαναl ¦√ q−°²³¯¤µ¬¶. l 辽宁铁岭 ׬¨ ¬¯±ªo¬¤²±¬±ª
≠t 北京杨 Πqβειϕινγενσισ 北京温泉 • ±¨´ ∏¤±o …¨ ¬­¬±ª
≠u 北京杨 Πq≅ βειϕινγενσισ 北京海淀 ‹¤¬§¬¤±o…¨ ¬­¬±ª
≠v 青杨 Πqχατηαψανα 陕西杨凌 ≠¤±ª¯¬±ªo≥«¤¤±¬¬
⁄…u 小美旱 Πqσιµονιι ≅ k Πqπψραµιδαλισn Σαλιξ µατσυδανα ¦√ q−°²³¯¤µ¬¶. l 辽宁铁岭 ׬¨ ¬¯±ªo¬¤²±¬±ª
⁄…x 小美旱 Πqσιµονιι ≅ k Πqπψραµιδαλισn Σαλιξ µατσυδανα ¦√ q−°²³¯¤µ¬¶. l 辽宁铁岭 ׬¨ ¬¯±ªo¬¤²±¬±ª
≠Ž… 北京杨 Πq≅ βειϕινγενσισ 北京长阳 ≤«¤±ª¼¤±ªo …¨ ¬­¬±ª
≠Ž 茶 子葡萄座腔菌 y|杨 Πqδελτοιδεσ ¦¯ q−∏¬. 江西 ¬¤±ª¬¬
≠Ž× Βοτρψοσπηαερια δοτηιδεα 北京杨 Πq≅ βειϕινγενσισ 山东泰安 פ¬π¤±o≥«¤±§²±ª
≠Ž° 北京杨 Πq≅ βειϕινγενσισ 北京平谷 °¬±ªª∏o…¨ ¬­¬±ª
׍ 桃树 Πρυνυσ περσιχα 辽宁丹东 ⁄¤±§²±ªo¬¤²±¬±ª
׍⁄ 桃树 Πρυνυσ περσιχα 北京 …¨ ¬­¬±ª
‹÷tv 雪松 Χεδρυσ δεοδαρα 河南 ‹ ±¨¤±
‹Ž y|杨 Πqδελτοιδεσ ¦¯ q−∏¬. 湖南 ‹∏±¤±
°t 北京杨 Πq≅ βειϕινγενσισ 北京 …¨ ¬­¬±ª
°w 槐树 Σοπηοραϕαπονιχα 北京九龙山 ¬∏¯²±ª¶«¤±o …¨ ¬­¬±ª
≥³t 北京杨 Πq≅ βειϕινγενσισ 北京 …¨ ¬­¬±ª
v 银白杨 Πqαλβα 陕西杨凌 ≠¤±ª¯¬±ªo≥«¤¤±¬¬
t 银新杨 Πqαλβα ≅ Πqαλβα √¤µq πψραµιδαλισ 陕西杨凌 ≠¤±ª¯¬±ªo≥«¤¤±¬¬
‹®∏ 美洲黑杨 Πqδελτοιδεσ 陕西杨凌 ≠¤±ª¯¬±ªo≥«¤¤±¬¬
°… 苹果 Μαλυσ πυµιλα 北京长阳 ≤«¤±ª¼¤±ªo …¨ ¬­¬±ª
°× Β qβερενγεριανα §¨‘²·q©q¶³qπιριχολα 苹果 Μqπυµιλα 山东泰安 פ¬π¤±o≥«¤±§²±ª°° 苹果 Μqπυµιλα 北京平谷 °¬±ªª∏o …¨ ¬­¬±ª
°Š… 苹果 Μqπυµιλα 北京长阳 ≤«¤±ª¼¤±ªo …¨ ¬­¬±ª
°Š× Β q βερενγεριανα 苹果 Μqπυµιλα 山东泰安 פ¬π¤±o≥«¤±§²±ª
°Š° 苹果 Μqπυµιλα 北京平谷 °¬±ªª∏o…¨ ¬­¬±ª
≥„ 石榴 Πυνιχα γρανατυµ 山东枣庄 ¤²½«∏¤±ªo≥«¤±§²±ª
≥… 石榴 Πqγρανατυµ 山东枣庄 ¤²½«∏¤±ªo≥«¤±§²±ª
≥≤ ∆οτηιορελλᶳq 石榴 Πqγρανατυµ 山东枣庄 ¤²½«∏¤±ªo≥«¤±§²±ª
°{ 杨树 Ποπυλυσ¶³q 北京 …¨ ¬­¬±ª
…≠Ž 北京杨 Πq≅ βειϕινγενσισ 北京 …¨ ¬­¬±ª
≠… 小叶杨 Πqσιµονιι 北京 …¨ ¬­¬±ª
≥³{ 北京杨 Πq≅ βειϕινγενσισ 北京 …¨ ¬­¬±ª
∏®u 柳树 Σαλιξ ¶³q 山东泰安 פ¬π¤±o≥«¤±§²±ª
°ts 北京杨 Πq≅ βειϕινγενσισ 北京 …¨ ¬­¬±ª
w Χονιοτηψριυµ ¶³q 河北杨 Πqηοπειενσισ 陕西杨凌 ≠¤±ª¯¬±ªo≥«¤¤±¬¬
x 河北杨 Πqηοπειενσισ 陕西杨凌 ≠¤±ª¯¬±ªo≥«¤¤±¬¬
≠Ž×µ° 北京杨 Πq≅ βειϕινγενσισ 山东泰安 פ¬π¤±o≥«¤±§²±ª
≠„ ∆οτηιχηιζᶳq 北京杨 Πq≅ βειϕινγενσισ 北京 …¨ ¬­¬±ª
⁄× ∆οτηιχηιζα ποπυλεα 小叶杨 Πqσιµονιι 山东泰安 פ¬π¤±o≥«¤±§²±ª
wy 林 业 科 学 wu卷
112 供试菌株培养
以 °≥„培养基k马铃薯 uss ªo葡萄糖 us ªo琼脂 us ªo水 t l培养供试菌株 ots §后 o在菌落周缘取直径为
v °°的菌饼 {片 o置于 txs °的三角瓶中以 °≥培养基k马铃薯 uss ªo蔗糖 us ªo水 t sss °l ou{ ε 恒温液
体静置培养 ots §后收获菌丝并用灭菌去离子水洗涤 v次 op us ε 保存备用 ∀
113 ∆ΝΑ提取
⁄‘„提取方法参考张星耀等kt|||l的方法 ∀
114 ΡΑΜσ−ΠΧΡ 扩增
本研究的微卫星引物序列及其退火温度如表 u所示 ∀
表 2 Ρ ΑΜσ引物及退火温度
Ταβ .2 Τηε πριµερσ οφ Ρ ΑΜΣ ανδ ιτσ αννεαλινγ τεµ περατυρε
引物 °µ¬°¨ µ¶ 序列 ≥¨´ ∏¨ ±¦¨ ≠ 退火温度 „±±¨ ¤¯¬±ª·¨°³¨µ¤·∏µ¨Πε
kŠ×l± x. ≠‹≠kŠ×lx Š ws
k≤Š„l± x. ⁄‹…k≤Š„lx ys
k≤≤„l± x. ⁄⁄…k≤≤„lx ws
kŠ„„l± x. ‹……kŠ„„lx vx
k≤„„l± x. …⁄…k„≤„lx w|
kŠ„l± x. …‹…kŠ„lx Š ws
tv x. Š„ŠŠŠ×ŠŠ≤ŠŠ××≤× w{
≠任选碱基为 }…kŠ o× o或 ≤l o⁄kŠ o„ o或 ×l o‹k„ o× o或 ≤l o≠kŠ o
„ o或 ≤l ∀ ׫¨ ©²¯ ²¯º¬±ª§¨¶¬ª±¤·¬²±¶¤µ¨ ∏¶¨§©²µ§¨ª¨ ±¨ µ¤·¨¶¬·¨¶}…kŠ o× o²µ
≤l o⁄kŠ o „ o²µ×l o‹k„ o× o²µ≤l o ≠kŠ o„ o²µ≤l q
实验中所用引物由北京九发金贝生物技术有限
公司合成 oפ´ 酶购于北京鼎国生物技术有限公司 ∀
扩增反应采用 ux ∏反应体系 ∀包括 t ≅ 缓冲液
ktss °°²# pt ×µ¬¶ ‹≤¯ o tx °°²¯ # pt ª≤¯ u o
xs °°²¯#pt Ž≤¯ l os1w Λ°²¯ # pt 的 • „¶引物 o
s1u °°²¯#pt的 §‘×°¶ot ˜的 פ´ 酶 o模板 ⁄‘„ 约
ts ±ª#kux ˏlpt o反应体系中加入 us ˏ矿物油以防
止反应液蒸发 ∀
反应条件 }|w ε 变性 u °¬± 以后 o|w ε 变性
vs ¶o退火 vs ¶k各引物退火温度见表 ul ozu ε 延伸
wx ¶为一个循环 o共计 vx次循环 ozu ε 保持 x °¬±∀
扩增反应在 °∞公司 ⁄‘„ ׫¨µ°¤¯ ≤¼¦¯ µ¨w{s上进行 ∀热启动 °≤• 以防止低温过程中的非特异性扩增 ∀每一
引物重复 v次 o设不加模板 ⁄‘„的反应作为阴性对照 ∀
扩增产物在 x h及 { h聚丙烯酰胺凝胶 ot ≅ ׅ∞缓冲液 otus ∂ 电压下电泳 o以鼎国生物工程公司的
tss ¥³ ⁄‘„ ¤§§¨µ作为分子量标准 ∀硝酸银染色法显色 ∀胶片观察灯下观察 o照相记录 ∀
115 ΡΑΜσ ) ΠΧΡ 产物电泳数据的处理
将聚丙烯酰胺凝胶电泳图像输入计算机 o利用凝胶分析软件 …¤±§≥¦¤±x1s kŠ¯ ¼®²oŒ±¦qt||{l对电泳条带
进行识别 o小于 ts ¥³被认为属于同一条带 ∀根据某一条带在样品中出现和不出现 o分别赋值为/ t0和/ s0 o
得到供试菌株的扩增谱带二态数据矩阵 ∀
将扩增谱带二态数据矩阵根据按以下公式计算相关菌株的相似系数 Ι k‘¨¬ετ αλqot|z|l oΙ € u ΝιϕΠk Νι n
Νϕl o其中 oΝι oΝϕ为 u样品的总显示带数 oΝιϕ为 u样品共有的显示带数 o距离 ∆ € t p Ι ∀用邻位连接法
k±¨ ¬ª«¥²µp­²¬±¬±ªo‘l对供试菌株进行聚类 o得到树法计算系统树 ∀相似系数的计算和聚类分析均由
‘·¶¼¶u1su分析软件完成 ∀
u 结果与分析
z个引物在供试菌株中扩增产物的分子量大小及各个引物的特征性扩增产物k总计 tv个lk见表 vl ∀
表 3 Ρ ΑΜσ引物得到的 Βοτρψοσπηαερια及其相关属真菌的分子标记
Ταβ .3 Τηε µ ολεχυλαρ µαρκερ οφ γενυσ Βοτρψοσπηαερια ανδ οτηερ ρελατεδ γενυσφροµ Ρ ΑΜσ−ΠΧΡ
引物
°µ¬°¨ µ¶
特征性扩增片段长度
¨±ª·«²© • „¶p°≤• ³µ²§∏¦·¶Π¥³
总带数
ײ·¤¯ ¤°³¯¬©¬¨§©µ¤ª° ±¨·¶
特征带数
≥³¨¦¬©¬¦¤°³¯¬©¬¨§©µ¤ª° ±¨·¶
多态性
°²¯¼°²µ³«¬¶°Πh
kŠ×l± t txs ot sts tu u {v1v
k≤Š„l± t xss ot uss tu u {v1v
k≤≤„l± t wxs ot u|s tu u {v1v
kŠ„„l± u {ss ou wss ozss tw v z{1y
k≤„„l± {xs oxss tt u {t1{
kŠ„l± ty s tss
tv u yss ou wss tv u {w1y
根据扩增结果对供试菌株进行 ‘聚类分析 o结果见图 t ∀
xy 第 tt期 张星耀等 }树木溃疡病菌主要类群系统地位及茶 子葡萄座腔菌的种内一致性
由 ‘方法建立的系统树显示 }所有的 wu株供试菌株 o在 ts1x的水平上可以分为 w类 o我们定义为 w个
• „¶分类群 }群 ´包括 tt株 Βοτρψοσπηαερια δοβηιδεα菌株 }„ o‹÷tv o…o≠t o≠u o≠v o⁄…x o≤ o‹Žo≥°t o≠Ž…~t株
Β qβερενγεριανα 菌株 °Š° ~u 株 ∆οτηιορελλα γρεγαρια 菌株 ≥„ o≥≤ ∀群 µ包括茶 子葡萄座腔菌菌株 °° o
∆οτηιορελλα菌株 ≥…∀群 ¶包括 y株茶 子葡萄座腔菌菌株 ⁄…u o≠Ž°o≠Žo≠Ž× o׍⁄o°t o除 ׍⁄为桃树流胶
病病原真菌外 o其余均为杨树溃疡病菌 ~w株 Β qβερενγεριανα菌株 °…o°× o°Š…o°Š× ~u株 ∆οτηιχηιζα菌株 ≠„ o
⁄× ~y株 Χονιοτηψριυµ 菌株 ≥°{ o˜Žow ox o°ts o≠Ž×µ°∀群 ·由 x株茶 子葡萄座腔菌菌株 ׍o°w o‹®∏ot ov ~u
株 ∆οτηιορελλα菌株 °{ o…≠Ž构成 ∀群 ¶可以在更近的距离水平上分为 u个亚群 }亚群 t包含了苹果干腐病和
轮纹病菌 °…o°× o°Š…o°Š× o以及溃疡病病原真菌菌株 ⁄…u o≠Ž° o≠Žo≠Ž× o׍⁄o°t ~亚群 u 则由 u 个
∆οτηιχηιζα菌株和 y个 Χονιοτηψριυµ 构成 ∀
图 t 树木溃疡病病原真菌菌株的
• „¶p°≤• ‘系统进化树
ƒ¬ªqt ׫¨ ‘³«¼¯²ª¨ ±¼·µ¨¨²©³¤·«²ª¨ ±¬¦©∏±ª¬¦¤∏¶¨§
·µ¨ ¶¨¦¤±®¨µ¥¤¶¨§²± • „¶p°≤• ¤±¤¯¼¶¬¶
• „¶p°≤• 的 聚 类 结 果 不 能 将 Βοτρψοσπηαερια !
∆οτηιχηιζα !Χονιοτηψριυµ 属供试菌株区分为 v 个单一的类
群 o系统树显示真菌属间有着比较复杂的亲缘关系 ∀z个茶
子葡萄座腔菌供试菌株与 Χονιοτηψριυµ o∆οτηιχηιζα属的供
试菌株构成了一个混合的分类群 k群 ¶ l ∀所有的
Χονιοτηψριυµ 菌株则与 ∆οτηιχηιζα菌株严格地聚为一类 ∀茶
子葡萄座腔菌分布于以茶 子葡萄座腔菌为主构成的 v
个分类群中 o根据无性阶段确定为 ∆οτηιορελλα的石榴溃疡
病菌株 ≥…与苹果轮纹病菌株 °°组成一群 o在类群 ¶中的
茶 子葡萄座腔菌真菌菌株表现出了与苹果轮纹病及干腐
病菌株的较近的亲缘关系 o• „¶p°≤• 的方法并不能将这两
种真菌分开 ∀ Β qδοτηιδεα菌株在 ts1x的水平上形成了 w个
• „¶分类群 k见图 tl o类群间的距离甚至于大于
Χονιοτηψριυµ o∆οτηιχηιζα属间的遗传距离 ∀
v 结论与讨论
311 Βοτρψοσπηαερια及相关属真菌的 ΡΑΜσ分子标记位点
引物 tv okŠ„„l±okŠ×l± !k≤Š„l± !k„„≤l±和k≤≤„l±
均能产生 t条以上的类群内共有的特征性微卫星 ⁄‘„ 片
段 o或者几条微卫星 ⁄‘„ 片段共同代表类群的特征 o应用
这些引物可以对树木溃疡病原真菌进行快速分子鉴定 ∀
312 Χονιοτηψριυµ 与 ∆οτηιχηιζα属真菌的分类地位
传统分类系统中 Βοτρψοσπηαερια属 !Χονιοτηψριυµ 属和 ∆οτηιχηιζα属真菌同属腔孢纲k≤²¨ ²¯°¼¦¨·¨¶l !球壳孢
科k≥³«¤¨µ²³¶¬§¤¦¨¤¨ l o以子座 !分生孢子器和分生孢子的形态特征来区分 ∀ Χονιοτηψριυµ 的分生孢子有色 o小 o
圆形或椭圆形 o其他 v属分生孢子无色 ~∆οτηιχηιζα不具有子座 o分生孢子器为盘状不规则开裂 o分生孢子小
于 tx Λ° ~∆οτηιορελλα具有子座 o而且多个分生孢子器集生在其中 o孢子较大 o圆筒形或卵圆形 ∀张星耀等
kt|||l通过 u{≥µ⁄‘„p• ƒ°和 • „°⁄技术研究了 Χονιοτηψριυµ 属 !Βοτρψοσπηαερια属与 ∆οτηιχηιζα属的系统关系 o
结果表明 Χονιοτηψριυµ !与 ∆οτηιχηιζα属真菌的分类地位较为接近 o而与 Βοτρψοσπηαερια属的亲缘关系相对较远 ∀
本研究中 o在 {1s的水平上 oy株 Χονιοτηψριυµ 菌株与 u株 ∆οτηιχηιζα菌株严格聚合在一起 o形成 t个复合
的 • „¶p°≤• 分类群 o说明 Χονιοτηψριυµ 与 ∆οτηιχηιζα 真菌具有更近的亲缘关系 ~除 ≥³{ 以外的 x 个
Χονιοτηψριυµ 菌株形成 t个小的聚类枝 o∆οτηιχηιζα菌株 ⁄×与 ≠„处于另一聚类枝上 o又说明 Χονιοτηψριυµ 与
∆οτηιχηιζα真菌不同 ∀
313 杨树溃疡病病原真菌菌株 Α !Β !Χ及石榴溃疡病菌 ΣΒ !ΣΒ !ΣΧ的分子关系
菌株 „ !… !≤是杨树溃疡病病原真菌中研究的较为充分的 v个菌株 ∀赵仕光kt||{l !刘会香等kt||z¤~
t||z¥~t||z¦l对 „ !… !≤ v菌株的形态特征 !生理学特性 !同工酶 !可溶性蛋白质 !致病性及诱导抗性等方面进
行了系统研究 ∀结果表明 }在形态特征和生理特征方面 o将 „ !≤ 两菌株归为同一生理型 o…菌株属另一生理
yy 林 业 科 学 wu卷
型 ∀但是诱导作用的大小与生理型之间没有必然联系 ∀根据 • „°⁄p°≤• 结果表明 „ !…在分子水平上具有
更大的相似性k张星耀等 ousssl ∀本试验中得到了与后者相似的结论 ∀ • „°⁄分子标记具有较快的进化速
率 o因此 o具有一定的鉴别作用 o利用进化更快的微卫星分子标记 o可以看出 v菌株之间的相似性下降 o但是
来自陕西的 „ !…菌株仍然聚合在一起 o而与来自于辽宁的菌株 ≤有了较为明显的分化 ∀ „ !… !≤ 的分化现象
显示出了地理起源与 Β qδοτηιδεα种内分化的相关性 ∀电泳图谱容易看出 o在一些特征性的扩增条带上 o部
分引物出现了互补现象 o如k≤Š„l±的 t xss ot uss条带和k≤≤„l±引物 t wxs ot u|s条带 o这清晰地说明了微
卫星分子标记的共显性特点 o通过对其序列特征的研究 o将有助于对 Βοτρψοσπηαερια真菌相关微卫星位点进
化的了解 ∀
菌株 ≥„ !≥… !≥≤是近年来严重危害石榴的病原真菌 o≥„为石榴疮疥病原 o≥…为石榴果腐病原 o≥≤ 为石
榴干腐病原 ∀ • „¶p°≤• 的结果显示 ≥„和 ≥≤之间具有更大的相似性 ∀
314 苹果轮纹病菌和苹果干腐病菌的分类地位
苹果轮纹病菌和苹果干腐病菌是危害苹果生产的两种病原真菌 o现在将苹果干腐病菌确定为 Β q
βερενγεριαναo苹果轮纹病菌确定为 Β qβερενγεριανα §¨ ‘²·q©q¶³q πιριχολα k‘²¶¨lk中国果树研究所 ot||ul ∀黄
春燕等kusstl !张星耀等kt|||l利用 • „°⁄p°≤• 将苹果轮纹病菌与苹果干腐病菌区分开来 o• „°⁄分析不仅
可以用于 Β qβερενγεριανα的鉴定和种内专化型的区分 o而且可用于区分不同寄主 !不同地域的菌株 ∀张星耀
等kt|||l同时发现苹果干腐病菌和杨树溃疡病菌率先聚合在一起 o表明了两病害病原菌的一定相似性 ∀
本研究的结果未能将苹果干腐病菌与苹果轮纹病菌完全分开 o其中干腐病菌 °Š° o°Š× o轮纹病菌 °…o°×
各自聚为一类 o表明了这 u类真菌的不同 ~但是 °Š°和 °°却聚合在一起 ∀ • „¶p°≤• 的结果显示苹果干腐
病菌与苹果轮纹病菌的更多分化现象 o发现来自北京的 °…o°° o°Š°有着较好的相似性 o而 u株山东的菌株
与来自北京的 °Š…有着较好的相关性 ∀
315 茶 子葡萄座腔菌的种内一致性
近年来许多研究认为葡萄座腔菌属k Βοτρψοσπηαεριαl不是一个单系类群k¤¦²¥¶ ετ αλqot||{ ~≥°¬·« ετ αλqo
usst¤~«²∏ ετ αλqousst¤l o其中形态学上确定的茶 子葡萄座腔菌和 Β qριβισ之间有很大的不同 ∀ ¤等
kussul用 °p°≤• 及 Œ×≥序列分析均将 {y个被认为是茶 子葡萄座腔菌的菌株 o分为清晰的 v个组 ∀张星
耀等kusssl的 • „°⁄结果也显示出了茶 子葡萄座腔菌内部的不一致性 o部分菌株构成了一个纯正的 …§分
类群 o另外一部分则与 Β qβερενγεριανα构成了复合类群 ∀
本研究表明 }在我国引起树木溃疡病的病原真菌 Β qδοτηιδεα菌株之间具有较大的遗传分化 o在 ts1s的
水平上 ou{个供试菌株被分为 u大类 o其中以 „ o…为代表的一类几乎全由 Β qδοτηιδεα构成 o而另外一类则具
有更为复杂的结构 o与 Χονιοτηψριυµ 与 ∆οτηιχηιζα以及茶 子葡萄座腔菌的大多数菌株更为相近 o相互之间有
着较远的进化距离 ∀在 |1s的水平上 oΒ qδοτηιδεα则可以分为 w个分类群 ∀
在本研究建立的 ‘系统树中 oΒ qδοτηιδεα类群表现出了内部遗传分化的明显不一致性 o与国外的研究
相一致 ∀关于树木溃疡病的病原 o国外有些研究者认为主要是由 Β qριβισ与茶 子葡萄座腔菌等构成 o即认
为 Β qριβισ与茶 子葡萄座腔菌分别代表 u个不同的真菌类群 o而国内一般认为 Β qριβισ是茶 子葡萄座腔
菌的同物异名 ∀本研究中根据后一种观点将有关的树木溃疡病菌鉴定为茶 子葡萄座腔菌 o但是试验结果
却清晰地揭示出供试菌株的遗传分化 ∀因此 o对于 • „¶分析的结果 o如果考虑到部分 Β qριβισ菌株的存在 o
则本研究结果与国外完全一致 ∀本研究的结果显示出茶 子葡萄座腔菌内部的不一致性 o形态学上认定的
茶 子葡萄座腔菌菌株应该是 u个到 w个种组成的多元类群 oΒ qριβισ不是茶 子葡萄座腔菌的同物异名 o
• „¶p°≤• 可以看出二者之间的遗传差异 o因而应该认为是 u个不同的生物学种 ∀在与国外的菌株进行比
较研究之后 o可以最终验证这个结论的正确性 ∀
参 考 文 献
黄春燕 o刘开启 qusst1 苹果轮纹病及相关病害病原菌的 • „°⁄分析 q植物病理学报 ovtkul }tyw p ty|
李传道 qt|z|1 树木的溃疡病 q南京林学院学报 otkul }uu p uw
刘会香 o胡景江 o朱 玮 o等 qt||z¤q杨树溃疡病菌 v菌系脂酶同工酶 o可溶性蛋白及致病性研究 q西北林学院学报 otukvl }uw p u{
刘会香 o景 耀 o赵仕光 o等 qt||z¥q杨树溃疡病菌 v菌系形态和生理特性的研究 q西北林学院学报 otukvl }t{ p uv
刘会香 o朱 玮 o胡景江 o等 qt||z¦q杨树溃疡病菌 v菌系及诱导物对寄主两种酶活性的影响 q西北林学院学报 otukvl }u| p vw
zy 第 tt期 张星耀等 }树木溃疡病菌主要类群系统地位及茶 子葡萄座腔菌的种内一致性
向玉英 o花晓梅 qt|z|1 杨树水泡性溃疡病的病原鉴定 q微生物学报 ot|ktl }xz p yv
向玉英 qt|{z1 杨树病害及其防治 q北京 }中国林业出版社 oxx p ys
张星耀 o骆有庆 qussv1 中国森林重大生物灾害 q北京 }中国林业出版社 o|v p tv| ~vzu p v{x
张星耀 o赵仕光 o吕 全 o等 qusss1树木溃疡病病原真菌类群分子遗传多样性研究 µ ) …²·µ¼²¶³«¤¨µ¬¤属 u{≥µ⁄‘„ °≤• • ƒ°和 • „°⁄解析 q林业
科学 ovykul }zy p {t
张星耀 o赵仕光 o朴春根 o等 qt|||1 树木溃疡病病原真菌类群分子遗传多样性研究 ´ ) 小穴壳菌属 o疡壳孢属 o壳囊孢属 o盾壳霉属分类地位的
分子证明 q林业科学 ovxkvl }vw p ws
赵仕光 qt||{ q杨树溃疡病寄主组织病理理学和病菌分子生物学研究 q东北林业大学博士论文
赵仕光 o景 耀 o王 颍 o等 qt||z1 杨树溃疡病测报技术的研究 }西北林学院学报 otukvl }wx p xt
赵仕光 o景 耀 o杨俊秀 qt||v1 杨树树皮内过氧化物酶和多酚氧化酶活性与抗溃疡病的关系 q西北林学院学报 o{kvl }tt p tz
中国果树研究所 qt||y1 中国果树病虫志 q北京 }中国农业出版社
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k责任编辑 朱乾坤l
{y 林 业 科 学 wu卷