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Chnemical constituents from Bombyx Batryticatus

白僵蚕化学成分研究



全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 16期 2015年 8月

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白僵蚕化学成分研究
黄居敏 1,邓华勇 2,蔡 英 1,李 旸 1,张普照 1*,杨 明 1
1. 江西中医药大学 现代中药制剂教育部重点实验室,江西 南昌 330004
2. 江西省南城县人民医院 药剂科,江西 南城 344700
摘 要:目的 研究白僵蚕 Bombyx Batryticatus 的化学成分。方法 利用正相硅胶柱色谱、Sephadex LH20、反相硅胶柱色
谱及反相制备液相色谱等手段进行分离纯化,并通过 1H-、13C-NMR 等波谱技术进行结构鉴定。结果 从白僵蚕醋酸乙酯层
中分离得到 11 个化合物,分别鉴定为环(D-脯-D-缬)二肽(1)、环(S-脯-R-亮)二肽(2)、环(D-脯-D-异亮)二肽(3)、环(D-
脯-D-苯丙)二肽(4)、金色酰胺醇酯(5)、(+)-松脂醇(6)、异黑麦草内酯(7)、butyl-2-pyrrolidone-5-carboxylate(8)、(−)-
杜仲树脂酚(9)、(−)-落叶松树脂醇(10)、4-羟基苯乙酸甲酯(11)。结论 所有化合物均为首次从僵蚕中分离得到。
关键词:白僵蚕;环肽类化合物;木脂素类化合物;环(D-脯-D-缬)二肽;金色酰胺醇酯;(−)-杜仲树脂酚
中图分类号:R284.1 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2015)16 -2377- 04
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.16.006
Chnemical constituents from Bombyx Batryticatus
HUANG Ju-min1, DENG Hua-yong2, CAI Ying1, LI Yang1, ZHANG Pu-zhao1, YANG Ming1
1. Key Laboratory Modern Preparation of TCM, Ministry of Education, Jiangxi University of TCM, Nanchang 330004, China
2. Pharmaceutical Preparation Section, Nancheng People’S Hospital of Jiangxi Province, Nancheng 344700, China
Abstract: Objective To study the chemical constituents of Bombyx batryticatus. Methods The chemical constituents of B.
batryticatus were isolated by different column chromatographic techniques, including silica gel and Sephadex LH-20 columns. The
structures of these compounds were identified by a comprehensive analysis of the spectroscopic data. Results Eleven compounds
were isolated from the EtOAc extract of B. batryticatus. The compounds were identified as cyclo (D)-Pro-(D)-Val (1), cyclo
(S)-Pro-(R)-Leu (2), cyclo (D)-Pro-(D)-Ile (3), cyclo (D)-Pro-(D)-Phe (4), aurantiamid (5), (+)-pinoresinol (6), isololiolide (7),
butyl-2-pyrrolidone-5-carboxylate (8), (−)-medioresinol (9), (−)-lariciresinol (10), and methylphydroxybenzeneacetate (11).
Conclusion All the compounds are isolated from B. batryticatus for the first time.
Key words: Bombyx Batryticatus; cyclopeptides; lignans; cyclo (D)-Pro-(D)-Val; aurantiamid; (−)-medioresinol

白僵蚕又名僵蚕(《千金方》)、天虫(《药材资
料汇编》),为蚕蛾科昆虫家蚕 Bombyx mori Linnaeus
4~5 龄的幼虫感染(或人工接种)白僵菌 Beauveria
bassiana (Bals.) Vuillant 而致死的干燥体。僵蚕药用
历史悠久,最早收录于《神农本草经》。《本草纲目》
对其功用主治作了全面而具体的总结,言僵蚕“散
风痰结核瘰疬,头风,风虫齿痈,皮肤风疮,丹毒
作痒,痰症癥结,妇人乳汁不通,崩中下血,小儿
疳蚀鳞体,一切金疮,疗肿风痔。”《中国药典》2010
年版记载僵蚕具有息风止痉、祛风止痛、化痰散结
之功。主要用于肝风夹痰、惊痫抽搐、小儿急惊、
破伤风、中风口喎、风热头痛、目赤咽痛、风疹瘙
痒、发颐痄腮。现代药理研究表明,僵蚕具有抗凝、
抗血栓、抗惊厥、抗癌、降血糖、调血脂等作用[1-5]。
但是与僵蚕药理活性相应的物质基础研究较薄弱,
化学成分研究较少。文献报道,僵蚕中主要含有肽
类、甾体类、脂肪酸类、黄烷类、香豆素类及杂环
类化合物[6-12]。本实验对僵蚕的化学成分进行了研
究。通过反复柱色谱及制备液相等分离手段,从中
分离得到 11 个化合物,分别鉴定为环(D-脯-D-缬)
二肽 [cyclo (D)-Pro-(D)-Val,1]、环(S-脯-R-亮)二肽
[cyclo (S)-Pro-(R)-Leu,2]、环(D-脯-D-异亮)二肽

收稿日期:2015-04-22
基金项目:江西省卫生厅项目(2014A005)
作者简介:黄居敏,女,硕士研究生,研究方向为中药药剂学。
*通信作者 张普照 Tel: 18270852060 E-mail: zhpuzh@163.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 16期 2015年 8月

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[cyclo (D)-Pro-(D)-Ile,3]、环(D-脯-D-苯丙)二肽
[cyclo (D)-Pro-(D)-Phe , 4] 、 金 色 酰 胺 醇 酯
(aurantiamid,5)、(+)-松脂醇 [(+)-pinoresinol,6]、
异黑麦草内酯(isololiolide,7)、butyl-2-pyrrolidone-
5-carboxylate(8)、(−)-杜仲树脂酚 [(−)-medioresinol,
9]、(−)-落叶松树脂醇 [(−)-lariciresinol,10]、4-羟
基苯乙酸甲酯(methylphydroxybenzeneacetate,11)。
所有化合物均为首次从僵蚕中分离得到。
1 仪器与材料
安捷伦 400 MHz 核磁共振波谱仪;AB SCIEX
TripleTOF 5600 型质谱仪;LC-6AD 制备型高效液
相色谱(日本岛津株式会社);柱色谱硅胶和薄层色
谱硅胶(青岛海洋化工厂); Sephadex LH-20
(Pharmacia 公司);反相 ODS 填料(YMC 公司);
高效液相色谱仪 Agilent 1200;分析高效液相色谱柱
为 Welch AQ-C18 柱(250 mm×4.6 mm);制备高效
色谱柱为 YMC-PACK ODS-A(250 mm×10 mm);
高效液相用甲醇为色谱级(TEDIA),其余试剂均为
分析级。
僵蚕药材于 2014 年购于江西樟树天齐堂中药
饮片有限公司,经江西中医药大学中药资源与民族
药研究中心张亚梅讲师鉴定为僵蚕 Bombyx
Batryticatus。
2 提取与分离
取僵蚕药材 9.5 kg,粉碎,用体积分数 60%乙
醇煎煮 2 次,第 1 次 1.5 h,第 2 次 1 h,合并滤液,
减压回收得乙醇浸膏(1 050 g)。加入适量水混悬,
分别用石油醚,醋酸乙酯和水饱和正丁醇进行萃取。
得石油醚萃取物(13.4 g),醋酸乙酯萃取物(96 g)
和正丁醇萃取物(49 g)。取醋酸乙酯浸膏,加硅胶
适量进行拌样,进行硅胶柱色谱,以二氯甲烷-甲醇
(1∶0、50∶1、10∶1、8∶1、1∶1)梯度洗脱,根
据薄层色谱分析,合并组分相同的流分后得到 3 个
流分 A、B、C。其中 C 经 Sephadex LH-20 柱色谱,
二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脱后得到 2 个流分 C1、
C2。C2 再经 ODS 柱色谱,以甲醇-水(50∶50、70∶
30、100∶0)梯度洗脱得到 3 个流分,其中 50%甲
醇洗脱部分经硅胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇 20∶1、
100∶0)和高效制备液相色谱(甲醇-水)纯化,得
到 11 个化合物。经高效制备液相色谱甲醇-水(15∶
85→60∶40)梯度洗脱 80 min 得到化合物 4(5 mg)、
化合物 5(5 mg)及化合物 8(10 mg)。甲醇-水(30∶
70)等度洗脱得到化合物 1(3 mg)和化合物 3(3
mg),甲醇-水(20∶80)等度洗脱分离得到化合物
2(5 mg)和 7(6 mg)。甲醇-水(40∶60)等度洗
脱得到化合物 6(8 mg)、化合物 9(5 mg)及化合
物 11(4 mg)。乙腈-水(20∶80)等度洗脱得到化
合物 10(4 mg)。
3 结构鉴定
化合物 1:无色结晶(甲醇),分子式为
C10H16O2N2。ESI-MS m/z: 197 [M+H]+。1H-NMR
(400 MHz, CDCl3) δ: 5.89 (1H, s, N-H), 4.07 (1H, m,
H-6), 3.93 (1H, s, H-3), 3.64 (1H, m, H-9), 3.54 (1H,
m, H-9), 2.62 (1H, m, H-1′), 2.37 (1H, m, H-7), 2.04
(2H, m, H-7, 8), 1.90 (1H, m, H-8), 1.06 (3H, d, J =
7.2 Hz, H-2′), 0.90 (3H, d, J = 6.8 Hz, 3′-CH3);
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 170.0 (C-5), 164.8
(C-2), 60.3 (C-6), 58.8 (C-3), 45.1 (C-9), 28.5 (C-5),
28.3 (C-7), 22.4 (C-1′), 19.3 (C-2′), 16.0 (C-3′)。以上
数据与文献报道基本一致[13],故鉴定化合物 1为环
(D-脯-D-缬)二肽。
化合物 2:无色片晶(甲醇),分子式为
C11H18O2N2。ESI-MS m/z: 211 [M+H]+。1H-NMR
(400 MHz, CDCl3) δ: 5.88 (1H, s, NH), 4.11 (1H, m,
H-6), 4.01 (1H, dd, J = 9.6, 3.5 Hz, H-9), 3.56 (2H, m,
H-3), 2.34 (1H, m, H-5), 2.07 (1H, m, H-5), 1.89 (1H,
m, H-4), 1.51 (1H, ddd, J = 14.5, 11.9, 7.1 Hz, H-10),
1.72 (1H, m, H-11), 0.99 (3H, d, J = 6.5 Hz, 12-CH3),
0.94 (3H, d, J = 6.5 Hz, 11-CH3);13C-NMR (100
MHz, CDCl3) δ: 170.1 (C-1), 166.1 (C-7), 59.0 (C-6),
53.3 (C-9), 45.5 (C-3), 38.6 (C-10), 28.1 (C-5), 24.7
(C-11), 23.3 (C-4), 22.7 (C-12), 21.1 (11-CH3)。以上
数据与文献报道基本一致[14],故鉴定化合物 2为环
(S-脯-R-亮)二肽。
化合物 3:白色粉末,分子式为 C11H18O2N2。
ESI-MS m/z: 211 [M+H]+。1H-NMR (400 MHz,
CDCl3) δ: 5.77 (1H, s, NH), 4.06 (1H, m, H-6), 3.96
(1H, s, H-9), 3.68~3.49 (2H, m, H-3), 2.43~2.24
(1H, m, H-5), 2.10~1.97 (1H, m, H-5), 1.22~1.09
(1H, m, H-11), 1.04 (1H, d, J = 7.2 Hz, 12-CH3), 0.92
(1H, t, J = 7.4 Hz, H-13);13C-NMR (100 MHz,
CDCl3) δ: 169.8 (C-1), 164.9 (C-7), 60.5 (C-9), 58.8
(C-6), 45.1 (C-3), 35.2 (C-10), 28.5 (C-5), 24.0
(C-11), 22.4 (C-4), 16.0 (C-13), 12.1 (C-12)。以上数
据与文献报道基本一致[15],故鉴定化合物 3为环(D-
脯-D-异亮)二肽。
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 16期 2015年 8月

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化合物 4:白色针状晶体(甲醇),分子式为
C14H16O2N2。ESI-MS m/z: 245 [M+H]+。1H-NMR
(400 MHz, CDCl3) δ: 7.39~7.18 (5H, m, Ar-H), 5.96
(1H, s, NH), 4.28 (1H, d, J = 10.0 Hz, H-9), 4.07 (1H,
t, J = 7.8 Hz, H-6), 3.72~3.49 (1H, m, H-3), 2.89~
2.74 (1H, m, H-10), 2.31 (1H, m, H-5), 2.06~1.82
(1H, m, H-5);13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 169.6
(C-1), 165.0 (C-7), 135.8 (C-1′), 129.2 (C-2′), 129.2
(C-4′), 127.5 (C-3′), 59.1 (C-6), 56.2 (C-9), 45.4
(C-3), 36.8 (C-10), 28.3 (C-5), 22.5 (C-4)。以上数据
与文献报道基本一致[15],故鉴定化合物 4 为环(D-
脯-D-苯丙)二肽。
化合物 5:白色粉末,分子式为 C25H26O3N2。
ESI-MS m/z: 403 [M+H]+, 425 [M+Na]+。1H-NMR
(400 MHz, CDCl3) δ: 7.72 (2H, d, J = 8.2 Hz, H-3′,
7′), 7.51 (1H, t, J = 7.4 Hz, H-5′), 7.42 (2H, t, J = 8.0
Hz, H-4′, 6′), 7.27 (5H, m, H-5, 6, 7, 8, 9), 7.15 (3H,
m, H-5″, 6″, 7″), 7.08 (2H, d, J = 7.5 Hz, H-4″, 8″),
6.43 (1H, d, J = 7.5 Hz, β-NH), 4.83 (1H, q, J = 8.0
Hz, H-2), 4.07 (1H, m, H-1″), 3.41 (2H, m, H-9″),
3.20 (1H, dd, J = 13.5, 6.3 Hz, H-3a), 3.06 (1H, dd,
J = 13.5, 9.0 Hz, H-3b), 2.77 (1H, dd, J = 13.5, 7.5
Hz, H-2″a), 2.69 (1H, dd, J = 13.5, 7.5 Hz, H-2″b);
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 171.0 (C-1), 167.3
(C-1′), 137.4 (C-4), 136.6 (C-3″), 133.3 (C-2′), 132.0
(C-5′), 129.3 (C-6, 8), 129.1 (C-5″, 7″), 128.8 (C-4″,
8″), 128.6 (C-5, 9), 128.5 (C-3′, 7′), 127.2 (C-7), 127.1
(C-4′, 6′), 126.5 (C-6″), 63.9 (C-9″), 55.2 (C-2), 52.9
(C-1″), 38.5 (C-3), 36.7 (C-2″)。以上数据与文献报道
基本一致[16],故鉴定化合物 5为 aurantiamid。
化合物 6:无色结晶(甲醇),分子式为
C20H22O6。ESI-MS m/z: 359 [M+H]+。1H-NMR (400
MHz, CDCl3) δ: 6.89 (2H, d, J = 1.6 Hz, H-2, 2′), 6.87
(2H, d, J = 8.0 Hz, H-5, 5′), 6.81 (2H, m, H-6, 6′),
5.60 (2H, s, 4, 4′-OH), 4.73 (2H, d, J = 3.8 Hz, H-7,
7′), 4.24 (2H, dd, J = 8.4, 6.6 Hz, H-9b, 9′b), 3.90 (6H,
s, 3, 3′-OCH3), 3.87 (2H, dd, J = 9.2, 2.8 Hz, H-9a,
9′a), 3.09 (2H, m, H-8, 8′);13C-NMR (100 MHz,
CDCl3) δ: 146.6 (C-3, 3′), 145.2 (C-4, 4′), 132.9 (C-1,
1′), 118.9 (C-6, 6′), 114.2 (C-5, 5′), 108.5 (C-2, 2′),
85.9 (C-7, 7′), 71.6 (C-9, 9′), 55.9 (3, 3′-OCH3), 54.1
(C-8, 8′)。以上数据与文献报道基本一致[17],故鉴定
化合物 6为 (+)-松脂醇。
化合物 7:淡黄色油状物,分子式为 C11H16O3。
ESI-MS m/z: 197 [M+H]+, 219 [M+Na]+。1H-NMR
(400 MHz, CDCl3) δ: 5.70 (1H, s, H-7), 4.12 (1H, tt,
J = 11.5, 4.2 Hz, H-3), 2.53 (1H, ddd, J = 11.8, 4.0,
2.3 Hz, H-4a), 2.03 (1H, ddd, J = 12.8, 4.2, 2.3 Hz,
H-2a), 1.87 (1H, d, J = 1.3 Hz, H-2a), 1.57 (3H, s,
H-11), 1.49 (1H, m, H-4b), 1.32 (1H, m, H-2b), 1.30
(3H, s, H-10), 1.26 (3H, s, H-9);13C-NMR (100 MHz,
CDCl3) δ: 180.7 (C-8), 171.5 (C-6), 113.3 (C-7), 86.4
(C-5), 65.1 (C-3), 49.8 (C-2), 47.9 (C-4), 35.0 (C-1),
29.9 (C-11), 25.6 (C-10), 25.1 (C-9)。以上数据与文献
报道基本一致[18],故鉴定化合物 7为异黑麦草内酯。
化合物 8:白色粉末,分子式为 C9H15O3N。
ESI-MS m/z: 186 [M+H]+。1H-NMR (400 MHz,
CDCl3) δ: 6.34 (1H, s, N-H), 4.24 (1H, dd, J = 8.6, 5.2
Hz, H-5), 4.15 (2H, t, J = 6.7 Hz, H-7), 2.50 (1H, m,
H-4a), 2.45 (1H, m, H-3), 2.22 (1H, m, H-4b), 1.63
(2H, m, H-8), 1.36 (2H, m, H-9), 0.93 (3H, t, J = 7.4
Hz, H-10);13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 178.2
(C-6), 172.0 (C-2), 65.5 (C-7), 55.5 (C-5), 30.5 (C-8),
29.3 (C-3), 24.8 (C-4), 19.0 (C-9), 13.7 (C-10)。以上
数据与文献报道基本一致[19],故鉴定化合物 8 为
butyl-2-pyrrolidone-5-carboxylate。
化合物 9:白色粒状结晶(甲醇),分子式为
C21H24O7。ESI-MS m/z: 411 [M+Na]+。1H-NMR (400
MHz, CDCl3) δ: 6.96~6.83 (2H, m, H-2′, 5′), 6.81
(1H, d, J = 8.2 Hz, H-6′), 6.57 (2H, s, H-2, 6), 5.60
(1H, s, 4′-OH), 5.49 (1H, s, 4-OH), 4.74 (1H, d, J =
3.3 Hz, H-7′), 4.71 (1H, d, J = 3.7 Hz, H-7), 4.26 (1H,
m, H-9a), 3.90 (1H, m, H-9b);13C-NMR (100 MHz,
CDCl3) δ: 147.1 (C-3, 5), 146.7 (C-3′), 145.2 (C-4′),
134.2 (C-4), 132.8 (C-1′), 132.1 (C-1), 118.9 (C-6′),
114.2 (C-5′), 108.5 (C-2′), 102.6 (C-2, 6), 86.1 (C-7′),
85.8 (C-7), 71.9 (C-9), 71.6 (C-9′), 56.3 (3, 5-OCH3),
55.9 (3′-OCH3), 54.4 (C-8), 54.1 (C-8′)。以上数据与
文献报道基本一致[20],故鉴定化合物 9为 (−)-杜仲
树脂酚。
化合物 10:无色油状物,分子式为 C20H24O6。
ESI-MS m/z: 399 [M+K]+。1H-NMR (400 MHz,
CDCl3) δ: 6.87 (1H, d, J = 1.3 Hz, H-2′), 6.85 (1H, d,
J = 1.3 Hz, H-5), 6.84 (1H, d, J = 1.3 Hz, H-5′), 6.81
(1H, m, H-6′), 6.68 (1H, m, H-6), 4.79 (1H, d, J = 6.5
Hz, H-9′), 4.04 (1H, m, H-9α), 3.87 (3H, s, -OCH3),
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 16期 2015年 8月

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3.86 (3H, s, -OCH3), 3.75 (1H, dd, J = 6.4, 8.3 Hz,
H-9β), 2.90 (1H, dd, J = 13.4, 5.0 Hz, H-7a), 2.72
(1H, m, H-8), 2.53 (1H, dd, J = 13.4, 10.9 Hz, H-7b),
2.40 (1H, ddd, J = 7.5, 6.6, 7.2 Hz, H-8′);13C-NMR
(100 MHz, CDCl3) δ: 146.6 (C-3), 146.5 (C-3′), 145.0
(C-4′), 143.9 (C-4), 134.7 (C-1′), 132.2 (C-1), 121.2
(C-6), 118.7 (C-6′), 114.4 (C-5), 114.1 (C-5′), 111.2
(C-2), 108.2 (C-2′), 82.8 (C-9′), 72.9 (C-9), 60.9
(C-7′), 55.9 (-OCH3), 55.9 (-OCH3), 52.6 (C-8′), 42.4
(C-8), 33.3 (C-7)。以上数据与文献报道基本一致[21],
故鉴定化合物 10为 (−)-lariciresinol。
化合物 11:淡黄色油状物,分子式为 C9H10O3。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.13 (2H, d, J = 8.5
Hz, H-3, 5), 6.77 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-2, 6), 3.68 (3H,
s, -OCH3), 3.55 (2H, s, H-7);13C-NMR (100 MHz,
CDCl3) δ: 172.5 (C-8), 154.7 (C-4), 130.5 (C-2, 6),
126.1 (C-1), 115.4 (C-3, 5), 52.1 (C-1′), 40.3 (C-7)。以
上数据与文献报道基本一致[22],故鉴定化合物 11
为 4-羟基苯乙酸甲酯。
志谢:江西中医药大学中药资源与民族药研究
中心提供制备液相色谱。
参考文献
[1] Wang J D, Narui T, Kurata H, et al. Hematological studies
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crude drugs on blood coagulation and fibrinolysis systems
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