全 文 ：园 艺 学 报 2010，37（3）：405–412
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期：2009–07–24；修回日期：2009–11–12
基金项目：科技部科技基础性工作专项（2006FY111000）；西南大学博士后基金项目（207001）
﹡ 通信作者 Author for correspondence (E-mail: changyong@hotmail.com)
重庆南瓜病毒病病原 ELISA 检测及 CMV 变异
分析
青 玲 1,2，包凌云 1，周常勇 1,2,*，杨水英 1，孙现超 1
（1 西南大学植物保护学院，重庆 400716；2中国农科院柑橘研究所，重庆 400712）
摘 要：利用 7 种植物病毒的抗体，对采自重庆 7 个区县的 67 份南瓜病毒病样品进行了抗原直接包
被酶联免疫吸附分析（ACP-ELISA）检测。检测结果表明，在这 67 份样品中，至少 59 份感染了所要检
测病毒，其中，感染黄瓜花叶病毒 (Cucumber mosaic virus, CMV)、烟草花叶病毒 (Tobacco mosaic virus,
TMV)、番茄花叶病毒 (Tomato mosaic virus, ToMV)、芜菁花叶病毒 (Turnip mosaic virus, TuMV)、蚕豆萎
蔫病毒 2 号 (Broad bean wilt virus 2, BBWV-2)、马铃薯 Y 病毒 (Potato virus Y, PVY)和马铃薯 X 病毒
(Potato virus X, PVX) 的样品分别为 80.60%、77.61%、74.63%、82.09%、76.12%、83.58%和 55.22%。在
检测呈阳性的 59 份样品中有 93.22%的样品受到 2 种以上病毒的复合侵染，而受 7 种病毒复合侵染的样品
高达 60.00%，表明在南瓜上病毒复合侵染现象相当严重。进一步对 54 份受 CMV 侵染的南瓜样品检测发
现，CMV 亚组Ⅰ (CMVⅠ) 病毒侵染的样品有 49 份，占 90.74%，CMV 亚组Ⅱ (CMVⅡ) 病毒侵染的样
品为 11 份，占 20.37%；其中 6 份（11.11%）样品检测到 CMVⅠ和 CMVⅡ的复合侵染。以免疫捕获反转
录 PCR (IC-RT-PCR) 扩增了一个 CMVⅠ分离物 (CMV-CQ) 近全长 CP 基因并进行序列分析，结果证实
其属于 CMV 亚组Ⅰ型，其核苷酸序列与国内 CMVⅠ型赤豆分离物 (CMV-RB) 的同源性最高，为 98.1%。
关键词：南瓜病毒病；ELISA 检测；黄瓜花叶病毒亚组；外壳蛋白基因；序列变异
中图分类号：S 642.1；S 436 文献标识码：A 文章编号：0513-353X（2010）03-0405-08

ELISA Detection of Infectious Pathogenic Viruses and Variation of CMV
from Squash in Chongqing
QING Ling1,2，BAO Ling-yun1，ZHOU Chang-yong1,2,*，YANG Shui-ying1，and SUN Xian-chao1
（1College of Plant Protection，Southwest University，Chongqing 400716，China；2 Citrus Research Institute，Chinese
Academy of Agricultural Sciences，Chongqing 400712，China）
Abstract: The 67 squash samples with viral symptoms collected from seven squash-growing counties
in Chongqing were detected by antigen–coated plate (ACP)-ELISA with antibodies against seven plant
viruses. The results showed that at least 59 samples with in these 67 squash samples were infected by the
viruses, of which 80.60%、77.61%、70.15%、82.09%、76.12%、83.58% and 55.22% of the samples were
infected by Cucumber mosaic virus (CMV), Tobacco mosaic virus (TMV), Tomato mosaic virus (ToMV),
Turnip mosaic virus (TuMV), Broad bean wilt virus 2 (BBWV-2), Potato virus Y (PVY) and Potato virus X
(PVX), respectively. Among 59 positive samples, 93.22% of the samples were mix–infected with more than
two viruses, and about 60% samples were mix-infected by the above seven viruses, indicating the mix-

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infections of viruses on squash were severely. Moreover, the results showed that among 54 samples infected
by CMV，49（90.74%）samples were infected by CMV subgroupⅠ（CMVⅠ）and 12（22.22%）samples
by CMV subgroup. Comparison of the nucleotide sequences showed that it has the highest identity（98.1%）
with the previously reported CMVⅠisolate infecting Phaseolus angularis（CMV-RB）from China.
Key words：squash virus diseases；ELISA detection；CMV subgroups；CP sequence variation

我国已报道侵染南瓜的病毒主要有中国南瓜曲叶病毒（Squash leaf curl virus-China，SLCV-Ch）
（Hong et al.，1995），南瓜花叶病毒（Squash mosaic virus，SqMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic
virus，CMV）和西瓜花叶病毒 2 号（Watermelon mosaic virus 2，WMV-2）（李凤梅，2002），以及番
木瓜环斑病毒西瓜株系（Papaya ringspot virus W，PRSV-W）、小西葫芦黄花叶病毒（Zucchini yellow
mosaic virus，ZYMV）、番茄斑萎病毒属病毒（Tospovirus）及粉虱传双生病毒（Whitefly transmitted
geminiviruses, WTGs）（杨国慧，2003；杨国慧 等，2007），其中，在部分省市 CMV、PRSV-W 和
WMV-2 是南瓜上的优势毒源（李凤梅 等，2002；杨国慧，2003；方琦 等，2004）。
在实际生产中，从南瓜病毒病叶表现的症状上很难判断究竟是由哪一种或哪几种病毒引起，因
而病害防治也缺乏针对性。为了了解重庆地区南瓜上的病毒种类，以及 CMV 在南瓜上的危害情况
及亚组类型, 为进一步开展南瓜花叶病毒病的防治提供科学依据，作者利用 ELISA 技术对采自重庆
7 个区县南瓜种植区的花叶病毒病样品，进行了针对 7 种常见蔬菜病毒的血清学检测，并对 CMV
南瓜分离物进行了亚组鉴定，同时利用免疫捕获反转录 PCR（IC-RT-PCR）技术扩增 CMV 南瓜分
离物近全长 CP 基因，并进行了序列变异性分析。
1 材料与方法
1.1 材料
自 2007 年来连续 3 年从重庆北碚、綦江、合川、忠县、江津、涪陵和石柱等区县南瓜种植区
采集表现花叶症状的南瓜病毒病样品共计 67 份，保存于–80 ℃冰箱。
CMVⅠ和 CMVⅡ、TMV、番茄花叶病毒（Tomato mosaic virus，ToMV）、芜菁花叶病毒（Turnip
mosaic virus，TuMV）及蚕豆萎蔫病毒 2 号（Broad bean wilt virus 2，BBWV-2）等 5 种病毒相应的
抗原及单抗由浙江大学周雪平教授惠赠，马铃薯 Y 病毒（Potato virus Y，PVY）和马铃薯 X 病毒
（Potato virus X，PVX）相应的抗原及多抗由本实验室分离、制备和保存，碱性磷酸酶标记的羊抗
鼠 IgG 和羊抗兔 IgG 购自美国 Promega 公司。
1.2 病毒种类的血清学检测
参考青玲等（2005）已报道的 ACP-ELISA 方法，用抗原直接包被 ELISA 板，经封闭后加入待
测病毒的特异性抗体，再与碱性磷酸酶标记的羊抗兔或羊抗鼠 IgG 充分反应，然后用硝基苯磷酸酯
钠盐显色，室温放置至显色反应完全后在 550 型酶联免疫检测仪（BIO-AD）上测各孔在 405 nm 的
OD 值，以 P/N＞0.5，P/N＞2.1 作为阳性判断标准。
1.3 引物设计及免疫捕获反转录 PCR
参考 Yu 等（2005）已报道的方法，根据 GenBank 中已登录的 CMV 亚组Ⅰ分离物的 CP 序列，
设计合成出两条用于扩增 CMVⅠ近全长 CP 的特异性引物（CMVⅠ-F：CGACTTAATAAGACGTTAGC
AGC；CMV-R：TGCTCRAYGTCRACATGAAG）。
3 期 青 玲等：重庆南瓜病毒病病原 ELISA 检测及 CMV 变异分析 407

在 0.5 mL PCR 管中加入 200 L 适当稀释的抗血清，37 ℃孵育 2 h，用 PBST 洗 3 次；加入 200
L 病毒感染的南瓜叶片汁液的上清液，37 ℃孵育 2 h；弃去抗原液, 用 PBST 洗 3 次，ddH2O 洗 1
次；再往管中加入 19 L ddH2O，8 L 5 × RT 缓冲液，4 L 10 mmol · L-1 dNTPs，4 L 100 mmol · L-1
DTT，2 L 3’引物 CMV-R（20 µmol），混匀后置 84 ℃变性 4 min，迅速置冰上 3 min，加 2 L AMV
反转录酶（200 U · L-1），1 L RNasin inhibitor（20 U · L-1），离心混匀后置 42 ℃反转录 1 h。
在 50 L 反应体系中加入 10 L cDNA 产物，5 L 10×反应缓冲液，3 L 25 mmol MgCl2，1 L 10
mmol · L-1 dNTPs，3′端及 5′端引物各 1 L，0.25 L（5 U · L-1）Taq DNA 聚合酶。PCR 扩增反应条
件为：94 ℃ 预变性 3 min；94 1℃ min，50 45℃ s，72 1℃ min，循环 35 次；然后 72 ℃延伸 10 min。
上述 PCR 产物进行 1.5 %琼脂糖凝胶电泳。
1.4 CMV 近全长 CP 基因的序列测定和分子变异分析
利用天根生化科技有限公司的 PCR 产物纯化试剂盒，对 CMV CP 的 IC-RT-CR 产物进行纯化
后送上海英俊生物技术有限公司完成序列测定。序列编辑和分析借助 DNAStar（Madison, Wis., USA）
和DNAMAN Version 4.0 ( Lynnon Biosoft, Quebec Canada) 软件进行。采用Clustal V方法和DNA Star
软件进行多序列比较，进化树构建采用 DNAMAN 的邻近相连法（Neighbor-oining），构建后步查 100
次分析，步查值大于 90%的置于分支点边上。用于比较的 CMV 亚组Ⅰ和亚组Ⅱ分离物见表 4。以
黄瓜花叶病毒属 (Cucumovirus) 中花生矮化病毒 (Peanut stunt virus，PSV) (U15730) 的 CP 核苷酸
序列作为系统进化树的根序列。
2 结果与分析
2.1 南瓜样品的病毒种类分析
2.1.1 主要病毒种类 在 67 份南瓜样品中，有 59 份检测到 CMV、TMV、ToMV、TuMV、BBWV-2、
PVY 和 PVX 等 7 种病毒中的 1 种或多种病毒。如表 1 所示，以 PVY 的总检出率最高，为 83.58%；
除此之外，CMV、TuMV 的侵染现象也很普遍，总检出率分别为 80.60%和 82.09%；TMV、BBWV-
和 ToMV 的总检出率次之，分别为 77.61%、76.12%和 74.63%；PVX 的总检出率最低，为 55.22%。
PVY 是北碚地区南瓜上的优势毒源，而綦江和忠县地区南瓜上的优势毒源则是 TuMV。綦江样品中
未检出 ToMV，在石柱样品中没有检测到 TMV 和 ToMV。由于 14 个江津样品中有 6 个检测呈阴性，
綦江样品中也有 2 个未检出病毒，因而这 7 种病毒在这 2 个地区的检出率较其它地区偏低。
表 1 地区南瓜病毒病主要毒原的 ELISA 检测结果
Table 1 ELISA detection of squash virus diseases in Chongqing
病毒检出率/%
Percentages of viruses detected 地点
County
样品编号
Original number of samples
样品数量
Number of
samples CMV TMV ToMV TuMV BBWV-2 PVY PVX
北碚 Beibei CQ-1~9,19,20,51~53,57~59,80,81 19 94.74 94.74 94.74 94.74 94.74 100.00 21.05
綦江 Qijiang CQ-41~43,66~68,137~140 10 50.00 50.00 30.00 70.00 40.00 60.00 50.00
江津 Jiangjin CQ-21~25, 90~94,146~149 14 57.14 57.14 57.14 57.14 57.14 57.14 57.14
合川 Hechuan CQ-35~39,70~73 9 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 88.89
忠县 Zhongxian CQ-10~16,77~79 10 90.00 90.00 90.00 100.00 90.00 90.00 90.00
涪陵 Fuling CQ-115,117,128 3 100.00 100.00 100.00 66.67 66.67 100.00 100.00
石柱 Shizhu CQ-107,108 2 100.00 – – 50.00 50.00 100.00 50.00
平均 Average 80.60 77.61 74.63 82.09 76.12 83.58 56.72
注：-表示未检出该类病毒，下同。
Note：- = no virus detected，the same below.
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2.1.2 病毒复合侵染 除检测呈阴性的 8 个样品外，在 59 份阳性样品中，只有 4 份仅受 1 种病毒侵染，
其中采自北碚和綦江的样品各有 1 份检测到 PVY 单独侵染，采自忠县和綦江的样品各有 1 份检测到
TuMV 单独侵染。在 55 份复合侵染样品中，CMV、TMV、ToMV、TuMV、BBWV-2、PVY 和 PVX
等 7 种病毒复合侵染是最主要的侵染类型，检出率高达 60%；CMV、TMV、ToMV、TuMV、BBWV-2
和 PVY 等 6 种病毒复合侵染次之，16 份样品检测到此复合侵染类型，其中有 15 份采自北碚，1 份
采自合川；另有 4 份样品受 5 种病毒复合侵染；检测到 2 种病毒复合侵染的样品最少，仅有 2 份（表
2）。且北碚、江津和合川的样品受病毒复合侵染的现象特别严重，6 种以上病毒复合侵染率接近
100%。
表 2 南瓜样品的病毒复合侵染类型和比例
Table 2 Types and percentages of co-infections of viruses in squash samples
病毒复合侵染类型
Types of co - infections of viruses
阳性样品编号
Original number of positive samples
阳性检出率/%
Positive rate
CMV + PVY CQ-107 1.82
TuMV + BBWV - 2 + PVY CQ-68 1.82
CMV + TMV + ToMV + PVY + PVX CQ-128 1.82
CMV + TMV + TuMV + PVY + PVX CQ-138,140 3.64
CMV + TuMV + BBWV - 2 + PVY + PVX CQ-108 1.82
CMV + TMV + ToMV + TuMV + BBWV - 2 + PVY CQ-1,6~9,19,20,35,51~53,57~59,80,81 29.09
CMV + TMV + ToMV + TuMV + BBWV - 2 + PVY + PVX CQ-3~5,10~14,16,21,23~25,36~39,42,70~73,
77~79,92~94,115,117,137,139,146
60.00
2.2 CMV 南瓜分离物的亚组鉴定
根据 54 份 CMV 阳性样品对 CMVⅠ和 CMVⅡ的特异性单克隆抗体的血清学反应结果对其进行
亚组分析，结果表明有 49 份样品受 CMV 亚组Ⅰ侵染，有 11 份样品受 CMV 亚组Ⅱ侵染，其检出
率分别为 90.74%和 20.37%（表 3），表明在重庆受 CMV 侵染的南瓜植株中 CMVⅠ属优势类型。其
中有 6 份样品检出 CMVⅠ和 CMVⅡ复合侵染，复合侵染率为 11.11%。另外，CMVⅠ和 CMVⅡ在
重庆不同地区的分布也有所不同，在采自綦江、合川、忠县和涪陵 4 个区县的南瓜样品中只检测到
CMVⅠ，未发现有 CMVⅡ侵染；而采自石柱的样品仅检测到 CMVⅡ侵染。在北碚和江津的样品中
均检测到 CMV 2 个亚组病毒的侵染，其中 CMVⅠ的检出率分别为 83.33%和 100%，CMVⅡ在北碚
的检出率较高，为 44.44%，且在这些样品中检测到 CMVⅠ和 CMVⅡ的复合侵染，复合侵染率分别
为 27.78%和 12.50%（表 3）。
表 3 重庆不同地区南瓜上 CMVⅠ和 CMV Ⅱ的检出率
Table 3 Percentages of CMV I and CMV II on squash in different counties of Chongqing
CMVⅠ CMVⅡ CMV + CMVⅠ Ⅱ 地点
County
样品数
Number
编号
No.
阳性检出率 /%
Positive rate
编号
No.
阳性检出率 /%
Positive rate
编号
No.
阳性检出率/%
Positive rate
北碚 Beibei 18 CQ-1,3~5,7~9,19,20,51,52,57,
59,80,81
83.33 CQ-6,8,52,53,57,58,
59,81
44.44 CQ-8,52,57,59,81 27.78
綦江 Qijiang 5 CQ-42,137~140 100.00 – – – –
江津 Jiangjin 8 CQ-21,23,24,25, 92,93,94,146 100.00 CQ-94 12.50 CQ-94 12.50
合川 Hechuan 9 CQ-35,36,37,38,39,70,71,72,73 100.00 – – – –
忠县 Zhongxian 9 CQ-10,11,12,13,14,16,77,78,79 100.00 – – – –
涪陵 Fuling 3 CQ-115,117,128 100.00 – – – –
石柱 Shizhu 2 – – CQ-17,18 100.00 – –
平均 Average 49 90.74 11 20.37 6 11.11
3 期 青 玲等：重庆南瓜病毒病病原 ELISA 检测及 CMV 变异分析 409

图1 南瓜样品CMV CP基因的IC-RT-PCR扩增
M: DNA Marker Ⅲ ladder；1: 健康植株；2: CQ-1 号样品；
3: CQ-19 号样品；4: CQ-20 号样品。
Fig. 1 Amplification of CMV CP gene in squash
samples by IC-RT-PCR
M: DNA Marker Ⅲ ladder; 1: Healthy plant; 2: Sample CQ-1;
3: Sample CQ-19; 4: Sample CQ-20.
图 2 基于 CMV 近全长 CP 基因核苷酸序列构建的
系统关系树
Fig. 2 Phylogenetic tree based on the alignment of nearly
full - length nucleotide sequences
of CMV CP genes
2.3 CMV CP 基因的 IC-RT-PCR 扩增
由于CMVⅠ在重庆南瓜CMV分离物中属
优势亚组类型，为了了解CMV的变异情况，选
取采自重庆北碚的ELISA检测为CMV亚组I阳
性的3个南瓜样（CQ-1、CQ-19和CQ-20），利
用CMVⅠCP基因的特异性引物对CMVⅠ-F/
CMV-R对其进行IC-RT-PCR扩增。
结果表明，从3个样品中均扩增得到约500 bp
的条带，与预期条带大小（Yu et al.，2005）一
致（图1）。
2.4 CMV CP 基因的序列变异性分析
将CQ-1号南瓜样品CMV（命名为CMV-
CQ）CP的IC-RT-PCR产物进行纯化，经测序获
得CMV-CQ 486个碱基（nt）的近全长CP基因
片段。将所测序列与GenBank中已登录的26个
CMV分离物序列进行比较分析。结果表明
CMV-CQ CP与已知的19个CMV亚组Ⅰ分离物
CP的核苷酸序列同源性均在92.2％以上；而与7
个CMV亚组Ⅱ分离物CP的核苷酸同源性最高
为78.4％，最低为76.5％。和国内13个CMV亚
组Ⅰ分离物相比，CMV-CQ CP与国内CMV赤
豆分离物（CMV-RB）的核苷酸序列同源性最
高，为98.1%。但与另两个CMV南瓜分离物（YN
和HLJ）的核苷酸同源性较低，分别为93.6%和
92.4%（表4）。
为进一步分析CMV-CQ的变异情况，将
CMV-CQ的CP核苷酸序列与GenBank中已登录
的26个CMV分离物CP及PSV ER株系CP核苷
酸序列构建系统关系树（图2）。结果表明，
CMV-CQ与已知的19个CMV亚组Ⅰ分离物形成
一个大的分支，其余7个CMV亚组Ⅱ分离物形成
另一个大的分支，表明CMV-CQ与这些CMV亚
组Ⅰ分离物之间有较近的亲缘关系，同属CMV
亚组Ⅰ分离物。
同时，CMV-CQ又与RB、PE等国内分离物
形成一个小的分支，表明它们之间有更近的亲
缘关系。而与另两个CMV南瓜分离物（TFN和
ZJ2）位于不同的小分支上。

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表 4 CMV–CQ近全长CP与其它CMV分离物CP核苷酸序列的同源性比较
Table 4 Percentages of nucleotide sequence identities among the nearly full–length CP of
CMV–CQ isolates and other selected ones
同源性/% CMV 亚组
CMV
subgroups
分离物
Isolations
国家或地区
Countries or areas
寄主
Hosts
登录号
GenBank accession CMV-CQ
CMV-RB 中国 China 赤豆 Phaseolus angularis AJ006990 98.1
CMV-PE 中国 China 西番莲 Passionflower AF268597 96.3
CMV-TFN 意大利 Italy 番茄 Tomato Y16926 95.7
CMV-ZJ2 中国浙江 Zhejiang, China 萝卜 Raphanus sativus AY138992 93.0
CMV-SD 中国山东 Shandong, China 烟草 Tobacco AB008777 93.4
CMV-AB I 韩国 Korea 剑兰 Gladiolus L36525 92.4
CMV-HLJ 中国黑龙江 Heilongjiang, 南瓜 Squash DQ459481 92.4
CMV-YN 中国云南 Yunnan, China 南瓜 Squash DQ459482 93.6
CMV-BD 中国 China 黄瓜 Cucumber X65017 92.2
CMV-M 中国福建 Fujian, China 不确定 Uncertain AF268599 92.8
CMV-P1 中国江苏 Jiangsu, China 豌豆 Garden Pea AJ006988 94.0
CMV-Pf 中国海南 Hainan, China 鸡蛋果 Passiflora edulis AF368192 94.0
CMV-YNT 中国云南 Yunnan, China 烟草 Tobacco AJ239098 94.9
CMV-Fny 美国 U.S.A 不确定 Uncertain D10538 94.7
CMV-BA 以色列 Israel 小果野蕉 Musa acuminate U43888 94.7
CMV-Ix 美国 U.S.A 番茄 Tomato U20219 92.8
CMV-NY 澳大利亚 Australia 不确定 Uncertain U22821 94.7
CMV-Oahu 美国 U.S.A 香蕉 Banana U31220 92.2
亚组Ⅰ
SubgroupⅠ
CMV-C 日本 Japan 不确定 Uncertain D42079 93.2
CMV-Ynb 中国云南 Yunnan, China 烟草 Tobacco AJ242585 77.4
CMV-XB 中国福建 Fujian, China 香蕉 Banana AF268598 77.8
CMV-Q 澳大利亚 Australia 不确定 Uncertain M21464 78.4
CMV-WL 美国 U.S.A 番茄 Tomato D00463 77.6
CMV-SN 澳大利亚 Australia 不确定 Uncertain U22822 77.6
CMV-KI 美国 U.S.A 烟草 Tobacco Z12818 77.6
亚组Ⅱ
SubgroupⅡ
CMV-TRK 匈牙利 Hungary 不确定 Uncertain L15336 76.5
3 讨论
本研究结果表明从重庆南瓜样品中检测到 CMV、TMV、ToMV、TuMV、BBWV-2、PVY 和
PVX 等 7 种常见蔬菜病毒。其中 PVY、TuMV 和 CMV 的检出率均在 80%以上，是重庆地区南瓜
上的优势毒源。除 CMV 属已知侵染南瓜的病毒种类外，在国内还未见另外 6 种病毒自然侵染南瓜
的报道。由于已有报道大多未针对这 6 种病毒进行血清学或分子生物学的检测，因而不能排除其侵
染南瓜的可能性。且 CMV 编码的 2b 蛋白和 PVY 编码的 HC-Pro 蛋白（Anandalakshmi et al.，1998;
Brigneti et al.，1998）均是 RNA 沉默的抑制子，这 2 种病毒若成功侵染南瓜将抑制寄主的防御机制
从而有利于其它病毒的入侵。另一方面，本研究中所用 ELISA 技术虽可用于鉴定样品是否带毒及所
带病毒的种类，但由于本研究所用 PVY 和 PVX 的血清是多抗，故不能排除在检测中出现假阳性的
可能。且本研究中供试病毒抗血清都不是标准的抗血清，故检测结果也会受此影响，特别是对于 TMV
和 ToMV 这 2 个血清学关系密切且株系复杂的病毒种类，更需做进一步的分子鉴定。因而本研究
3 期 青 玲等：重庆南瓜病毒病病原 ELISA 检测及 CMV 变异分析 411

所得 ELISA 检测结果只是关于重庆地区南瓜病毒种类的一个极为初步的血清学检测结果，要准确
鉴定每一种病毒还需要利用生物学和分子生物学等多种手段，并从基因组水平提出更准确而可靠
的依据。在本研究中有 8 个南瓜样品未检测到待测的 7 种病毒，但样品病毒病症状明显，表明这
些样品中可能仍含有其它病毒种类未被检测出。由于没有 SqMV、ZYMV 和 WMV-2 等可侵染南
瓜的病毒的抗血清，未对样品进行针对这些病毒的检测，因而不能排除样品感染这些病毒的可能
性。
田间病毒侵染的情况通常比较复杂，笔者在调查重庆市外来有害生物的过程中，从一些菜田周
边的一种杂草——葎草上检出复合侵染的 7 种病毒，且复合侵染的比例高达 80%（青玲 等，2009）。
本研究中 93.22%的南瓜阳性样品均受病毒复合侵染，且 7 种病毒同时复合侵染的情况相当普遍，占
复合侵染样品的 60%，这一结果与箻草中的检测结果类似。一种可能是自然界确实存在如此严重的
复合侵染现象，但由于已有研究未同时利用这些病毒的血清来检测样品，因而此现象一直没有被发
现；另一方面，检测过程中可能存在的假阳性也是复合侵染率偏高的一个重要原因。鉴于病毒在南
瓜上的复合侵染现象很严重，因此，在制定病毒防治策略时，在以主要病毒防治为主的前提下，还
应兼顾其它病毒。
CMV 是世界范围内广泛分布的最具经济重要性的植物病毒之一，根据其寄主反应、血清学反
应、肽链图谱分析、dsRNA 分析、RT-PCR、核酸杂交及核苷酸序列分析等方法，可将 CMV 分离
物划分为亚组Ⅰ和亚组Ⅱ（Edwards & Gonsalves，1983；Rizos et al.，1992；Hsu et al.，2000），且
我国 CMV 分离物以亚组Ⅰ为主（冯兰香和杨翠荣，2000；Yu et al.，2005；杨国慧 等，2006）。
本试验结果表明，重庆地区南瓜上 CMVⅠ型占优势地位，同时在受 CMV 侵染的南瓜样品中还发现
11.11%的样品存在 CMVⅠ和 CMVⅡ的复合侵染。
本研究中运用IC-RT-PCR技术（Jansen et al.，1990），从南瓜样品中扩增到CMV近全长CP基因
（CMV-CQ）。序列比较表明，CMV-CQ CP与国内外已知的CMVⅠ分离物CP的核苷酸序列同源性
明显高于与CMVⅡ分离物CP核苷酸序列的同源性，其中又与国内CMVⅠ型赤豆分离物（CMV-RB）
的核苷酸序列同源性最高。构建CMV近全长CP基因核苷酸序列系统关系树，CMV-CQ与已知的
CMVⅠ分离物形成一个分支，表明此分离物属CMVⅠ，序列比对结果与ELISA检测结果相吻合。该
体系的建立为进一步开展重庆地区蔬菜上CMV的分子变异奠定了基础。

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