全 文 ：作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2016, 42(3): 368375 http://zwxb.chinacrops.org/
ISSN 0496-3490; CODEN TSHPA9 E-mail: xbzw@chinajournal.net.cn

本研究由国家转基因生物新品种培育重大专项(2014ZX08010-005)资助。
This study was supported by the National Major Project of Breeding for New Transgenic Organisms (2014ZX08010-005).
 通讯作者(Corresponding authors): 王旭静, E-mail: wangxujing@caas.cn, Tel: 010-82106124; 王志兴, E-mail: wangcotton@126.com,
Tel: 010-82106102
第一作者联系方式: E-mail: JT_Y1990@163.com
Received(收稿日期): 2015-05-29; Accepted(接受日期): 2015-11-20; Published online(网络出版日期): 2015-12-18.
URL: http://www.cnki.net/kcms/detail/11.1809.S.20151218.0915.020.html
DOI: 10.3724/SP.J.1006.2016.00368
陆地棉 GhRACK1启动子的克隆与缺失分析
杨江涛 庞伟民 王旭静* 吕少溥 唐巧玲 王志兴*
中国农业科学院生物技术研究所, 北京 100081
摘 要: 在基因工程发展中, 有应用前景的纤维特异表达启动子的缺乏是制约棉花纤维品质改良的主要因素之一。
本研究利用反向 PCR方法克隆到陆地棉纤维优势表达基因 GhRACK1的上游启动子 GhRACK1-P。GhRACK1-P全长
为 1987 bp, 含有 TATA-box、CAAT-box、MYB2 和 I-box 等顺式作用元件和调控元件。根据调控元件的分布对
GhRACK1-P进行不同程度的缺失, 获得了 p1、p2、p3和 p4缺失体; 构建不同缺失体和全长 GhRACK1-P的植物表
达载体 , 并通过农杆菌介导法导入烟草 , 获得不同类型转基因烟草。GUS 组织化学染色结果表明 , 全长启动子
GhRACK1-P只能驱动 gus基因在转基因烟草的幼根及根毛中表达, 其他缺失体驱动 gus基因在转基因烟草的花粉、
叶片和根中表达, 为组成型表达启动子。由于根毛与棉花纤维具有相似的发育机制, 推测全长 GhRACK1-P可能为纤
维优势表达启动子。本研究结果为棉花纤维品质改良基因工程提供了新的调控元件。
关键词: 纤维优势表达; GhRACK1启动子; 克隆; 缺失分析
Cloning and Deletion Analysis of GhRACK1 Promoter from Gossypium hirsutum
YANG Jiang-Tao, PANG Wei-Min, WANG Xu-Jing, LÜ Shao-Pu, TANG Qiao-Ling, and WANG Zhi-Xing
Biotechnology Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China
Abstract: The absence of fiber specific promoter with future prospect is one of the main factors to restrict the development of
genetic engineering in cotton fiber improvement. A 1987 bp length promoter sequence of Gossypium hirsutum GhRACK1 gene,
which encodes receptor for activated C kinase 1 and precedantly expresses in fiber, was cloned by combination of inverse PCR
and touchdown PCR method. Sequence analysis showed there were lots of promoter regulation elements such as cis acting factor
and the tissue specific regulation elements. The full-length GhRACK1-P and truncations from –600 to –1 bp, –1036 to –1 bp,
–1260 to –1 bp and –1620 to –1 bp were obtained by PCR method. Each of the truncations was fused with gus gene and inserted
into plant expression vectors pCamBIA2300. All constructs were transformed into Nicotiana tabacum var. NC89 through Agro-
bacterium-mediated transformation method. GUS histochemical assay showed that the full-length GhRACK1-P promoter was
expressed in root and exhibited a tissue-specific expression manner. All of the truncations were expressed in root, leaf and pollen
and exhibited a constitutive expression manner. Because there is the similar developmental mechanism between cotton fiber and
tobacco young root or trichome, the results indicate that GhRACK1- P may be a fiber specific expression promoter.
Keywords: Preferential expression in fiber; GhRACK1 promoter; Clone; Deletion analysis
我国既是棉花生产大国 , 也是原棉消费大国 ,
棉花生产在国民经济中占有十分重要的地位。目前
我国棉花纤维品质中等且单一, 虽然基本上可满足
纺织业的要求, 但原棉品质不如美国和澳大利亚等
产棉国, 缺乏国际竞争力。因此, 棉花纤维品质改良
成为当前我国棉花育种的主要目标之一。
受种质资源缺乏、育种周期长、产量性状与品
质性状负相关等因素的影响, 利用常规育种技术较
难培育出纤维品质优良的棉花新种质。基因工程技
术的发展为培育纤维品质优良的棉花新品种提供了
第 3期 杨江涛等: 陆地棉 GhRACK1启动子的克隆与缺失分析 369


新的途径。经过近 20年的努力, 目前研究者们已克
隆了多个纤维发育相关基因和纤维优势表达启动子,
并在棉花纤维品质改良基因工程中得到应用, 取得
了可喜的进展[1-5], 但目前仍缺乏有真正应用价值的
优良基因和调控元件。
RACK1蛋白(receptor for activated C kinase 1,
活化态 C激酶 1受体)普遍存在于动植物中, 是一种
高度保守的 WD40 重复蛋白, 在细胞骨架、蛋白运
输、细胞信号转导及分生组织形成等生命活动中扮
演重要角色[6]。自 1993年首次从烟草愈伤组织中克
隆了对生长素 2,4-D 响应的 RACK1 基因以来[7], 目
前已从拟南芥、水稻、烟草、苜蓿、油菜等多种植
物中克隆到了 RACK1 基因[7-11]。本实验室通过叶片
和纤维差减杂交得到了 RACK1基因的 EST序列, 并
通过 RACE 技术克隆得到了 GhRACK1 基因的全长
序列, RT-PCR 表明此基因在纤维中优势表达, 荧光
定量 PCR分析表明此基因在纤维伸长期的表达量大
约是叶片中的 20 倍左右, 上述结果均表明 GhRACK1
在纤维中优势表达[12]。
鉴于 GhRACK1 在纤维中优势表达, 本研究通
过反向 PCR 方法克隆 GhRACK1 基因的 5上游启动
子 GhRACK1-P, 根据 GhRACK1-P上调控元件的分
布进行不同程度的缺失, 利用 GhRACK1-P 缺失体
驱动 gus基因在烟草中表达, 分析不同 GhRACK1-P
缺失体转基因烟草中 GUS的组织表达模式, 以期获
得棉纤维中优势表达的启动子, 为棉花纤维品质改
良基因工程提供新的调控元件。
1 材料与方法
1.1 试验材料
烟草品种 NC89、陆地棉苏棉 12、大肠杆菌
DH5α、农杆菌 LBA4404、植物表达载体 pCamBIA
2300由本实验室保存。限制性内切酶、Taq酶和 T4
连接酶购自 TaKaRa或 NEB试剂公司。其他化学试
剂为国产分析纯。
1.2 反向 PCR 克隆 GhRACK1 基因的启动子
GhRACK1-P
利用植物基因组 DNA 提取试剂盒(天根生化,
北京)提取苏棉 12的基因组 DNA。分别经 Bgl II和
Msc I单酶切后自连环化。同时根据已知序列设计引
物并进行反向 PCR 扩增, 反应所需引物和模板详见
表 1。PCR条件 94℃ 5 min; 94℃ 30 s, 72~63℃ 30
s, 72℃, 3 min, 每循环降低 1℃, 依次进行 10个循环;
94℃ 30 s, 66℃ 30 s, 72℃ 3 min, 30个循环; 72℃
10 min。最终 PCR产物与 T-载体连接后转化大肠杆
菌, 挑选阳性克隆并测序鉴定。
1.3 GhRACK1-P缺失体的克隆与植物表达载体
构建
根据 GhRACK1-P 序列设计引物 R-1、F-600、
F-1036、F-1260、F-1620 和 F-1987。为构建载体方
便, 在R-1的 3端添加了Xba I酶切位点, 在 F-1987、
F-600、F-1036、F-1260和 F-1620的 3端添加了 Pst
I 酶切位点。以 GhRACK1-P 质粒为模板 , 以
R-1/F-1987、R-1/F-600、R-1/F-1036、R-1/F-1260和
R-1/F-1620为引物进行 PCR扩增, 反应条件为 94℃

表 1 反向 PCR扩增所需引物和模板
Table 1 Primer and template for inverse-PCR amplification
PCR
反应模板
Template
引物名称
Primer
引物序列
Primer sequence (5–3)
第一次反向 PCR First inverse-PCR
第一次 PCR扩增
First PCR amplification
基因组 DNA Bgl II酶切后自连
The genome DNA that self -ligation after Bgl II digestion
BglCYG1-F
BglCYG1-R
GGAATACCCTTGGAGAATGCAAA
AAAGGCAACGGAAAGCACATCTT
第二次 PCR扩增
Second PCR amplification
第一次 PCR反应产物
First PCR reaction products
BglCYG2-F
BglCYG2-R
CATCGTTTCGGCTTCCTGGGATA
CTGGGAATCTGAGGAGAGGACAA
第三次 PCR扩增
Third PCR amplification
第二次 PCR反应产物
Second PCR reaction products
BglCYG3-F
BglCYG3-R
GGCGGTTTCGCCTGATGGTTCTT
AGAGTGGCCGGTGAGACGACGAC
第二次反向 PCR Second inverse-PCR
第一次 PCR扩增
First PCR amplification
基因组 DNA Msc I酶切后自连
The genome DNA that self -ligation after Msc I digestion
MscCYG1-F
MscCYG1-R
CAGTTTGCTCTCTCCGGTTC
TCACGTGAGGAAGTGACGAT
第二次 PCR扩增
Second PCR amplification
第一次 PCR反应产物
First PCR reaction products
MscCYG2-F
MscCYG2-R
TTTTCAATCGACAACCGTCA
GAACCAATCCCTCGGAGACT

370 作 物 学 报 第 42卷


5 min; 94℃ 45 s, 62℃或 55℃ 30 s, 72℃ 1~2 min,
30个循环; 72℃ 10 min (表 2)。获得的 PCR产物与
T-载体连接后转化大肠杆菌, 挑选阳性克隆并测序
鉴定, 正确的阳性克隆分别被命名为 GhRACK1-P、
p1、p2、p3和 p4。
Hind III 和 EcoR I 双酶切 pBI121 和 pCamBIA
2300, 分别回收 3 kb和 9 kb左右的DNA条带, 连接
后形成中间载体 pCamBIA230035S。Pst I 和 Xba I
双酶切 pCamBIA230035S、 p1、 p2、 p3、 p4 和
GhRACK1-P, 分别回收大片段和相应的小片段, 连
接后形成植物表达载体 PGhrack-1、PGhrack-2、
PGhrack-3、PGhrack-4和 PGhrack-5。
1.4 农杆菌介导法转化烟草
利用热击法将表达载体 PGhrack-1、PGhrack-2、
PGhrack-3、PGhrack-4 和 PGhrack-5 转入农杆菌
LBA4404。含有目标载体的农杆菌 LBA4404在含有
250 mg L–1链霉素、250 mg L–1利福平和 100 mg L–1
卡那霉素的 YEB液体培养基中被活化。收集菌体并
用液体MS基本培养基重悬稀释至OD600为 0.1~0.2。
将继代培养 15 d左右的烟草组培苗叶片切成 2 mm
左右的长条, 于农杆菌液中侵染 10 min。然后放在
含有 2 mg L–1 6-BA和 0.5 mg L–1 NAA的MS培养基
上, 25℃暗培养 3~4 d。将外植体转移到含有NAA 0.5
mg L–1、6-BA 2 mg L–1、Kan 100 mg L–1和 Carb 500
mg L–1的 MS固体培养基上分化培养, 3~4周后即有
再生芽的出现。待再生芽长到 1 cm左右时, 将其移
到含有Kan 100 mgL–1和 Carb 500 mg L–1的MS培养
基上进行生根培养。
1.5 转基因烟草的 PCR检测
根据 GhRACK1-P 缺失体序列设计系列引物。
提取转基因烟草基因组 DNA, 利用对应的引物进
行 PCR扩增, 反应条件为 94℃ 5 min; 95℃ 1 min,
50~54℃ 30 s, 72℃ 1 min, 32个循环; 72℃ 10 min,
具体见表 3。

表 2 GhRACK1-P缺失体的克隆所需引物和反应条件
Table 2 Primer and PCR progress for cloning of GhRACK1-P truncations
缺失体
Truncations
引物名称
Primer
引物序列
Primer sequence (5–3)
PCR反应过程中的退火温度
Annealing temperature during
PCR amplification
p1

R-1
F-600
ATCTAGATTTCGTCGGCGCTTGCGGCGGGAGCGGCCTTTA
TCTGCAGAAATTTGAAATTTTAATCTTGACCCAAT
55℃

p2

R-1
F-1036
ATCTAGATTTCGTCGGCGCTTGCGGCGGGAGCGGCCTTTA
TCTGCAGGTAGGTGGAATTTTAGTTTTATAAGA
55℃

p3

R-1
F-1260
ATCTAGATTTCGTCGGCGCTTGCGGCGGGAGCGGCCTTTA
TCTGCAGTATGAATTGACGATATTATTCTT
55℃

p4

R-1
F-1620
ATCTAGATTTCGTCGGCGCTTGCGGCGGGAGCGGCCTTTA
TCTGCAGTCGCC TGAGCAGTCAGGACAGT
62℃

GhRACK1-P

R-1
F-1987
ATCTAGATTTCGTCGGCGCTTGCGGCGGGAGCGGCCTTTA
TCTGCAGCCACATGGCGTCTGAAACAACATGAA
62℃


表 3 转基因烟草 PCR检测所需引物
Table 3 Primers for PCR detection of transgenic tobacco
转基因烟草
Transgenic tobacco
引物名称
Primer name
引物序列
Primer sequence (5–3)
PCR反应过程中的退火温度
Annealing temperature during
PCR amplification
p1-R AAATGATAGGTCAGCGGAGAATGA 含 p1缺失体
Containing truncation p1 p1-F ACACAGTATCACATGTGTGATAGT
50℃

p2-R ACTATCACAC ATGTGATACTGTGT 含 p2 缺失体
Containing truncation p2 p2-F GACTCGAGTTCAGACTACACTTAGA
52℃

p3-R TCTAAGTGTAGTCTGAACTCGAGTC 含 p3缺失体
Containing truncation p3 p3-F TATGAATTGACGATATTATTCTT
54℃

p4-R AATTCCACCTACCCCTTTCGAAT 含 p4缺失体
Containing truncation p4 p4-F AAGGAGCAGCGCAGATGCTGCAAGT
50℃

p5-F CCACATGGCGTCTGAAACAACATGAA含 GhRACK1-P
Containing GhRACK1-P p5-R AAGAATAATATCGTCAATTCATA
52℃


第 3期 杨江涛等: 陆地棉 GhRACK1启动子的克隆与缺失分析 371


1.6 GUS组织化学染色
参考 Jefferson 等[13]的方法, 将植物组织浸入适
量X-Gluc溶液中, 密封, 37℃避光过夜, FAA固定 15
min, 然后依次用 75%、85%、95%和 100%酒精脱色,
观察是否有蓝色出现。
2 结果与分析
2.1 GhRACK1-P的克隆及序列分析
第一次反向 PCR获得了 514 bp的上游序列, 第
二次反向 PCR获得了 1473 bp的上游序列。将两次
反向 PCR 所得序列拼接后获得了 GhRACK1 基因的
5端上游序列 1987 bp。
利用 http://www.cbrc.jp/research/db/TFSEARCH.
html在线软件预测 GhRACK1基因上游的 1987 bp中
可能的转录起始位点, 发现它可能位于–71 bp, 序
列为 TCATTCT, 此序列符合 PyPyANT/APyPy 的保
守序列结构。PlantCare分析其上面调控元件的分布,
发现此序列上除了含有 TATA-box、CAAT-box 等顺
式作用元件外 , 还含有 3个与根特异表达有关的
RootmotifTAPOX1、1个与表皮毛发育有关的MYB2、
以及 TBOX、LIBOX、IBOXCORE等组织特异性调
控元件(图 1)。

图 1 GhRACK1-P的序列及其部分调控元件
Fig. 1 Sequence of GhRACK1-P and its partial regulation elements
372 作 物 学 报 第 42卷


2.2 启动子缺失及植物表达载体的构建
根据 GhRACK1-P 序列上与表皮毛、根、纤维
特异表达相关作用因子的分布, 对 GhRACK1-P 进
行了不同程度的缺失, 利用 PCR 方法克隆得到了
p1、p2、p3、p4 四个缺失体。相对于全长启动子
GhRACK1-P来说, p4缺失体上主要缺失了与表皮毛
发育相关的调控元件 MYB2, p3 缺失体上主要缺失
了表皮毛发育相关的调控元件 MYB2、组织特异性
启 动 元 件 OSE1 、 种 皮 特 异 性 启 动 元 件
PROLAMIBOX, p2 缺失体上主要缺失了表皮毛发
育相关的调控元件 MYB2、根特异表达调控元件
RootmotifTAPOX1、组织特异性启动元件 OSE1、种
皮特异性启动元件 PROLAMIBOX、纤维特异相关
的启动子元件 L1BOX、参与棉花纤维发育与乙烯
合成途径的 IBOXCORE 等, p1 缺失体上缺失了所
有的与根和纤维特异表达相关的调控元件 , 主要
含有 TATA-box、CAAT-box等启动子必需的调控元
件(图 2)。
以 pCAMBIA2300为基础载体, 以 gus为报告基
因, 分别构建了全长启动子GhRACK1-P和 4个启动
子缺失体的植物表达载体。在构建的系列植物表达
载体中, 报告基因 gus基因由GhRACK1启动子的不
同缺失体驱动, 由 nos 终止子终止表达; 筛选标记
基因为 npt II, 由 CaMV 35S 启动子驱动表达, 35S
polyA 终止表达。构建的植物表达载体经多酶切鉴
定和测序证明是正确的(图 3)。

图 2 GhRACK1-P的缺失示意图
Fig. 2 Schematic diagram of deletion of GhRACK1-P

图 3 植物表达载体基因表达盒示意图
Fig. 3 Schematic diagram of plant expression vector
35S P: CaMV 35S promoter; npt II: Neomycin phosphotransferase gene; 35S polyA: CaMV 35S 3’-UTR polyA; PGhrack promoter: different
truncation of GhRACK1-P; gus: Beta glucuronidase gene; Nos T: Nos terminor.

2.3 不同缺失体转基因烟草的获得和 PCR检测
将含不同启动子缺失体的植物表达载体通过冻
融法导入农杆菌 LBA4404, 并利用农杆菌介导法导
入烟草 NC89中, 获得了分别含有启动子缺失体 p1、
p2、p3、p4和全长启动子 GhRACK1-P的转基因烟草。
提取转基因烟草 DNA 进行 PCR 检测, 结果不
同类型的转基因烟草中均扩增出了相应的目的条带,
含有启动子缺失体 p1、p2、p3 和 p4 和全长启动子
GhRACK1-P 的转基因烟草中扩增的目的条带大小
分别约为 330、790、486、521、971 和 450 bp (图
4)。经 PCR检测后, 分别获得了 40、28、32、34和
41 株含有启动子缺失体 p1、p2、p3、p4 和全长启
动子 GhRACK1-P的转基因烟草。
2.4 不同缺失体的时空表达模式分析
分别取不同类型转基因烟草的根、叶和花粉经
GUS组织化学染色发现, 含有启动子缺失体 p1、p2、
p3 和 p4 的转基因烟草的根、叶和花粉中均有 GUS
的表达, 而全长启动子 GhRACK1-P 的转基因烟草
只能在幼根及根毛中检测到 GUS表达。说明只有全
长启动子 GhRACK1-P 为幼根及根毛特异表达, 其
他缺失体均为组成型表达(图 5)。相对于启动子缺失
体而言, 全长启动子序列主要增加了 MYB2 元件和
ROOTMOTIFTAPOX1 等与表皮毛和根特异表达有
关的调控元件, 据此推测, 全长启动子上的这些元
件与其组织特异表达密切相关, 可能是其在根毛和
幼根中表达所必需的。
第 3期 杨江涛等: 陆地棉 GhRACK1启动子的克隆与缺失分析 373



图 4 转基因烟草的 PCR检测
Fig. 4 PCR detection of transgenic tobacco
A, B, C, D, E分别为含有启动子缺失体 p1、p2、p3、p4和全长启动子 GhRACK1-P的转基因烟草的 PCR检测; M: 2k marker;
1~15: 转基因烟草; 16: NC89; 17: 质粒 DNA。
A, B, C, D, E represent PCR detection of transgenic tobacco containing p1, p2, p3, p4, and GhRACK1-P, respectively. M: 2k marker;
1–15: transgenic tobacco plants; 16: NC89; 17: Plasmid DNA.

3 讨论
为实现目标基因在转基因植物中的定时、定位
表达, 降低植物体内代谢负担和减轻对作物本身的
不利影响, 组织特异性启动子越来越受到研究者的
关注。组织特异性启动子除了具有核心启动子区外,
还具有调控基因在组织中特异表达的调控元件, 这
些组织特异表达调控元件在启动子中的分布位置、
数目和种类决定其组织表达特性。目前, 已发现了
多个与组织特异和诱导表达相关的调控元件 , 如
RHEs为根毛特异表达的调控元件[14-15]; CANNTG、
ACGT 和 GATA 等顺式作用元件为决定组织特异表
达相关转录因子的结合位点[16]。
5端缺失法是研究启动子表达特性和调控元件
功能最常用的方法之一, 利用限制性内切酶、核酸
外切酶、PCR 等方法从启动子 5端上游对启动子进
行不同程度的缺失, 通过检测缺失体驱动报告基因
在转基因植物中的表达情况来推断启动子不同缺失
片段的结构和功能[17]。
利用 PlantCare 在线软件分析了本研究获得的
GhRACK1-P 启动子上面调控元件的分布, 发现除
含有 TATA-box、CAAT-box 等顺式作用元件外, 含
有与根特异表达有关的 RootmotifTAPOX1和与表皮
毛发育有关的 MYB2等组织特异性调控元件。含不
同启动子缺失体转基因烟草的GUS组织化学染色结
果表明, 缺失体 p1、p2、p3和 p4均驱动 gus基因在
叶片、幼根和花粉中表达, 不具有组织特异性, 说明
–644 ~ –640 bp和–1257 ~ –1253 bp处的 Rootmotif-
TAPOX1 不是 GhRACK1-P 启动子组织特异表达所
必需的 ; 缺失启动子上–1920 ~ –1916 bp 处的
RootmotifTAPOX1和–1846 ~ –1841 bp处的 MYB2
374 作 物 学 报 第 42卷



图 5 不同类型转基因烟草的 GUS组织化学染色分析
Fig. 5 Histochemical GUS assay of transgenic tobacco
p1, p2, p3, p4, GhRACK1-P, 35S和 NC89依次代表含启动子缺失
体 p1、p2、p3和 p4, 全长启动子 GhRACK1-P, CaMV 35S启动
子转基因烟草和非转基因烟草 NC89的花粉、叶片和根染色
情况。
p1: pollen, leaf and root of transgenic tobacco with p1; p2: pollen,
leaf and root of transgenic tobacco with p2; p3: pollen, leaf and root
of transgenic tobacco with p3; p4: pollen, leaf and root of trans-
genic tobacco with p4; GhRACK1-P: pollen, leaf and root of trans-
genic tobacco with GhRACK1-P; 35S: pollen, leaf and root of
transgenic tobacco with CaMV 35S promoter; NC89: no transgenic
tobacco NC89.

元件后, GhRACK1-P启动子的幼根及表皮毛特异表
达的特性也随之消失, 推测–1920 ~ –1916 bp 处的
RootmotifTAPOX1和–1846 ~ –1841 bp处的 MYB2
元件是幼根及表皮毛特异表达必需的。
棉纤维是从胚珠外珠被上的单个表皮细胞分化
和发育而来的, 与烟草和拟南芥的表皮毛具有相似
的发育机制 [18-19]。鉴于棉花遗传转化周期比较长 ,
转化效率低, 研究者们经常利用模式植物来分析纤
维优势表达基因启动子的表达模式, 如纤维优势表
达基因 GhRDL1 启动子在棉纤维中为优势表达, 在
模式植物拟南芥中表现出表皮毛特异表达的模式[20];
编码脂转移蛋白的基因 Fsltp4 在棉纤维发育中高表
达, 其启动子在转基因烟草中表现出表皮毛特异表
达的特性[21]。本研究利用 GhRACK1-P分别驱动 gus
和 gfp 基因在转基因烟草中稳定和瞬时表达, 前者
结果说明 GhRACK1-P 驱动 gus 基因只在转基因烟
草的幼根及根毛中表达, 后者结果证明 GhRACK1-
P 驱动 gfp 基因只在烟草叶片的表皮毛表达(未发表
数据), 据此初步推测 GhRACK1-P 为纤维优势表达
启动子, 但其组织表达特性仍需在转基因棉花中进
一步研究。
4 结论
克隆了陆地棉纤维优势表达基因 GhRACK1 的
启动子 GhRACK1-P。只有全长 GhRACK1-P在转基
因烟草幼根及根毛中特异表达, 初步推测 GhRACK1-
P为纤维优势表达启动子。
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