全 文 ：园 　　艺 　　学 　　报 32卷
参考文献 :
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收稿日期 : 2005 - 02 - 21; 修回日期 : 2005 - 07 - 18
基金项目 : 国家 ‘863’项目 (2004AA241120)3 通讯作者 Author for correspondence ( E2mail: fenghuiaaa@2631net)
羽衣甘蓝游离小孢子培养初报
姜凤英 1, 2 　冯 　辉 13 　 (1 沈阳农业大学园艺学院 , 沈阳 110161; 2 辽宁省农科院花卉研究所 , 沈阳 110161)
Em bryogenesis and Plan t Regenera tion of O rnam en ta l Ka le v ia Isola ted
M icrospore Culture
J iang Fengying1, 2 and Feng Hui13 (1 College of Horticulture, Shenyang A gricultural U niversity, Shenyang 110161, China;
2 Floriculture Institu te of L iaoning A cadem y of A gricultural Science, Shenyang 110161, China)
关键词 : 羽衣甘蓝 ; 小孢子 ; 胚状体
中图分类号 : S 63519　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2005) 0520884201
本文介绍了羽衣甘蓝 (B rassica oleracea L. var. acepha la DC. ) 游离小孢子培养诱导出胚状体 , 并获得再生植株的
研究结果。国内还未见羽衣甘蓝小孢子培养成功的报道。
将 5个羽衣甘蓝 F1 杂交种 ‘红欧 ’、‘白欧 ’、‘皱叶红心 ’、‘皱叶白心 ’和 ‘皱叶玫红 ’穴盘育苗 , 盆栽。开
花后 , 取长 310～510 mm的花蕾分离小孢子。用 NLN213培养液稀释 , 以每皿 215 mL悬浮液分装入Φ 60 mm的培养
皿内 , 用 Parafilm封口 , 置于恒温箱中静置暗培养。2周后观察胚状体发生情况。挑出子叶期的胚接种到改良 MS培养
基上 , 置于 25℃、12 h /d光照的培养室中继续培养。
结果表明 : 在 NLN213培养基上 , 游离小孢子热激培养 1 d后 , 部分小孢子出现明显的膨大。培养 2～3 d, 小孢
子发生第 1次分裂。红欧和皱叶红心小孢子发生细胞分裂 , 并在培养 3周后 , 获得了胚状体 (图版 , 1) , 出胚率分别
为 0110和 0134胚 /蕾 , 其他 3个品种无胚状体形成。在添加 BA (0105～016 mg/L) 和 NAA (0～014 mg/L) 的 NLN2
13培养基上 , 小孢子培养 2～3 d后 , 有 4个品种小孢子细胞分裂 , 其中红欧、皱叶红心和皱叶白心获得了胚状体 ,
出胚率分别为 0132, 0158和 0137胚 /蕾。胚状体经过 30 d培养分化成幼苗 (图版 , 2)。
在上述 NLN213培养基上 , 分别添加 50、100、150μL的琼脂糖 (500 mg/L) 和活性炭 (10 000 mg/L ) , 小孢子
培养 2～3 d后 , 5个供试品种的细胞分裂情况与未添加的相似。培养 15～20 d, 挑出子叶期的胚 , 将剩下的胚分成两
组 , 一组在添加琼脂糖和活性炭 100μL的新鲜培养基上培养 , 另一组置于未加琼脂糖和活性炭的基本培养基上培养。
15 d后观察发现 , 前者培养基上幼胚发育快 , 大部分能发育成子叶形胚 ; 后者培养基上幼胚发育迟缓 , 只有少部分能
发育成子叶形胚。将子叶形胚接种到改良 MS培养基上 , 培养 3～5 d, 胚状体开始变绿 , 胚根伸长并长出根毛。经过
15 d的培养 , 整个胚状体变成绿色 , 同时分化出小芽。在添加和不加活性炭的培养基上都能诱导成苗 (图版 , 3) ,
但前者芽苗长得健壮 , 不经过壮苗培养就可直接转接到生根培养基上诱导生根 , 移栽成活后 , 获得小孢子植株 (图
版 , 4)。琼脂糖和活性炭对提高羽衣甘蓝小孢子胚状体发育有促进作用。
图版说明 : 1. 小孢子培养获得的胚状体 ; 2. 小孢子胚萌发成幼苗 ; 3. 继代苗 ; 4. 成活小孢子植株。
Explana tion of pla tes: 1. Embryoid via isolated m icrospore culture; 2. The cotyledonary embryoid formed p lantlet; 3. Regenerated p lantlet;
4. Survival p lantlet from m icrospore culture.
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