全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 24期 2015年 12月

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以多糖为主要部位的 6种腰痛宁衍生方对巨噬细胞中炎症因子表达及软骨
细胞增殖的影响
张立国，赵丽丽，倪力军*，程佳佳
华东理工大学 化学与分子工程学院，上海 200237
摘 要：目的 以腰痛宁胶囊组方药材有效部位为基础，考察 6种以多糖活性部位为主的腰痛宁衍生方的细胞药理活性，为
风湿骨病处方候选药物筛选提供依据。方法 分别以甘草多糖、苍术多糖、川牛膝多糖、麻黄多糖、淫羊藿多糖、桑寄生多
糖为主要部位（组方中比例 50%）组成 6种腰痛宁衍生方，酶联免疫方法测定脂多糖（LPS）诱导的 Ana-1细胞中前列腺素
E2（PGE2）及 Ana-1细胞中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平，CCK8法检测
软骨细胞增殖活性。采用半数抑制浓度（IC50）及半数有效浓度（EC50）评价各样品的活性，通过比较各组方实验 EC50/IC50
与其理论叠加值的差异，分析样品中活性部位间的相互作用。结果 6个腰痛宁衍生方中，以桑寄生多糖或淫羊藿多糖为主
的 2个组方抑制 LPS诱导的 Ana-1细胞分泌 PGE2、促进 Ana-1细胞分泌 IL-6、IL-1β 及 TNF-α 及促进软骨细胞增殖的活性
显著弱于腰痛宁全方，其余由腰痛宁处方药材多糖为主的 4个组方的相关活性优于腰痛宁全方或与腰痛宁全方相当，无统计
学差异。其中川牛膝多糖占 50%的组方在抑制 LPS诱导的 Ana-1细胞分泌 PGE2、促进 Ana-1细胞分泌 IL-6、IL-1β 及促进
IL-1β 诱导的软骨细胞增殖方面均具有良好效果。结论 以川牛膝多糖为主的腰痛宁衍生方具有良好的细胞抗炎、免疫调节
和促进软骨细胞增殖活性，可作为风湿骨病处方中多糖的优选部位。
关键词：风湿骨病；腰痛宁胶囊；多糖；前列腺素 E2；白细胞介素-6；白细胞介素-1β；肿瘤坏死因子-α；软骨细胞增殖
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2015)24 - 3710 - 07
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.24.017
Effect of six polysaccharides in formulas derived from Yaotongning on expression
of inflammatory cytokines in macrophages and proliferation of chondrocyte
ZHANG Li-guo, ZHAO Li-li, NI Li-jun, CHENG Jia-jia
School of Chemistry and Molecular Engineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China
Abstract: Objective On the basis of formulas derived from Yaotongning (YTN) Capsules to compare the different cellular
pharmacological activity of six kinds of Chinese materia medica (CMM) polysaccharides, thus to supply the evidence for the screening
of candidate medicines for rheumatoid bone diseases. Methods Six samples were designed by respectively adding the
polysaccharides of Glycyrrhizae Radix, Atractylodis Rhizoma, Cyathulae Radix, Ephedrae Herba, Epimedii Herba, and Taxilli Herba,
at 50% into the six mixtures based on the derived formula of YTN. Murine macrophage cells and chondrocytes were exposed to the
new recipes, and then the half-inhibitive concentration (IC50) and half-effective concentration (EC50) were applied to evaluating their
activity for inhibiting secretion of PGE2 in Ana-1 cells induced by LPS and activities for stimulating the production of IL-6, IL-1β, and
TNF-α in Ana-1 cells as well as activity for promoting IL-1β-induced proliferation of chondrocytes by enzyme linked immunosorbent
assay. The interactions among the active fractions were evaluated by comparing the experimental EC50/IC50 values to their
corresponding additive EC50/IC50 values, which were calculated by the least square method. Results Among the six formulas derived
from YTN, except for one of the two formulas mainly consisted by polysaccharides of Taxilli Herba or Epimedii Herba, whose
activities for inhibiting the production of PGE2 in Ana-1 cells induced by LPS, promoting the secretion of IL-6, IL-1β, and TNF-α in
Ana-1 cells, and stimulating the secretion of chondrocytes induced by IL-1β were significantly weaker than those of YTN. The
activities of other four formulas which were respectively consisted by 50% one of polysaccharides from YTN material medicines

收稿日期：2015-07-14
作者简介：张立国（1963—），男，副教授，硕士生导师，从事中药新药研发、中药物质基础与药效关系的研究。
Tel/Fax: (021)64253045 E-mail: zlgfyt@163.com
*通信作者 倪力军 Tel: (021)64253045 E-mail: nljfyt@sina.com
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were better than those of YTN or statistically equivalent to YTN. The sample mainly composed of polysaccharides of Cyathulae Radix
worked well on inhibiting the production of PGE2 in Ana-1 cells induced by LPS, promoting the secretion of IL-6, IL-1β in
macrophages, and stimulating the secretion of chondrocytes. Conclusion The polysaccharides of Cyathulae Radix have the good
effect on cellular anti-inflammation, immune regulation, and chondrocytes proliferation. It can be a candidate for the active fraction of
polysaccharides in the prescription of rheumatoid disease.
Key words: rheumatism; Yaotongning Capsules; polysaccharides; PGE2; IL-6; IL-1β; TNF-α; proliferation of chondrocyte

《素问•痹论》曰“风寒湿三气杂至，合而为痹
也”。中医认为风湿骨病的发生主要与正虚、邪侵
及痰浊瘀血有关，病机是邪气痹阻经络、筋骨，留
着关节，营卫不通，气血运行受阻。轻者，肢体、
关节等处酸楚、疼痒；重者则疼痛、酸楚显著，并
因反复发作，日久不愈，气血运行不畅，酿成痰浊
疲血，阻痹经络。中医对本病的治疗注重健脾化痰、
祛湿除寒、活血通络。西医认为这类疾病与免疫功
能紊乱、低下，炎症及骨细胞损失有关。现代医学
对该类疾病的通行治则是抗炎、增强免疫功能、促
进骨细胞修复和增殖。
腰痛宁胶囊为治疗风湿骨病的大品种中药，用
于主治寒湿痹阻导致的腰腿痛、腰肌劳损、腐蚀性
关节炎及腰椎间盘突出等疾病[1]。腰痛宁胶囊根据
中药“君臣佐使”的配伍原则，以具有镇痛抗炎功
能的制马钱子为君药，麻黄、苍术作为佐药助马钱
子祛风胜湿止痛；乳香、没药、土鳖虫、全蝎、僵
蚕具有活血通络的作用，散瘀血止痹痛辅以为臣；
川牛膝引药下行作为使药；甘草调和诸药使各药材
发挥最大的功效。以上诸药合理配伍，君臣佐使有
序，具有散瘀止痛、温经通络、消肿化瘀、治疗风
寒湿痹阻和血瘀气滞之功效。本课题组前期基于腰
痛宁有效部位组方的细胞药理学研究表明，腰痛宁
全方具有良好的细胞抗炎、免疫调节、活血和促进
骨关节细胞修复等药理活性[2-5]。
目前关于腰痛宁胶囊对风湿关节炎及风湿骨病
的研究主要集中于临床评价及毒理、药理研究[6-10]。
中药药理的研究通常针对单一处方、单味药材、
单一有效部位或者某一处方中若干主要成分组
合、不同提取物的组合进行，缺乏同类药物（药
材、有效部位）间的相互比较，难以评估同类有
效部位的药理活性，不利于评价和筛选优化中药
处方。本课题组从治疗风湿骨病的中药处方中筛
选出使用频率较高的骨碎补、桂枝、三七、红花、
人参、独活、淫羊藿、桑寄生[11]等 8味药材，提
取其生物碱、皂苷、黄酮、挥发油、多糖等有效
部位，按照腰痛宁组方原则与组合化学思想构建
了 27个中药有效部位组方，比较各组方的细胞抗
炎[12]、促进软骨细胞增殖[13]及免疫调节的活性[14]，
以发现优化的有效部位组合作为风湿骨病候选处
方。限于篇幅，已有报道[12-14]中未能对同类有效
部位（如多糖）的综合细胞药理活性及有效部位
间的相互作用进行分析，本实验以腰痛宁衍生方
（腰痛宁组方药材及上述 8 味药材的生物碱＋黄
酮＋皂苷＋挥发油/水提物的等比例混合物）为基
础构建了分别由甘草、苍术、川牛膝、麻黄 4 个
腰痛宁处方药材多糖及来自风湿骨病处方常用药
材淫羊藿和桑寄生多糖为主的中药有效部位组
方，通过比较这些样品与腰痛宁全方的细胞抗炎、
免疫调节活性和促软骨细胞增殖活性，在细胞层
面考察不同多糖有效部位的活性差异及腰痛宁处
方的比较优势，探究何种多糖有效部位在风湿骨
病复方中有较优的药理作用，为研发风湿骨病中
药有效部位处方提供基础。
1 材料
1.1 动物
健康清洁级 SD大鼠 6只，7日龄，雌雄各半，
购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，许可证号
SCXK（沪）2008-0016。
1.2 细胞株
正常小鼠腹腔巨噬细胞（Ana-1 细胞）株，购
自中国科学院上海生物细胞所。
1.3 药材
本实验以腰痛宁组方中的 10 味药材及其药引
黄酒，以及从治疗风湿骨病的中药处方中筛选出使
用频率较高的骨碎补、桂枝、三七、红花、人参、
独活、淫羊藿、桑寄生 8味药材为组方来源药材，
以上药材均由颈复康药业集团有限公司提供，经该
公司执业药师王春民鉴定为正品，样本保存于华东
理工大学化学与分子工程学院分析化学实验室。各
药材的活性部位均为自制，具体药材及各活性部位
信息见表 1。
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表 1 19种药材中各活性部位的制备方法
Table 1 Preparation methods of active fractions extracted from 19 kinds of material medicines
药材 批号 活性部位 活性部位在提 取物中的量 提取方法
*马钱子 Strychnos nux-vomica Y302-09091-10 马钱子生物碱 0.89 g·g−1[15] 乙醇加热回流＋氯仿萃取[12,16]
*麻黄 Ephedra sinica Y412-100601-12 麻黄生物碱
麻黄多糖
0.50 g·g−1[17]
0.35 g·g−1[18]
乙醇加热回流＋氯仿萃取[12]
水煮醇沉法[18]
*甘草 Glycyrrhiza uralensis Y013-110301-1 甘草黄酮
甘草皂苷
甘草多糖
0.45 g·g−1[12,19]
0.78 g·g−1[20-21]
0.33 g·g−1[18]
乙醇加热回流＋大孔树脂纯化[12,19]
乙醇加热回流＋大孔树脂纯化[11-12]
水煮醇沉法[18]
*川牛膝 Cyathula officinalis Y012-110401-1 川牛膝多糖
川牛膝皂苷
0.96 g·g−1[18]
0.16 g·g−1[11-12]
水煮醇沉法[18]
乙醇加热回流＋大孔树脂纯化[11-12]
*苍术 Atractylodes lancea Y002-101001-2 苍术多糖
苍术挥发油
0.63 g·g−1[18]
1 mL·mL−1
水煮醇沉法[18]
提取-精馏耦合[22]
*乳香 Boswellia sacra 110301-2 乳香挥发油 1 mL·mL−1 水蒸气蒸馏
*没药 Commiphora myrrha 110401-1 没药挥发油 1 mL·mL−1 水蒸气蒸馏
*全蝎 Buthus martensii Y804-11302-4 全蝎水提液 0.1 g·mL−1 超声水提法[12]
*土鳖虫 Eupolyphaga sinensis Y803-110101-5 土鳖虫水提液 0.1g·mL−1 超声水提法[12]
*僵蚕 Bombyx Batryticatus Y805-1011054 僵蚕水提液 0.1 g·mL−1 超声水提法[12]
三七 Panax notoginsen Y806-11508-7 三七皂苷 0.85 g·g−1[12,21] 乙醇加热回流＋大孔树脂纯化[11-12]
桑寄生 Taxillus chinensis Y807-11609-9 桑寄生黄酮
桑寄生多糖
0.01 g·g−1[12,19]
0.38 g·g−1[18]
乙醇加热回流＋大孔树脂纯化[12,19]
水煮醇沉法[18]
独活 Angelica pubescens Y808-11909-4 独活挥发油 1 mL·mL−1 提取-精馏耦合[22]
红花 Carthamus tinctorius Y809-11401-6 红花黄酮 0.41 g·g−1[12,19] 乙醇加热回流＋大孔树脂纯化[12,19]
骨碎补 Davallia mariesii Y810-11907-1 骨碎补黄酮 0.41 g·g−1[12,19] 乙醇加热回流＋大孔树脂纯化[12,19]
人参 Panax ginseng Y811-11706-2 人参皂苷 0.89 g·g−1[12,21] 乙醇加热回流＋大孔树脂纯化[11-12]
淫羊藿 Epimedium sagittatum Y812-11808-3 淫羊藿黄酮 0.20 g·g−1[12,19] 乙醇加热回流＋大孔树脂纯化[12,19]
淫羊藿多糖 0.24 g·g−1[18] 水煮醇沉法[18]
桂枝 Cinnamomum cassia Y813-11301-3 桂枝挥发油 1 mL·mL−1 提取-精馏耦合[22]
黄酒 291110 黄酒多糖 旋转蒸发
*为腰痛宁处方药材
*material medicines in YTN
1.4 试剂
DMEM培养基（北京清大天一科技有限公司）；
聚山梨酯-80（国药集团化学试剂上海有限公司）；小
牛血清（FBS，杭州四季青生物工程材料有限公司）；
白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子-α
（TNF-α）、前列腺素 E2（PGE2）酶联免疫试剂盒
（R&D）；CCK-8试剂盒（东仁化学科技有限公司）；
脂多糖（LPS，Sigma 公司）；花生四烯酸（AA，
Sigma公司）；磷酸盐缓冲液（PBS，Medicago AB）；
0.25% 胰酶、两性霉素、链霉素-青霉素（Biowest）；
刀豆蛋白 A（ConA，Sigma公司）。
1.5 仪器
ML104分析天平（德国METTER TOLEDO公
司）；GL-88B漩涡混合器（海门市其林贝尔仪器制
造有限公司）；680多功能酶标仪（Bio-Rad公司）；
S10-3恒温磁力搅拌器（上海司乐仪器有限公司）；
DS-3510DTH 超声仪（上海生析超声仪器有限公
司）；NU4850-E CO2 培养箱（NUAIRE 公司）；
TS100-F荧光倒置显微镜（NIKON公司）；TXZ-92B
台式恒温振荡器（上海贺德实验设备厂）；XX超净
台（Air Tech公司）；SS-325电脑控制消毒柜（TOMY
公司）；CLASS II生物安全柜（LABCONCO公司）。
2 方法
2.1 6种以不同多糖为主要部位的腰痛宁衍生方样
品的制备
将各有效部位按照表 2 所示质量百分比配制 6
种腰痛宁衍生方及腰痛宁全方共7个样品。其中1～
4号样品所含的川牛膝多糖、甘草多糖、苍术多糖、
麻黄多糖分别是腰痛宁胶囊组方药材中的有效部
位。5～6号样品所含的桑寄生多糖、淫羊藿多糖则
为所选 8味风湿骨病常用处方药材中的有效部位。
精密称取各有效部位，加入适量 PBS 搅拌初
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表 2 腰痛宁及其衍生方有效部位组成及比例
Table 2 Composition and proportion of active fractions from
YTN Capsules and its derivative formulas
样品
编号 样品组成
1 12.5%A＋12.5%F＋12.5%S＋12.5%V＋50%川牛膝多糖
2 12.5%A＋12.5%F＋12.5%S＋12.5%V＋50%甘草多糖
3 12.5%A＋12.5%F＋12.5%S＋12.5%V＋50%苍术多糖
4 12.5%A＋12.5%F＋12.5%S＋12.5%V＋50%麻黄多糖
5 12.5%A＋12.5%F＋12.5%S＋12.5%V＋50%淫羊藿多糖
6 12.5%A＋12.5%F＋12.5%S＋12.5%V＋50%桑寄生多糖
7 腰痛宁全方（含黄酒药引）
A（总生物碱）＝50%麻黄生物碱＋50%马钱子生物碱；F（总黄
酮）＝20%甘草黄酮＋20%淫羊藿黄酮＋20%桑寄生黄酮＋20%
红花黄酮＋20%骨碎补黄酮；S（总皂苷）＝25%甘草皂苷＋25%
三七皂苷＋25%人参皂苷＋25%川牛膝皂苷；V（总挥发油/水提
物）＝16.67%桂枝挥发油＋16.67%独活挥发油＋16.67%（乳香、
没药）挥发油＋16.67%苍术挥发油＋16.67%（全蝎、僵蚕）水提
物＋16.67%土鳖虫水提物
A (total alkaloids) = alkaloids of Ephedra sinica and Strychnos
nux-vomica mixed in equal ratio; F (total falvonoids) = falvonoids of
Glycyrrhiza uralensis, Epimedium sagittatum, Taxillus chinensis,
Carthamus tinctorius and Davallia mariesii mixed in equal ratio;
S (total saponins) = saponins of Glycyrrhiza uralensis, Panax
notoginsen, Panax ginseng and Cyathula officinalis mixed in equal
ratio; V (volatile oils/aqueous extracts) = volatile oils/aqueous
extracts of Cinnamomum cassia, Angelica pubescens, Boswellia
sacra/Commiphora myrrha, Atractylodes lancea, and Eupolyphaga
sinensis mixed in equal ratio
步溶解，沸水浴加热 10 min，待其完全溶解后按表
2方案混合，一并超声 20 min，冷却，定容，配成
2 500 mg/L母液，0.22 μm滤膜滤过并稀释至质量
浓度为 400、200、100、50、25、12.5、6.25与 3.125
mg/L，备用。其中 7号样品中各有效部位按照腰痛
宁胶囊原料药材的比例进行混合[4]，并加入黄酒浓
缩物。
2.2 对Ana-1细胞增殖及 LPS诱导的Ana-1细胞上
清液中 PGE2水平的影响
Ana-1细胞在 37 ℃、5% CO2条件下，用含 10%
小牛血清、青霉素（1×105 U/L）及链霉素（100
mg/L）的 DMEM 培养液进行传代培养，实验用细
胞均处于对数生长期。参照文献方法[23]将密度为
4 000个/孔的 Ana-1细胞接种于 96孔培养板中，
设空白对照组、LPS 处理组及待测药物组（400、
200、100、50、25、12.5、6.25、3.125 mg/L）。细
胞先于 37 ℃、5% CO2条件下培养 2 h，除空白对
照组外，其余各组细胞加入 LPS（终质量浓度为 1
mg/L）培养 9 h；弃去旧培养液，用新鲜培养液洗
涤 3次，待测药物组分别加入各质量浓度的待测药
物孵育30 min，加入底物AA（终浓度为10 μmol/L），
37 ℃孵育 20 min，收集上清液。细胞上清液中 PGE2
的测定按照 PGE2 酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒
使用说明进行，每组重复 3次，计算各待测药物对
PGE2的 IC50值。同时，按照 CCK8 试剂盒使用说
明，每个孔加入 100 μL CCK8试剂，用多功能酶标
仪于 450 nm处检测吸光度（A）值。
2.3 对 Ana-1细胞增殖及上清液中 IL-6、IL-1β、
TNF-α水平的影响
取对数生长期的 Ana-1 细胞，用含 10%的小牛
血清的DMEM培养基制成 2×106个/mL细胞悬液，
接种于 96孔培养板，每孔 100 μL；各待测药物组每
孔加药体积 100 μL，对照组每孔加入 100 μL 不含小
牛血清的 DMEM培养液；37 ℃、5% CO2培养 48 h。
48 h后，加入 CCK-8试剂，置微量振荡器混匀后，
静置 4 h，用酶标仪在 450 nm处测定 A值。取Ana-1
细胞上清液，用酶联免疫方法测定各组细胞上清液
中 IL-6、IL-1β、TNF-α 的水平。
2.4 对 IL-1β诱导的软骨细胞增殖的影响
SD大鼠脱颈处死，浸泡于 95%乙醇中数分钟，
取出后剪开表皮及肌肉组织，取出股骨头、肩关节
及膝关节软骨组织，加入少量 PBS剪碎，用 1 mL
0.2%的 II型胶原酶 37 ℃消化数次，至细胞较纯且
数量较多，移取上清液作为单个细胞悬液接种于培
养皿中。待软骨细胞基本长满后传代培养，传至第
2 代时，调整细胞浓度为 1×107个/L，接种于 96
孔培养板内用于实验。每孔接种 200 μL细胞悬液，
接种 24 h后把培养孔分为对照组、IL-1β 组、各待
测药物组，每组 3个复孔，分别更换培养液：对照
组更换含 5% FBS的 DMEM培养液；模型组更换
含 10 μg/L IL-1β 及 5% FBS的 DMEM培养液；各
待测药物组更换含 10 μg/L IL-1β、5% FBS及各质
量浓度药物的 DMEM培养液，培养 48 h后，去除
培养基，加入 100 μL CCK8试剂，用多功能酶标仪
在 450 nm处测定 A值。
2.5 数据处理
各有效部位对检测指标的 EC50（或 IC50）贡
献之和称为该样品的 EC50（或 IC50）叠加值，运
用自编 Matlab 程序计算各样品的叠加 EC50 或
IC50[6-9,17-18]，实验值以 EC50±SD或 IC50±SD（SD
为实验值的标准方差）表示，并采用 SPSS 18.0软
件进行单因素方差分析。按文献方法[4]将组方中各
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活性部位间的相互作用分为 3种形式：叠加作用、
拮抗作用、协同作用。
3 结果
3.1 对 Ana-1细胞活力的影响
7 个样品对 Ana-1 细胞活力影响的测定结果表
明，1、2、4、6号样品在 400 mg/L以及 3号样品
在 200～400 mg/L抑制了 Ana-1细胞的生长，在测
定这些样品促进 IL-6、IL-1β、TNF-α 分泌的 EC50
及抑制 PGE2分泌的 IC50时剔除了相应质量浓度。
3.2 对 LPS诱导的 Ana-1细胞分泌 PGE2的影响
由图 1 可知，对 LPS 诱导的 Ana-1 细胞产生
PGE2的影响中，除以淫羊藿多糖为主的 5号样品中
的有效部位间产生了拮抗作用外，其余 5个分别以
川牛膝多糖、甘草多糖、苍术多糖、麻黄多糖、桑
寄生多糖为主的腰痛宁衍生方 1～4、6号样品及腰
痛宁全方 7号样品中的有效部位之间均为叠加或协
同作用，且这些样品的 IC50值无显著性差异；5号
样品的 IC50值显著高于其他样品的 IC50值。



与 7号样品比较：**P＜0.01；与 3号样品比较：##P＜0.01
**P < 0.01 vs sample 7; ##P < 0.01 vs sample 3
图 1 不同样品对Ana-1细胞分泌PGE2的影响 ( x±s, n = 3)
Fig. 1 Effect of various samples on secretion of PGE2 in
Ana-1 cells ( x±s, n = 3)
3.3 对Ana-1细胞分泌 IL-6、IL-1β、TNF-α的影响
在促进 Ana-1细胞分泌 IL-6的实验中发现，在
本研究确定的质量浓度范围内分别以苍术多糖、麻
黄多糖为主的 3、4样品对 Ana-1细胞分泌 IL-6的
促进率均未达到 50%，没有得到 EC50 值；分别以
淫羊藿多糖和桑寄生多糖为主的 5、6 样品促进
Ana-1细胞分泌 IL-6的 EC50值显著高于其他样品，
分别以川牛膝多糖、甘草多糖为主的 1、2 及腰痛
宁全方 7样品促进 Ana-1细胞分泌 IL-6的 EC50值
之间无显著性差异。除腰痛宁全方中的有效部位间
产生协同作用外，1、2、5、6样品中的有效部位之
间为叠加作用。结果见图 2。
在促进 Ana-1细胞分泌 IL-1β 的实验中发现，
在本研究确定的质量浓度范围内分别以甘草多糖、
苍术多糖、麻黄多糖为主的 2～4 样品对 Ana-1 细
胞分泌 IL-1β 的促进率均未达到 50%，没有得到
EC50值；分别以淫羊藿多糖、桑寄生多糖为主的 5、
6 样品中的有效部位间分别存在拮抗、叠加作用，
且二者的EC50显著高于以川牛膝多糖为主的1号及
腰痛宁全方 7号的 EC50。结果见图 3。

与7号样品比较：*P＜0.05 **P＜0.01；与2号样品比较：#P＜0.05 ##P＜0.01
*P < 0.05 **P < 0.01 vs sample 7; #P < 0.05 ##P < 0.01 vs sample 2
图 2 不同样品对Ana-1细胞分泌 IL-6的影响 ( x±s, n = 3)
Fig. 2 Effect of samples on secretion of IL-6 in Ana-1 cells
( x±s, n = 3)



与 7号样品比较：**P＜0.01
**P < 0.01 vs sample 7
图 3 不同样品对Ana-1细胞分泌 IL-1β的影响 ( x±s, n = 3)
Fig. 3 Effect of various samples on secretion of IL-1β in
Ana-1 cells ( x±s, n = 3)
在促进 Ana-1细胞分泌 TNF-α 的实验中发现，
在本研究确定的质量浓度范围内分别以川牛膝多
糖、甘草多糖、苍术多糖、麻黄多糖为主的 1～4
号样品对Ana-1细胞分泌TNF-α的促进率均未达到
50%，没有得到 EC50值；以淫羊藿多糖为主的 5号
样品与腰痛宁全方中的有效部位间存在协同作用，
以桑寄生多糖为主的 6号样品中的有效部位间产生
叠加作用，其促进 Ana-1 细胞分泌 TNF-α 的 EC50
显著高于 5号样品与腰痛宁全方。结果见图 4。
3.4 对 IL-1β诱导的软骨细胞增殖的影响
图 5表明腰痛宁全方及 6个以不同多糖为主的
腰痛宁衍生方均具有良好的促进 IL-1β 诱导的软骨
细胞增殖作用。部分样品的 EC50虽有统计学差异，
但均在同一量级范围内小幅波动。
**##

**##

*#

**

**


400
300
200
100
0
IC
50
/(μ
g·
m
L−
1 )
实验值
叠加值
1 2 3 4 5 6 7
样品编号

实验值
叠加值
1 2 5 6 7
样品编号
250
200
150
100
50
0
−50
E
C
50
/(μ
g·
m
L−
1 )
EC
50
/(μ
g·
m
L−
1 )
500
400
300
200
100
0


实验值
叠加值
1 5 6 7
样品编号
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 24期 2015年 12月

·3715·



与 7号样品比较：**P＜0.01；与 5号样品比较：#P＜0.05
**P < 0.01 vs sample 7; #P < 0.05 vs sample 5
图4 不同样品对Ana-1细胞分泌TNF-α的影响 ( x±s, n = 3)
Fig. 4 Effect of various samples on secretion of TNF-α in
Ana-1 cells ( x±s, n = 3)


与 7号样品比较：**P＜0.01；与 4号样品比较：#P＜0.05 ##P＜0.01
**P < 0.01 vs sample 7; #P < 0.05 ##P < 0.01 vs sample 4
图 5 不同样品对 IL-1β 诱导的软骨细胞增殖的影响
( x±s, n = 3)
Fig. 5 Effect of various samples on proliferative activity of
chondrocytes induced by IL-1β ( x±s, n = 3)
4 讨论
本实验通过考察分别以一种药材多糖为主（组
方中多糖比例 50%）的 6个腰痛宁衍生方的相关细
胞药理活性，比较川牛膝多糖、苍术多糖、甘草多
糖、麻黄多糖、淫羊藿多糖、桑寄生多糖的抗炎及
促进软骨细胞增殖的活性，筛选风湿骨病中药组方
中多糖的优选部位。本实验结果表明，分别以川牛
膝多糖、甘草多糖、苍术多糖、麻黄多糖、桑寄生
多糖为主的组方均表现出很好的抑制 LPS 诱导的
Ana-1细胞分泌 PGE2因子的活性，显著优于以淫羊
藿多糖为主的 5号样品，提示 5号样品中各有效部
位间的拮抗作用导致其细胞抗炎活性显著弱于产
生协同或叠加作用的其他组方。分别以川牛膝多糖
和甘草多糖为主的组方（1、2号样品）促进 Ana-1
细胞分泌 IL-6 因子的活性显著优于由其他多糖组
成的组方；以川牛膝多糖为主的组方促进 Ana-1细
胞分泌 IL-1β 的活性显著优于由其他多糖组成的组
方；以淫羊藿多糖为主的组方促进 Ana-1细胞分泌
TNF-α 的活性显著优于由其他多糖组成的组方。
综合评价实验结果，以川牛膝多糖为主的组方
（1号样品）具有良好的细胞抗炎、免疫调节及促进
骨细胞修复等活性，同时考察了腰痛宁衍生方与腰
痛宁全方在细胞抗炎、免疫调节及促进骨细胞增殖
活性方面的差异，结果表明 1号样品作用强度与腰
痛宁全方相当，并无统计学差异，提示川牛膝多糖
可作为腰痛宁衍生方中的多糖优选部位。
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**#

**##

**##

#

100
80
60
40
20
0

EC
50
/(μ
g·
m
L−
1 )

实验值
叠加值
5 6 7
样品编号
10
8
6
4
2
0

EC
50
/(μ
g·
m
L−
1 )

实验值
叠加值
1 2 3 4 5 6 7
样品编号
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 24期 2015年 12月

·3716·
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