全 文 ：武汉植物学研究 2007，25(1)：65-69
Journa／of Wuhan Botanical Research
三种植物生长调节剂对密叶绢藓 (Entodon chalengeri)
孢子萌发、原丝体发育及芽体发生的影响
黄士良 ，一，李敏 ，张秀萍2，赵建成h，王振杰
(1．河北师范大学生命科学学院，石家庄 050016；2．河北师范大学实验中心，石家庄 050016；
3．河北女子职业技术学院，石家庄 050091)
摘 要：研究了3种植物生长调节剂苯基噻二唑基脲(TDZ)、6-苄基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)对密叶绢藓
[Entodon chalenged(Paris)Cardot]孢子萌发、原丝体发育及芽体发生的影响，并对整个发育过程进行了显微观察
和照相，结果表明：(1)3种植物生长调节剂对密叶绢藓孢子萌发影响不显著；(2)在原丝体发育阶段，1．0 m L
NAA对原丝体初期的发育促进效果显著，0．4 ms／LTDZ对原丝体发育中期分枝的形成促进效果显著，6-BA处理效
果不显著；(3)3种植物生长调节剂单独处理均促进芽体的发生，但0．4 mg／L TDZ效果最佳。而1．5 mg／L
6-BA+TDZ组合处理效果更加显著；(4)芽体的发生数量与芽体的长势无正相关性。
关键词：密叶绢藓；TDZ；6-BA；NAA；孢子萌发；原丝体发育；芽体发生
中图分类号：Q945．4 文献标识码 ：A 文章编号：1000—470X(2007)01．0065—05
Efect of Three Growth Regulators on Spore Germination，Protonema
Development and Bud Diferentiation in Entodon challenged
HUANG Shi．Liang ，LI Min ，ZHANG Xiu．Ping2
， ZHAO Jian．Cheng ’，WANG Zhen．Jie
(1．Colege ofLife Science，ltebei Normal University，Shijiazhuang 050016，China；2．Experimental Center，Hebei Normal
University，Shijiazhuang 050016，China；3．1tebei Women’5 Vocational Colege．Shijiazhuang 050091，China)
Abstract：Based on the tissue culture，the efect of N—phenyl—N’一l，2，3-thiadiazol-5一ylurea(TDZ)，6一
benzyla minoprine(6一BA)and 1-Naphthylacetic acid(NAA)on spore germination，protonema develop—
ment an d bud diferentiation in Entodon challengeri Was investigated in this paper． e whole process was
observed an d taken pictures． nle results show that TDZ．6一BA an d NAA have no signifcan t efect on the
spo re germination．During the process of protonema development．1．0 mg／L NAA can promote the pri—
mary development of protonema sign ifcantly．and 0．4 mg／L TDZ promotes bran ches form ation in inter-
mediate stage of the protonema development。The number of bud increases wi山 the concentrations aug-
mentation of the three growth regulators．but it is beter under 0．4 mg／L TDZ．And it is the best efect
when 1．5 mg／L 6-BA and ，IDZ is mixed．The bud quantity isn’t correlated directly with its growing
trend．
Key words：Entodon challengeri；TDZ；6一BA；NAA；Spore germ ination；Protonema development；Bud
diferentiati0n
在苔藓植物的生活史中，原丝体阶段是其从孢
子萌发至配子体发生过程中的关键环节，也是苔藓
植物区别于其他高等植物的重要特征之一。研究不
同环境因子对藓类植物孢子萌发与原丝体发育的影
响，对于探讨苔藓植物的种系发生和系统分类，缩短
其配子体发生的时问，建立苔藓植物的快速人工繁
殖体系具有非常重要的实践价值，并且对于苔藓植
物的次生代谢物和分子系统学研究也具有非常重要
的理论意义 ¨J。
苔藓植物不同于其他高等植物 ，在发育过程中，
少数外界生长物质的干扰对其根本不产生显著影
响-6 J。国外学者对此研究相对较多，但他们主要
是用激素处理苔藓植物愈伤组织，而利用生长调节
剂来处理苔藓植物原丝体发育的研究较少。刘晓红
等的研究表明，CaM的专性抑制剂氯丙嗪和细胞分
裂素对葫芦藓配子体的形成具有明显的抑制作用 ，
收稿日期：2006-05—14，修回日期：20O6—12-06。
基金项 目：国家自然科学基金重大研究计划(90202019)；河北省自然科学基金项目(303150，(：2006000147)。
作者简介：黄士良(1977一)，男，河北清河县人，硕士，主要从事苔藓植物学研究。
· 通讯作者(E-mail：zhaojiancheng@mail．hebtu．edu．er)。
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武 汉 植 物 学 研 究 第 25卷
且抑制程度与浓度成正比 J。Schnept和 Reinhard
的实验证明，脱落酸(ABA)能够诱导正常生长的葫
芦藓绿丝体变成短囊状细胞(Brachycytes)，叶绿体
形态变为狭长形[1。。 而 Christianon的实验却表明，
ABA能够通过阻止细胞分裂素发挥作用，从而抑制
葫芦藓原丝体上配子体的形成 。
新型植物生长调节剂噻二唑苯基脲 (N—phenyl—
N’1，2，3-thiadiazol-5一ylurea，TDZ)是噻重氮苯基类
有机化合物，它具有强烈的细胞分裂素活性，在植物
组织培养中，能促进植物组织的形成和茎的增殖，作
用比腺嘌呤型细胞分裂素还要强 ¨-1引。TDZ、萘乙
酸(NAA)和 6一苄基 腺嘌呤 (6-benzyla minoprine，
6-BA)对种子植物生长发育的影响早有报道，但其
对苔藓植物生长发育影响的研究尚属空白。
密叶 绢 藓 (Entodon chalengeri)属 绢 藓 科
(Entodontaceae)绢藓属(Entodon)，它的生活幅相对
较宽，且具有治疗水肿病的药用价值 引，因此，我们
以密叶绢藓为材料，研究 3种植物生长调节剂在其
孢子萌发和原丝体发育过程中的作用，这将对密叶
绢藓的人工规模化培养及其应用奠定理论和实践
基础 。
1 材料与方法
1．1 实验材料
实验材料取自河北师范大学植物标本室密叶绢
藓[Entodon chalenged(Paris)Cardot]标本上的成
熟孢 蒴。凭 证标 本：密 叶绢藓，李 凤岚 020131
(HBNU)，2002年 9月 21 13，河北省围场县，海拔
1150 nl，腐木生。
1．2 实验方法
实验组为含有改良的Knop营养液的琼脂培养基，
其中琼脂为SIGMA公司生产。实验步骤H 如下：
(1)培养基的制备：在一定量的Knop营养液中
加入适量的琼脂 ，使其浓度为7 g／L。加入3种植物
生长调节剂，使其浓度分别配成 0．2、0．4、1．0、
1．5 mg／L，经灭菌后即可使用。以上浓度各做 3个
重复，1组空白对照。
(2)孢子悬液的制备：在超净工作台上，取密叶
绢藓的成熟孢蒴，将其浸入75％的酒精中，20 s后
取出用蒸馏水反复冲洗 3次，用镊子和解剖针打开
孢蒴，将孢子散入适量的蒸馏水中。制成适当浓度
的孢子悬液。
(3)用移液器将稀释后的孢子悬液分别接种于
已凝固的培养基质上。
(4)培养皿加盖后放在 RXZ型智能人工气候
箱中培养，温度(23 4-2)℃，相对湿度大于 85％，光
照强度 24 mol·in～·s～，光照时间12 h／d。
(5)自接种培养后，每天定时镜检孢子萌发情
况，对具代表性的个体的萌发过程进行显微照相及
绘图，并详细记录其发育过程。
(6)萌发率的统计，自接种24 h后开始在显微
镜下统计孢子的萌发率。统计时，在每一个培养皿
里随机抽取 3个视野(10倍物镜下)，统计每一视野
内的孢子总数和萌发的孢子数目，并计算孢子的单
极、两极和三极萌发率，每一浓度求其平均值即为该
浓度条件下孢子的萌发率；在原丝体培养至 15 d
时，在每一个培养皿里随机抽取 3个视野(10倍物
镜下)，统计每一视野内的芽体总数，每一浓度条件
下求其平均值即为该浓度的芽体发生数目。
(7)参数的测量。任意选取一个孢子萌发形成
的原丝体测量。取最长的主轴绿丝体测量其长度、
直径及单个原丝体细胞的长度、直径，各数值均取其
最大值；选取原丝体上最长的分枝，测量分枝长度及
直径；对所取数值进行方差分析，计算出结果。
2 实验结果
2．1 3种植物生长调节剂对密叶绢藓孢子萌发的
影响
结果表明，密叶绢藓的孢子接种后第 5 d，各种
处理条件下的孢子萌发率均达到 95％左右 (见
表 1)，上述数据为 3组重复处理密叶绢藓孢子萌发
率的平均值。可见3种生长调节剂对密叶绢藓的孢
子萌发没有显著的影响。
表 1 3种植物生长调节剂对密叶绢藓孢子萌发的影响
Table 1 Efect ofTDZ，6-BA，NAA on spore germination
in Entodon chalenged
2．2 3种植物生长调节剂对密叶绢藓原丝体发育
的影响
2．2．1 对绿丝体发育的影响
培养8 d时的统计结果显示：
NAA 0．2一1．0 ms／L均促进绿丝体伸长(图I：A)。
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第1期 黄士良等：三种植物生长调节剂对密叶绢藓(西撬 吼g )孢子萌发、原丝体发育及芽体发生的影响
为对照组的1．2倍(图3：E)。
3 小结
(1)在密叶绢藓孢子萌发阶段，3种植物生长
调节剂处理的各组孢子的萌发率方差分析并没有显
著差异，说明在实验浓度梯度范围内，它们对密叶绢
藓孢子萌发没有显著影响。由此可以认为，孢子萌
发所需的生长物质主要来源于其自身，外界生长物
质对孢子萌发的影响不显著。在孢子萌发率统计
时，由于实验采用的孢子为2002年采集的，萌发率
会有所降低，需要考虑此因素。
(2)在密叶绢藓原丝体发育阶段，3种植物生
长调节剂单独处理比组合处理效果显著。
在原丝体发育前期，1．0 mg／LNAA处理组的发
育效果最好，其次是0．4 mg／L TDZ处理组，6-BA处
理组的效果不显著，而组合处理组的效果最差。因
此，在原丝体发育前期阶段，生长调节剂 NAA是最
佳选择。这是因为 NAA主要是通过促进细胞的纵
向延长来促进植物的生长，即通过促进原丝体细胞
的伸长来促进其生长，这与实验结果是一致的。
在原丝体发育中期阶段：NAA和6一BA单独处
理及TDZ+NAA+6-BA组合处理均抑制原丝体产
生分枝，而只有 TDZ处理可促进原丝体分枝的产
生，且0．4 mg／L的促进效果最显著，这与 TDZ能促
进植物茎的增殖效应具有一致性。但是，当 TDZ、
NAA和6一BA一起处理时，由于后两者的抑制作用，
降低了TDZ促进原丝体产生分枝的效应。
(3)在芽体发生阶段，3种植物生长调节剂不
管是单独处理还是组合处理均促进芽体的发生。
在单独处理时，0．4 mg／L TDZ效果显著，其次
是 0．2 mg／L 6一BA处理组，NAA处理组效果最差。
在组合处理组中，TDZ和6-BA组合效果最佳；而
TDZ+NAA+6-BA组合处理产生的芽体数比前一组
合减少了11．1个，这说明NAA抑制了6一BA+TDZ
组合的促进作用。
与此同时，3种植物生长调节剂对芽体发生的
时间也有影响。6-BA处理组的芽体发生时间比对
照组提前了4 d，TDZ单独处理组和两个组合处理组
均比对照组提前了6 d。
由此可见，合理的组合与单独处理相比，可缩短
芽体的发生时间并提高芽体发生数量。如6-BA+
TDZ组合比它们各自单独处理时的芽体发生时间均
提前。这也充分体现了植物生长调节剂的高效性。
(4)密叶绢藓原丝体发育时期，在没有加入外
界生长物质时，原丝体细胞一直保持顶端生长，形成
侧枝，并保持丝状生长。同时，丝状原丝体内产生促
使芽体生成的物质，但只有原丝体达到一定的数量，
即产生的生长物质浓度达到促使芽体发生的临界值
时，原丝体才能由营养生长进入生殖生长。但如果
人为地加入促芽体生长物质，使培养基质中生长物
质浓度提前达到芽体发生的临界标准，就会促使原
丝体细胞呈现出新的形态学变化，原丝体就会从丝
状生长转为分生组织生长，即可以提前促使芽体发
生。关于生长物质如何通过外界基质运输到原丝体
内部，并促使其芽体提前发生尚待进一步研究。
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