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STUDIES ON SPORULATION OF METARHIZIUM IN SUBMERGED CULTURE

液体深层培养绿僵菌分生孢子的研究


strains of Metarhizium were cultivated in submerged culture. The results indicated that the submerged conidia could be produced by means of microcyclic sporogenesis for some strains of Metarhizium,but perhaps, the occurrence of microcyclic sporogenesis depended on the nature of strains. Submerged sporulation of M337 strain was emphatically observed in the media containing different nutrient elements. The results showed that the submerged sporulation depended on a delicate equilibrium in the composition of the medium. Various carbon and nitrogen sources affected the production of submerged conidia greatly. Sucrose, soluble starch and lactose were effective for sporulation of submerged conidia. Peanut cake powder, yeast extract and peptone were ideal nitrogen sources for submerged sporulation. The influence of trace elements on submerged sporulation was most spectacular. Molybdenum was the most important element. Zinc was stimulatory. When all 6 elements (B,Cu,Fe,Mn,Mo,Zn) were added together, it yielded highest production of submerged conidia. Vitamins affected submerged sporulation significantly. VB6+VH and compound vitamin B were more effective for producing submerged conidia. In addition, the infectivity of submerged conidia of M337 strain was tested in laboratory, which showed higher virulent to the 3rd~4th instar larvae of Dendrolimus punctatus. From experiment results, we can appreciate the fact of worth while making a thorough study on production of conidia of Metarhizium cultivated in submerse fermentation.


全 文 : 第 vz卷 第 x期u s s t年 | 月
林 业 科 学
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∂²¯1vz o‘²1x
≥ ³¨qou s s t
液体深层培养绿僵菌分生孢子的研究
宋 漳
k福建林学院资源与环境系 南平 vxvsstl
关键词 } 绿僵菌 o液体深层培养 o液生分生孢子 o马尾松毛虫 o毒力
收稿日期 }usss2sy2tv ∀
基金项目 }福建省自然科学基金项目k≤|ysuyl和福建省教委科学研究基金项目kŽ|vsvyl资助 ∀
ΣΤΥ∆ΙΕΣ ΟΝ ΣΠΟΡΥΛΑΤΙΟΝ ΟΦ ΜΕΤΑΡΗΙΖΙΥΜΙΝ ΣΥΒΜΕΡ ΓΕ∆ ΧΥΛΤΥΡΕ
≥²±ª«¤±ª
k Ρεσουρχεσ & Ενϖιρονµεντ ∆επαρτµεντ o Φυϕιαν Χολλεγε οφ Φορεστρψ Νανπινγ vxvsstl
Αβστραχτ} y ¶·µ¤¬±¶²© Μεταρηιζιυµ º¨ µ¨ ¦∏¯·¬√¤·¨§¬± ¶∏¥°¨ µª¨§¦∏¯·∏µ¨ q ׫¨ µ¨¶∏¯·¶¬±§¬¦¤·¨§·«¤··«¨ ¶∏¥2
°¨ µª¨§¦²±¬§¬¤¦²∏¯§¥¨ ³µ²§∏¦¨§¥¼ °¨ ¤±¶²© °¬¦µ²¦¼¦¯¬¦¶³²µ²ª¨ ±¨ ¶¬¶©²µ¶²°¨ ¶·µ¤¬±¶²© Μεταρηιζιυµ o¥∏·³¨µ2
«¤³¶ o·«¨ ²¦¦∏µµ¨±¦¨ ²©°¬¦µ²¦¼¦¯¬¦¶³²µ²ª¨ ±¨ ¶¬¶§¨ ³¨ ±§¨§²±·«¨ ±¤·∏µ¨ ²©¶·µ¤¬±¶q≥∏¥°¨ µª¨§¶³²µ∏¯¤·¬²±²© vvz
¶·µ¤¬± º¤¶ °¨³«¤·¬¦¤¯ ¼¯ ²¥¶¨µ√¨ §¬±·«¨ °¨ §¬¤¦²±·¤¬±¬±ª§¬©©¨µ¨±·±∏·µ¬¨±·¨¯ °¨¨ ±·¶q׫¨ µ¨¶∏¯·¶¶«²º¨ §·«¤··«¨
¶∏¥°¨ µª¨§¶³²µ∏¯¤·¬²± §¨ ³¨ ±§¨§²±¤§¨ ¬¯¦¤·¨ ¨´ ∏¬¯¬¥µ¬∏°¬±·«¨ ¦²°³²¶¬·¬²±²©·«¨ °¨ §¬∏°q∂¤µ¬²∏¶¦¤µ¥²±¤±§±¬2
·µ²ª¨± ¶²∏µ¦¨¶¤©©¨¦·¨§·«¨ ³µ²§∏¦·¬²± ²©¶∏¥°¨ µª¨§¦²±¬§¬¤ªµ¨¤·¯¼ q≥∏¦µ²¶¨ o¶²¯∏¥¯¨¶·¤µ¦«¤±§ ¤¯¦·²¶¨ º¨ µ¨ ©¨©¨¦2
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©²µ¶∏¥°¨ µª¨§¶³²µ∏¯¤·¬²±q׫¨ ¬±©¯∏¨±¦¨ ²©·µ¤¦¨ ¨¯ °¨¨ ±·¶²±¶∏¥°¨ µª¨§¶³²µ∏¯¤·¬²± º¤¶°²¶·¶³¨¦·¤¦∏¯¤µq ²¯¼¥2
§¨ ±∏° º¤¶·«¨ °²¶·¬°³²µ·¤±·¨ ¯¨ °¨ ±·q¬±¦º¤¶¶·¬°∏¯¤·²µ¼q • «¨ ± ¤¯¯y ¨¯ °¨¨ ±·¶k…o≤∏oƒ¨o±o²o±l º¨ µ¨
¤§§¨§·²ª¨·«¨µo¬·¼¬¨ §¯¨§«¬ª«¨¶·³µ²§∏¦·¬²±²©¶∏¥°¨ µª¨§¦²±¬§¬¤q∂¬·¤°¬±¶¤©©¨¦·¨§¶∏¥°¨ µª¨§¶³²µ∏¯¤·¬²±¶¬ª±¬©¬2
¦¤±·¯¼q∂…y n ∂ ‹ ¤±§¦²°³²∏±§√¬·¤°¬± … º¨ µ¨ °²µ¨ ©¨©¨¦·¬√¨ ©²µ³µ²§∏¦¬±ª¶∏¥°¨ µª¨§¦²±¬§¬¤qŒ± ¤§§¬·¬²±o·«¨
¬±©¨¦·¬√¬·¼ ²©¶∏¥°¨ µª¨§¦²±¬§¬¤²© vvz ¶·µ¤¬± º¤¶·¨¶·¨§¬± ¤¯¥²µ¤·²µ¼oº«¬¦«¶«²º¨ §«¬ª«¨µ√¬µ∏¯ ±¨··²·«¨ vµ§∗
w·«¬±¶·¤µ¯¤µ√¤¨ ²© ∆ενδρολιµυσπυνχτατυσqƒµ²° ¬¨³¨µ¬°¨ ±·µ¨¶∏¯·¶oº¨ ¦¤±¤³³µ¨¦¬¤·¨·«¨ ©¤¦·²©º²µ·«º«¬¯¨ °¤®2
¬±ª¤·«²µ²∏ª«¶·∏§¼ ²± ³µ²§∏¦·¬²± ²©¦²±¬§¬¤²© Μεταρηιζιυµ ¦∏¯·¬√¤·¨§¬±¶∏¥°¨ µ¶¨ ©¨µ°¨ ±·¤·¬²±q
Κεψ ωορδσ} Μεταρηιζιυµ o≥∏¥°¨ µª¨§¦∏¯·∏µ¨ o≥∏¥°¨ µª¨§¦²±¬§¬¤o ∆ενδρολιµυσ πυνχτατυσoײ¬¬¦¬·¼
目前国内外生产绿僵菌分生孢子制剂常用固体发酵法或两相发酵法 o这些方法生产周期长 o产品易
被污染 o产量低 o不能大量满足生物防治的需要 ∀而液体深层培养具有生产周期短 o产品不易被污染 o生
产率高 o培养条件易控制等优点 o倍受人们所推崇 ∀现已知有少数几种昆虫致病丝孢菌 o如 Ασπεργιλλυσ
οχηραχευσk∂i½¬±¤ ετ αλqot|yxl !Ηιρσυτελλα τηοµπσονιι √¤µq σψννεµατοσα k •¬±®¨ «¯²©© ετ αλqot|{wl !Βεαυϖερια
βασσιανα k׫²°¤¶ ετ αλqot|{zl以及绿僵菌k樊美珍等 ot||vl的某些菌株在液体深层培养中能产生液生分
生孢子 ∀且有研究认为在某些培养条件下产生的液生分生孢子的性质与气生分生孢子相似k׫²°¤¶ ετ
αλqot|{zl ∀因此 o本文着重从绿僵菌液生分生孢子形成与培养基组成的关系 o以及液生分生孢子对森
林主要害虫马尾松毛虫的侵染性等方面进行较为系统的研究 ∀
1 材料与方法
t qt 供试菌种 金龟子绿僵菌 Μεταρηιζιυµ ανισοπλιαε k ·¨¶¦«ql ≥²µ²®¬±o vvz !tsv !tsw ~贵州绿僵菌
Μεταρηιζιυµ γυιζηουενσε ≤«¨ ± ·¨Š∏² ottx ~金龟子绿僵菌大孢变种 Μεταρηιζιυµ ανισοπλιαε √¤µq µαϕορ
k²±±¶·²±l ×∏¯ ²¯¦« ovvy ~黄绿绿僵菌 Μεταρηιζιυµ φλαϖοϖιριδε Š¤°¶ovvx ∀以上菌种均来源于中国农业菌
种保藏中心 ∀
t qu 培养基成分 ktl基础盐 kª#ptl }Ž‹u°’w t qxs !ª≥’w#z‹u ’ s qxs !≤¤≤¯ u s qst ~kul微量元素kΛª#
ptl }‹v…’v vs !±≥’w #w‹u ’ ws !‘¤u ²’w#u‹u ’ xs !≤∏≥’w #x‹u ’ {s !±≥’w #z‹u ’ wss !ƒ ≤¨¯ v#y‹u ’ xss ~
kvl维生素ktx Λª#ptl }∂…t !∂…u !∂…y !∂ ≤ !∂ ‹ !∂…w !复合维生素 …~kwl吐温 {s }s1t h ~kxl碳源kux ª#
ptl }葡萄糖 !蔗糖 !可溶性淀粉 !乳糖 !麦芽糖 ~kyl氮源ktx ª#ptl }豆饼粉 !花生饼粉 !玉米粉 !麦麸 !酵
母浸出汁 !蛋白胨 !Ž‘’v ∀最终培养基的 ³‹调至 y q{ ∀
t qv 试验方法 取供试斜面菌种加 s qt h吐温 {s无菌水 o用无菌操作打散混匀 !稀释 o使其最终含孢量
为 t qs ≅ ts| 个孢子#pt ouxs °三角瓶装入 w| °培养液 o接入 t °孢子悬浮液 o试验设 v个重复 o置
kux ? tl ε 恒温摇床中振荡培养 o振荡频率为 tvs µ#°¬±pt o接种后每隔 tu «取样观察 ∀液生分生孢子用
血球计数板计数 o生物量用干物质称量法测定 o即将培养液过滤 otus ε 烘干 u «o称重 ∀
t qw 液生分生孢子对马尾松毛虫的毒力生物测定 选用金龟子绿僵菌 vvz菌株接种于液体培养基
中 o置kux ? tl ε !振荡频率为 tvsµ#°¬±pt的恒温摇床中振荡培养 tww «o大量形成液生分生孢子 o然后滤
除菌丝体 o浓缩液生分生孢子悬浮液 o再用 s qt h吐温 {s无菌水配制成浓度梯度分别为 }t qs ≅ tstt ∗ t q
s ≅ tsz 个孢子#pt的液生分生孢子悬浮液 ∀每种浓度设 v个重复 o每个重复 vs条 v ∗ w龄马尾松毛虫
∆ενδρολιµυσ πυνχτατυσ • ¤¯®¨µ∀用微量注射器吸取上述菌液滴于幼虫体表 o每虫接种量为 s qt°菌液 o对
照组用 s qt h吐温 {s无菌水接种 ∀处理后放入装有松针的罐头瓶中 o瓶盖装有铁丝网 o以保持通气 o置
于 ux ε 下饲养 ∀每日更换松针 o喷清水以保持高湿 o逐日统计感染死亡虫数 ∀同时以 vvz菌株的气生
分生孢子对马尾松毛虫的毒力测定为对比试验 o接种方法同上 ∀
图 t 气生分生孢子ktl ≅ zxs和液生分生孢子kul ≅ {zx形态比较
ƒ¬ªqt ²µ³«²¯²ª¼ ²©¤¨µ¬¤¯ ¦²±¬§¬¤ktl ≅ zxs ¤±§¶∏¥°¨ µª¨§¦²±¬§¬¤kul ≅ {zx
图 u 不同培养时间绿僵菌 vvz菌株的产孢量
ƒ¬ªqu ≥³²µ∏¯¤·¬²±¦∏µ√¨ ²© vvz ¶·µ¤¬± ¤·§¬©©¨µ¨±·¦∏¯·∏µ¨ ·¬°¨
2 结果与分析
u qt 液生分生孢子形成与菌株的关系 振荡培养
uw «后 o绿僵菌分生孢子开始萌发 o原生质转移至芽
管生长点 o芽管自孢子一端或两端伸出 ∀vy«菌体呈
网状 ow{ «菌体呈团状 oys «菌体出现产孢结构 o开始
形成液生芽孢子 o液生芽孢子呈长卵形 ∀zu«液生芽
孢子开始大量形成 o部分芽孢子以循环产孢方式 o不
经营养生长阶段 o直接从芽孢子上形成分生孢子 o液
生分生孢子卵球形 o与气生分生孢子有明显差异k图
tl ∀此后液生分生孢子产量逐渐增加 otus ∗ tww «达
到最高产孢量k图 ul ∀本试验所选用的 y个菌株中 o
有 w个菌株可通过微循环产孢形成液生分生孢子 o
另 u个菌株始终仅形成液生芽孢子 ∀且各菌株的产
孢能力差异很大k表 tl ∀可见 o绿僵菌微循环产孢现
象的发生及液生孢子的产量与菌株有一定的相关性k樊美珍等 ot||vl o通过对菌株的筛选 o可望获得适
xvt 第 x期 宋 漳 }液体深层培养绿僵菌分生孢子的研究
合液体发酵生产液生分生孢子菌剂的菌株 ∀
表 1 液体培养 120 «绿僵菌生物量和液生分生孢子产量
Ταβ .1 Βιοµασσ ανδ προδυχτιον οφσυβµεργεδ χονιδια οφ Μεταρηιζιυµ αφτερ γροωινγ ιν λιθυιδ µεδια φορ 120 η
菌株 ≥·µ¤¬± vvz tsv tsw ttx vvx vvy
液生分生孢子
≥∏¥°¨ µª¨§¦²±¬§¬¤k ≅ ts|¶³²µ¨#ptl
v qwt t qzx t quy s q|v ) )
生物量 …¬²°¤¶¶kª#ptl v qsz v qz{ x q|| v qyu w qz{ t qyv
表 2 不同碳源对绿僵菌生长及液生分生孢子形成的影响
Ταβ .2 Γροωτη ανδ σπορυλατιον οφ Μεταρηιζιυµ ανισοπλιαειν λιθυιδ µεδια χονταινινγ ϖαριουσ χαρβον σουρχεσ
碳源
≤¤µ¥²± ¶²∏µ¦¨
葡萄糖
⁄¨ ¬·µ²¶¨
蔗糖
≥∏¦µ²¶¨
可溶性淀粉
≥²¯∏¥¯¨¶·¤µ¦«
乳糖
¤¦·²¶¨
麦芽糖
¤¯·²¶¨
液生分生孢子
≥∏¥° µ¨ª¨§¦²±¬§¬¤k ≅ ts|¶³²µ¨#ptl
v qus w qv| w qvt w qus v qtv
生物量 …¬²°¤¶¶kª#ptl y qxs z qsu y q{y x q|t y q{t
表 3 不同氮源对绿僵菌生长及液生分生孢子形成的影响
Ταβ .3 Γροωτη ανδ σπορυλατιον οφ Μεταρηιζιυµ ανισοπλιαειν λιθυιδ µεδια χονταινινγ ϖαριουσ νιτρογεν σουρχεσ
氮源
‘¬·µ²ª¨ ± ¶²∏µ¦¨
豆饼粉
…¨ ¤± ¦¤®¨
³²º§¨µ
花生饼粉
³¨ ¤±∏·¦¤®¨
³²º§¨µ
玉米粉
≤²µ± ©¯²∏µ
麦麸
• «¨ ¤·¥µ¤±
酵母浸出汁
≠ ¤¨¶·¨ ¬·µ¤¦·
蛋白胨
°¨ ³·²±¨
Ž‘’v
液生分生孢子 ≥∏¥°¨ µª¨§¦²±¬§¬¤
k ≅ ts|¶³²µ¨#ptl
v qty w qzt t qxw t qty w qyz w qyv s qxu
生物量
…¬²°¤¶¶kª#ptl
w qtz u q{v u qvz u qt| { qzt { q{| u q|x
u qu 碳 !氮源对液生分生孢子形成影响 以豆饼粉为氮源组配成不同碳源的培养基 !以蔗糖为碳源组
配成不同氮源的培养基 o同时在以上不同碳 !氮源培养基中加入 … !≤∏!ƒ¨!± !²!± y种微量元素和
∂…t o以金龟子绿僵菌 vvz菌株为供试菌株测定不同碳 !氮源对液生分生孢子形成的影响 ∀ vvz菌株
在以上各种液体培养基中振荡培养 tus «后生长量和产孢情况如表 u和表 v ∀经统计分析表明 o不同的
碳源和氮源对金龟子绿僵菌 vvz菌株的生物量和液生分生孢子形成具有极显著的影响 ∀经 ≥• 法检
验可知 o蔗糖 !可溶性淀粉 !乳糖是有利于绿僵菌形成液生分生孢子的较好碳源 o且它们之间无显著差
异 ∀花生饼粉 !酵母浸出汁 !蛋白胨是有利于绿僵菌形成液生分生孢子的较理想氮源 o且它们之间无显
著差异 ∀同时从试验中还可以看出复杂的有机氮源比简单的无机氮源更有利于液生分生孢子的形成 ∀
u qv 微量元素对绿僵菌液生分生孢子形成的影响 在以花生饼粉 !蔗糖 !基础盐 !吐温 {s为基础培养
基中加入不同的微量元素 o用 vvz菌株接种 o测定微量元素对绿僵菌液生分生孢子形成的影响 ∀试验
结果表明k表 wl }微量元素对绿僵菌液生分生孢子的形成有重要影响 ∀当单个微量元素或 u个以上的
微量元素组合加入时 o可以看出钼是最重要的微量元素 o对绿僵菌液生分生孢子的形成有很大的影响 ∀
锌 !钼组合加入时 o锌为刺激因子 o液生分生孢子产量比单一的钼元素加入时明显增大 ∀但当以上 y种
元素同时加入时 o可获得最大的产孢量 o说明微量元素对绿僵菌液生分生孢子形成的影响应是协同进行
的 ∀
yvt 林 业 科 学 vz卷
表 4 微量元素对绿僵菌生长和液生分生孢子形成的影响
Ταβ .4 Ινφλυενχε οφτραχε ελεµεντσ ον γροωτη ανδ σπορυλατιον οφ Μεταρηιζιυµ ανισοπλιαε
微量元素
×µ¤¦¨ ¨¯ °¨ ±¨·
kΛª#ptl
液生分生孢子
≥∏¥°¨ µª¨§¦²±¬§¬¤
k ≅ ts|¶³²µ¨#ptl
生物量
…¬²°¤¶¶kª#ptl
微量元素
×µ¤¦¨ ¨¯ °¨ ±¨·
kΛª#ptl
液生分生孢子
≥∏¥°¨ µª¨§¦²±¬§¬¤
k ≅ ts|¶³²µ¨#ptl
生物量
…¬²°¤¶¶
kª#ptl
…ovs s qtz ts qwz ²oxs ~ƒ¨oxss t qv{ y qus
≤∏o{s s q{{ ts qwz ²oxs ~ ±ows s qyv x qzv
ƒ¨oxss s qzu ts qws ²oxs ~±owss v quz x qvv
±ows s qvs ts qxs ²oxs ~≤∏o{s ~ƒ¨oxss t qs{ y qus
²oxs t qzu ts qtv ²oxs ~≤∏o{s ~ƒ¨oxss ~…ovs t qxv x qyz
±owss s qtz ts qws ²oxs ~≤∏o{s ~ƒ¨oxss ~ ±ows v qsv x qxz
²oxs ~…ovs t quu y qvv 同时加入 y种微量元素 „¯ ¯ y·µ¤¦¨ ¨¯ °¨¨ ±·¶ w qux ts qwv
²oxs ~≤∏o{s t q{s y quz 对照k未加微量元素l≤²±·µ²¯k‘²¤§§¬·¬²±l s qws | qyz
表 5 不同维生素对绿僵菌生长及液生分生孢子形成的影响
Ταβ .5 Γροωτη ανδ σπορυλατιον οφ Μεταρηιζιυµ ανισοπλιαε ον λιθυιδ µεδια χονταινινγ ϖαριουσ ϖιταµιν
维生素
∂¬·¤°¬±
液生分生孢子
≥∏¥°¨ µª¨§¦²±¬§¬¤
k ≅ ts|¶³²µ¨#ptl
生物量
kª#ptl
维生素
∂¬·¤°¬±
液生分生孢子
≥∏¥°¨ µª¨§¦²±¬§¬¤
k ≅ ts|¶³²µ¨#ptl
生物量
…¬²°¤¶¶
kª#ptl
∂…t | qs | qu ∂…y n ∂ ‹ tz q{ y q{
∂…u tw q| ts qv ∂…y n ∂…w y qv y q{
∂…y ts qs tt qs ∂…u n ∂…t n ∂ ≤ v qv y qy
∂ ≤ tt qt ts qu ∂…u n ∂…t n ∂ …y y qu y qz
∂ ‹ ts qu { q| ∂…u n ∂ ≤ n ∂ ‹ u qv z qs
∂…w tv qs ts qv ∂…y n ∂…t n ∂ ≤ w qu y q{
∂…u n ∂…t w qs y q{ ∂…y n ∂…t n ∂ ‹ { qs y q|
∂…u n ∂…y z qu y q{ ∂…y n ∂ ≤ n ∂ ‹ { qs y qy
∂…u n ∂ ≤ u qz y qw 复合维生素 … ≤²°³²∏±§√¬·¤°¬± … ty qw tt qt
∂…u n ∂ ‹ tt qv y qw 对照k未加维生素l≤²±·µ²¯ k‘²√¬·¤°¬±l t qv y qs
u qw 生长辅助因子对绿僵菌液生分生孢子形成的影响 在以花生饼粉为氮源 !蔗糖为碳源的培养液中
加入不同维生素作为生长辅助因子 o每处理的最终维生素含量设定为每升培养液中维生素含量为 tx
Λª∀研究结果如表 x所示 o经方差分析可知 o不同维生素对金龟子绿僵菌菌丝生长及液生分生孢子的形
成影响显著 ∀复合维生素 …和 ∂…y 可使绿僵菌获得最大的生物量ktt qt ª#pt和 tt qs ª#ptl o而 ∂…y n
∂ ‹和复合维生素 …能使绿僵菌获得最大的液生分生孢子产量ktz q{ ≅ ts| 个孢子#pt和 ty qw ≅ ts| 个
孢子#ptl ∀可见 o在培养液中添加适宜的生长辅助因子 o能有效促进液生分生孢子的形成 ∀
u qx vvz菌株液生分生孢子和气生分生孢子对马尾松毛虫的毒力生物测定结果 以 v ∗ w龄马尾松
毛虫幼虫为生测对象 o接种处理 u §后松毛虫个体开始死亡 o虫尸经数天后出现典型的绿色僵虫症状 o
侵染 tu §后的死亡情况见表 y ∀通过 ⁄xs的 …„≥Œ≤程序k稍做修改l运算k张宗炳 ot|{{l o结果得到死亡
率k用机率值l与感染浓度k用对数值l的回归方程和 ≤xsk见表 zl o×xs的计算结果见表 { ∀从生物测定
结果可以看出 o绿僵菌 vvz菌株的液生分生孢子和气生分生孢子对马尾松毛虫的僵虫率相近 o液生分
生孢子的毒力仅略低于气生分生孢子 ∀
zvt 第 x期 宋 漳 }液体深层培养绿僵菌分生孢子的研究
表 6 337 菌株的 5 种不同浓度分生孢子感染 3 ∗ 4 龄马尾松毛虫的死亡率
Ταβ .6 Τηε µορταλιτψ οφ 3ρδ ∗ 4τη ινσταρ λαρϖαε οφ ∆ενδρολιµυσ πυνχτατυσινφεχτεδ ωιτη διφφερεντ χονχεντρατιονσ οφ χονιδια οφ Μ337 στραιν
浓度
≤²±¦¨±·µ¤·¬²±
k≥³²µ¨#ptl
供试虫数k只l
±∏¤±·¬·¼
©²µ·¨¶·
液生分生孢子 ≥∏¥° µ¨ª¨§¦²±¬§¬¤ 气生分生孢子 „ µ¨¬¤¯ ¦²±¬§¬¤
死亡虫数k只l
‘²q²©§¨¤·«
死亡率
²µ·¤¯¬·¼k h l
校正死亡率
≤²µµ¨¦·¨§
°²µ·¤¯¬·¼k h l
死亡虫数k只l
‘²q²©§¨¤·«
死亡率
²µ·¤¯¬·¼k h l
校正死亡率
≤²µµ¨¦·¨§
°²µ·¤¯¬·¼k h l
t qs ≅ tstt vs uz |s qss {{ qwy u{ |v qvv |u qvt
t qs ≅ tsts vs uw {s qss zy q|u uv zy qyz zv qs{
t qs ≅ ts| vs ut zs qss yx qv{ uu zv qvv y| quv
t qs ≅ ts{ vs t| yv qvv xz qy| us yy qyz yt qxw
t qs ≅ tsz vs tw wy qyz v{ qwy t{ ys qss xv q{x
对照 ≤²±·µ²¯ vs w tv qvv w
表 7 337 菌株对马尾松毛虫幼虫的毒力
Ταβ .7 Τοξιχιτψ οφ Μ337 στραιν το λαρϖαε οφ ∆ενδρολιµυσ πυνχτατυσ
项目
Œ·¨°¶
≤xs
k≥³²µ¨#ptl
|x h置信限
|x h ≤²±©¬§¨±¦¨ ¬¯°¬·¶
k≥³²µ¨#ptl
回归方程
• ª¨µ¨¶¶¬²± ¨´ ∏¤·¬²±
卡方检验
≤«¬2¶´∏¤µ¨ ·¨¶·
液生分生孢子
≥∏¥°¨ µª¨§¦²±¬§¬¤ x qvv ≅ ts
z u qtu ≅ tsz ∗ t qvw ≅ ts{ ψ€ u qvsuy n s qvw|tξ Ξus qsxkwl € | qw{{  t q{xx
气生分生孢子
„ µ¨¬¤¯ ¦²±¬§¬¤ { qvt ≅ ts
y t qyz ≅ tsy ∗ w qsw ≅ tsz ψ€ v qtuuu n s quztwξ Ξus qsxkwl € | qw{{  u qzwu
表 8 337 菌株对马尾松毛虫幼虫的致死时间
Ταβ .8 Λετηαλτιµε οφ Μ337 στραιν το λαρϖαε οφ ∆ενδρολιµυσ πυνχτατυσ
浓度
≤²±¦¨±·µ¤·¬²±
k≥³²µ¨#ptl
液生分生孢子 ≥∏¥°¨ µª¨§¦²±¬§¬¤ 气生分生孢子 „ µ¨¬¤¯ ¦²±¬§¬¤
回归方程
• ª¨µ¨¶¶¬²± ¨´ ∏¤·¬²±
×xsk§l
相关系数
≤²µµ¨ ¤¯·¬²±
¦²¨©©¬¦¬¨±·
回归方程
• ª¨µ¨¶¶¬²± ¨´ ∏¤·¬²±
×xsk§l
相关系数
≤²µµ¨ ¤¯·¬²±
¦²¨©©¬¦¬¨±·
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3 结论与讨论
绿僵菌某些菌株如 vvz !tsv !tsw !ttx经液体振荡培养 zu«后 o能通过微循环产孢方式 o不经
营养生长阶段 o直接从液生芽孢子上形成液生分生孢子 o且这种微循环产孢现象的发生和产孢能力与菌
株有一定的相关性 ∀
绿僵菌液生分生孢子的形成与培养基成分关系密切 ∀不同的碳 !氮源对绿僵菌液生分生孢子形成
具有极显著的影响 ∀蔗糖 !可溶性淀粉和乳糖是液体培养分生孢子的较好碳源 o而花生饼粉 !酵母浸出
汁和蛋白胨则是较理想的氮源 o且复杂的有机氮源比简单的无机氮源更有利于液生分生孢子的形成 ∀
同时试验结果还显示 }微量元素和维生素对促进绿僵菌液生分生孢子的形成具有重要影响 ∀ … !≤∏!ƒ¨!
± !²!±的协同作用将有力促进液生分生孢子的产生 ∀在培养基中添加 ∂…y n ∂ ‹ 或复合维生素 …
能有效促进绿僵菌液生分生孢子的形成 ∀有研究资料表明 o液生孢子产生方式和数量受控于营养成分
和培养环境条件k∂i½¬±¤ ετ αλqot|yx ~„§e°¨ ®ot|yx ~¦≤²¼ ετ αλqot|zu ~≤¤°³¥¨¯¯ ετ αλqot|z{ ~樊美珍等 o
t||vl ∀因此 o选择适当的菌株和适宜的培养基对绿僵菌液体深层培养液生分生孢子尤为重要 ∀
从室内对马尾松毛虫毒力的生物测定结果来看 o绿僵菌 vvz菌株的液生分生孢子对马尾松毛虫
{vt 林 业 科 学 vz卷
的毒力仅略低于气生分生孢子 ∀因此 o作为一种微生物杀虫剂 o液体发酵生产绿僵菌分生孢子有进一步
研究的价值 ∀
参 考 文 献
樊美珍 o郭 超 o薛文奇 q金龟子绿僵菌液体深层培养初报 q中国虫生真菌研究与应用 ot||v okvl }twy ∗ tw|
张宗炳编著 q杀虫剂的毒力测定 ) 原理#方法#应用 q北京 }科学出版社 ot|{{ ov{{ ∗ v|t
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